Efek Renoprotektif Isoliquiritigenin Pada Cedera Ginjal Akut Akibat Cisplatin Melalui Penghambatan FPR2 Pada Makrofag

Untuk informasi lebih lanjut, silakan hubungi: ali.ma@wecistanche.com

Tan Rui-Zhi dkk

Klik ke Cistanche untuk pengobatan penyakit ginjal

Abstrak

Cedera ginjal akut (AKI) adalah komplikasi serius pada pasien sakit kritis. Mengumpulkan bukti menunjukkan bahwa makrofag memainkan peran pro-inflamasi yang penting dalamCedera Ginjal Akutdan isoliquiritigenin (ISL) dapat menghambat peradangan makrofag, tetapi perannya dalamCedera Ginjal Akutdan mekanisme yang mendasarinya tidak diketahui. Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki efek renoprotektif ISL pada AKI dan peran reseptor Formylpeptide 2 (FPR2) dalam proses ini. Dalam penelitian ini, model AKI yang diinduksi cisplatin dan model inflamasi makrofag yang diinduksi lipopolisakarida digunakan untuk melakukan eksperimen in vivo dan in vitro. Hasilnya menunjukkan bahwa ISL sangat legacedera ginjaldan menghambat peradangan ginjal in vivo dan menekan respon inflamasi makrofag in vitro. Yang penting, ditemukan bahwa FPR2 diregulasi secara signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol pada makrofag yang diinduksi AKI dan LPS, sedangkan FPR2 sangat ditekan oleh ISL. Menariknya, ekspresi berlebihan FPR2 dengan transfeksi pcDNA3.1-FPR2 secara efektif membalikkan efek anti-inflamasi ISL dalam makrofag, menunjukkan bahwa FPR2 mungkin menjadi target potensial untuk ISL untuk mencegah peradangan dan meningkatkancedera ginjaldariCedera Ginjal Akut. Secara bersama-sama, temuan ini menunjukkan bahwa ISL meningkatkan cisplatin-inducedcedera ginjaldengan menghambat FPR2 melibatkan peradangan makrofag, yang dapat memberikan pilihan terapi potensial untuk AKI.

1. Perkenalan

Akutginjalcedera (AKI) adalah jenis parah yang umum dariginjalpenyakit dengan mortalitas tinggi.1 Penyakit ini ditandai dengan penurunan fungsi ginjal yang cepat yang terjadi dalam waktu 7 hari atau kurang. Publikasi terbaru melaporkan bahwa kejadian AKI setinggi 5 persen pasien rawat inap dan 30 persen pasien parah, danAKImenyebabkan 2 juta kematian di seluruh dunia setiap tahun, yang telah menjadi masalah kesehatan global. Meskipun definisinya biasa dan seragam, AKI dapat disebabkan oleh berbagai alasan, termasuk asupan obat nefrotoksik, cedera iskemia-reperfusi (Ischemia-reperfusion injury, IRI), sepsis, operasi kardiovaskular, hipertensi, dan diabetes.2,3 Lama usia, diabetes, dan gagal jantung meningkatkan risiko AKI, yang biasanya menyebabkan penyakit ginjal kronis (CKD) dan penyakit ginjal stadium akhir (ESRD) yang tidak dapat diubah pada beberapa pasien.4 Khususnya, penelitian telah menunjukkan bahwa hampir semua sel imun terlibat. pada inflamasi imun ginjal pada AKI.5 Di antara mereka, makrofag telah terbukti memiliki peran penting dalam memicu inflamasi ginjal.6 Menghapus makrofag meningkatkan cedera dan inflamasi ginjal AKI.7 Oleh karena itu, penghambatan efektif inflamasi makrofag mungkin bermanfaat untuk meningkatkan pendekatan terapeutik saat ini untuk pengelolaan AKI.

