Proporsi Konsentrat Dalam Diet Sapi Perah Laktasi Dini Memiliki Pengaruh Berbeda Terhadap Sirkulasi Leukosit Profil Transkriptomik Global, Kesehatan Dan Kesuburan Menurut Paritas

Abstrak:Fungsi sirkulasi leukosit pada sapi perah ditekan setelah melahirkan, dengan keseimbangan energi negatif sebagai faktor risiko. Profil transkriptomik leukosit dibandingkan secara terpisah pada 44 sapi Holstein-Friesian multipara (MP) dan 18 primipara (PP) yang menerima pakan berbeda dalam proporsi konsentrat untuk menguji apakah disfungsi kekebalan dapat dikurangi dengan nutrisi yang tepat. Setelah melahirkan, sapi diberikan (1) konsentrat rendah (LC); (2) pakan konsentrat sedang (MC), atau (3) pakan konsentrat tinggi (HC) dengan proporsi konsentrat terhadap silase rumput masing-masing 30%:70%, 50%:50%, dan 70%:30%. Data fenotip sapi yang dikumpulkan meliputi metabolit yang bersirkulasi, hasil susu, serta catatan kesehatan dan kesuburan. Urutan RNA dari leukosit yang bersirkulasi pada 14 hari dalam susu dilakukan. Diet HC meningkatkan keseimbangan energi pada kedua kelompok umur. Terdapat lebih banyak gen yang diekspresikan secara berbeda pada sapi PP dibandingkan pada sapi MP (460 vs. 173, perbandingan HC vs. LC) dengan sedikit tumpang tindih. Sapi MP yang diberi pakan LC menunjukkan peningkatan regulasi kaskade komplemen dan koagulasi serta mekanisme pertahanan kekebalan bawaan terhadap patogen dan memiliki kecenderungan lebih banyak kasus mastitis dan kesuburan yang lebih buruk. Sebaliknya, sapi PP yang diberi pakan HC menunjukkan respons imun yang lebih besar berdasarkan ekspresi gen dan data fenotipik serta interval melahirkan hingga pembuahan yang lebih lama. Oleh karena itu, leukosit sapi MP dan PP memberikan respons yang berbeda terhadap pola makan antara usia, pasokan nutrisi, dan kekebalan yang memengaruhi kesehatan dan kesuburan selanjutnya.

manfaat cistanche untuk pria-memperkuat sistem kekebalan tubuh

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Meningkatkan Imunitas

【Minta lebih lanjut】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikasi WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Kata kunci:imunosupresi pascapersalinan; kekebalan bawaan; metabolisme; leukosit; diet laktasi; transkriptom; reproduksi; sapi

1. Perkenalan

Pada awal pascapersalinan, sapi perah ditandai dengan imunosupresi yang memengaruhi imunitas bawaan dan adaptif, termasuk imunitas seluler dan humoral. Leukosit yang bersirkulasi direkrut ke dalam jaringan seperti kelenjar susu dan endometrium selama peradangan. Namun penelitian sebelumnya menunjukkan penurunan jumlah leukosit dan kapasitas fungsionalnya selama periode peripartum [1,2]. Efek yang dilaporkan meliputi gangguan fagositosis dan aktivitas ledakan oksidatif [3-5], penurunan respons sel T yang bersirkulasi terhadap agen mitogenik, dan penurunan produksi imunoglobulin oleh sel B [6,7]. Penyebabnya multifaktorial namun tampaknya terkait dengan pembagian nutrisi yang mendukung produksi susu pada awal laktasi, sehingga mengganggu fungsi kekebalan tubuh [8-10]. Leukosit memerlukan pasokan glukosa, berbagai asam lemak, dan kolesterol atau okisterol yang cukup untuk pemeliharaan dan fungsinya [8,11,12]. Namun, pasokan nutrisi yang tersedia diprioritaskan ke kelenjar susu setelah melahirkan, membutuhkan sekitar 25% lebih banyak energi dan protein yang dapat dimetabolisme dibandingkan yang disediakan oleh asupan pakan [8,13,14]. Selain itu, proses persalinan ditandai dengan proses inflamasi yang berhubungan dengan perubahan sekresi berbagai prostaglandin, steroid, dan sitokin serta kemungkinan cedera selama proses persalinan itu sendiri [15-17]. Respon inflamasi terhadap proses melahirkan anak dan metabolit yang dilepaskan selama mobilisasi jaringan memiliki efek anoreksia yang kuat, yang selanjutnya menurunkan asupan dan memperburuk keseimbangan energi negatif (NEB) [18]. Ketika asupan pakan tidak dapat memenuhi peningkatan kebutuhan energi, sapi memasuki periode NEB, dengan beberapa individu menjadi tidak seimbang secara metabolik [19-21]. NEB dikaitkan dengan resistensi insulin, penurunan ekspresi reseptor hormon pertumbuhan hati (GH), dan sintesis IGF-1 hati yang lebih rendah [22,23]. Pelepasan GH dengan insulin pada sapi postpartum merupakan adaptasi yang memprioritaskan suplai glukosa ke jaringan seperti sel epitel susu, yang penyerapannya tidak bergantung pada insulin [8]. Dalam situasi ini, persaingan pasokan energi antara kelenjar susu dan sistem kekebalan tubuh tidak dapat dihindari karena keduanya bergantung pada substrat penting yang sama dan keduanya merupakan konsumen energi yang besar. Kvidera dkk. [24] menunjukkan bahwa aktivasi respon imun penuh pada sapi membutuhkan 2,5 hingga 3,1 Kg glukosa per hari. Hal ini serupa dengan perkiraan kebutuhan glukosa sebesar 2,7 kg/hari yang diambil oleh sel epitel susu untuk produksi susu sebesar 40 kg/hari [8].

Mobilisasi jaringan juga dikaitkan dengan peningkatan konsentrasi asam lemak non-esterifikasi (NEFA), beta-hidroksibutirat (BHB), dan penurunan IGF-1 dalam sirkulasi, yang semuanya berkontribusi terhadap disfungsi imun [5,9,10,20 ]. Sebagai contoh, penelitian terbaru kami menggambarkan bahwa adhesi sel leukosit ke sel dihambat ketika konsentrasi NEFA melebihi 750 µM [25]. Meskipun mobilisasi jaringan merupakan adaptasi normal mamalia untuk mendukung laktasi, banyak penelitian menunjukkan bahwa NEB yang parah memiliki pengaruh besar pada kemampuan sapi untuk hamil tepat waktu [26]. Hal ini dapat disebabkan oleh berbagai faktor termasuk keterlambatan dalam pemulihan lingkungan rahim yang sesuai [2]; periode anovulasi yang berkepanjangan [27], lingkungan intrafollicular yang buruk [28], dan gangguan kualitas oosit [29]. Sapi dara perah umumnya melahirkan sekitar 90% dari berat badan dewasanya [30]. Penelitian kami sebelumnya menunjukkan bahwa sapi primipara (PP) memiliki konsentrasi insulin, IGF-1, dan leptin yang lebih tinggi dalam sirkulasinya, konsentrasi metabolit darah (BHB, NEFA, dan urea) yang lebih rendah, serta konsentrasi glukosa yang lebih tinggi dibandingkan sapi multipara (MP ) sapi setidaknya selama 7 minggu setelah melahirkan [31,32]. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat lebih sedikit pelepasan sumbu somatotrofik pada awal laktasi pada sapi PP dibandingkan dengan sapi MP, terkait dengan lemahnya prioritas nutrisi ke kelenjar susu, sehingga memungkinkan pertumbuhan yang berkelanjutan. Profil ekspresi gen dalam sirkulasi leukosit juga berbeda antara sapi PP dan MP selama awal laktasi [33].

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh

Optimalisasi pengelolaan nutrisi pada musim kemarau dapat meningkatkan asupan bahan kering (DMI), menurunkan kejadian penyakit periparturien, dan meningkatkan kesuburan (34). Ada pedoman umum tentang cara mengurangi risiko penyakit terkait pemberian pakan dan manajemen [35]. Namun, hanya ada sedikit informasi yang tersedia mengenai formulasi pakan untuk seekor sapi yang mengalami ketidakseimbangan metabolisme selama periode postpartum yang dapat meningkatkan fungsi kekebalan tubuh, menurunkan kejadian penyakit, dan meningkatkan kinerja reproduksi selanjutnya. Merumuskan diet dengan potensi asupan nutrisi yang tinggi merupakan pendekatan praktis [36]. Dalam penelitian ini, sapi pada tahap awal laktasi diberikan pakan rendah (LC), sedang (MC), atau konsentrat tinggi (HC) berdasarkan proporsi konsentrat terhadap silase rumput, dan efeknya terhadap kesehatan dan penyakit metabolik, serta kekebalan sistemik ( dengan menilai profil ekspresi gen leukosit global yang bersirkulasi) ditentukan. Data dari sapi PP dan MP dianalisis secara terpisah untuk menghindari efek perancu yang timbul dari paritas. Hipotesis kami adalah bahwa diet konsentrasi tinggi akan meningkatkan fungsi kekebalan tubuh dan bermanfaat bagi kesuburan.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh

2. Hasil

2.1. Pengaruh Pola Makan terhadap Asupan Bahan Kering, Hasil Susu, Keseimbangan Energi dan Metabolit Darah

Parameter susu, berat badan (BB), DMI, skor kondisi tubuh (BCS), keseimbangan energi (EBAL), dan metabolit darah sapi MP dan PP pada umur sekitar 14 hari dalam susu (DIM) dirangkum dalam Tabel 1. DMI untuk sapi MP berbeda nyata antara ketiga kelompok pakan dengan urutan HC > MC > LC (p < 0.01–0.0{{11 }}1). Produksi susu sapi MP yang diberi pakan HC secara signifikan lebih tinggi dibandingkan sapi yang diberi pakan LC (p < 0.05). Perbedaan produksi susu terkoreksi energi (ECM) antara kelompok LC dan HC adalah signifikan (p < 0.05), dengan nilai antara pada kelompok MC. Nilai EBAL pada ketiga kelompok MP adalah negatif tetapi nilai EBAL pada sapi MC dan HC secara signifikan lebih baik (kurang negatif) dibandingkan pada sapi LC (p <0,01). Konsentrasi glukosa yang bersirkulasi (p <0,01) dan IGF-1 (p <0,001) pada sapi HC secara signifikan lebih tinggi dibandingkan sapi LC. Sapi MP yang diberi pakan HC juga menghasilkan lebih sedikit urea yang bersirkulasi (p <0,001), BHB (p <0,05), dan NEFA dibandingkan sapi yang diberi pakan LC dengan konsentrasi LC > MC > HC, meskipun terdapat perbedaan konsentrasi NEFA antar kelompok pakan. tidak signifikan secara statistik.

Tabel 1. Total asupan bahan kering, parameter susu, bobot badan, keseimbangan energi, skor kondisi tubuh, dan metabolit darah sekitar 14 hari setelah melahirkan, dianalisis berdasarkan paritas dan pola makan 1,2

Pada sapi PP, sapi yang diberi pakan MC atau HC memiliki DMI lebih tinggi dibandingkan sapi yang diberi pakan LC (p < {0}}.01). Hasil susu tidak berbeda nyata. EBAL positif pada sapi yang diberi pakan MC atau HC, sedangkan pada sapi yang diberi pakan LC, hasilnya negatif. Perbedaan EBAL antara sapi HC dan LC PP signifikan (p <0,05). Dari metabolit yang diukur, hanya konsentrasi urea yang berbeda antar kelompok, yang lebih rendah pada sapi HC (LC > MC > HC, p <0,001 untuk LC vs. HC atau MC).

