Efek Renoprotektif Oridonin pada Model Tikus Pada Cedera Ginjal Akut Melalui Supresi Makrofag Yang Terlibat Inflamasi

{0}}

PENGANTAR

Fitur penting dari akutcedera ginjal(AKI) adalah penurunan mendadak dalamfungsi ginjal. Ini adalah masalah kesehatan global yang telah menimbulkan kekhawatiran luas di masyarakat. Menurut statistik, sekitar 13,3 juta orang di seluruh dunia menderita AKI setiap tahun, 85 persen di antaranya berada di negara berkembang, yang akan membunuh 1,7 juta orang.1,2) Khususnya, AKI bukanlah penyakit tunggal, dan mungkin merupakan komplikasi dari beberapa penyakit. Biasanya, ini dapat disebabkan oleh sepsis, syok, iskemia-reperfusi, dan keracunan. Setelah perkembangan jangka panjang, penyakit ini cenderung berkembang menjadi kronispenyakit ginjal,gagal jantung kongestif dan stadium akhirpenyakit ginjal.3–5) Ringkasnya, AKI dapat menyebabkan beban ekonomi yang sangat besar, dan secara nyata akan meningkatkan beban psikologis dan fisik pasien.ginjaliskemia-reperfusi saat ini dianggap sebagai penyebab paling umum dari AKI, dan biasanya terjadi selama trauma, reseksi bedah, atautransplantasi ginjal. Makrofag adalah salah satu sel inflamasi kunci yang memainkan peran penting dalam perkembangan AKI. Mincle terutama diekspresikan pada sel myeloid dan neutrofil, terutama pada makrofag. Ini memiliki domain lektin tipe-C yang sangat dipertahankan yang merupakan pemain utama dalam kekebalan antijamur. Mincle awalnya diverifikasi identitasnya oleh Matsumoto sebagai lipopolisakarida (LPS)-protein terinduksi yang dapat mengaktifkan faktor nuklir-kappaB (NF-κB) melalui pensinyalan Card9-Bcl10-MALT1, menghasilkan pembentukan subtipe T helper 1 (Th1) dan Th17 yang efektif yang mempromosikan ekspresi faktor inflamasi untuk menghubungkan respons imun bawaan dan adaptif.6) Penelitian terbaru menemukan bahwa Mincle juga dapat mengenali semua jenis zat abnormal dalam sel, merasakan kerusakan- sinyal terkait, dan kemudian menanggapi tanggapan yang relevan. Misalnya, Mincle dapat mengikat -GlcCer yang merupakan metabolit intraseluler yang ada di mana-mana dari sel yang rusak, mengaktifkan dan menginduksi sitokin, dan memicu respons sel T spesifik antigen.7) Mincle adalah reseptor yang merasakan kematian sel yang heterogen, dapat mengenali ligan endogen SAP130 dilepaskan oleh sel-sel mati, menginduksi produksi sitokin inflamasi, dan mendorong infiltrasi neutrofil ke jaringan yang rusak.8,9) Khususnya, tim Lan menegaskan bahwa Mincle secara khusus diinduksi pada makrofag M1 dan memainkan peran kunci dalam mempertahankan fenotipe peradangan Makrofag M1.6) Oleh karena itu, terapi campuran yang ditargetkan dapat menjadi kunci untuk mengobati penyakit AKI.