Isoliquiritigenin (ISL) adalah flavonoid dengan struktur chalcone, yang berakar pada obat herbal Cina tradisional yang terkenal.8 Dalam beberapa tahun terakhir, telah menarik perhatian luas dari para ilmuwan karena antioksidan, anti-inflamasi, anti-agregasi trombosit, antibakteri , anti-virus, anti-tumor, hepatoprotektif, neuroprotektif, perlindungan jantung, dan sifat detoksifikasi.9 ISL telah terbukti menghambat proliferasi sel, mengurangi ROS, dan menginduksi apoptosis, nekrotik, dan kematian sel kanker ke berbagai derajat.10 Terbaru laporan menunjukkan bahwa isoliquiritigenin dapat menghambat produksi IL-6 dan TNF-a yang diinduksi oleh lipid A porsi LPS dalam makrofag RAW264.7 dan melemahkan pembentukan kompleks LPS-TLR4/ MD-2. Selain itu, ISL dapat menginduksi apoptosis sel HepG2 melalui jalur pensinyalan MAPK, STAT3, dan NF-kB yang dimediasi ROS.11 Bukti eksperimental juga menunjukkan bahwa ISL menginduksi aktivasi intrinsik yang dimediasi ROS dan mengaktifkan mekanisme protease c-sistein mitokondria-sistein apoptosis sel PC-12. Perlu dicatat bahwa ISL sering digunakan sebagai suplemen makanan untuk wanita.12 Studi terbaru menunjukkan bahwa ISL memiliki efek anti-inflamasi yang signifikan pada AKI, tetapi mekanisme kerja spesifiknya masih belum jelas.

Penelitian sebelumnya dari tim kami menemukan bahwa Mincle, lektin tipe-C yang diinduksi makrofag, adalah reseptor pengenalan pola transmembran yang terlibat dalam peradangan ginjal,13 yang melaluinya, kami menyaring reseptor formil peptida 2 (FPR2) yang memiliki hubungan tertentu dengan Mincle dari database GEO. Namun, perannya dalam penyakit ginjal akut belum diverifikasi. FPR2 adalah gen penyandi protein yang termasuk dalam keluarga reseptor berpasangan protein G dan mengandung 351 residu asam amino.14,15 Mereka adalah reseptor berpasangan protein G transmembran 7- yang dapat memediasi regulasi imun, sekresi faktor inflamasi, kemotaksis sel, dan adhesi sel, yang erat kaitannya dengan terjadinya dan berkembangnya berbagai penyakit.16 Homologinya dengan FPR1 dan FPR3 adalah sebesar 69 persen dan 83 persen . Subsel FPR2 terlokalisasi di membran sel dan merupakan protein membran multi-pass. Mereka terutama diekspresikan dalam neutrofil, eosinofil, monosit, sel epitel, fibroblas, sel glial, sel mesangial, dll., Didistribusikan di berbagai organ seperti paru-paru, limpa, dan hati. Khususnya, FPR2 banyak diekspresikan di interstitium ginjal,17 di mana sel-sel inflamasi berada. Fungsi utama FPR2 adalah menggabungkan media pemacu dekomposisi khusus (SPM) tertentu untuk memediasi aktivitas metabolit ini dalam menekan dan menghilangkan peradangan. Namun, peran FPR2 dalam inflamasi AKI dan apakah dapat digunakan sebagai target intervensi obat masih belum diketahui.

Dalam penelitian ini, kami menggunakan model AKI tikus yang diinduksi obat nefrotoksik -cisplatin dan model sel inflamasi yang diinduksi LPS untuk mengeksplorasi efek peningkatan ISL pada cedera dan peradangan ginjal pada AKI, serta peran kunci FPR2 dalam peradangan ginjal dan pengobatan ISL dari AKI. Studi ini akan memberikan arahan baru untuk memahami mekanisme cedera inflamasi dan strategi pengobatan untuk AKI.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Narkoba

Isoliquiritigenin (purity>98 persen) adalah senyawa isoflavon yang diekstrak dari akar licorice. Rumus molekulnya adalah C15H12O4. Dalam penelitian ini, isoliquiritigenin dibeli dari Chengdu Biopurified Phytochemicals Ltd. (BP0787), dilarutkan dalam 10 persen DMSO (ST038, Beyotime, China), dan tikus yang diinduksi cisplatin diberikan secara intragastrik dalam dosis 7,5 mg/kg dan 30 mg /kg, masing-masing.

2.2. Isolasi BMDM

Tikus C57BL/6 jantan dengan usia 6-8 minggu dipilih untuk mengisolasi sel BMDM. Pisahkan tulang kaki belakang dengan hati-hati dari tulang paha dan lepaskan otot-otot yang menempel. Giling tulang dalam PBS dengan mortar sampai warna tulang berubah dari merah menjadi putih. Selanjutnya, kumpulkan supernatan dan saring melalui saringan 70, dilanjutkan dengan sentrifugasi pada 1500 rpm selama 5 menit. Eritrosit dipecah dalam cairan yang disaring dengan 10 - PBS, yang kemudian disaring pada saringan sel 40 mm. Inkubasi sel yang diperoleh dalam cawan kultur 10 cm dan induksi dengan supernatan L929 30 persen selama 7 hari. Sel-sel BMDM distimulasi dengan 100 ng/ml LPS untuk membangun model sel inflamasi.