2.2. Pengaruh Diet pada Parameter Peradangan

Efek dari pola makan terhadap parameter inflamasi yang diukur pada uterus dan kelenjar susu disajikan pada Tabel 2. Pada sapi PP, rasio leukosit polimorfonuklear terhadap sel epitel uterus (PMN: UECs) yang dikumpulkan dari uterus menggunakan cytobrush secara signifikan lebih tinggi untuk sapi yang diberi pakan HC dibandingkan dengan pakan LC (p < 0.05). Pada sapi MP, trennya searah, dengan LC < MC < HC, namun tidak mencapai signifikansi statistik. Pada susu, sapi MP yang diberi pakan LC memiliki SCC yang jauh lebih tinggi dibandingkan sapi yang diberi pakan MC atau HC (p < 0.05), sedangkan pada sapi PP, tren yang tidak signifikan terjadi dalam arah sebaliknya. . Konsentrasi N-asetil- -d-glukosaminidase (NAGase) dan laktat dehidrogenase (LDH) susu, enzim susu yang mengindikasikan mastitis, mengikuti tren umum yang sama dengan nilai SCC tetapi tidak ada perbedaan yang signifikan. Hasil ini didukung oleh catatan kesehatan. Sapi MP yang diberi pakan HC tidak mengalami kasus mastitis (15/0) sedangkan 4/14 (28,6%) sapi yang diberi pakan LC didiagnosis menderita mastitis klinis dalam waktu 16 hari setelah melahirkan. Kecenderungan ini kembali terjadi dalam arah yang berlawanan pada sapi PP dengan satu dari enam (16,7%) yang diberi pakan LC menderita mastitis klinis dibandingkan dengan satu kasus mastitis klinis dan dua kasus mastitis subklinis pada pakan HC (50%).

Tabel 2. Parameter inflamasi pada umur sekitar 14 hari setelah melahirkan menurut paritas dan ransum 1,2.

2.3. Data Kesuburan

Rincian data kesuburan disajikan pada Tabel 3. Untuk sapi MP, sapi yang diberi pakan LC membutuhkan waktu sedikit lebih lama untuk hamil dan membutuhkan lebih banyak layanan per konsepsi dibandingkan sapi HC (2,4 ± 0,42 vs. 1,6 ± 0.23), meskipun lebih banyak sapi HC yang tidak dilayani (keputusan manajemen) atau gagal hamil sama sekali (6{{10}}.0% vs .71,4%). Namun tidak satu pun dari perbedaan tersebut yang signifikan. Untuk sapi PP, yang terjadi justru sebaliknya, sapi LC mempunyai interval pembuahan terpendek yaitu 29 hari (p < {{20}}.05), dengan lima dari enam hewan yang melakukan pembuahan untuk pertama kalinya . Sebaliknya, setengah dari kelompok HC tidak dilayani (n=2) atau gagal untuk hamil (n=1), dengan tiga kelompok yang hamil memerlukan 2,0 ± 0,41 layanan per konsepsi. Hal ini mengakibatkan kelompok HC memiliki skor "in calf by" (ICB) yang jauh lebih tinggi (p <0,05).

Tabel 3. Data fertilitas menurut paritas dan pola makan 1,2

2.4. Profil Transkriptomik Leukosit pada Sapi Menawarkan Proporsi Konsentrat yang Berbeda

Referensi genom sapi ARS-UCD 1.2 yang disediakan oleh RefSeq (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/assembly, diakses pada 1 Mei 2022) berisi 35.158 gen, dimana 19.001 gen leukosit dapat dihitung ketika pengurutannya berbunyi dalam file FASTQ dipetakan ke sana. Plot gunung berapi yang menunjukkan profil ekspresi pada sapi MP dan PP yang menerima tiga pakan berbeda disajikan pada Gambar 1. Pada sapi MP, terdapat 173 gen yang diekspresikan secara berbeda (DEG) dalam perbandingan antara HC dan LC, 126 antara MC dan LC, dan 68 untuk HC vs. MC (File Tambahan S1A – C). Diagram Venn menggambarkan bahwa tidak ada gen (DEG umum) yang signifikan dalam ketiga perbandingan makanan (Gambar 2A). Pada sapi PP, terdapat 460 DEG dalam perbandingan HC vs LC, 178 antara MC vs LC, dan 128 antara HC vs MC (File Tambahan S2A – C). Hanya satu gen umum (DCN, perubahan lipatan (FC)=−7.3) yang signifikan dalam ketiga perbandingan makanan (Gambar 2B). Ini mengkodekan dekorin, protein yang berperan dalam perakitan fibril kolagen. Secara keseluruhan terlihat bahwa jumlah DEG yang lebih besar ditemukan pada perbandingan pola makan ekspresi gen leukosit pada sapi PP dibandingkan pada sapi MP meskipun ukuran kelompoknya lebih kecil, dengan sebagian besar gen ini diregulasi pada pola makan HC. Selain itu, terdapat sedikit tumpang tindih dalam gen yang diidentifikasi antara kelompok umur yang berbeda, seperti yang diilustrasikan dalam diagram Venn pada Gambar 3. Hal ini menunjukkan bahwa pola makan memiliki efek yang berbeda terhadap transkriptome leukosit pada sapi PP dan MP. Pada kedua kelompok umur, perbedaan terbesar ditemukan antara sapi yang diberi pakan LC vs. HC, jadi kami fokus pada perbandingan ini dalam analisis selanjutnya.

Gambar 1. Plot gunung berapi menunjukkan profil ekspresi sapi MP dan PP yang menerima tiga pakan berbeda. (A) MP sapi HC vs. LC, (B) MP sapi HC vs. MC, (C) MP sapi MC vs. LC, (D) PP HC vs. LC, (E) PP HC vs. MC dan (F ) PP MC vs.LC. HC: konsentrat tinggi (n=6 pada sapi PP dan n=14 pada sapi MP), MC: konsentrat sedang (n=5 pada sapi PP dan n=15 pada sapi MP ), dan LC: konsentrat rendah (n=6 pada sapi PP dan n=14 pada sapi MP). Perubahan lipatan telah ditransformasikan2-dalam log. Titik hijau menunjukkan gen yang diregulasi dengan p (BH) < 0.05 dan perubahan lipat Kurang dari atau sama dengan −1,5 dan titik merah menunjukkan gen yang diregulasi dengan p (BH) < {{ 16}}.05 dan perubahan lipat Lebih besar dari atau sama dengan 1,5. Titik oranye menunjukkan gen dengan p (BH) <0,05 tetapi perubahan lipatan absolut <1,5.

Gambar 2. Diagram Venn menunjukkan gen yang diekspresikan secara berbeda oleh leukosit yang bersirkulasi antara tiga kelompok pakan pada (A) sapi multipara (MP) dan (B) sapi primipara (PP). HC: konsentrat tinggi (n=6 pada sapi PP dan n=14 pada sapi MP), MC: konsentrat sedang (n=5 pada sapi PP dan n=15 pada sapi MP ) dan LC: konsentrat rendah (n=6 pada sapi PP dan n=14 pada sapi MP).

Gambar 3. Diagram Venn yang menunjukkan perbedaan ekspresi gen melalui sirkulasi leukosit antara sapi PP dan MP pada perbandingan (A) konsentrat tinggi (HC) dengan konsentrat rendah (LC); (B) HC dengan konsentrat sedang (MC), dan (C) MC dengan LC. HC: n=6 pada sapi PP dan n=14 pada sapi MP, MC: n=5 pada sapi PP dan n=15 pada sapi MP dan LC: n {{5 }} pada sapi PP dan n=14 pada sapi MP

2.5. Perbandingan Profil Ekspresi Gen Leukosit antara Sapi Multipara yang Diberi Pakan Konsentrat Tinggi dan Rendah

20 DEG teratas yang diregulasi dan diregulasi diberi peringkat berdasarkan nilai p (disesuaikan BH) pada sapi MP yang diberi HC dibandingkan dengan sapi yang diberi diet LC diberikan dalam File Tambahan S1D, E. Di antara DEG yang diregulasi, sebagian besar terlibat dalam GO fungsi proses sistem kekebalan tubuh, metabolisme, dan respons terhadap stimulus, dengan banyak protein penyandi yang memiliki peran ganda. Misalnya ALAS2 (pengkodean 50 -aminolevulinate synthase 2) yang berperan dalam proses metabolisme, respon terhadap stimulus, dan proses perkembangan. COL1A1 (rantai kolagen tipe I alfa 1) dan DAB2 terlibat dalam metabolisme, respons terhadap stimulus, organisme multiseluler, penggerak, dan perkembangan. 20 gen teratas yang mengalami downregulasi menggambarkan tema yang jelas tentang perubahan imunitas dengan 14 DEG terkait. Dari jumlah tersebut, DMTB1, FGA, FGB, dan TF mengkodekan peptida antimikroba, ALB dan TF mengkode protein fase akut negatif (APP), dan FGA dan FGG mengkodekan APP positif. Delapan gen berperan dalam metabolisme dan 10 gen terlibat dalam respons terhadap stimulus.

tanaman cistanche meningkatkan sistem kekebalan tubuh

DEG leukosit yang berasal dari perbandingan HC dengan kelompok LC selanjutnya dilakukan analisis pengayaan GO. 76 DEG yang diregulasi diperkaya secara signifikan dengan 208 fungsi, dimana 20 fungsi teratas berdasarkan skor pengayaan ditunjukkan pada Gambar 4A. Hal ini terkait dengan berbagai aspek fungsi seluler, dengan faktor pertumbuhan turunan trombosit yang mengikat di atasnya. Banyak fungsi yang terkait dengan metabolisme protein dan asam amino (melibatkan APLP1, COL1A1, COL1A2, COL3A1, HTR1B, dan P2RY12 di sebagian besarnya), biomineralisasi dan pemrosesan kolagen (melibatkan COL1A1, COL1A2, SPP1, dan TUFT1), dan komunikasi sel. Sebaliknya, fungsi utama dari 97 DEG yang didownregulasi memiliki tema yang jelas tentang berbagai proses pertahanan kekebalan (Gambar 4B) yang sebagian besar terkait dengan 20 DEG. Dari jumlah tersebut, FGA (APP positif) mengalami penurunan regulasi sebesar 85-kali lipat dalam perbandingan HC vs. LC. Alat browser GO merangkum fungsi biologis DEG yang diatur ke atas dan ke bawah ke dalam delapan kategori signifikan (Tabel 4). Kecuali untuk biomineralisasi, semua fungsi biologis lainnya, terutama yang terkait dengan pertahanan kekebalan, sebagian besar terkait dengan penurunan regulasi DEG.

Gambar 4. 20 fungsi GO teratas yang terkait dengan DEG yang diperoleh dari perbandingan HC vs. LC. (A) DEG yang diregulasi oleh MP, (B) DEG yang diregulasi oleh MP, (C) DEG yang diregulasi oleh PP, dan (D) DEG yang diregulasi oleh PP.