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN FUNGSI GINJAL/GINjal

Oridonin adalah senyawa alami dipeptida tetrasiklik dengan kerangka kauriene yang diekstraksi dari London, yang memiliki berbagai fungsi biologis, termasuk anti-mikroba, anti-tumor, anti-inflamasi, dan anti-fibrosis. Berbagai jenis penelitian telah melaporkan potensi dan mekanisme antitumor dari diterpenoid alami ini dalam rangkaian sel kanker.10,11) dan telah dipastikan bahwa Oridonin sebagai obat antikanker saat ini sedang menjalani uji klinis fase I di Indonesia. Cina. Namun, peran Oridonin dalampenyakit ginjaljarang dilaporkan. Beberapa jenis penelitian telah memverifikasi bahwa Oridonin dapat mengurangi proteinuria dankerusakan ginjalpada model tikus lupus eritematosus spontan, dan penelitian in vitro telah menemukan bahwa Oridonin dapat mengurangi sekresi sitokin inflamasi dan respons inflamasi yang diinduksi oleh LPS setelah pengobatan dengan Oridonin.12,13) ​​Dalam penelitian ini, kami berfokus pada pengungkapan potensi Oridonin dalam pengobatan AKI, dan apakah mekanisme yang mendasarinya terkait dengan penghambatan Mincle dalam makrofag. Studi ini dapat memberikan bukti kuat untuk skrining terapi AKI.

Kata kunci:Oridonin; cedera ginjal akut (AKI); makrofag; cincang; peradangan; fungsi ginjal

BAHAN DAN METODE HewanTiga puluh enam tikus jantan C57BL/6 (umur 8–10 minggu) diperoleh dari Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co., Ltd. (Beijing, China), dan ditempatkan di dalam ruangan yang dikontrol suhu dan kelembapannya. -ruang terkontrol dari Pusat Percobaan Hewan Universitas Kedokteran Southwest (21,0 ± 2,0 derajat dan 65 ± 5 persen, masing-masing). Semua mencit secara stokastik dibagi menjadi tiga kelompok: kelompok Sham, kelompok model iskemia-reperfusi cedera (IRI) (kelompok IRI), dan kelompok IRI yang diberi Oridonin (kelompok OR) (15 mg/kg). Sebelum operasi, mencit dibius dengan injeksi intraperitoneal 45 mg/kg sodium pentobarbital. Model tikus AKI dibuat dengan menjepit bilateralginjalarteri selama 35 menit. Tikus dalam kelompok palsu hanya terpapar rongga perut selama 35 menit sedangkan tikus dalam kelompok OR secara terus menerus diberikan Oridonin secara intragastrik selama 3 hari setelah operasi, dan kelompok lain diberi volume saline yang sama sebagai kontrol. Tikus di-eutanasia dengan injeksi intraperitoneal natrium pentobarbital encer salin (200 mg/kg) pada hari ketiga. Semua prosedur percobaan hewan dilakukan sesuai dengan Pedoman Perawatan Hewan Laboratorium (Nomor Izin 201812-55).

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN GAGAL GINJAL/GINJAL

Bahan Kimia dan ReagenOridonin (BP1041, kemurnian Lebih besar dari atau sama dengan 95 persen ) diperoleh dari Biopurify phytochemicals Ltd. (Chengdu, China). Antibodi NF-κB, p-AKT, dan inducible nitric oxide synthase (iNOS) dibeli dari Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA). Antibodi interleukin (IL)-1 , tumor necrosis factor (TNF)- , Mincle, p-NF-κB, dan AKT dibeli dari Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Kit ekstraksi RNA total diperoleh dari Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co., Ltd. (Beijing, China). Kit Transkripsi Terbalik, Kit PCR Real-time disediakan oleh Shanghai Promega Bioproducts Co., Ltd. (Shanghai, China). LPS (Escherichia coli 055:B5) disediakan oleh Sigma Chemical (St. Louis, MO, USA). Reagen transfeksi DNA diperoleh dari Zeta Life (Zeta Life, USA).

Kultur Sel dan TransfeksiSel RAW264.7 dibeli dari Chinese Academy of Sciences Cell Bank (Shanghai, China), yang dikultur pada 37 derajat dalam lingkungan 5 persen CO2 dalam medium glukosa tinggi Dulbecco's Eagle's medium (DMEM) yang dimodifikasi. Pencernaan dilakukan ketika sel tumbuh hingga 80 persen pertemuan. Seluruh percobaan menggunakan sel fase pertumbuhan logaritmik. Ekspresi berlebih Mincle dalam sel RAW264.7 dilakukan dengan transfeksi plasmid ekspresi berlebih Mincle (Genechem, Shanghai, Cina) ke sel dengan reagen transfeksi DNA Zeta Life Advanced. Morfologi dan status pertumbuhan sel diamati menggunakan mikroskop cahaya.