2.3. Knock-down dan ekspresi berlebihan FPR2 di BMDM

FPR2 diregulasi ke bawah oleh transfeksi dengan Zeta LifeAdvanced Transfection Reagent (AD600050, Zeta life, USA) dan FPR2 siRNA ke BMDM (Urutan FPR2 siRNA: Sense, 5'-GGAGAUGUGUAUUGUACAUTT-3'; Antisense, 5'-AUGUACAAUACA CAUCUCCTT-3'. Sangon Biotech, China). Demikian pula, pcDNA3.1-FPR2plasmid (Dibangun oleh Fenghui Biotech, China) ditransfusikan ke BMDM dengan ZETA untuk mengekspresi FPR2 secara berlebihan dalam sel.

2.4. Eksperimen hewan

Semua percobaan hewan dilakukan sesuai dengan pedoman dari Komite Etika Universitas Kedokteran Southwest. 32 tikus jantan C57BL/6 dibeli dari ChengduDaShuo Animal Co., Ltd, yang secara acak dibagi menjadi 4 kelompok: kelompok palsu, kelompok model (kelompok AKI yang diinduksi Cisplatin), kelompok dosis rendah ISL (7,5 mg/kg, kelompok L), dan kelompok dosis tinggi (30 mg/kg, kelompok H). Kelompok model disuntik cisplatin 20 mg/kg (P4394, Sigma-Aldrich, USA) pada hari pertama, sedangkan kelompok dosis rendah diberikan 7,5 mg/kg ISL dan kelompok tinggi diberikan 30 mg/kg ISL selama 3 hari. . Setelah 3 hari, serum dan ginjal diambil dari mencit yang dikorbankan.

2.5. Tes fungsi ginjal

Setelah mengumpulkan serum dari setiap kelompok tikus, ikuti instruksi kit dengan ketat untuk mendeteksi kadar kreatinin serum(C011-2-1, Jiancheng Biotech, China) dan urea nitrogen (C013-2-1, Jiancheng Biotech, Cina).

2.6. Pewarnaan patologis

Pewarnaan H&E: Bagian secara rutin dewaxing dan rehidrasi, pewarnaan hematoxylin selama 5 menit, pembilasan air RO, pemisahan alkohol asam klorida 1 persen selama 2 detik, pembilasan air keran, perendaman etanol 75 persen selama 2 detik, eosin yang larut dalam alkohol 1 persen selama 30 detik , bilas air keran, etanol 100 persen Dehidrasi selama 1 menit, keringkan, xylene transparan selama 10 menit, keringkan, segel dengan media pemasangan balsam netral (36313ES60, Yepsen, China).

Pewarnaan PAS: Irisan ditempatkan dalam larutan asam periodik pada suhu kamar selama 5-8 menit, diikuti dengan pembilasan dua kali dengan air RO. Kemudian, masukkan irisan ini ke dalam reagen Schiff selama 10-20 menit, dibilas dengan air keran selama 10 menit, diwarnai dengan hematoxylin selama 1e2 menit, dikeringkan dan transparan dalam alkohol 100 persen, kering, segel dengan media pemasangan balsam netral.

2.7. Imunofluoresensi

Tempatkan bagian jaringan beku di PBS, cuci dua kali, fiksasi dengan 10 persen formaldehida selama 10 menit. Jaringan pada bagian diblokir dengan serum kambing 5 persen selama 30 menit, diikuti dengan inkubasi dengan FPR2 anti-tikus primer tikus (1:200, sc-57141, Santa Cruz, USA) dan anti-tikus F4/80 antibodi (1:200, sc-52664, Santa Cruz, USA) pada4 - C semalaman. Keesokan harinya, cuci bagian dua kali dengan PBS, inkubasi dengan antibodi sekunder (1: 200) pada suhu kamar selama 1 jam, dan noda inti dengan DAPI. Gambar ditangkap oleh sistem EVOS.

2.8. Elisa

Konsentrasi IL-1b, IL-6, TNF-a dalam serum dan supernatan seluler dianalisis menggunakan ELISA Kits (EMC001B, EMC004, EMC102A, Neobioscience, China) sesuai dengan instruksi kit.

2.9. RealTime-PCR

Total RNA diekstraksi menggunakan kit ekstraksi RNA (Tiangen, China) mengikuti instruksi pabrik. Setelah mentranskripsi terbalik RNA yang diekstraksi ke dalam cDNA, menambahkannya ke sistem reaksi 10 mL untuk melakukan PCR waktu-nyata oleh sistem Roche LightCycler 480 dan sistem reaksinya adalah sebagai berikut: Eastep® qPCR MasterMix 2 -, 5 mL; cetakan cDNA, 1 mL; primer hulu (10 mM), 0,5 mL; primer hilir (10 mM), 0,5 mL; Air bebas nukleus, 3 mL. Primer yang digunakan dalam percobaan ini disintesis oleh Sangon (Shanghai, China), dan urutan semua primer tercantum pada Tabel 1.

