Efek Protektif Glikosida Total Dari Cistanche Salsa Pada Cedera Hati Eksperimental

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964{0}}

Wang Yanfang, Zhao Jijun, Hai Pengli, Xue Peifeng, Li Hui, Li Minhui

Abstrak

Dalam percobaan ini, model cedera hati alkoholik pada tikus didirikan, dan indikator biokimia fungsi hati dan perubahan histopatologi hati digunakan sebagai indikator inspeksi. Selidikiefek perlindungan dari total glikosida cistanche salsa pada cedera hati alkoholik eksperimental. Berikan totalglikosida dari cistanche salsadosis tinggi (130 mg/kg) dan dosis sedang dengan gavage (100 mg/kg), dosis rendah (65 mg/kg), dan bidentate (150 mg/kg) sebagai obat kontrol positif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ALT dan AST serum meningkat secara signifikan; Aktivitas SOD di hati berkurang, dan kandungan MDA meningkat; lipidosis sel hati muncul. Glikosida total kelompok dosis tinggi cistanche salsa efektif dalam Meningkatkan indeks fungsi hati dan mengurangi degenerasi lipid sel hati. Atas dasar ini, penentuan awalechinacosidadanakteosidakandungan total glikosida salsa cistanche adalah 29,1 persen. Percobaan di atas menunjukkan bahwa total glikosida salsa cistanche memiliki efek perlindungan pada cedera hati alkoholik pada tikus, dan juga menegaskan bahwa echinacosida dan acteoside adalah bahan aktif utama dari total glikosida salsa cistanche.

Kata kunci: glikosida total salsa cistanche; kromatografi cair kinerja tinggi; akteosida; echinacosida; cedera hati alkoholik

salsa jerukadalah tanaman Cistanche dari keluarga Orobanchaceae (Orobanchaceae), juga dikenal sebagai salina, tanaman parasit herba abadi, terutama didistribusikan di gurun, gurun, dan daerah kering lainnya. Daerah penghasil utama berada di Xinjiang dan Mongolia Dalam. 1]. Karena fakta bahwa Herba Cistanche dari keluarga yang sama dan genus yang sama telah digali dalam jumlah besar, dan tanaman parasit sulit untuk berkembang biak, sumber daya obat menurun dari hari ke hari, dan sulit untuk memenuhi permintaan pasar. Di negara kita, salsa cistanche rakyat digunakan sebagai pengganti cistanche deserticola, tetapi laporan penelitiannya sedikit. Untuk lebih memperjelas nilai obatnya, total glikosida cistanche salsa (total glikosida dari Cistanche salsa), kelas zat yang mengandung glikosida fenilethanoid, telah dipelajari secara farmakologis.Glikosida total salsa cistanche memiliki efek perlindungan pada saraf[2] dan dapat melindungi DNA dari kerusakan oksidatif yang disebabkan oleh hidroksil (OH·) [3]. Cistanche salsa fenilethanoid glikosida dapat secara signifikan meningkatkan aktivitas superoksida dismutase (SOD) pada jaringan jantung, hati, dan otak tikus [4]. Penelitian di atas menunjukkan bahwatotal glikosida dari cistanche salsamemiliki efek antioksidan.

Insiden penyakit hati alkoholik (ALD) meningkat dari tahun ke tahun di negara saya. Alkohol telah menjadi penyebab utama kedua kerusakan hati setelah virus hepatitis [5]. Untuk pengobatan cedera hati alkoholik, ada kekurangan obat yang aman dan efektif. Cara menggunakan sumber daya tanaman untuk mengembangkan obat dan produk kesehatan anti-alkohol dan pelindung hati telah menarik perhatian luas di industri farmasi dan makanan. Setelah literatur yang luas, telah ditemukan bahwa cedera hati alkoholik berhubungan dengan stres oksidatif, dantotal glikosida cistanche salsa memiliki efek pada cedera hati alkoholiky. Penelitian tentang efek perlindungan masih kosong. Penelitian dalam percobaan ini memberikan dasar ilmiah untuk pengembangan dan pemanfaatan glikosida total salsa cistanche.