Analisis Kit Penghitung Sel-8 (CCK-8)Tiga ribu sel diunggulkan dalam piringan 96-sumur dengan 6 sumur ulangan per kelompok. Selanjutnya, sel-sel dibiarkan kelaparan dalam media bebas serum selama 24 jam, diikuti dengan perawatan dengan media yang mengandung obat selama 24 jam. Kemudian, setelah mengeluarkan media, tambahkan 100 L 10 persen CCK-8 reagen ke setiap sumur dan inkubasi selama 3 jam. Tingkat kelangsungan hidup sel dihitung sesuai dengan nilai absorbansi masing-masing sumur.

Penilaian Fungsi GinjalTingkat kreatinin serum dan nitrogen urea diukur dengan menggunakan kit yang sesuai (Jiancheng, Nanjing, Cina). Nilai dinyatakan sebagai mmol/L serum.

Pewarnaan Hematoxylin–Eosin (H&E) dan Periodic Acid-Schiff (PAS)yang dikumpulkanginjaljaringan ditempatkan dalam paraformaldehida 4 persen selama 24 jam, dan kemudian ditempatkan dalam larutan etanol dengan konsentrasi berbeda, dan ditempatkan dalam blok xilena dan lilin untuk ditanam. Sebelum pewarnaan, slide dimasukkan ke dalam oven 60 derajat selama 2 jam, dan kemudian di-dewax dan direhidrasi. Beberapa sampel diwarnai dengan pigmen eosin dan hematoxylin, sampel lain menambahkan alkohol asam periodik dan larutan Schiffdye secara terpisah. Terakhir, Diamati dan difoto di kamera mikroskop.

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)Kadar IL-1 , IL-6 dan TNF- dalam supernatan kultur sel diukur dengan menggunakan kit ELISA (IL-1 : Neobioscience, EMC001b; IL-6: Neobioscience , EMC004; TNF- : Neobioscience, 500850). Lakukan pengujian sampel sesuai dengan metode yang diberikan oleh pemasok reagen, dan hitung nilai konsentrasi masing-masing kelompok sesuai dengan kurva standar.

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN NYERI GINJAL / GINJAL

Western BlotSemua sampel hewan dan sel dilisiskan dalam buffer radioimmunoprecipitation assay (RIPA) di atas es dan disentrifugasi untuk mendapatkan sampel protein yang sesuai. Uji Coomassie Brilliant Blue digunakan untuk menentukan konsentrasi protein dari setiap sampel, dan gel dijalankan dengan sejumlah sampel protein. Setiap kelompok protein dipisahkan dengan elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida (SDS-PAGE), kemudian dipindahkan ke membran polivinilidena difluorida (PVDF). Setelah menginkubasi membran dengan antibodi primer pada 4 derajat semalam, antibodi sekunder diinkubasi pada suhu kamar selama 1 jam. Warna pita dikembangkan dengan solusi pengembangan warna, dan intensitas abu-abu pita dihitung dengan perangkat lunak Image J.

PCR Waktu NyataTotal RNA diperoleh sesuai dengan instruksi pengoperasian kit Tiangen, dan dilarutkan dalam air bebas enzim. Menurut instruksi yang relevan, kami menggunakan kit transkripsi terbalik untuk mensintesis cDNA. Kondisi reaksi RT-PCR dilakukan sebagai berikut: 37 derajat selama 15 menit, 95 derajat selama 5 menit, dan kemudian 40 siklus