2.10. noda barat

Buffer lisis RIPA digunakan untuk mengekstrak protein dari jaringan ginjal dan sel BMDM. Setelah memisahkan protein dalam 10 persen SDS-PAGEgel dan mentransfer ke membran PVDF, memblokir membran dalam 5 persen BSA selama 1 jam dan dicuci dengan TBST 3 kali, diikuti dengan menginkubasi membran dengan antibodi primer pada 4 - C semalam (disiapkan dengan 5 persen BSA, 1: 1000). Kemudian, membran diinkubasi dengan antibodi sekunder (Peroksidase-Conjugated Goat anti-Mouse IgG (ZB-2305, 1:3000), Goat anti-Rabbit IgG (ZB-2301, 1:3000)) pada suhu kamar selama 1 jam. Gambar ditangkap oleh sistem pencitraan gel (BIORAD, USA). Intensitas abu-abu dari pita dihitung dengan perangkat lunak Image J.

2.11. Analisis statistik

Hasil ditunjukkan sebagai mean ± standar deviasi. Analisis data dilakukan dengan uji one way ANOVA dilanjutkan dengan uji komparasi ganda dengan uji LSD menggunakan software SPSS 21.0. P < 0.05="" dianggap="" signifikan="" secara="" statistik.="" setiap="" kelompok="" percobaan="" menggandakan="" 3="">

3. Hasil

3.1. Isoliquiritigenin meningkatkan cedera ginjal yang diinduksi cisplatin dan menghambat peradangan ginjal

Untuk menyelidiki efek renoprotektif dan anti-inflamasi dari isoliquiritigenin pada AKI, kami mendeteksi kadar serum Cre dan BUN masing-masing kelompok, serta ekspresi dan sekresi sitokin inflamasi dengan PCR dan ELISA waktu nyata. Selain itu, patologi ginjal diukur dengan pewarnaan H&E dan PAS. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dibandingkan dengan kelompok normal, kadar serum Cre dan BUN meningkat pada model AKI, sedangkan perlakuan dengan ISL 7,5 mg/kg atau 30 mg/kg secara signifikan menurunkan kadar Cre dan BUN serum, di antaranya , 30 mg/kg dosis memiliki efek terapeutik terbaik (Gbr. 1A dan B). Khususnya, 30 mg/kg ISL dapat memperbaiki kerusakan tubulus ginjal sesuai dengan persentase nekrosis tubulus yang dievaluasi (Gbr. 1C). Hasil ELISA dan PCR menunjukkan bahwa sekresi IL-1b, IL-6, dan TNF-a mengalami penurunan regulasi setelah intervensi ISL (7,5 mg/kg dan 30 mg/kg), dan ekspresi mRNA IL-1b, IL-6, dan TNF-a juga sangat berkurang dengan pemberian 30 mg/kg ISL (Gbr. 1DeI). Di sisi lain, hasil pewarnaan H&E dan PAS menunjukkan bahwa ginjal pada kelompok AKI menunjukkan kerusakan tubulus ginjal yang parah, pelepasan epitel ginjal, sel mesangial dan hiperplasia interstisial mesangial, dan infiltrasi sel inflamasi, secara mengejutkan, 30 mg/kg ISL dapat secara efektif membalikkan cedera ginjal pada AKI (Gbr. 1J). Semua hasil menunjukkan bahwa pemberian 7,5 mg/kg dan 30 mg/kg ISL dapat memperbaiki cedera ginjal yang diinduksi cisplatin dan menghambat peradangan ginjal, di mana 30 mg/kg ISL memiliki efek terbaik.