Tabel 4. Ringkasan fungsi utama pengayaan GO DEG leukosit pada perbandingan antara sapi multipara yang mendapat pakan konsentrat tinggi (n=14) dan rendah (n=14) pada awal laktasi.

Tabel 4. Lanjutan.

Gabungan DEG yang naik dan turun (n=173) secara signifikan diperkaya dengan 23 jalur KEGG yang terutama terkait dengan berbagai proses kekebalan dan metabolisme (Tabel 5). Kaskade komplemen dan koagulasi berada di atas dengan delapan DEG yang diturunkan regulasinya (CFB, FGA, FGB, FGG, KNG1, PROC, SERPINA1, dan VTN). Jalur inflamasi dari pensinyalan mirip NOD dikaitkan dengan enam DEG (IFNB1, MAPK10, OAS1X, OAS1Y, OAS1Z, dan OAS2), yang semuanya kecuali MAPK10 diturunkan regulasinya. Jalur pencernaan dan penyerapan protein mengandung enam DEG, tiga di antaranya (COL1A1, COL1A2, dan COL3A1) diregulasi dan tiga diregulasi ke bawah (CELA2A, COL5A3, dan ELN). Lima DEG yang diregulasi terlibat dalam jalur pensinyalan reseptor teraktivasi proliferator peroksisom (PPAR) (APOA2, APOC3, FABP1, HMGCS2, dan PCK1). Jalur interaksi matriks-reseptor ekstraseluler, adhesi fokal, dan sinyal sphingolipid semuanya terlibat dalam pemeliharaan struktur sel dan jaringan.

Tabel 5. Jalur signifikan yang diidentifikasi oleh pengayaan jalur KEGG terkait dengan ekspresi gen leukosit yang berbeda pada sapi multipara yang diberi diet konsentrat tinggi (n=14) dibandingkan dengan sapi yang diberi diet konsentrat rendah (n=14).

2.6. Perbandingan Pola Ekspresi Gen Leukosit antara Sapi Primipara yang Diberi Pakan Konsentrat Tinggi atau Rendah

20 DEG leukosit teratas yang bersirkulasi pada sapi PP yang diberi makan HC dibandingkan dengan diet LC tercantum dalam File Tambahan S2D, E. Imun, dan proses metabolisme mendominasi fungsi biologis DEG yang diregulasi paling atas, masing-masing mengandung 11 dan 12 DEG. Di antaranya, ACSL6, MMP9 dan SLC11A1 terlibat dalam proliferasi leukosit, dan ACSL6, ADGRG3, COL1A2, DUSP1, HCK, MMP9 dan PADI4 dalam proses perkembangan. SLC40A1 adalah pengangkut zat besi utama yang memainkan peran penting dalam menyeimbangkan kadar zat besi seluler dan sistemik. Beberapa DEG ini mengkode protein dengan berbagai fungsi. Misalnya, MMP9, DUSP1, SLC11A1, dan COL1A2 dikaitkan dengan sebagian besar fungsi GO di atas. Fungsi biologis DEG yang diatur dari atas ke bawah lebih beragam. Ada delapan DEG yang terlibat dalam proses sistem kekebalan tubuh, lima berperan dalam metabolisme, dan dua terkait dengan proliferasi leukosit dan proses perkembangan (EPCAM dan FCRL3). Sekali lagi, beberapa DEG, misalnya CD96 dan FCRL3, mengkodekan protein dengan peran ganda.

Pada sapi PP, 382 DEG yang diregulasi yang berasal dari perbandingan HC vs. LC dikaitkan secara signifikan dengan 690 fungsi GO, dengan 20 fungsi teratas disajikan pada Gambar 4C. Semua ini melibatkan 116 DEG (File Tambahan S2F) dengan berbagai aktivitas kekebalan. Fungsi teratas adalah jalur pensinyalan reseptor permukaan sel. Hal ini dikaitkan dengan 43 DEG yang mencakup gen yang mengkode banyak reseptor untuk ligan imun, seperti CXCR1, CXCR2, IL17RD, dan IL1RAP. Fungsi ini memiliki enam subfungsi penting termasuk jalur pensinyalan yang dimediasi lipopolisakarida (LPS) (PTAFR, TLR4, dan SCARB1) dan jalur pensinyalan reseptor permukaan sel yang diatur oleh respons imun. Subfungsi teratas dalam regulasi proses organisme multiseluler adalah regulasi produksi sitokin, dengan 24 DEG yang diregulasi, seperti MARK13, LTF, dan TLR4. Terdapat lebih sedikit DEG yang didownregulasi (hanya 78) yang dikaitkan dengan 298 fungsi GO yang signifikan, dengan skor pengayaan yang lebih rendah dan proses biologis yang lebih beragam. Gambar 4D menunjukkan 20 fungsi teratas. Beberapa di antaranya terkait dengan aspek imunitas, seperti adhesi sel, regulasi produksi mediator respon imun, respon terhadap LPS, dan respon terhadap molekul asal bakteri. Lainnya terkait dengan pemeliharaan homeostasis, seperti permukaan sel, sitolisis, transpor transmembran, dan endopeptidase tipe serin. Rangkuman fungsi biologis signifikan yang terkait dengan naik dan turunnya regulasi DEG menghasilkan tujuh kategori (Tabel 6), dengan proses sistem kekebalan berada di urutan teratas dan sebagian besar fungsi lainnya juga terkait dengan pertahanan kekebalan. Misalnya, penggerak diperkaya oleh DEG dengan sifat kemotaktik dan kekebalan serta interaksi antarspesies antar organisme, yang melibatkan pembunuhan patogen yang menyerang. Proses seluler dan regulasi biologis dikaitkan dengan sejumlah besar DEG. Proses seluler (n=239 DEGs) mencakup banyak sub-fungsi yang terkait dengan adhesi sel, pembunuhan sel, aktivasi sel kekebalan, dan proliferasi populasi sel. Regulasi biologis (125 DEGs) juga melibatkan banyak aktivitas imun, seperti regulasi proses sistem imun, penggerak, dan respons terhadap stimulus. Semua fungsi ini sebagian besar mengandung DEG yang diregulasi pada diet HC.

Tabel 6. Ringkasan fungsi utama pengayaan GO DEG dalam perbandingan antara sapi primipara yang diberi pakan konsentrat tinggi (n=6) dan rendah (n=6) pada awal laktasi.

Tabel 6. Lanjutan.

Gabungan DEG yang naik dan turun (460) pada sapi PP diperkaya dengan 35 jalur KEGG yang signifikan (Tabel 7). Banyak yang terkait dengan proses metabolisme yang melibatkan asam amino (valin, leusin, isoleusin, arginin, dan glutathione), protein, lipid (asam arakidonat, gliserolipid, dan kolesterol), vitamin B6, dan beberapa hormon (aldosteron, kortisol, tiroid, dan hormon pertumbuhan). ). Jalur metabolisme ini sebagian besar diperkaya dengan DEG yang diregulasi pada diet HC. Misalnya, biosintesis asam amino dikaitkan dengan lima DEG yang diregulasi (ARG2, ASS1, GPT2, SDS, dan SDSL), jalur sintesis, sekresi, dan aksi hormon pertumbuhan diperkaya dengan enam DEG yang diregulasi (ADCY6, CREB3L2, CREB5, FOS , MAPK13 dan SOCS3) dan satu DEG yang diregulasi (BCAR1), dan metabolisme asam arakidonat mengandung lima DEG yang diregulasi (CYP2J2, GGT5, GPX3, PLB1 dan TBXAS1). Beberapa jalur yang terkait dengan proses kekebalan/inflamasi juga diperkaya secara signifikan, sekali lagi terutama dengan peningkatan regulasi DEG. Ini termasuk jalur pensinyalan kemokin, MAPK, dan TNF serta kaskade komplemen dan koagulasi. Misalnya, jalur pensinyalan kemokin berisi delapan DEG yang diregulasi (ADCY6, CCL16, CCR1, CXCL13, CXCR1, CXCR2, GNG7, dan HCK) dan dua DEG yang diregulasi (BCAR1 dan CCR5), jalur pensinyalan TNF berisi enam DEG yang diregulasi (CREB3L2, CREB5 , FOS, MAPK13, MMP9, dan SOCS3), dan jalur pensinyalan MAPK berisi 12 DEG yang diregulasi, termasuk IL1A, MAP3K6, dan MAPK13.

Tabel 7. Jalur signifikan yang diidentifikasi oleh pengayaan jalur Kegg terkait dengan ekspresi gen leukosit yang berbeda pada sapi primipara yang diberi pakan konsentrat tinggi (n=6) dibandingkan dengan sapi yang diberi pakan konsentrat rendah (n=6).

3. Diskusi

Sapi perah pasca melahirkan mempunyai mekanisme homeostatis untuk mengontrol partisi nutrisi antara laktasi dan fungsi kehidupan penting lainnya, seperti imunitas dan pertumbuhan [8]. Mobilisasi jaringan merupakan adaptasi normal mamalia untuk mendukung laktasi, namun beberapa sapi mengalami ketidakseimbangan metabolisme [35,37]. Hewan tersebut mengalami mobilisasi jaringan adiposa yang berlebihan, resistensi insulin, dan peradangan sistemik yang berkontribusi terhadap gangguan imunitas yang sering diamati saat ini [38]. Hal ini terkait dengan mediator inflamasi seperti TNF dan IL6 [39,40]. Pada hari ke 14 setelah melahirkan, ketika sampel leukosit yang bersirkulasi dalam penelitian ini dikumpulkan, sel-sel tersebut telah terkena periode stimulasi inflamasi. Kami telah menunjukkan dengan menggunakan pengurutan generasi berikutnya dan analisis bioinformatika bahwa pakan dengan proporsi konsentrat berbeda menghasilkan efek berbeda pada transkriptome leukosit yang bersirkulasi pada sapi PP dan MP pada awal laktasi. Hal ini terkait dengan perbedaan kesehatan dan kesuburan mereka. Informasi ini menambah temuan baru pada laporan kami sebelumnya mengenai efek pola makan terhadap produksi susu dan kekebalan tubuh [32].

3.1. Perbandingan Pengaruh Pakan Konsentrat Tinggi dan Rendah pada Sapi Multipara

Sapi MP yang diberi pakan HC memiliki DMI lebih tinggi dibandingkan sapi MC dan LC dan hal ini dikaitkan dengan konsentrasi glukosa dan IGF{{0}} yang lebih tinggi dalam sirkulasi. Hal ini menyebabkan sapi HC berada dalam kondisi NEB yang tidak terlalu parah dan menghasilkan lebih banyak susu. Diet HC diformulasikan untuk memenuhi kebutuhan energi dan protein untuk laktasi dan pemeliharaan homeostasis tubuh dan pengukuran metabolit mengkonfirmasi bahwa status metabolisme mereka memang lebih baik dibandingkan sapi LC, dengan kebutuhan mobilisasi jaringan yang lebih rendah untuk memenuhi kebutuhan energi. Hal ini akan membantu mempercepat resolusi proses inflamasi pasca melahirkan, karena banyak penyakit inflamasi pada awal laktasi berhubungan dengan atau disebabkan oleh gangguan metabolisme [38] dan kami telah menunjukkan sebelumnya bahwa peradangan uterus teratasi lebih cepat pada sapi dengan status keseimbangan energi yang lebih baik. [2]. Pada penelitian ini, tidak terdapat perbedaan rasio PMN terhadap sel epitel lumen uterus menurut pakan pada sapi MP. Indeks ini sering digunakan sebagai indikator sitologi endometritis [41]. Namun, perbedaan berdasarkan pola makan diamati pada kelenjar susu karena sapi LC memiliki SCC lebih tinggi dan hal ini dikaitkan dengan proporsi lebih besar dari mereka yang mengalami mastitis klinis selama 16 DIM pertama (28,6% vs. 0% pada LC vs .kelompok HC).