95 derajat selama 10 menit, 95 derajat selama 15 detik, dan 60 derajat selama 1 menit. Tingkat ekspresi mRNA relatif dari setiap gen dinormalisasi relatif terhadap gliseraldehida-3-fosfat dehidrogenase (GAPDH). Urutan primer ditunjukkan pada Tabel 1.Pewarnaan imunofluoresensiSel RAW264.7 difiksasi dalam paraformaldehyde 4 persen, kemudian diblokir dengan albumin serum sapi pada suhu kamar (rt) selama 1 jam, dan diinkubasi dengan antibodi primer yang sesuai pada 4 derajat semalaman. Setelah dicuci dengan phosphate-buffered saline (PBS) selama 3 kali, sel diinkubasi dengan antibodi sekunder pada rt selama 1 jam. Nukleus diwarnai dengan 4′-6-diamidino- 2-fenilindole (DAPI). Gambar imunofluoresensi ditangkap oleh mikroskop Nikon Eclipse (Nikon, Tokyo, Jepang).Analisis statistikHasil analisis statistik disajikan sebagai mean ± standar deviasi (SD), Perbandingan antar kelompok dilakukan dengan menggunakan ANOVA satu arah, p< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">

HASIL

Oridonin Menghambat Iskemia-Reperfusi yang Diinduksi Cedera Ginjal dan PeradanganUntuk mengevaluasi efek perlindungan oridonin pada AKIginjaldiinduksi oleh iskemia-reperfusi, kami memeriksa kreatinin darah, nitrogen urea, danginjalindeks cedera tubular tikus di setiap kelompok, serta ekspresi sitokin inflamasi di jaringan ginjal dan menilaiginjalpatologi dengan pewarnaan H&E dan PAS. Hasilnya ditunjukkan pada gambar bahwa kadar kreatinin serum (Gbr. 1a) dan nitrogen urea (Gbr. 1b) dari kelompok model AKI berkurang ketika injeksi Oridonin terus menerus selama tiga hari. Sejalan dengan itu, indeks cedera tubular menunjukkan bahwa Oridonin sangat mengurangi nekrosis tubular diginjaltikus AKI (Gbr. 1c). Hasil PCR waktu nyata menunjukkan bahwa Oridonin secara signifikan menurunkan kadar mRNA IL-1 , MCP-1, dan F4/80 diginjaldari kelompok model AKI (Gbr. 1d-f). Selain itu, hasil pewarnaan patologis dan imunofluoresensi menunjukkan bahwa Oridonin secara signifikan mengurangi nekrosis tubular (Gbr. 1g) dan tingkat protein sitokin inflamasi (Gbr. 1h) pada tikus AKI, yang secara efektif memperbaiki kerusakan ginjal, menunjukkan bahwa Oridonin memiliki anti-cedera yang signifikan. dan efek anti-inflamasi pada model AKI.

Oridonin Menghambat Jalur Pensinyalan Mincle/AKT/NF-κB di Ginjal Tikus AKIUntuk menjelaskan mekanisme terapi Oridonin padaginjalperadangan, kami selanjutnya memeriksa aktivasi pensinyalan Mincle / AKT / NF-κB setelah pemberian Oridonin. Hasil Western blot menunjukkan bahwa intervensi Oridonin dapat secara signifikan mengurangi ekspresi protein terkait inflamasi IL-1 dan iNOS pada AKIginjaldan menurunkan aktivasi protein jalur AKT dan NF-kB (Gbr. 2a-e), menunjukkan bahwa Oridonin dapat menghambat peradangan yang diinduksi IRI diginjaldari AKI. Khususnya, hasil PCR Real-time dan Western blot menunjukkan bahwa Oridonin secara efektif mengurangi kadar mRNA dan protein Mincle diginjaldari model AKI (Gbr. 2f, g). Untuk mendeteksi lokasi Mincle diginjal, kami melakukan imunofluoresensi pada setiap kelompok (Gbr. 2h), hasilnya menunjukkan bahwa Mincle terletak diginjalinterstitium dan dilokalisasi bersama dengan Marker makrofag F4/80, menunjukkan bahwa Mincle terutama diekspresikan dalamginjalmakrofag, dan sangat diregulasi setelah AKI. Hasil fluoresensi imuno-FL juga menunjukkan bahwa makrofag meningkat secara signifikan setelah AKI, menunjukkan peran penting makrofag dalam perkembangan AKI. Khususnya, Oridonin secara signifikan menghambat Mincle dalamginjalmakrofag tikus AKI. Hasil di atas menunjukkan bahwa Oridonin dapat meningkatginjalperadangan dan cedera dengan menghambat pensinyalan Mincle/AKT/NF-κB.