3.2. Isoliquiritigenin mengurangi ekspresi FPR2 dalam makrofag tikus AKI

Banyak laporan sebelumnya menunjukkan bahwa FPR2 memainkan peran penting dalam respons imun dan penyakit terkait peradangan. Namun, efek potensial FPR2 pada ginjal AKI tidak terdefinisi. Dalam penelitian ini, kami melakukan imunofluoresensi untuk menemukan bersama FPR2 dan makrofag (F4/80, pembuat makrofag). Hasil penelitian menunjukkan bahwa makrofag (bintik-bintik hijau) banyak diinfiltrasi di ginjal tikus AKI, sedangkan FPR2 (bintik-bintik merah) terletak bersama dengan F4/80, menggambarkan bahwa FPR2 terutama diekspresikan pada makrofag dan kadar FPR2 secara signifikan. meningkat pada ginjal tikus AKI (Gbr. 2A). Kami selanjutnya mendeteksi ekspresi mRNA FPR2 dan protein terkait peradangan dengan PCR real-time dan western blotting di ginjal, dan hasilnya menunjukkan bahwa 30 mg/kg ISL dapat secara efektif menurunkan regulasi mRNA dan kadar protein FPR2 di ginjal tikus AKI dibandingkan dengan 7,5 mg/kg kelompok ISL (Gbr. 2B, G, H). Yang penting, hasil western blotting menunjukkan bahwa 30 mg/kg ISL juga menghambat aktivasi p-65 dan menurunkan kadar protein TNF-a, IL-6, dan IL{{28} }b di ginjal tikus AKI (Gbr. 2CeF). Semua data di atas menunjukkan bahwa ISL meredakan peradangan ginjal pada tikus AKI mungkin berhubungan dengan pengurangan ekspresi FPR2 dalam makrofag.

3.3. Isoliquiritigenin menekan ekspresi dan sekresi FPR2 dan sitokin inflamasi dalam sel BMDM yang diinduksi LPS

Untuk mendeteksi lebih lanjut efek ISL pada sel BMDM yang diinduksi LPS, kami memeriksa tingkat mRNA FPR2, ekspresi, dan sekresi sitokin inflamasi dalam sel BMDM yang diinduksi LPS setelah pemberian ISL dengan PCR dan ELISA waktu nyata. Hasilnya menunjukkan bahwa ISL menurunkan tingkat mRNA FPR2, IL-1b, IL-6, dan TNF-a (Gbr. 3AeD), serta sekresi IL-1b , IL-6, dan TNF-a dalam supernatan seluler dalam sel BMDM yang diinduksi LPS (Gbr. 3EeG). Hasil di atas menunjukkan bahwa pengobatan ISL dengan konsentrasi 40 mM sangat menghambat peradangan pada sel BMDM yang diinduksi LPS.

3.4. Isoliquiritigenin menurunkan kadar protein FPR2 dan sitokin inflamasi dalam sel BMDM yang diinduksi LPS

Kami juga mendeteksi kadar protein FPR2 dan sitokin inflamasi dalam sel BMDM yang diinduksi LPS setelah pemberian ISL dengan western blotting. Data menunjukkan bahwa dibandingkan dengan kelompok kontrol, kadar protein FPR2, p-p65, IL-6, dan TNF-a meningkat secara signifikan pada sel BMDM yang diinduksi LPS, dan sangat berkurang dengan pemberian ISL 40 mM ( Gambar 4AeE). Hasil ini lebih lanjut menggambarkan bahwa ISL dapat menekan aktivasi NF-kB dan menurunkan kadar protein sitokin inflamasi dalam sel BMDM yang diinduksi LPS.

3.5. Penghambatan FPR2 menekan peradangan yang diinduksi LPS dalam sel BMDM

Untuk mengeksplorasi peran FPR2 dalam peradangan makrofag, kami menggunakan siRNA untuk merobohkan FPR2 dalam sel BMDM. Hasil penelitian menunjukkan bahwa transfeksi siRNA dapat secara signifikan menghambat ekspresi FPR2 dalam makrofag yang diinduksi LPS (Gbr. 5A), dan secara efektif mengurangi ekspresi IL-1b dan TNF-a (Gbr. 5B dan C). Selain itu, hasil western blot membuktikan bahwa setelah transfeksi siRNA, tingkat protein FPR2 secara signifikan dihambat, terlepas dari apakah itu dirangsang oleh LPS (Gbr. 5D dan E). Khususnya, merobohkan FPR2 secara signifikan mengurangi kadar protein sitokin inflamasi dan menghambat aktivitas pensinyalan NF-kB (Gbr. 5FeK), menunjukkan bahwa FPR2 memainkan peran penting dalam mempromosikan respons inflamasi di makrofag. Juga, itu mungkin menjadi target utama ISL untuk menghambat peradangan makrofag.