Sebagian besar DEG yang diidentifikasi dalam analisis transkriptom leukosit terlibat dalam proses imun dan/atau metabolisme, seperti yang diharapkan pada populasi sel imun. Jalur KEGG yang paling signifikan adalah kaskade komplemen dan koagulasi, yang mencakup enam gen dengan regulasi paling rendah pada sapi HC. Dari jumlah tersebut, CFB mengkodekan faktor komplemen B, sebuah komponen jalur alternatif aktivasi komplemen. FGA, FGB, dan FGG mengkodekan tiga subunit faktor koagulasi fibrinogen, komponen kunci bekuan darah yang juga penting dalam mengikat bakteri ke trombosit [42]. Bentuk kininogen dengan berat molekul tinggi, yang dikodekan oleh KNG1, juga penting untuk pembekuan darah, dan kininogen melepaskan bradikinin, suatu peptida dengan berbagai fungsi termasuk aktivitas antibakteri dan antijamur. Vitronektin, yang dikodekan oleh VTN, juga terlibat dalam regulasi jalur koagulasi dan penyembuhan luka, sementara domain pengikat heparinnya memberikan sifat anti-mikroba. PROC mengkodekan glikoprotein plasma yang bentuk teraktivasinya mengandung domain serin protease yang berfungsi dalam degradasi bentuk teraktivasi faktor koagulasi V dan VIII, sedangkan SERPINA1 mengkodekan inhibitor protease serin yang targetnya meliputi aktivator plasmin, trombin, dan plasminogen. Peningkatan regulasi kaskade komplemen dan koagulasi sebelumnya telah ditunjukkan pada jaringan susu sebagai respons awal inang terhadap E. coli atau Staph. infeksi aureus [43]. Karena jalur ini lebih banyak terlihat pada sapi yang diberi pakan LC, hal ini mendukung bukti adanya insiden mastitis yang lebih besar pada hewan tersebut.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem kekebalan tubuh

Fungsi teratas lainnya yang dirangkum oleh browser GO adalah proses pembunuhan patogen (interaksi antarspesies antar organisme), yang dikaitkan dengan 14 DEG yang diturunkan regulasinya pada sapi HC (Tabel 4). Ini termasuk sejumlah gen yang terlibat dalam aktivitas antivirus (IFI6, IFNB1, ISG15, MX2, OAS1Y, OAS1Z, OAS2, dan RSAD2) yang diekspresikan pada tingkat yang lebih rendah. Dari jumlah tersebut, IFNB1 mengkodekan interferon beta 1 sementara yang lain semuanya merupakan gen yang distimulasi interferon [44,45]. Mereka semua juga merupakan bagian dari jalur pensinyalan reseptor mirip NOD (NLR). NLR adalah reseptor pengenalan pola sitosol yang diaktifkan oleh berbagai komponen non-mandiri termasuk peptidoglikan bakteri, yang berpotensi memulai ekspresi sitokin pro-inflamasi yang bergantung pada NF-kappa B-/AP{21}}, ekspresi interferon tipe I, autophagy dan peradangan [46]. Penelitian terbaru kami menunjukkan bahwa jalur ini diregulasi dalam leukosit dari sapi yang terinfeksi E. coli [47]. Gen lain yang diidentifikasi adalah MPO, yang mengkode myeloperoxidase, suatu enzim yang disimpan dalam butiran azurofilik PMN dan makrofag. Ini dilepaskan ke cairan ekstraseluler selama proses inflamasi dan telah digunakan sebagai penanda peradangan dan stres oksidatif [48]. IL1R2 mengkodekan anggota keluarga reseptor interleukin 1 dan merupakan salah satu DEG yang mengalami penurunan regulasi paling signifikan yang diidentifikasi pada sapi MP. Ini dapat mengikat reseptor IL1A, IL1B, dan interleukin 1, tipe I (IL1R1/IL1RA) tetapi bertindak sebagai reseptor umpan untuk menghambat aktivitas ligan.

Gen dengan ekspresi diferensial paling signifikan antara sapi MP pada pakan berbeda adalah FCER1A, dengan ekspresi lebih rendah pada sapi HC. Ini mengkodekan subunit reseptor IgE, yang merupakan inisiator respon alergi yang mungkin berevolusi untuk meningkatkan pertahanan inang terhadap parasit melalui pelepasan mediator seperti histamin [49]. Menariknya, FCER1A adalah satu dari hanya 18 gen yang tingkat ekspresinya diidentifikasi sebagai pembeda antara kesuburan sapi dara (50). Peran pastinya pada sapi masih belum dapat ditentukan tetapi dalam uji coba vaksin pada anak sapi yang secara eksperimental terinfeksi nematoda parasit Ostertagia ostertagi yang penting secara ekonomi, tingkat ekspresinya dalam darah berkorelasi positif dengan jumlah sel mast dan negatif dengan jumlah cacing [51]. Tiga gen lain yang diregulasi pada sapi HC dengan beberapa fungsi kekebalan adalah ALAS2, GZMB, dan LIF. ALAS2 mengkodekan 50 -aminolevulinate synthase 2, enzim khusus eritroid yang terletak di mitokondria yang mengkatalisis langkah pertama dan pembatas laju dalam jalur biosintetik heme. Heme merupakan kofaktor penting dalam berbagai proses penting termasuk transportasi oksigen, sementara mutasi pada gen ini telah dikaitkan dengan berbagai penyakit manusia termasuk anemia [52]. GZMB mengkodekan preproprotein yang disekresikan oleh sel pembunuh alami dan limfosit T sitotoksik dan diproses untuk menghasilkan protease aktif yang menginduksi apoptosis sel target dan juga memproses sitokin dan mendegradasi protein matriks ekstraseluler (53). Faktor penghambat leukemia sitokin, yang dikodekan oleh LIF, pada awalnya diidentifikasi melalui keterlibatan dalam diferensiasi makrofag tetapi juga telah terbukti memainkan peran penting dalam perkembangan embrio dan pembentukan kebuntingan pada berbagai spesies termasuk sapi [54].

DEG yang diperoleh dari perbandingan HC vs. LC pada sapi MP juga diperkaya dengan beberapa jalur signifikan yang terkait dengan metabolisme glukosa, protein, dan asam lemak. Ini termasuk empat DEG yang diregulasi dan terlibat dalam jalur pensinyalan PPAR (APOA2, APOC3, FABP1, dan PCK1). Dalam penelitian ini, tiga isoform PPAR utama (A, D, G) terdeteksi pada populasi leukosit. Meskipun ekspresi PPAR sendiri tidak dipengaruhi oleh pola makan, jalur ini dapat mempengaruhi ekspresi gen yang terlibat dalam metabolisme glukosa dan lipid, diferensiasi adiposit, dan respons inflamasi [55,56] dan berkontribusi terhadap adaptasi metabolik terhadap pasokan nutrisi yang terbatas dengan menginduksi gen yang terlibat dalam -oksidasi [57]. Jalur metabolisme retinol juga diturunkan regulasinya pada sapi HC, dengan ekspresi RBP4 dan TTR yang lebih rendah (masing-masing mengkode protein pengikat retinol dan transthyretin), yang keduanya bertindak sebagai pengangkut retinol dalam darah. Interaksi retinol dengan jalur pensinyalan PPAR mempengaruhi transkripsi banyak gen hilir lainnya (58). APOA2 dan APOC3 bersama dengan APOH juga merupakan bagian dari jalur metabolisme kolesterol. Kolesterol adalah komponen utama membran plasma dan mempengaruhi organisasi dan fungsinya [59,60]. Penelitian terbaru menggarisbawahi munculnya peran kolesterol sebagai modulator penting aktivitas imun bawaan dan adaptif [61].

Jalur glikolisis/glukoneogenesis dikaitkan dengan tiga DEG yang mengalami penurunan regulasi pada sapi yang diberi makan HC (ADH1C, ALDOB, dan PCK1). Dari jumlah tersebut, PCK1 mengkodekan fosfoenolpiruvat karboksikinase 1 yang bertindak sebagai titik kontrol utama untuk regulasi glukoneogenesis. Enzim ini, bersama dengan GTP, mengkatalisis pembentukan fosfoenolpiruvat dari oksaloasetat, dengan pelepasan karbon dioksida dan PDB. Aktivasi jalur imun/inflamasi mendorong transkripsi gen glukoneogenik melalui toll-like receptor 4 (TLR4) (62). Hal ini dapat menyebabkan sel imun mengubah metabolisme glukosa dari fosforilasi oksidatif menuju glikolisis untuk menghasilkan energi dan nutrisi yang dibutuhkan untuk proliferasi dan produksi molekul imun [12,63]. Hal ini menyebabkan peningkatan permintaan glukosa yang bersaing dengan kebutuhan produksi laktat [64].

Singkatnya, perbedaan ekspresi gen antara sapi MP yang diberi pakan HC dan LC memberikan bukti adanya peningkatan regulasi aktivitas imun dan peradangan pada sapi LC. Hal ini disertai dengan tingginya insiden mastitis. Sebaliknya, gen yang mengkode beberapa protein yang mungkin bermanfaat bagi kesehatan dan kesuburan seperti ALAS2 dan LIF diregulasi pada sapi HC. Hal ini mendukung indeks metabolik yang diukur yang menunjukkan bahwa terdapat peningkatan status EBAL pada sapi MP yang diberi pakan HC, yang mungkin membantu melindungi mereka dari perkembangan penyakit menular atau penyakit metabolik.