Oridonin Secara Signifikan Memulihkan Perubahan Morfologi Makrofag RAW264.7 yang Diinduksi oleh LPSUntuk mempelajari efek Oridonin pada makrofag inflamasi, kami menggunakan LPS untuk merangsang sel RAW264.7 untuk membangunmodel sel inflamasi. Struktur kimia Oridonin ditunjukkan pada Gambar. 3a. Oleh karena itu, kami menguji toksisitas Oridonin pada konsentrasi yang berbeda pada sel RAW264.7. Hasil CCK8 menunjukkan bahwa ketika konsentrasinya 5 M, Oridonin tidak memiliki pengaruh yang signifikan terhadap morfologi sel (Gbr. 3b), yang digunakan dalam percobaan in vitro berikutnya. Kami secara mengejutkan menemukan bahwa Oridonin secara signifikan meningkatkan morfologi makrofag yang diinduksi LPS (Gbr. 3c), termasuk mengurangi vakuola intraseluler dan membuat sel lebih padat.

Oridonin Menekan Sekresi dan Ekspresi Faktor Inflamasi dalam RAW264.7 yang Distimulasi LPSSel Untuk memperjelas efek anti-inflamasi oridonin pada sel RAW264.7 yang distimulasi LPS, kami menggunakan FL fluorescent PCR, ELISA, dan imunofluoresensi real-time untuk mengukur faktor inflamasi yang disekresikan oleh setiap kelompok sel. Hasilnya menunjukkan bahwa Oridonin secara signifikan mengurangi tingkat mRNA IL-1, IL-6, TNF-, iNOS, dan MCP-1 dalam sel yang distimulasi LPS (Gbr. 4a–e). Selanjutnya, Oridonin juga secara signifikan menurunkan regulasi sekresi IL-1 , IL-6, dan TNF- dalam supernatan dalam model sel inflamasi (Gbr. 4f-h) serta kadar protein sitokin inflamasi pada makrofag yang dirangsang LPS (Gbr. 4i). Hasil di atas menunjukkan bahwa Oridonin memiliki efek anti-inflamasi yang jelas pada makrofag.

Oridonin Memblokir Jalur Pensinyalan Mincle/AKT/NF-κB dalam Makrofag Inflamasi in VitroMincle, sebagai reseptor pengenalan pola, sangat penting untuk mempromosikan peradangan terkait makrofag diginjaldari AKI. Hasil percobaan hewan di atas menunjukkan bahwa Oridonin dapat menurunkan regulasi ekspresi Mincle dalamginjaldari AKI. Oleh karena itu, kami menyelidiki lebih lanjut apakah Oridonin dapat mengurangi tingkat mRNA dan protein Mincle dalam model inflamasi makrofag yang distimulasi LPS. Hasil Western blot, imunofluoresensi dan PCR real-time menunjukkan bahwa 5 M Oridonin tidak hanya secara signifikan mengurangi ekspresi mRNA (Gbr. 5c), tetapi juga menurunkan tingkat protein Mincle dalam makrofag inflamasi (Gbr. 5a, b , d). Selain itu, Oridonin secara signifikan menurunkan tingkat protein iNOS dan fosforilasi-AKT dan NF-κB dalam sel RAW264.7 yang diobati dengan LPS.