3.6. Ekspresi berlebihan FPR2 menetralkan efek anti-inflamasi isoliquiritigenin dalam sel BMDM yang diinduksi LPS

Untuk menentukan bahwa ISL menekan peradangan pada AKI melalui penghambatan FPR2 dalam makrofag, kami menggunakan plasmid ekspresi berlebih FPR2 untuk mengatur ekspresi FPR2 dalam sel BMDM inflamasi yang diobati dengan ISL. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 6, tingkat protein dan mRNA FPR2 meningkat secara signifikan pada kelompok yang ditransfeksi pcDNA3.1- FPR2 (Gbr. 6A, B, G), dan ekspresi berlebih FPR2 secara efektif menghilangkan efek penghambatan 40 mM ISL pada aktivasi p65 dan kadar protein IL-1b, IL-6 dan TNF-a dalam sel BMDM yang diinduksi LPS (Gbr. 6CeF). Demikian pula, peningkatan regulasi FPR2 menghilangkan efek penekanan 40 mM ISL pada ekspresi dan sekresi sitokin inflamasi dalam sel BMDM yang diinduksi LPS, seperti IL-1b, IL-6, dan TNF-a (Gbr. 6HeM), menunjukkan bahwa ISL mengurangi peradangan pada sel BMDM yang diinduksi LPS dengan menghambat FPR2.

4. Diskusi

Cedera ginjal akut adalah salah satu penyakit klinis yang umum. Biasanya menyebabkan gangguan fungsi kekebalan tubuh pasien dalam waktu singkat. Dalam kasus kehilangan darah trauma, kerusakan organ, syok, ginjal adalah organ yang paling rentan dan rentan berkembang menjadi cedera akut.18e20 Sejumlah penelitian telah mengkonfirmasi bahwa peradangan memainkan peran kunci dalam pengembangan AKI, yang telah dipertimbangkan sebagai target intervensi potensial untuk pengobatan AKI. Dalam beberapa tahun terakhir, obat-obatan Cina telah membuat kemajuan luar biasa dalam intervensi peradangan, termasuk kurkumin, quercetin, naringenin, dan monomer lainnya. Iso-liquiritigenin adalah senyawa flavonoid, yang memiliki banyak aktivitas biologis, seperti antiinflamasi, anti radikal bebas, anti tumor, dan efek lainnya.21 Studi sebelumnya menemukan bahwa ISL menghambat apoptosis, peradangan, dan produksi matriks ekstraseluler pada angiotensin. Sel HK-2 yang diinduksi II.22 Studi dari Wu Yangping menunjukkan bahwa ISL dapat menurunkan regulasi IL-6 dan IL-8 dengan menghambat aktivitas NF-kB dalam model psoriasis, menunjukkan ISL dapat menjadi kandidat untuk pengobatan psoriasis dan penyakit inflamasi autoimun lainnya.23 Di sisi lain, penelitian terbaru menunjukkan bahwa ISL dapat meringankan AKI septik dengan menekan translokasi NF-kB p65 dan menghambat respons inflamasi.24 Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa ISL dapat secara efektif meningkatkan fungsi ginjal pada tikus AKI yang diinduksi cisplatin, mengurangi kerusakan ginjal, dan menghambat peradangan ginjal. Namun, mekanisme yang tepat dari ISL menghambat peradangan tidak jelas.

FPR2 milik keluarga reseptor kemotaktik dan merupakan reseptor berpasangan protein G dari 7 kali transmembran. Studi sebelumnya telah menemukan bahwa FPR2 terlibat dalam berbagai proses fisiologis dan patologis, termasuk respons pertahanan, peradangan, penyakit neurodegeneratif, tumor, gangguan yang berkaitan dengan metabolisme glukosa dan lipid.25,26 FPR2 dapat diregulasi oleh lipopolisakarida, berbagai faktor inflamasi, dan prostaglandin E2 dalam proses inflamasi yang mungkin memainkan peran anti-inflamasi dan pro-inflamasi.27,28 Efek yang berbeda dari FPR2 pada peradangan tergantung pada lingkungan dan ligan yang mengaktifkan jalur sinyal yang berbeda.29 Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa FPR2 terutama diekspresikan dalam makrofag di interstitium ginjal, dan sangat diekspresikan dalam ginjal tikus AKI yang diinduksi cisplatin, menunjukkan bahwa FPR2 dalam makrofag mungkin terlibat dalam respons inflamasi makrofag di ginjal AKI. Semakin banyak bukti telah mengkonfirmasi bahwa sejumlah besar makrofag menyusup ke ginjal dalam beberapa jam setelah terjadinya AKI, dan memperburuk kerusakan ginjal dengan merespons peradangan. menjadi arah penting untuk meningkatkan AKI, dan apakah FPR2 terlibat dalam proses ini tidak diketahui.