1 Bahan dan peralatan

1. 1 Obat dan reagen

Cistanche salsadisediakan oleh Laboratorium Kunci Identifikasi dan Standarisasi Bahan Obat Mongolia, Baotou Medical College; Pil tetes bifendate (Zhejiang Wanbang Pharmaceutical Co., Ltd., nomor batch A02121139); Kit Alanine Aminotransferase (ALT), kit Aspartame Acid aminotransferase (AST), kit uji malondialdehid (MDA), kit superoksida dismutase (SOD), kit penentuan protein biru brilian Coomassie (Institut Bioteknologi Nanjing Jiancheng, nomor batch 20110422); Minuman Keras 56 derajat (Beijing Red Star Co., Ltd.); reagen lainnya murni di dalam negeri.

1. 2 Hewan

72 tikus jantan spesies Kunming, dengan berat 17-22 g (Pusat Hewan Laboratorium Universitas Mongolia Dalam, Sertifikat Kualifikasi Hewan No.:6 (Mongolia 2002-0001)).

1. 3 Instrumen

Spektrofotometer sinar ultraviolet [Unico (Shanghai) Instrument Co., Ltd., model UV-2000]; Pembaca pelat mikro (Beckman Coulter, AS, model AD340); Centrifuge berkecepatan tinggi (Hangzhou Aipu Instrument Equipment Co., Ltd., model TG18-WS); Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (Thermo Fisher Scientific, Model Ultimate 3000); Neraca Analitik (METTLER TOLEDO Instruments Co., Ltd. Model AR153O); Osilator Ultrasonik (Shanghai Branson, Model SB3200); Pengering beku (Beijing Boyikang Experimental Instrument Co., Ltd., model FD-1-50).

2 Metode dan hasil

2. 1 Studi total glikosida aktivitas salsa cistanche

2. 1. 1 Total glikosida ekstraksi salsa cistanche

2. 1. 1. 1 Ekstraksi ekstrak kasar

Timbang 100 g bubuk kasar cistanche salsa, tambahkan 600 mL etanol 70 persen dan rendam selama 3 jam, ekstrak secara ultrasonik selama 30 menit, saring, dan ulangi langkah di atas dua kali pada residu filter, gabungkan filtrat dan konsentrat untuk memulihkan etanol sampai tidak memiliki rasa alkohol, kumpulkan ekstraknya dan keringkan untuk mendapatkan ekstrak kasar cistanche salsa 19,46 g.

2. 1. 1. 2 Proses pemurnian

Masukkan 10 g ekstrak kasar cistanche salsa ke dalam gelas kimia, tambahkan 20 mL air hingga larut dalam ultrasound, tambahkan 80 mL etanol absolut, kocok rata dan tempatkan selama 12 jam kemudian lakukan filtrasi, filtrat dipekatkan hingga pulih etanol sampai tidak ada rasa alkohol, dan dikeringkan dengan cara dibekukan untuk mendapatkan 8.408 g dari total glikosida ekstrak cistanche salsa.

2. 1. 2 Pengelompokan dan pemberian hewan

72 ekor mencit diberi pakan adaptif selama 2 hari sebelum percobaan dan dibagi secara acak menjadi 6 kelompok, masing-masing 12 ekor, yaitu kelompok kontrol blanko, kelompok model cedera hati alkoholik, dan kelompok kontrol positif (150 mg /kg bidentat), Total glikosida kelompok dosis tinggi salsa cistanche (130 mg/kg), total glikosida kelompok dosis sedang salsa cistanche (100 mg/kg) dan total glikosida salsa cistanche rendah- kelompok dosis (65 mg/kg). Hewan pada masing-masing kelompok diberikan pemberian intragastrik (ig) dua kali sehari, dan volume ig adalah 0,2 mL/20 g berat badan. Kelompok kontrol kosong dan kelompok model diberi volume garam yang sama. Dua jam setelah pemberian masing-masing, kecuali untuk kelompok kontrol kosong, kelompok lain diberi 56 derajat minuman keras pada 0,4 mL/20 g berat badan ig selama 10 hari berturut-turut menyebabkan model cedera hati alkoholik akut. Pada hari ke-9 pembangunan model, puasa tidak diperbolehkan. Pada hari ke 10 diberikan anggur putih 56 derajat selama 3 jam. Bola mata diambil darahnya dan dipisahkan serumnya. Setelah pengambilan darah, mencit dikorbankan. Timbang, ambil lobus kanan hati dan tempatkan dalam larutan fiksatif formaldehid 10 persen, dan tempatkan sisa hati dalam lemari es pada derajat -20 .