3.2. Perbandingan Pengaruh Pakan Konsentrat Tinggi dan Rendah pada Sapi Primipara

Mirip dengan sapi MP, sapi PP yang diberi pakan HC juga memiliki DMI yang lebih tinggi, sekitar 4 kg/hari, namun produksi susunya tidak meningkat secara signifikan. Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam konsentrasi glukosa, NEFA, BHB, atau IGF-1 yang bersirkulasi, hanya urea yang lebih tinggi pada diet LC. Sebaliknya, terdapat perbedaan yang lebih signifikan dalam ekspresi gen leukosit antara kelompok pakan dibandingkan pada sapi MP, dengan 460 vs. 173 DEG yang diidentifikasi dalam perbandingan HC vs. LC, dimana 83% di antaranya diregulasi pada sapi PP yang diberi pakan HC. Hanya sebagian kecil DEG yang tumpang tindih antara kedua kelompok umur (Gambar 3), menunjukkan bahwa perubahan fungsi leukosit pada pakan laktasi dini lebih sensitif pada sapi PP dibandingkan sapi MP. Kami berharap bahwa pola makan HC akan menguntungkan sapi PP dengan meningkatkan DMI mereka dan sepenuhnya memenuhi kebutuhan protein yang tidak dapat terurai dan dapat dimetabolisme dari makanan yang telah dihitung. EBAL memang membaik pada diet HC tetapi analisis ekspresi gen menunjukkan peningkatan regulasi gen yang jauh lebih besar yang terlibat dalam pertahanan kekebalan. Sapi yang diberi makan HC juga memiliki rasio PMN: UEC yang lebih tinggi di dalam rahimnya, serta jumlah SCC yang lebih besar dan lebih banyak kasus mastitis. Hal ini menunjukkan bahwa mereka sebenarnya lebih rentan terhadap penyakit, bukannya lebih kecil. Kami sebelumnya menemukan bahwa neutrofil yang dikumpulkan dari sapi PP dalam penelitian ini pada tiga minggu pertama masa laktasi memiliki indeks fagositik dan indeks ledakan oksidatif yang jauh lebih tinggi dibandingkan dengan sapi MP, namun 2-efek pola makan dan paritas terhadap pengukuran ini tidak dilaporkan [32].

Proses sistem kekebalan yang diidentifikasi dalam perbandingan HC vs. LC mencakup peningkatan regulasi reseptor permukaan sel dan jalur sinyal pengenalan pola, kemotaksis, produksi sitokin, dan migrasi leukosit pada sapi yang diberi makan HC. DEG yang teridentifikasi dikaitkan dengan berbagai mekanisme pertahanan kekebalan, termasuk berbagai peptida antimikroba (AMP) (CATHL6, CXCL13, DEFB1, LTF, PGLYRP1, PGLYRP4, SA100A8, SA100A9, S100A1, dan SLC11A1). Ini tidak hanya membunuh organisme yang menyerang secara langsung tetapi juga membantu dengan memodulasi proses kekebalan dan antimikroba lainnya [65-67]. Peningkatan regulasi peptida antimikroba dalam profil transkriptomik leukosit sebelumnya telah ditunjukkan pada sapi dengan mastitis klinis [47,68] dan metritis/endometritis [69,70]. Fungsi adhesi leukosit dikaitkan dengan 16 DEG yang diregulasi dan lima DEG yang diregulasi pada hewan yang diberi makan HC. Adhesi leukosit ke dinding kapiler merupakan langkah penting pertama yang memungkinkan mereka bertransmigrasi dari darah dan lalu lintas menuju lokasi kerusakan jaringan, infeksi, dan peradangan [71]. Interaksi sel-sel dan sel-matriks mempengaruhi fenotip leukosit, dan disregulasi jalur adhesi dapat menyebabkan aktivasi leukosit yang persisten dengan peradangan yang belum terselesaikan (72). Dari DEG yang diregulasi yang diidentifikasi, ADAM8, ANGPTL3, CD24, ICAM3, dan THY1 semuanya terlibat dalam ekstravasasi [73,74] sementara FN1, NRP1, TNFAIP6, dan VCAN memiliki peran potensial dalam perdagangan dan fungsi sel leukosit dalam jaringan yang meradang [72, 75]. Gen yang mengkode reseptor kemokin CXCR1 dan CXCR2 juga diregulasi pada sapi yang diberi makan HC; keduanya penting dalam menstimulasi kemotaksis PMN menuju lokasi infeksi serta mengaktifkan proses biokimia yang membunuh bakteri yang menyerang [76].

Dari gen yang mengalami penurunan regulasi terkait dengan adhesi pada sapi yang diberi makan HC, BCAR1 mengkode protein multifungsi yang dikenal sebagai cas dengan keterlibatan dalam motilitas sel, apoptosis, dan kontrol siklus sel (77). Polimorfisme pada BCAR1 sebelumnya telah dikaitkan dengan SCC dan resistensi mastitis [78]. ADGRG1 (juga dikenal sebagai GPR56) mengkodekan reseptor berpasangan protein G yang mengikat kolagen 3 dan transglutaminase 2, keduanya merupakan komponen stroma jaringan. ADGRG1 terbukti berperan dalam sel pembunuh alami manusia (NK), yang menghambat sitotoksisitasnya [79]. Ekspresinya sendiri diturunkan regulasinya setelah aktivasi yang diinduksi sitokin, yang sesuai dengan hasil yang ditunjukkan di sini. Protein CD96 juga bertindak sebagai reseptor pos pemeriksaan penghambatan pada sel NK [80]. Penelitian sebelumnya mengenai perubahan transkriptome leukosit selama masa transisi juga menemukan perubahan dalam ekspresi gen yang berkaitan dengan migrasi transendotel meskipun dengan kesimpulan yang berbeda, masing-masing melaporkan aktivasi setelah melahirkan [81] atau penghambatan [82]. Analisis kami juga mengidentifikasi sejumlah perbedaan dalam jalur sinyal tanda metabolisme asam amino pada sapi PP yang diberi pakan HC dibandingkan dengan sapi yang diberi pakan LC, terkait dengan enzim yang dikodekan oleh lima DEG yang diregulasi (ARG2, ASS1, GPT2, SDS, dan SDSL) . Dari jumlah tersebut, ASS1 mengkodekan arginin suksinat sintase 1, yang mengkatalisis langkah kedua dari belakang jalur biosintetik arginin, sementara ARG2 mengkodekan arginase, mengkatalisis hidrolisis arginin menjadi ornitin dan urea. L-arginin juga dapat diubah menjadi oksida nitrat, sebuah molekul pemberi sinyal yang memainkan peran penting dalam patogenesis peradangan [83]. Glutamic-pyruvic transaminase 2 (GPT2) adalah enzim mitokondria yang mengkatalisis transaminasi reversibel antara alanin dan 2-oksoglutarat untuk menghasilkan piruvat dan glutamat. Gen ini diregulasi dalam kondisi stres metabolik dan berperan dalam mendorong glukoneogenesis dari metabolisme asam amino (84). Serine dehydratase (SDS) mengkode enzim yang mengubah L-serine menjadi piruvat dan amonia, sedangkan serine dehydratase (SDSL) diperkirakan terlibat dalam jalur biosintesis isoleusin dari treonin.

Jalur metabolisme kolesterol dikaitkan dengan empat DEG yang diregulasi pada diet HC (ANGPTL3, LRP1, SCARB1, dan SORT1). Hal ini mungkin menyebabkan akumulasi kolesterol dalam leukosit sapi yang diberi makan HC dan meningkatkan peradangan, termasuk peningkatan sinyal TLR, aktivasi inflamasi, dan produksi monosit dan neutrofil yang lebih besar di sumsum tulang dan limpa [85]. Jalur metabolisme asam arakidonat dengan lima DEG yang diregulasi (seperti yang disebutkan sebelumnya) mengarah pada produksi rangkaian produk pro dan antiinflamasi, seperti prostaglandin dan leukotrien [86]. Jalur metabolisme gliserolipid dikaitkan dengan empat DEG yang diregulasi (DGAT2, DGKG, GK, dan GPAT3) yang mengkode gen lipogenik yang terlibat dalam sintesis triasilgliserol. Akumulasinya dapat menyebabkan aktivasi leukosit dan peradangan [87,88]. Semua temuan ini mendukung kesimpulan bahwa pola makan HC meningkatkan regulasi jalur metabolisme leukosit pada sapi PP sehingga meningkatkan respons imun/inflamasi mereka. Penelitian sebelumnya pada sapi berfokus terutama pada periode kering dan telah menunjukkan bahwa pemberian makan berlebihan dan BCS yang tinggi pada saat ini mendorong mobilisasi lipid berikutnya dan peningkatan respon inflamasi selama periode peripartum [34]. Dalam penelitian ini, rasio PMN uterus: UEC dan kecenderungan menuju SCC yang lebih tinggi mendukung dugaan bahwa terdapat peningkatan migrasi leukosit ke uterus dan kelenjar susu pada sapi PP yang menerima pakan HC. Meskipun ini merupakan komponen penting dari pertahanan kekebalan tubuh, aktivasi berlebihan dapat menyebabkan hiperinflamasi. Diperlukan penelitian lebih lanjut dengan ukuran sampel yang lebih besar untuk mengkonfirmasi temuan ini.

3.3. Kesamaan Respon terhadap Pola Makan Sapi Multipara dan Primipara

In terms of metabolic changes, both the MP and PP cows had higher circulating concentrations of urea when on the LC diet. Blood urea in both late pregnancy and early lactation may rise following mobilization of amino acids stored in skeletal muscle [89] or when dietary protein supply exceeds energy availability or protein needed [90], so these situations could have applied here. Elevated levels of urea have been associated with reduced fertility, but only at >4,5 mmol/L, lebih tinggi dari konsentrasi yang dicapai pada hewan yang diberi makan LC dalam penelitian ini [91]. Mengenai data transkripsi gen leukosit, menarik untuk dicatat bahwa DEG yang berasal dari perbandingan HC vs. LC pada kedua kelompok umur diperkaya dengan jalur pencernaan dan penyerapan protein, di mana gen yang mengkode berbagai isoform kolagen memainkan peran penting. . Diantaranya, terdapat tiga gen kolagen yang diregulasi (COL1A1, COL1A2, dan COL3A1) pada sapi MP dan PP, dan satu gen kolagen yang diregulasi (COL5A3) pada sapi MP. Nilai ekspresi mereka dalam sampel kecil, namun perbedaannya signifikan. Sebagian dari RNA ini mungkin berasal dari fibrosit, populasi sel yang hanya terdiri dari 0.1–0.5% sel noneritrositik dalam darah tepi [92,93]. Kolagen adalah peningkat kekebalan yang telah lama terlibat dalam banyak proses kekebalan/inflamasi [93,94]. Oleh karena itu, peningkatan produksinya dalam sirkulasi darah oleh diet HC dapat mempengaruhi fungsi leukosit.