Hasil percobaan kami menunjukkan bahwa pengobatan dengan ISL dosis rendah dan tinggi pada tikus AKI yang diinduksi cisplatin, tidak hanya dapat memperbaiki struktur dan fungsi ginjal, tetapi juga mengurangi tingkat sitokin inflamasi. Selain itu, ISL dapat secara efektif menurunkan kadar protein FPR2 dan aktivitas p65. Karena FPR2 terutama diekspresikan dalam makrofag, ini menunjukkan bahwa ISL dapat meningkatkan peradangan ginjal dengan menghambat FPR2 dalam makrofag. Karena peran penting makrofag yang diinfiltrasi dalam peradangan ginjal, kami kemudian mengekstraksi makrofag primer yang berasal dari sumsum tulang untuk deteksi in vitro dari efek peningkatan ISL pada peradangan makrofag dan mekanisme potensial. Hasil kami menunjukkan bahwa ISL dapat secara signifikan menghambat inflamasi makrofag yang diinduksi LPS dan menurunkan regulasi ekspresi dan sekresi faktor inflamasi IL-1b, IL-6, dan TNF-a. Pada saat yang sama, ISL juga dapat mengurangi tingkat protein molekul inflamasi dalam makrofag dan menghambat ekspresi mRNA dan tingkat protein FPR2 yang dirangsang oleh LPS. Untuk memverifikasi peran kunci penghambatan FPR2 peradangan dengan ISL, kami menggunakan pcDNA3.1-FPR2plasmid untuk mengekspresikan FPR2 secara berlebihan dan menemukan bahwa dalam makrofag inflamasi yang diobati dengan ISL, ekspresi berlebihan FPR2 menetralkan efek penghambatan ISL pada peradangan, menunjukkan bahwa inflamasi makrofag yang diatur oleh ISL terutama melalui penghambatan FPR2. Khususnya, kami menggunakan model AKI yang diinduksi cisplatin in vivo dan memilih model sel inflamasi yang diinduksi LPS secara in vitro. Meskipun reagen induksi dari kedua model tidak konsisten, kedua metode ini saat ini diakui untuk membangun model inflamasi in vivo dan in vitro, masing-masing. Mengingat bahwa penelitian ini berfokus pada respon inflamasi, adalah layak untuk menggunakan dua metode ini dalam satu penelitian.

Data ini membuktikan bahwa ISL dapat secara efektif mengurangi ekspresi faktor inflamasi in vivo dan in vitro, dan dapat dicapai dengan menghambat ekspresi FPR2. ISL dengan demikian dapat berfungsi sebagai obat terapi potensial untuk AKI.

Ucapan Terima Kasih

Pekerjaan ini didukung oleh Luzhou - Proyek Gabungan Universitas Medis Barat Daya (2017LZXNYD-P01 dan 2018LZXNYD-PT03), Universitas Kedokteran Barat Daya - Proyek Gabungan Rumah Sakit Pengobatan Tradisional Afiliasi (2018XYLH-034), Proyek Pembangunan Laboratorium Utama Provinsi Sichuan Kedokteran (2018#53), proyek sains dan teknologi Luzhou (2020-JYJ-56) dan Hibah Khusus Bersama Universitas Kedokteran Kota Luzhou - Southwest untuk Pengenalan Bakat Tingkat Tinggi (Tim Lan Hui-Yao ).

Referensi

1. Soares DB, Mambrini JVM, Botelho GR, Girundi FF, Botoni FA, Martins MAP. Terapi obat dan faktor lain yang terkait dengan perkembangan cedera ginjal akut pada pasien sakit kritis: studi cross-sectional.RekanJ. 2018;6:e5405. e-pub sebelum dicetak 2018/08/22.

2. Sato Y, Yanagita M. Sel imun dan inflamasi pada perkembangan AKI menjadi CKD.Am J Physiol Ren Physiol. 2018;315(6):F1501eF1512. e-pub sebelum cetak 2018/08/30.

3. Ram P, Mezue K, Pressman G, Rangaswami J. Cedera ginjal akut pasca penggantian katup aorta transkateter.klinik kardio. 2017;40(12):1357e1362. e-pub sebelum cetak 2017/12/19.

4. YH H, IJ C, YF L, YJ C, YH L, HW C. Laktoferin memberikan kontribusi efek renoprotektif pada cedera ginjal akut dan fibrosis ginjal awal.Ilmu farmasi. 2020;12(5):434.

5. Bonavia A, Singbartl K. Tinjauan tentang peran sel imun pada cedera ginjal akut.Pediatr Nefrol. 2018;33(10):1629e1639. e-pub sebelum cetak 2017/08/ 13.

6. Li J, Tang Y, Tang PMK, dkk. Memblokir faktor penghambat migrasi makrofag melindungi terhadap cedera ginjal akut yang diinduksi cisplatin pada tikusmol di sana. 2018;26(10):2523e2532. e-pub sebelum cetak 2018/08/06.