Ekspresi Mincle Berlebihan Menghilangkan Efek Inhibisi Oridonin pada Peradangan pada Sel RAW264.7 Terstimulasi LPSUntuk menentukan apakah Mincle adalah target utama Oridonin untuk menghambat peradangan pada makrofag, kami mentransfeksi sel RAW264.7 dengan plasmid ekspresi berlebih Mincle untuk mengatur ekspresi Mincle. Menurut hasil real-time PCR dan Western blot, ditunjukkan bahwa tingkat mRNA dan protein Mincle dalam sel RAW264.7 meningkat setelah transfeksi (Gbr. 6a, b). Plasmid tersebut kemudian ditransfeksi ke sel inflamasi yang diobati dengan Oridonin, dan hasilnya menunjukkan bahwa ekspresi Mincle juga meningkat dalam sel kelompok ini (Gbr. 6c, d). Vektor ditransfusikan dalam sel sebagai kontrol negatif. Hasil percobaan pemulihan menunjukkan bahwa ekspresi berlebih dari Mincle di Oridonin yang mengobati makrofag inflamasi mengatur aktivasi AKT dan NF-kB dengan meningkatkan tingkat fosforilasi kedua protein ini (Gbr. 6d-g), yang menunjukkan bahwa Oridonin menghambat peradangan makrofag mungkin melalui down-regulating Mincle dan pensinyalan AKT dan NF-κB hilirnya. Selain itu, hasil PCR dan ELISA real-time menunjukkan bahwa ekspresi berlebih dari Mincle memulihkan ekspresi dan sekresi sitokin dalam makrofag inflamasi yang diobati dengan Oridonin (Gbr. 6h-l). Hasil di atas menunjukkan bahwa Oridonin menghambat peradangan pada makrofag dengan mengatur pensinyalan Mincle/AKT/NF-κB.

DISKUSI

AKI adalah sindrom klinis yang disebabkan oleh berbagai etiologi dan mekanisme patologis.ginjalcedera iskemia-reperfusi adalah proses patofisiologi umum di klinik, dan itu salah satu penyebab utamacedera ginjal.14,15) Respon inflamasi adalah jaringan kompleks yang terlibat dalamginjalsel parenkim dan sel imun residen, di mana, makrofag memainkan peran penting dalamcedera ginjal.16) Karena perubahan lingkungan mikro imun, makrofag akan terpolarisasi menjadi beberapa fenotipe, terutama dibagi menjadi tipe M1 dan M2. Ekspresi iNOS adalah tanda tipe M1. Studi in vivo dan in vitro keduanya menemukan bahwa ekspresi iNOS meningkat pada kelompok model, dan ekspresi menurun setelah perawatan. Lektin tipe-C yang diinduksi makrofag (Mincle) adalah reseptor lektin tipe-C yang diekspresikan pada makrofag yang diaktifkan dan secara genetik terlokalisasi pada tikus 6F2 dan kromosom manusia 12P31. Beberapa penelitian telah melaporkan bahwa Mincle berpartisipasi dalam inisiasi respon imun bawaan dengan mengenali reseptor pengenalan pola molekuler terkait patogen.17) Beberapa penelitian eksperimental telah menemukan bahwa setelah cedera iskemik serebral pada tikus, peningkatan infiltrasi sel darah putih di daerah yang terluka. dapat menyebabkan hilangnya neuron di area perfusi vaskular, dan KO Mincle dapat secara signifikan

memperlambat cedera iskemik yang disebabkan oleh oklusi arteri serebral tengah. Penelitian terbaru mengungkapkan bahwa Mincle dapat merasakan kematianginjalsel epitel tubulus yang bergabung dengan -glucosylceramide, mempercepat respon inflamasi dan menunda eliminasi inflamasi.18) Studi tentangpenyakit ginjalsama dengan hasil penelitian kami yang menunjukkan bahwa Mincle sangat diekspresikan dalam model AKI yang diinduksi iskemia-reperfusi dan cisplatin, dan secara khusus diekspresikan pada makrofag tipe M1-. Singkatnya, studi Mincle yang ditargetkan mungkin merupakan pengobatan baru untuk penyakit terkait yang disebabkan oleh makrofag inflamasi. Studi kami menemukan bahwa ekspresi Mincle meningkat pada model tikus AKI