3.4. Implikasinya terhadap Kesuburan

Banyak penelitian sebelumnya telah melaporkan bahwa hubungan antara status metabolik dan kekebalan tubuh serta kejadian penyakit pada sapi pada awal laktasi mempunyai pengaruh besar terhadap kesuburan mereka selanjutnya (misalnya, [38,95]). Penelitian kami menunjukkan bahwa sapi MP dengan konsentrasi IGF-1 rendah pada 14 DIM lebih kecil kemungkinannya untuk hamil [37]. Baru-baru ini, kami melaporkan bahwa 63% sapi dengan IGF-1 rendah saat ini mengalami lebih dari satu masalah kesehatan selama 35 DIM pertama dibandingkan dengan hanya 26% sapi dengan IGF-1 tinggi. Ini termasuk lebih banyak hewan dengan infeksi rahim dan mastitis klinis [10]. Foley dkk. [69] membedakan antara sapi sehat, yang mampu memulihkan homeostatis dalam waktu 3 minggu setelah melahirkan, dan sapi lain yang mengalami respons inflamasi lebih parah dan berkepanjangan yang kemudian berkembang menjadi endometritis klinis. Hubungan dengan darah tepi ditunjukkan oleh Galvão et al. [96] yang menunjukkan bahwa neutrofil dari sapi dengan EBAL yang lebih buruk memiliki kandungan glikogen yang lebih rendah pada tujuh DIM dan hewan-hewan ini mengalami lebih banyak penyakit rahim, yang berpotensi terkait dengan penurunan ketersediaan bahan bakar oksidatif untuk respon imun. Mastitis klinis pada awal laktasi juga dikaitkan dengan peningkatan angka kehilangan embrio pra-implantasi, dengan beberapa indikasi bahwa BCS yang rendah semakin meningkatkan risiko [97]. Sejumlah mekanisme yang berhubungan dengan produksi sitokin dan prostaglandin serta mediator inflamasi lainnya telah diduga dapat mempengaruhi ovarium dan/atau menyebabkan lingkungan uterus yang tidak menguntungkan [98,99]. Data kesuburan yang diperoleh dari sapi dalam penelitian kami mendukung temuan terkait status kekebalan dan kesehatan sapi pada awal laktasi. Sapi MP yang diberi pakan LC memerlukan S/C yang lebih banyak secara numerik sesuai dengan EBAL mereka yang lebih buruk, serta bukti dari analisis transkriptome leukosit yang menunjukkan pertahanan kekebalan aktif yang lebih aktif, didukung oleh tingginya insiden mastitis. Sebaliknya, sapi PP yang diberi pakan HC membutuhkan waktu lebih lama untuk hamil dan lebih sedikit yang bunting dibandingkan dengan sapi yang diberi pakan LC. Mereka memiliki lebih banyak bukti peradangan pada awal kehamilan meskipun perhitungan EBAL mereka lebih baik. Saat ini, mekanisme mendasar yang menyebabkan buruknya status kesehatan dan kesuburan mereka masih belum diketahui secara pasti meskipun kami juga telah menemukan bukti berdasarkan ekspresi gen global mengenai peningkatan peradangan hati dan fibrosis (Cheng, Little, Ferris, Takeda, Ingvartsen, Crowe dan Wathes, pengamatan yang tidak dipublikasikan) .

3.5. Keterbatasan Penelitian

Jumlah sapi PP per kelompok yang tersedia lebih sedikit, dan hal ini mengurangi kekuatan statistik analisis yang berkaitan dengan fenotipe. Oleh karena itu, penelitian lebih lanjut dengan ukuran sampel yang lebih besar diperlukan untuk memastikan dampak makanan terhadap reproduksi dan penyakit. Dalam penelitian ini, kami mengekstraksi semua RNA dari seluruh darah tepi menggunakan tabung Tempus dan sistem isolasinya. Hal ini menawarkan kemudahan pengumpulan untuk penelitian pertanian skala besar tetapi tidak memisahkan jenis sel, yang akan mencakup limfosit T dan B, sel pembunuh alami, trombosit, monosit, granulosit (neutrofil, eosinofil, dan basofil), dan fibrosit. Oleh karena itu, data ekspresi gen yang disajikan dipengaruhi oleh kemungkinan efek pengobatan pada proporsi relatif tipe sel tertentu selain perubahan transkripsional individualnya. Hasil ini juga didasarkan pada tingkat transkripsi gen dan tidak mencakup informasi tentang pemrosesan pasca-translasi, yang juga akan memengaruhi seberapa banyak protein fungsional yang diproduksi.

4. Bahan dan Metode

4.1. Hewan dan Makanan

Semua prosedur dilakukan berdasarkan Undang-Undang Hewan (Prosedur Ilmiah) tahun 1986 dan dilindungi oleh Lisensi Proyek Kantor Pusat nomor PPL2754 dan Sertifikat Penunjukan Pendirian. Pekerjaan ini juga disetujui oleh Komite Etika dan Kesejahteraan dari Institut Pertanian Pangan dan Biosains (AFBI, Belfast, Irlandia Utara, Inggris). Enam puluh dua sapi perah Holstein–Friesian direkrut dari kawanan AFBI. Diantaranya, 18 ekor merupakan PP (laktasi 1) dan 44 MP dengan angka laktasi 2–7 (3,5 ± 1,28) dan seluruh sapi dalam keadaan sehat setelah diperiksa oleh dokter hewan. Bobot beranak adalah 680 ± 62 (Mean ± STD) kg untuk sapi MP dan 550 ± 39 kg untuk sapi PP. Setelah melahirkan, sapi PP dan MP secara terpisah dimasukkan ke dalam tiga kelompok pakan, dengan alokasi pada masing-masing kelompok umur seimbang untuk prediksi kemampuan penularan lemak plus protein (kg), berat badan sebelum melahirkan, dan BCS. Sapi MP juga seimbang dalam hal paritas dan hasil susu hari laktasi 305-hari sebelumnya. Sapi ditawari (1) konsentrat rendah (LC, 30% konsentrat ditambah 70% silase rumput, n=6 untuk PP dan n=14 untuk MP); (2) konsentrat sedang (MC, konsentrat 50% ditambah silase rumput 50%, n=6 untuk PP dan n=15 untuk MP) atau (3) konsentrat tinggi (HC, konsentrat 70% ditambah 30% silase rumput, n=6 untuk PP dan n=15 untuk MP) ransum (persentase berdasarkan bahan kering). Konsentrat untuk setiap perlakuan diformulasikan untuk mencapai konsentrasi total protein kasar (CP) ransum umum untuk masing-masing LC, MC, dan HC (masing-masing 152, 152, dan 154 g/kg DM), sedangkan total energi metabolisme ransum dihitung ( ME) isinya adalah 12,0, 12,4 dan 12,8 MJ/kg DM. Pakan tersebut diperkirakan menyediakan 1556, 1997, dan 2420 g/hari protein efektif yang dapat terurai dalam rumen; 559, 733, dan 888 g/hari protein yang tidak dapat terurai dari makanan dan 1346, 1817, dan 2275 g/hari protein yang dapat dimetabolisme untuk masing-masing LC, MC dan HC. Akses terhadap ransum pengobatan dikendalikan oleh sistem pemberian pakan Calan Broadbent (American Calan Inc., Northwood, NH, USA) yang terhubung dengan sistem identifikasi elektronik, yang memungkinkan asupan sapi individu dicatat setiap hari. Diet untuk setiap perlakuan ditawarkan sebesar 107% dari asupan hari sebelumnya untuk memastikan konsumsi ad libitum. Semua sapi juga diberikan tambahan 0,5 kg konsentrat pada setiap pemerahan melalui sistem pemberian pakan di ruang tunggu untuk membantu menjaga efisiensi aliran sapi. Penelitian ini merupakan bagian dari proyek yang lebih luas dan rincian lengkap mengenai pakan yang diberikan, pengelolaan pakan, dan komposisi pakan telah dijelaskan sebelumnya [32].

4.2. Pengumpulan Data Fenotip Sapi

Berat badan dicatat dua kali seminggu dengan menggunakan timbangan timbang. BCS diperkirakan sekitar 14 DIM [100]. Semua sapi diperah dua kali sehari dan hasil hariannya dicatat. Sampel susu dianalisis dua kali seminggu menggunakan analisis inframerah tengah untuk menghitung konsentrasi protein, lemak, dan laktosa, serta menghitung sel somatik susu. Sampel susu pagi tambahan (2 × 8 mL) dikumpulkan dua kali seminggu dan disimpan pada suhu −18 ◦C untuk analisis LDH (EC. 1.1.1.27) dan NAGase (EC 3.2.1.30) menggunakan uji fluorometri [101]. Produksi susu dengan koreksi energi (ECM; kg/hari) dihitung mengikuti metode yang digunakan dalam kelompok kami [32]. EBAL masing-masing sapi diperkirakan menggunakan metode yang dijelaskan sebelumnya [102].

Mastitis klinis didiagnosis menggunakan metode standar berdasarkan pengamatan harian terhadap perubahan abnormal pada tampilan susu (misalnya serpihan, gumpalan), kualitas, produksi susu, dan respons peradangan payudara (kemerahan, bengkak, panas, atau nyeri). Pembacaan SCC susu bersama dengan diagnosis klinis digunakan untuk mengkategorikan sapi menjadi tiga kelompok. Sapi sehat didefinisikan memiliki SCC <100,000 sel/mL susu dan tidak ada gejala klinis. Sapi mastitis subklinis didefinisikan memiliki SCC antara 100,000 dan 400,000 sel/mL susu dan tidak ada gejala klinis yang jelas. Sapi yang didiagnosis menderita mastitis klinis memiliki SCC > 400,000 sel/mL susu dan menunjukkan beberapa gejala klinis di atas. Sapi diinseminasi pada saat estrus diamati menggunakan praktik kawanan normal dan data kesuburan selama masa laktasi berikutnya atau sampai hewan tersebut dimusnahkan dan diambil dari catatan kawanan. Data yang dilaporkan meliputi hari pertama pelayanan (DFS), hari sampai konsepsi (hari terbuka), pelayanan per konsepsi, dan proporsi sapi yang bunting. Selain itu, data konsepsi diberi skor menggunakan skor 4-point in calf by (ICB) sebagai (1)<100 days, (2) 100–200 days, (3) >200 hari, atau (4) gagal hamil atau dimusnahkan.

4.3. Analisis Sitologi Rahim

Sampel cytobrush uterus (Minitube, Minitüb GmbH, Tiefenbach, Jerman) diambil dari setiap sapi pada suhu sekitar 14 DIM untuk mengevaluasi sitologi endometrium, seperti yang dijelaskan sebelumnya [103]. Sitobrush berpelindung ganda diarahkan secara manual melalui serviks ke dalam rahim, pelindung dalam dikeluarkan dari pelindung luar, dan sikat diputar perlahan ke dinding endometrium. Sikat itu kemudian ditarik ke dalam pelindung bagian dalam dan dilepas. Slide untuk pemeriksaan sitologi disiapkan dengan menggulung cytobrush ke slide kaca mikroskop yang bersih dan memfiksasi sampel dengan Fisherbrand™ CytoPrep™ Cytology Fixative (Fishers Scientific, Blanchardstown, Irlandia). Slide yang diperbaiki dikirim ke Fakultas Kedokteran Hewan UCD, University College Dublin, Irlandia untuk diproses dan diwarnai dengan pewarnaan Giemsa yang dimodifikasi. Penilaian sitologi dilakukan dengan menghitung UEC PMN pada perbesaran 400x (Leitz Labourlux-S, Wetzlar, Jerman) dan menentukan rasionya, dengan rata-rata menghitung 10 bidang berkekuatan tinggi per slide.

4.4. Analisis Metabolit yang Bersirkulasi dan IGF-1

Pada 14 ± 2 (rata-rata ± STD) hari setelah melahirkan, 10 mL sampel darah dikumpulkan dari vena jugularis semua sapi ke dalam tabung Na heparin untuk plasma dan tabung polos untuk serum. Setelah pemisahan plasma atau serum dengan sentrifugasi, disimpan pada suhu −20 ◦C sampai dianalisis. Konsentrasi glukosa plasma, urea, BHB, NEFA, dan kolesterol diukur menggunakan metode yang dijelaskan sebelumnya [20,25]. Secara singkat, konsentrasi serum NEFA ditentukan dengan metode ACS-ACOD menggunakan NEFA C Kits (Wako, Neuss, Germany). Glukosa plasma diukur dengan metode enzimatik (ADVIA 1800 Clinical Chemistry System, Siemens Healthcare Diagnostics, Ballerup, Denmark). BHB serum ditentukan dengan mengukur serapan pada 340 nm akibat produksi NADH pada pH basa dengan adanya BHB dehidrogenase. Urea serum dianalisis secara spektrofotometri. Koefisien variasi (CV) intra dan antar pengujian masing-masing berada di bawah tiga dan empat persen, baik untuk sampel kontrol rendah maupun tinggi. Konsentrasi serum IGF-1 diukur dengan radioimmunoassay setelah ekstraksi asam etanol [104]. CV intra-assay masing-masing adalah 12,4, 7,5, dan 9,9% untuk sampel kontrol rendah, sedang, dan tinggi.