2. 1. 3 Pemrosesan statistik

Gunakan software statistik SPSS 11.5 untuk mengolah data, analisis varians, P<0.05 is="" statistically="">

2. 1. 4 Pengaruh total glikosida salsa cistanche terhadap berat badan, berat hati, dan indeks hati cedera hati alkoholik akut pada tikus

Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1, berat hati dan indeks hati tikus pada kelompok model secara signifikan lebih tinggi daripada kelompok kontrol kosong (P<0.05), indicating="" liver="" damage.="" compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" liver="" weight="" and="" liver="" index="" of="" mice="" in="" the="" total="" glycoside="" of="" the="" cistanche="" salsa="" high-dose="" group="" and="" the="" positive="" control="" group="" were="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01). there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" total="" glycoside="" of="" cistanche="" salsa="" medium="" and="" low-dose="" groups="" (="" p="">0.05).

2. 1. 5 Pengaruh total glikosida salsa cistanche pada serum AST dan ALT

Darah yang dikumpulkan disentrifugasi pada 3,5 × 103 r / menit selama 10 menit untuk menyiapkan serum. Menggunakan metode Lai, pembacaan spektrofotometer UV-Vis 505 nm digunakan untuk mengetahui aktivitas ALT dan AST dalam serum. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2, serum ALT dan AST pada kelompok model secara signifikan lebih tinggi daripada kelompok kontrol kosong (P<0.05), indicating="" that="" the="" model="" group="" was="" successfully="" modeled.="" the="" serum="" alt="" and="" ast="" of="" mice="" in="" the="" positive="" control="" group="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" model="" group=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" alt="" and="" ast="" of="" mice="" in="" the="" total="" glycoside="" of="" the="" cistanche="" salsa="" high-dose="" group="" were="" significantly="" lower=""><0.01). there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" total="" glycoside="" of="" the="" cistanche="" salsa="" middle="" and="" low="" dose="" group="" and="" the="" model="" group="" (p="">0.05).

2. 1. 6 Pengaruh total glikosida salsa cistanche terhadap kandungan MDA dan aktivitas SOD di hati

Ambil 0.3 g jaringan hati untuk menyiapkan 10 persen dan 1 persen homogenat. Sentrifugasi 1 persen homogenat hati dengan 3,5 × 103 r/menit selama 10 menit dan ambil supernatannya. Larutan, protein dalam homogenat hati ditentukan dengan metode Coomassie Brilliant Blue. Ambil 1 persen supernatan homogenat hati, operasikan sesuai dengan kotak uji SOD, dan baca pada 450 nm pada pembaca lempeng mikro. Ambil 10 persen supernatan homogenat hati, operasikan sesuai dengan kit penentuan MDA, dan ukur absorbansinya (A532) dengan spektrofotometer pada 532 nm.

Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3, kandungan MDA dalam hati kelompok model secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol kosong (P<0.05), and="" the="" sod="" activity="" was="" significantly="" reduced=""><0.05). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" mda="" content="" in="" the="" liver="" of="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" lower=""><0.01), and="" the="" activity="" of="" sod="" was="" significantly="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" mda="" content="" of="" the="" total="" glycoside="" of="" the="" cistanche="" salsa="" high-dose="" group="" was="" significantly="" lower=""><0.01), and="" the="" activity="" of="" sod="" was="" significantly="" increased=""><0.01). the="" total="" glycoside="" of="" cistanche="" salsa="" medium="" and="" low="" dose="" groups="" had="" no="" difference="" in="" mda="" and="" sod="" compared="" with="" the="" model="" group="" (p="">0.05).

2. 1. 7 Pengaruh total glikosida salsa cistanche pada perubahan patologis jaringan hati pada tikus

Pemeriksaan patologis: jaringan hati difiksasi dengan formaldehida 10 persen, parafin konvensional bagian tertanam (ketebalan irisan 5 m), pewarnaan HE, dan pengamatan perubahan histopatologi hati di bawah mikroskop cahaya.

Hati kelompok kontrol blanko berwarna merah tua dan teksturnya lembut. Struktur jaringan hati normal dan struktur lobulus hati utuh. Itu poligonal dengan batas yang jelas, dan nukleusnya bulat dan jelas terletak di tengah sel. Volume hati mencit kelompok model dan total glikosida cistanche salsa kelompok dosis sedang dan rendah meningkat dan warnanya menjadi kuning. Perubahan patologis di bawah mikroskop terutama degenerasi lemak hepatosit, dengan vakuola lipid difus dan hepatosit di dalam sel. Besar, sitoplasma diisi dengan tetesan lipid kecil dan vakuola, dan nukleus masih di tengah. Pada kelompok kontrol positif dan total glikosida dari kelompok dosis tinggi cistanche salsa, lipidosis sel hati pada tikus berkurang sampai batas tertentu, dan jumlah tetesan lipid berkurang sampai batas tertentu.