dibangun oleh iskemia-reperfusi. Menurut hasil ko-lokalisasi imunofluoresensi, Mincle terutama diekspresikan padaginjalmakrofag dari kelompok model tikus dan konsisten dengan hasil penelitian Lan. Mincle diinduksi secara khusus pada makrofag M1, di mana pensinyalan Mincle-sky mempromosikan dan mempertahankan fenotipe inflamasi makrofag M1 dalam kondisi akut.radang ginjal.6) Mincle termasuk dalam reseptor lektin tipe-C (CLR) yang dapat mengenali jamur dan bentuk lain dari mikroorganisme atau bahaya aseptik. Mereka menginduksi peradangan melalui protein penghubung CARD9, diikuti oleh perakitan kompleks CARD9-Bcl10 dan regulasi NF-κB yang khas. Ada hubungan regulasi

antara NF-kB dan protein AKT.10,19) Dalam studi inflamasi makrofag yang dirangsang LPS, diverifikasi bahwa ekspresi AKT dan NF-kB meningkat. Selanjutnya, kami mentransfeksi plasmid ekspresi tinggi Mincle ke dalam sel yang diobati dengan intervensi obat, dan hasilnya menemukan jalur sinyal jalur pensinyalan AKT dan NF-κB diaktifkan kembali. Dapat disimpulkan bahwa Mincle dapat mempengaruhi ekspresi protein dari jalur ini. Namun, tidak jelas bagaimana Mincle mengatur dua jalur pensinyalan ini, dan tidak jelas apakah protein diaktifkan melalui jalur langit seperti yang dikatakan penelitian yang dilaporkan.

Oridonin adalah senyawa diterpenoid alami yang diekstraksi dari Orion, dan memiliki berbagai efek farmakologis, termasuk anti-tumor, anti-inflamasi, dan pelindung saraf. Dalam penelitian tentang fungsi neuroprotektif Oridonin, tim Wen menemukan bahwa Oridonin dapat memblokir resistensi insulin dengan menghambat autophagy untuk meningkatkan disfungsi kognitif.20) Tim Lin menemukan bahwa Oridonin dapat melindungi terhadap penyakit Parkinson dan kejang dengan mengurangi stres neurooksidatif dan efek neuroprotektif lainnya. 21) Yang paling banyak dipelajari adalah efek antitumor Oridonin. Sebuah tim peneliti membuat obat menjadi partikel yang dapat dihirup untuk mengobati tikus model kanker paru-paru non-sel kecil, yang menunjukkan efek penghambatan angiogenesis yang kuat dan efek pro-apoptosis dan memainkan efek anti-kanker yang signifikan.22) Oridonin juga dapat mengerahkan anti-inflamasi memengaruhi. Ini dapat menghambat jalur Notch, menginduksi polarisasi makrofag untuk beralih ke fenotipe anti-inflamasi dan menekan timbulnya neuritis autoimun.23)