4.5. Ekstraksi RNA Darah

Sampel darah untuk ekstraksi RNA dikumpulkan melalui pungsi vena jugularis dari semua sapi pada 14 ± 2 DIM ke dalam tabung RNA darah Tempus (Thermo-Fisher Scientific, Loughborough, UK). Tabung dikocok kuat-kuat selama 15–20 detik segera setelah dikumpulkan, kemudian dibekukan dan disimpan pada suhu −80 ◦C untuk ekstraksi RNA. RNA darah utuh diekstraksi menggunakan Kit isolasi Tempus Spin RNA (Thermo-Fisher) mengikuti instruksi pabrik seperti yang dijelaskan sebelumnya [20]. Agilent BioAnalyzer 2000 (Agilent Technologies UK Ltd., Cheadle, UK) dengan Agilent RNA 6000 Nano Kit (Agilent Technologies UK Ltd., Cheadle, UK) digunakan untuk menilai kuantitas dan integritas RNA. Selain itu, kuantitas dan kemurnian divalidasi dengan NanoDrop 1000 (Thermo Fischer). Data berkualitas dirangkum dalam File Tambahan S3. Hal ini menunjukkan bahwa semua sampel RNA memiliki integritas yang wajar (angka RIN > 8,7, 9,3 ± 0,3) dan kemurnian (260/280 antara 2,01 dan 2,15, rata-rata ± STD 2,10 ± 0,03), sehingga tidak ada hewan yang dikeluarkan dari analisis. RNA disimpan pada suhu −80 ◦C untuk pengurutan RNA selanjutnya.

4.6. Urutan RNA, Pemetaan dan Kuantifikasi

RNA leukosit yang diekstraksi diurutkan pada platform Illumina NextSeq 500 seperti yang dijelaskan sebelumnya [68]. Secara singkat, menggunakan stasiun kerja penanganan cairan epMotion (Eppendorf, Hamburg, Jerman) 750 ng total RNA ditranskripsi terbalik ke perpustakaan pengurutan cDNA dengan kit Illumina TruSeq Stranded Total RNA Library Prep Ribo-Zero Gold (Illumina, San Diego, CA, USA ). Pustaka cDNA yang dikumpulkan diurutkan pada sequencer Illumina NextSeq 500 pada 75 pembacaan ujung tunggal dengan panjang nukleotida untuk mencapai rata-rata 33,5 juta pembacaan per sampel. File FASTQ mentah disimpan ke Arsip Nukleotida Eropa (E-MTAB-9347 dan E-MTAB-9431). Semua analisis sekuensing dilakukan menggunakan CLC Genomic Workbench v21 (Qiagen, Manchester, UK). Setiap sampel berisi pembacaan dari empat jalur, dan digabungkan menjadi satu file fastq. Kualitas file fastq mentah dan terpangkas dinilai mengikuti Illumina Pipeline 1.8 dan setiap pembacaan yang gagal telah dihapus. Pembacaan kemudian dipetakan ke genom referensi rakitan Bos taurus (ARS-UCD1.2 disediakan oleh RefSeq di https://www.ncbi.nlm.nih.gov/assembly, diakses pada 1 Januari 2021) dan dihitung sebagai pembacaan per gen, dibaca per kilobase juta (RPKM), dan transkrip per kilobase juta (TPM). Ini disimpan sebagai file ekspresi gen (GE) di CLC Genomics Workbench untuk digunakan untuk analisis ekspresi gen diferensial berikut ini.

4.7. Analisis Ekspresi Gen Diferensial antara Kelompok Makanan

Sebelum analisis ekspresi diferensial untuk efek pola makan, kami menggunakan analisis komponen utama (PCA) dengan nilai RPKM untuk mengidentifikasi outlier, dan hal ini menunjukkan bahwa dua ekor sapi (Blood020009, MP dan Blood020103, PP) adalah populasi outlier dan karena itu dikeluarkan dari analisis lebih lanjut (File Tambahan S4A). Analisis komponen utama juga menunjukkan bahwa hanya ada sedikit tumpang tindih dalam keseluruhan pola ekspresi gen antara sapi PP dan MP (File Tambahan S2B). Hal ini mendukung desain penelitian asli untuk menganalisis setiap kelompok umur secara terpisah. Oleh karena itu, file GE yang berasal dari semua sampel individu dipisahkan berdasarkan kelompok umur (PP, n=5–6 per kelompok dan MP, n=14–15 per kelompok). DEG antara kelompok makanan pada sapi PP atau MP diidentifikasi dengan CLC Genomics Workbench V21 melalui prosedur mirip ANOVA satu arah. Tingkat penemuan palsu (FDR) untuk beberapa tes disesuaikan dengan Benjamini-Hochberg (BH) dan signifikansi dianggap pada p <0,05. Perubahan lipatan (FC) dihitung sebagai rasio ekspresi gen dari kelompok konsentrat yang lebih tinggi ke kelompok konsentrat yang lebih rendah (misalnya, HC vs. LC, MC vs. LC, atau HC vs. MC) jika nilai kelompok konsentrat lebih tinggi lebih besar dibandingkan kelompok konsentrat rendah (perubahan lipatan positif, peningkatan regulasi). Jika nilai kelompok konsentrat rendah lebih besar dibandingkan nilai kelompok konsentrat tinggi, maka digunakan perbandingan kelompok konsentrat rendah dengan kelompok konsentrat tinggi (misalnya, LC vs. HC, MC vs. HC, dan LC vs. MC ) (perubahan lipatan negatif, penurunan regulasi). DEG yang diregulasi dan diturunkan dengan perubahan lipatan absolut lebih besar dari atau sama dengan 1,5 antara kelompok makanan dipilih untuk analisis lebih lanjut.

4.8. Analisis Pengayaan Gene Ontologi (GO).

DEG yang berasal dari perbandingan pasangan antara kelompok makanan dimasukkan ke dalam Partek Genomics Suite V7.1 (Partek Incorporation, Chesterfield, MO, USA) untuk analisis pengayaan GO untuk penyelidikan fungsi biologis dan interaksi antara DEG dan Ensiklopedia Kyoto terkait. Jalur Gen dan Genom (KEGG) dengan genom Bos taurus ARS-UCD1.2. Uji eksak Fisher dengan penyesuaian BH digunakan dan signifikansi statistik dipertimbangkan pada p <0,05.

4.9. Analisis Statistik Data Fenotip

Data yang diperoleh dari seluruh sapi terlebih dahulu dipecah berdasarkan kelompok umur (sapi PP dan MP), sesuai dengan desain penelitian. Nilai DMI, BB, parameter susu, EBAL, BCS, metabolit sirkulasi (glukosa, urea, BHB, NEFA, kolesterol, dan IGF{{0}}), SCC (transformasi logaritmik), dan jumlah sel uterus dan rasionya dirangkum sebagai mean ± standard error of the mean (SE). Analisis statistik digunakan untuk membandingkan perbedaan antara kelompok diet menggunakan ANOVA satu arah yang dibangun dalam paket perangkat lunak SPSS V28 (Chicago, IL, USA). Homogenitas varians tiap variabel diuji dengan statistik Levene sebelum ANOVA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa homogenitas antar kelompok untuk ECM, EBAL, glukosa, urea, BHB, dan IGF-1 pada sapi PP tidak tercapai, sehingga diterapkan transformasi logaritmik untuk variabel-variabel tersebut. Jika ANOVA menunjukkan signifikansi, beberapa perbandingan dengan metode LSD Fisher dilakukan untuk mengidentifikasi sumber perbedaan. Karena homogenitas varian data SCC susu dan sitologi uterus tidak dapat dicapai setelah transformasi logaritmik, variabel-variabel ini diuji menggunakan ANOVA satu arah Kruskal-Wallis dengan perbandingan ganda Dunn. Data kesuburan diuji dengan metode Wilcoxon. Dalam semua kasus, signifikansi dianggap pada p <0,05.

5. Kesimpulan

Studi ini mendukung penelitian sebelumnya dalam menunjukkan hubungan yang jelas antara status metabolisme sapi pada awal laktasi dan fungsi kekebalan tubuh mereka. Sebagian besar penelitian sebelumnya yang bertujuan untuk meningkatkan kesehatan pascapersalinan melalui nutrisi yang lebih baik berfokus pada periode prepartum dan menunjukkan bahwa pemberian makan berlebihan dan BCS yang tinggi pada saat ini mendorong mobilisasi lipid selanjutnya dan peningkatan respon inflamasi selama periode peripartum [34]. Kami malah menilai apakah mungkin untuk mengubah fungsi kekebalan tubuh setelah melahirkan dengan mengubah pola makan laktasi. Kami menemukan bahwa respons terhadap penambahan konsentrat, yang menyediakan pakan yang diformulasikan untuk memenuhi kebutuhan energi dan protein hewani, menghasilkan efek berbeda pada transkriptome leukosit pada sapi MP dan PP. Pada sapi MP, diet HC jelas bermanfaat, karena leukosit sapi LC mengalami peningkatan regulasi kaskade komplemen dan koagulasi serta mekanisme pertahanan kekebalan bawaan terhadap patogen. Sebaliknya, leukosit pada sapi PP yang diberi pakan HC menunjukkan respons imun/inflamasi yang lebih besar dan rasio PMN: UEC yang lebih tinggi, menunjukkan peningkatan migrasi leukosit ke rahim. Sapi-sapi ini kemudian mempunyai jangka waktu melahirkan hingga pembuahan yang lebih lama, yang menunjukkan kesuburan yang lebih buruk. Penelitian lebih lanjut dengan jumlah sapi yang lebih banyak diperlukan untuk mengonfirmasi temuan mengenai efek pola makan terhadap kesuburan dan untuk memahami lebih lengkap bagaimana respons metabolik dari pola makan pascapersalinan berbeda pada hewan yang lebih muda.