2. 2 Analisis komponen utama dari total glikosida cistanche salsa

2. 2. 1 Kondisi kromatografi

Kondisi kromatografi adalah kolom kromatografi ZORBAX ODS (250×4,6 mm, 5μm); fase gerak: metanol 0,2 persen larutan asam format (27,5∶72,5), elusi gradien; suhu kolom 30 derajat; laju aliran 1 mL/menit; panjang gelombang deteksi 334 nm. Di bawah kondisi kromatografi di atas, pemisahanechinacosidadanakteosidabaik.

2. 2. 2 Persiapan larutan referensi

Timbang secara akurat 1,3 mg dan 1,2 mgechinacosidadanakteosidabahan acuan untuk membuat {{0}}.13 mg/mL larutan bahan acuan echinacosida dan 0,12 mg/mL larutan acuan akteosida.

2. 2. 3 Persiapan larutan uji

Timbang akurat 0.1082 g total glikosida ekstrak salsa cistanche dan encerkan hingga 50 mL dengan larutan fase gerak.

2. 2. 4 Hubungan linier

Gambarkan dengan tepat solusi referensi {{0}}. 06, 0. 12. 0. 18. {{10}}. 24. 0. 30, 0. 48. 0. 54. 0. 72. 1. Pada 20 mg/mL, injeksikan 5 L ke dalam kromatografi cair secara berurutan, dan hitung persamaan regresi dengan volume injeksi (ug) dari dua zat acuan sebagai absis dan luas puncak yang sesuai sebagai ordinatnya. echinacosida: Y=11.868 X-0.0785, R=0.9997; acteoside: Y=18.026X-0.1913, R=0.9997. Akibatnya, zat referensi echinacosida memiliki hubungan linier yang baik dalam kisaran 0,0635 hingga 0,4445 ug; zat referensi akteosida berada dalam kisaran 0,059 hingga 1,18 ug Hubungan linier dalam baik.

2. 2. 5 Uji presisi

Tepatkan 10 L larutan uji yang sama, dan ulangi injeksi 5 kali pada kondisi kromatografi di atas. Catat kromatogram dan tentukan luas puncaknya. Hasilnya adalah RSD echinacosida 0,89 persen,RSD dariacteoside sebesar 1,87 persen , menunjukkan bahwa ketepatan instrumen baik.

2. 2. 6 Uji stabilitas

Larutan uji yang sama, berturut-turut, pada 0, 2, 4, 8, 16, 32, 40, 48 jam, secara akurat menarik 10 L, menyuntikkannya ke dalam kromatografi cair, merekam kromatogram, dan mengukur luas puncaknya . Hasilnya adalah RSD dari echinacosida 1. 58 persen , RSD dariakteosidaadalah 0. 49 persen, menunjukkan bahwa larutan uji dalam waktu 48 jam

Stabilitasnya bagus.

2. 2. 7 Uji pengulangan

Timbang dengan akurat sekitar 0.2 mg dari kumpulan sampel yang sama, total 5 bagian, dan siapkan 5 bagian larutan. Menurut metode penentuan kandungan, secara akurat pipet 10 L ke dalam kromatografi cair, catat kromatogramnya, dan tentukan luas puncaknya. Hasilnya adalah echinacoside RSD sebesar 1,91 persen dan RSD glikosida Verbascum sebesar 2,08 persen , menunjukkan bahwa metode penentuan memiliki keterulangan yang baik.

2. 2. 8 Tes tingkat pemulihan

Timbang dengan akurat 0.2 g atotal glikosida dari cistanche salsa, tambahkan sejumlahechinacosida dan akteosidazat referensi masing-masing, siapkan larutan uji sesuai dengan metode di bawah 2.2.3 di atas, dan lakukan penentuan menurut metode penentuan konten di bawah kondisi kromatografi yang ditentukan. Hasilnya Tingkat pemulihan rata-rata echinacosida adalah 98,49 persen, RSD 1,06 persen, tingkat pemulihan rata-rata acteoside adalah 97,35 persen, dan RSD adalah 1,45 persen.