Hal ini juga dapat meringankan timbulnya osteoarthritis dengan menghambat sekresi faktor inflamasi dan produksi oksidase reduktif.24) Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa Oridonin juga memiliki efek yang signifikan pada berbagaipenyakit ginjal. Penelitian telah melaporkan bahwa Oridonin dapat bekerja sama dengan 5-fluorouracil (5-FU) untuk memberikan efek antitumor dan meningkatkan 5-sitotoksisitas FU padaginjalsel kanker.25) Menurut hasil percobaan in vivo dari penelitian ini, Oridonin dapat secara signifikan mengurangi nitrogen urea kreatinin serum pada tikus dengan cedera iskemia-reperfusi, dan secara signifikan mengurangi kerusakan patologisnya. Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa Oridonin dapat menghambat aktivitas inflamasi terkait dengan penekanan jalur AKT dan NF-κB, yang mirip dengan hasil penelitian intervensi Oridonin pada nefropati diabetik dan secara bersamaan dapat mengurangi infiltrasi sitokin inflamasi dan aktivitas toll- seperti jalur pensinyalan reseptor 4 (TLR4)/NF-κB.26) Hasil di atas menunjukkan bahwa Oridonin dapat menghambat Mincle dan menekan aktivitas jalur AKT dan NF-κB. Dalam percobaan in vitro, indikator jalur ini meningkat pada model peradangan makrofag yang distimulasi LPS dan juga diturunkan oleh Oridonin. Hasil percobaan pemulihan menunjukkan bahwa, ekspresi berlebih Mincle dalam makrofag inflamasi yang diobati dengan Oridonin meningkatkan aktivitas pensinyalan AKT dan NF-kB, menghasilkan regulasi ekspresi dan sekresi sitokin inflamasi dalam sel yang diobati dengan Oridonin, yang menyarankan Oridonin menghambat peradangan pada makrofag dapat melalui penekanan pensinyalan Mincle dan AKT/NF-κB

CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN INFEKSI GINJAL/GINJAL

Ada banyak cara untuk membangun model hewan AKI, termasuk iskemia-reperfusi bilateral, IRI unilateral dengan nefrektomi kontralateral, cisplatin, toksin difteri, LPS, asam aristolochic atau asam folat. Namun, injeksi cisplatin tidak dapat sepenuhnya mensimulasikan klinis pasien. Model yang diinduksi dengan injeksi toksin difteri cenderung memperpanjang perkembanganpenyakit ginjal, yang terutama dapat menyebabkanginjalfibrosis dan sklerosis glomerulus, serta kerusakan tubulus ringan. Nefropati asam aristolochic adalah nefritis tubulointerstitial, dan asam folat juga merupakan penginduksi nefrotoksisitasginjalfifibrosis, tetapi insiden klinis keduanya rendah.27) Akut yang diinduksi IRIcedera ginjaladalah masalah kesehatan masyarakat global yang terkait dengan morbiditas, mortalitas, dan biaya perawatan kesehatan yang tinggi. Oleh karena itu, kami menggunakan iskemia-reperfusi untuk membangunginjalmodel tikus cedera. Beberapa penelitian telah melaporkan waktu penjepitan yang berbedaginjalpembuluh darah. Sebuah tim peneliti membentuk model hewan IRI untuk menjepit bilateralginjalpedikel tikus Sprague-Dawley (SD) selama 1 jam.28) Tim peneliti lain menjepit bilateralginjalarteri selama 45 menit untuk menyiapkan model reperfusi pada tikus Wistar. Selain itu, penelitian dilakukan menggunakan tikus C57BL/6J untuk menjepit pedikel ginjal bilateral selama 35 menit untuk membangun model.29) Berdasarkan hasil eksperimen sebelumnya, ditemukan bahwa reperfusi dilanjutkan setelah bilateralginjalarteri dijepit selama 20 menit, dan kreatinin serum kembali ke tingkat dasar normal tiga hari kemudian. Oleh karena itu, kami memilih untuk menjepit arteri ginjal bilateral selama 35 menit sebelum reperfusi, dan perubahan kreatinin serum stabil setelah operasi selama tiga hari. Selama operasi, kita dapat mengamati bahwa warnaginjalperubahan dari merah muda menjadi merah muda, yang disebabkan olehginjaliskemia pembuluh darah arteri. Setelah melepas klip 35 menit kemudian, kita dapat mengamati bahwa warnaginjalkembali normal, model IRI-AKI dibangun. Singkatnya, temuan ini menunjukkan bahwa Oridonin memiliki efek anti-inflamasi yang signifikan, dan dapat melindungi ginjal pada AKI dari cedera, yang mungkin terutama terlibat dalam penghambatan Mincle dan aktivitas pensinyalan hilir NF-κB dan AKT. Studi ini memberikan mekanisme potensial baru pengobatan Oridonin untuk AKI, yang dapat memberikan pilihan untuk pengobatan klinis AKI.