7. Ferenbach DA, Sheldrake TA, Dhaliwal K, dkk. Penipisan makrofag / monosit oleh clodronate, tetapi bukan toksin difteri, meningkatkan cedera iskemia / reperfusi ginjal pada tikus.Inti Ginjal. 2012;82(8):928e933. e-pub sebelum cetak 2012/06/08.

8. JQ, JC, BM, dkk. Isoliquiritigenin menghambat aterosklerosis dengan memblokir ekspresi saluran TRPC5.Terapi kardiovaskular. 2020;2020:1926249.

9. YG, XL, HY, LP, X C. Isoliquiritigenin memberikan efek antioksidan dan anti-inflamasi melalui pengaktifan jalur KEAP-1/Nrf2 dan menghambat jalur NF-kB dan NLRP3 pada radang selaput dada yang diinduksi karagenan.Makanan& fungsi. 2020;11(3):2522e2534.

10. LS, XY, XY, YW, Q Z. Isoliquiritigenin menginduksi apoptosis sel T24 kanker kandung kemih manusia melalui mekanisme kinase-independen yang bergantung pada siklin.Surat Onkologi. 2017;14(1):241e249.

11. Wang JR, Luo YH, Piao XJ, dkk. Mekanisme yang mendasari apoptosis yang diinduksi isoliquiritigenin dan penghentian siklus sel melalui jalur MAPK/STAT3/NF-kappaB yang dimediasi ROS dalam sel karsinoma hepatoseluler manusia.Pengembang Narkobares. 2019;80(4):461e470. e-pub sebelum cetak 31/01/2019.

12. AH, CS, YY, dkk. Evaluasi aktivitas estrogenik spesies licorice dibandingkan dengan hop yang digunakan dalam tumbuhan untuk gejala menopause.PLoSSatu. 2013;8(7):e67947.

13. LL L, PM T, CJ L, dkk. Reseptor pengenalan pola, Mincle, penting untuk mempertahankan fenotip makrofag M1 pada inflamasi ginjal akut.Inti Ginjal. 2017;91(3):587e602.

14. Schroder N, Schaffrath A, Welter JA, dkk. Penghambatan reseptor peptida formil meningkatkan hasil pada model tikus penyakit Alzheimer.Jperadangan saraf. 2020;17(1):131. e-pub sebelum dicetak 26/04/2020.

15. Neymeyer H, Label R, Reverte V, dkk. Aktivasi pensinyalan annexin A1 pada fibroblas ginjal memberikan efek antifibrotik.Acta Physiol. 2015;215(3):144e158. e-pub sebelum cetak 2015/09/04.

16. FC, MP, R A. Kaskade pensinyalan yang berbeda ditimbulkan oleh agonis reseptor 2 (FPR2) formil peptida yang berbeda.Int J Mol Sci. 2013;14(4):7193e7230.

17. HW, XP, YG, dkk. Senyawa turunan Ganoderma-A memberikan efek penghambatan melalui reseptor formil peptida 2.Farmakol Depan. 2020;11:337.

18. Wang Y, Cai J, Tang C, Dong Z. Mitophagy pada cedera ginjal akut dan perbaikan ginjal.Sel. 2020;9(2). e-pub sebelum dicetak 2020/02/07.

19. Sato Y, Takahashi M, Yanagita M. Patofisiologi AKI untuk perkembangan CKD.Semin Nefrol. 2020;40(2):206e215. e-pub sebelum dicetak 2020/04/19.

20. Ronco C, Bellomo R, Kellum JA. Cedera ginjal akut.Lanset. 2019;394(10212): 1949e1964. e-pub sebelum cetak 2019/11/30.

21. PZ, HM J, JW Z, dkk. Efek perlindungan isoliquiritigenin terhadap cedera otak pada tikus septik melalui redaman NF-kB.Diflammofarmakologi. 2019;27(4): 809e816.

22. DX, WH, ST Y, YS T. Isoliquiritigenin meringankan cedera ginjal hipertensi yang diinduksi Ang II melalui penekanan sitokin inflamasi dan apoptosis yang diinduksi stres oksidatif melalui jalur Nrf2 dan NF-kB.Biokimia BiofisikaRes Commun. 2018;506(1):161e168.

23. YW, XC, XG, dkk. Isoliquiritigenin mencegah perkembangan gejala seperti psoriasis dengan menghambat NF-kB dan sitokin proinflamasi.J MolMed(Berl). 2016;94(2):195e206.