2. 2. 9 Penentuan sampel

Tepatkan 10 L masing-masing larutan referensi dan larutan uji, injeksikan sampel, tentukan kondisi kromatografi di atas, dan hitung kandungan sampel dengan metode standar eksternal. Hasilnya ditunjukkan pada Tabel 4 Rata-rata kandungan echinacosida adalah 24,5 persen, dan rata-rata kandunganakteosidaadalah 4,6 persen.

3 Diskusi

Kerusakan hati alkoholik mengacu pada kerusakan hati dan serangkaian perubahan patologis yang disebabkan oleh minum alkohol dalam jangka panjang. Asupan alkohol yang berlebihan dalam jangka panjang dapat menyebabkan kerusakan sel hati, kemudian berkembang menjadi fibrosis hati, bahkan sirosis hati [6]. Dibandingkan dengan kelompok model, total glikosida kelompok dosis tinggi cistanche salsa dalam percobaan ini secara signifikan mengurangi aktivitas ALT dan AST dalam serum tikus, secara signifikan mengurangi kandungan MDA di hati, dan secara signifikan meningkatkan aktivitas SOD , yang mengurangi lipidosis sel hati sampai batas tertentu. , Mengurangi jumlah tetesan lipid. Tidak ada perbedaan yang signifikan antara kelompok dosis menengah dan rendah dan kelompok model. Hasil percobaan ini sesuai dengan hasil penelitian pefek perlindungan dari total glikosida Cistanche pada cedera hati alkoholik pada tikus [7].

Total glikosida cistanche salsa melindungi kerusakan sel hatidengan mengurangi permeabilitas membran sel dan meningkatkan kandungan ALT dan AST yang dilepaskan ke dalam darah; dapat meningkatkan aktivitas SOD dan menghilangkan sejumlah besar radikal bebas yang dihasilkan oleh alkohol dalam metabolisme tubuh. ; Dapat mengurangi pembentukan MDA dan mencegahnya merusak struktur membran sel jaringan [8-10]. Glikosida total salsa cistanche memiliki efek perlindungan pada cedera hati alkoholik, dan ada hubungan efek kuantitatif. Memeriksa literatur, tidak ada analisis kuantitatif bahan aktif total glikosida salsa cistanche. Dalam makalah ini, isi dariakteosidadanechinacosida, komponen utama dari total glikosida cistanche salsa, dianalisis secara kuantitatif untuk pertama kalinya dengan HPLC, yang menyumbang 29,1 persen dari total glikosida. Memberikan dasar ilmiah untuk pengembangan dan pemanfaatan total glikosida salsa cistanche. Studi farmakologi modern telah menemukan bahwa echinacosida memiliki efek perlindungan pada sel PC12 yang rusak oleh hidrogen peroksida dan kerusakan stres oksidatif pada tikus demensia vaskular [11,12]. Keduanyaechincoside dan acteoside memiliki efek penghambatan pada sitotoksisitas hepatositdiinduksi oleh D GalN dan TNF- [13]. Selain itu, diperkirakan bahwatotal glikosida cistanche salsa melindungi tikus dari cedera hati alkoholikdapat ditingkatkan denganechinacosida dan akteosidauntuk meningkatkan aktivitas enzim antioksidan seluler, meningkatkan kapasitas antioksidan sel hati, sehingga menjaga integritas membran plasma sel hati, sehingga sel hati dapat berfungsi normal Fungsi pertahanan dan kompensasi. Kami selanjutnya akan mengisolasi senyawa dalam studi masa depan dan menggunakan teknik biologi molekuler untuk mempelajari regulasi senyawa monomer pada apoptosis sel hati dan hubungannya dengan regulasi gen target terkait.

referensi

1 Zhang HW. Studi tentang konstituen kimia dan

sidik jari Cistanche salsa (CA Mey.) G. Beck. Ho hot: Perguruan Tinggi Kedokteran Mongolia Dalam, MSc. 2008.

2 Tian XF, Pu XP. Glikosida feniletanoid dari Cistanches salsa menghambat apoptosis yang diinduksi oleh ion metil fenil piridinium di neuron. J Ethnopharmacol, 2005, 97: 59-63.

3 Wang XW, Jiang XY, Wu LY. Memulung efek glikosida Cistanche pada radikal bebas dan perlindungan terhadap OH·-diinduksi kerusakan DNA in vitro China Pharm J, 2001, 36: 29-32.

4 Wu HH. Persiapan dan aktivitas antioksidan glikosida fenilethanoid dari Cistanche salsa. Nanjing: Universitas Pertanian Nanjing, MSc. 2008.