Referensi

1. Mallard, BA; Dekkers, JC; Irlandia, MJ; Leslie, KE; Syarif, S.; Vankampen, CL; Water, L.; Wilkie, BN Perubahan respon imun selama periode peripartum dan dampaknya terhadap kesehatan sapi perah dan anak sapi. J. Ilmu Susu. 1998, 81, 585–595. [Ref Silang] [PubMed]

2. Jam Tangan, DC; Cheng, Z.; Chowdhury, W.; Fenwick, MA; Fitzpatrick, R.; Morris, Dirjen; Patton, J.; Murphy, JJ Keseimbangan energi negatif mengubah ekspresi gen global dan respon imun pada rahim sapi perah pasca melahirkan. Fisiol. Genom. 2009, 39, 1–13. [Referensi Silang]

3. Ingvartsen, KL; Moyes, K. Nutrisi, fungsi kekebalan tubuh dan kesehatan sapi perah. Hewan 2013, 7 (Lampiran 1), 112–122. [Ref Silang] [PubMed]

4. Kehrli, SAYA, Jr.; Nonnecke, BJ; Roth, JA Perubahan fungsi neutrofil sapi selama periode periparturien. Saya. J.Dokter Hewan. Res. 1989, 50, 207–214. [PubMed]

5. Ster, C.; Loiselle, MC; Lacasse, P. Pengaruh konsentrasi asam lemak nonesterifikasi serum pasca melahirkan pada fungsi sel kekebalan sapi. J. Ilmu Susu. 2012, 95, 708–717. [Ref Silang] [PubMed]

6. Lacetera, N.; Scalia, D.; Bernabucci, U.; Ronchi, B.; Pirazzi, D.; Nardone, A. Fungsi limfosit pada sapi yang dikondisikan berlebihan sekitar masa nifas. J. Ilmu Susu. 2005, 88, 2010–2016. [Ref Silang] [PubMed]

7. Nonnecke, BJ; Kimura, K.; Goff, JP; Kehrli, ME, Jr. Pengaruh kelenjar susu terhadap kapasitas fungsional populasi leukosit mononuklear darah dari sapi periparturien. J. Ilmu Susu. 2003, 86, 2359–2368. [Referensi Silang]

8. Habel, J.; Sundrum, A. Ketidaksesuaian alokasi glukosa antar fungsi kehidupan yang berbeda pada masa transisi sapi perah. Hewan 2020, 10, 1028. [CrossRef]

9. Horst, EA; Kvidera, SK; Baumgard, LH Tinjauan yang diundang: Pengaruh aktivasi kekebalan terhadap kesehatan dan kinerja sapi transisi-Sebuah evaluasi kritis terhadap dogma-dogma tradisional. J. Ilmu Susu. 2021, 104, 8380–8410. [Referensi Silang]

10. Jam Tangan, DC; Becker, F.; Buggiotti, L.; Gagak, MA; Ferris, C.; Lipat, L.; Grelet, C.; Hostens, M.; Ingvartsen, Kuala Lumpur; Marchitelli, C.; dkk. Hubungan antara konsentrasi IGF-1 yang bersirkulasi, status penyakit, dan transkriptom leukosit pada sapi perah laktasi awal. Ruminansia 2021, 1, 147–177. [Referensi Silang]

11. Dimeloe, S.; Burgerer, AV; Grahlert, J.; Hess, C. Metabolisme sel T yang mengatur aktivasi, proliferasi, dan diferensiasi; tampilan modular. Imunologi 2017, 150, 35–44. [Ref Silang] [PubMed]

12. Loftus, RM; Finlay, DK Imunometabolisme: Metabolisme seluler mengubah pengatur kekebalan tubuh. J.Biol. kimia. 2016, 291, 1–10. [Ref Silang] [PubMed]

13. Bauman, DE; Currie, WB Partisi nutrisi selama kehamilan dan menyusui: Tinjauan mekanisme yang melibatkan homeostasis dan homeorhesis. J. Ilmu Susu. 1980, 63, 1514–1529. [Ref Silang] [PubMed]

14. Drackley, Penghargaan Cendekiawan Yayasan JK ADSA. Biologi sapi perah pada masa transisi: Batas akhir? J. Ilmu Susu. 1999, 82, 2259–2273. [Ref Silang] [PubMed]

15. Jabbour, HN; Penjualan, KJ; Catalano, RD; Norman, JE Jalur inflamasi pada kesehatan dan penyakit reproduksi wanita. Reproduksi 2009, 138, 903–919. [Referensi Silang]

16. Pascottini, OB; LeBlanc, SJ Modulasi fungsi imun pada uterus sapi peripartum. Teriogenologi 2020, 150, 193–200. [Referensi Silang]

17. Sheldon, IM; Lewis, GS; LeBlanc, S.; Gilbert, RO Mendefinisikan penyakit rahim pasca melahirkan pada sapi. Teriogenologi 2006, 65, 1516–1530. [Referensi Silang]

18. Kuhla, B. Ulasan: Sitokin pro-inflamasi dan peradangan hipotalamus: Implikasi terhadap kurangnya asupan pakan sapi perah transisi. Hewan 2020, 14, s65–s77. [Referensi Silang]

19. Ingvartsen, Kuala Lumpur; Moyes, KM Faktor yang berkontribusi terhadap imunosupresi pada sapi perah selama periode periparturien. Jpn. J.Dokter Hewan. Res. 2015, 63 (Lampiran 1), S15–S24.

20. Jam Tangan, DC; Cheng, Z.; Salavati, M.; Buggiotti, L.; Takeda, H.; Tang, L.; Becker, F.; Ingvartsen, KI; Ferris, C.; Hostens, M.; dkk. Hubungan profil metabolik dengan ekspresi gen hati dan leukosit sapi perah awal laktasi. J. Ilmu Susu. 2021, 104, 3596–3616. [Referensi Silang]

21. Pinedo, P.; Melendez, P. Gangguan hati berhubungan dengan ketidakseimbangan metabolisme pada sapi perah. Dokter hewan. Klinik. N.Am. Animasi Makanan. Praktek. 2022, 38, 433–446. [Ref Silang] [PubMed]

22. Fenwick, MA; Fitzpatrick, R.; Kenny, DA; Diskin, MG; Patton, J.; Murphy, JJ; Wathes, DC Hubungan antara keseimbangan energi negatif (NEB) dan regulasi IGF pada hati sapi perah menyusui. Domestik. animasi. Endokrinol. 2008, 34, 31–44. [Ref Silang] [PubMed]

23. Kobayashi, Y.; Wah, CK; Pakis, CJ; Lamberson, WR; Keisler, DH; Lucy, MC Penurunan asam ribonukleat pembawa pesan reseptor hormon pertumbuhan (GHR) di hati sapi periparturien disebabkan oleh penurunan regulasi spesifik GHR 1A yang berhubungan dengan penurunan faktor pertumbuhan mirip insulin I. Endokrinologi 1999, 140, 3947–3954. [Referensi Silang]

24. Kvidera, SK; Horst, EA; Abujamieh, M.; Mayorga, EJ; Fernandez, MV; Baumgard, LH Kebutuhan glukosa dari sistem kekebalan tubuh yang diaktifkan pada sapi Holstein menyusui. J. Ilmu Susu. 2017, 100, 2360–2374. [Ref Silang] [PubMed]

25. Cheng, Z.; Wylie, A.; Ferris, C.; Ingvartsen, Kuala Lumpur; Jam Tangan, DC; Gplus, EC Pengaruh pola makan dan kadar asam lemak nonesterifikasi terhadap profil transkriptomik global dalam sirkulasi sel mononuklear darah tepi pada sapi perah laktasi awal. J. Ilmu Susu. 2021, 104, 10059–10075. [Referensi Silang]

26. Jam Tangan, DC; Fenwick, M.; Cheng, Z.; Bourne, N.; Llewellyn, S.; Morris, Dirjen; Kenny, D.; Murphy, J.; Fitzpatrick, R. Pengaruh keseimbangan energi negatif terhadap siklus dan kesuburan pada sapi perah berproduksi tinggi. Teriogenologi 2007, 68 (Lampiran 1), S232 – S241. [Referensi Silang]

27. Santos, JE; Bisinotto, RS; Ribeiro, ES Mekanisme yang mendasari berkurangnya kesuburan pada sapi perah anovular. Teriogenologi 2016, 86, 254–262. [Referensi Silang]

28. Pascottini, OB; Leroy, J.; Opsomer, G. Malaadaptasi masa transisi dan dampaknya terhadap kesuburan sapi perah. mereproduksi. Dom. animasi. 2022, 57 (Lampiran 4), 21–32. [Referensi Silang]

29. Leroy, JL; Valckx, SD; Jordaens, L.; De Bie, J.; Desmet, Kuala Lumpur; Van Hoeck, V.; Britt, JH; Marei, WF; Bols, Nutrisi PE dan kesehatan metabolisme ibu dalam kaitannya dengan kualitas oosit dan embrio: Pandangan kritis tentang apa yang kami pelajari dari model sapi perah. mereproduksi. Subur. Dev. 2015, 27, 693–703. [Referensi Silang]

30. Coffey, anggota parlemen; Cupang, J.; Brotherstone, S. Aspek genetik pertumbuhan sapi perah Holstein-Friesian sejak lahir hingga dewasa. J. Ilmu Susu. 2006, 89, 322–329. [Referensi Silang]

31. Jam Tangan, DC; Cheng, Z.; Bourne, N.; Taylor, VJ; Coffey, anggota parlemen; Brotherstone, S. Perbedaan sapi perah primipara dan multipara pada hubungan sifat metabolik, produksi susu dan skor kondisi tubuh pada masa periparturien. Domestik. animasi. Endokrinol. 2007, 33, 203–225. [Ref Silang] [PubMed]

32. Kecil, UM; Wylie, ARG; O'Connell, NE; Welsh, MD; Grelet, C.; Lonceng, MJ; Gordon, A.; Ferris, CP Efek imunologis dari perubahan tingkat inklusi konsentrat dalam pakan berbasis silase rumput untuk sapi Holstein Friesian laktasi awal. Hewan 2019, 13, 799–809. [Ref Silang] [PubMed]

33. Buggiotti, L.; Cheng, Z.; Salavati, M.; Jam Tangan, CD; Genotipe plus Lingkungan, C. Perbandingan transkriptome dalam sirkulasi leukosit pada awal laktasi antara sapi primipara dan multipara memberikan bukti adanya perubahan terkait usia. Genom BMC. 2021, 22, 693. [Ref Silang] [PubMed]

34. Cardoso, FC; Kalscheur, KF; Drackley, Ulasan Simposium JK: Strategi nutrisi untuk peningkatan kesehatan, produksi, dan kesuburan selama masa transisi. J. Ilmu Susu. 2020, 103, 5684–5693. [Ref Silang] [PubMed]

35. Ingvartsen, KL Penyakit yang berhubungan dengan pemberian pakan dan manajemen pada sapi transisi. animasi. Ilmu Pakan. Teknologi. 2006, 126, 175–213. [Referensi Silang]

36. Ferris, CP; Gordon, FJ; Patterson, DC; Mayne, CS; McCoy, MA Perbandingan jangka pendek kinerja empat sistem produksi susu berbasis padang rumput untuk sapi perah yang melahirkan di musim gugur. Ilmu Pengetahuan Rumput Hijauan. 2003, 58, 8. [Referensi Silang]

37. Taylor, VJ; Cheng, Z.; Pushpakumara, PG; Baik, DE; Wathes, DC Hubungan antara konsentrasi plasma faktor pertumbuhan mirip insulin-I pada sapi perah dan kesuburan serta hasil susunya. Dokter hewan. Rek. 2004, 155, 583–588. [Referensi Silang]

38. LeBlanc, SJ Interaksi metabolisme, inflamasi, dan kesehatan saluran reproduksi pada masa nifas pada sapi perah. mereproduksi. dokter. animasi. 2012, 47 (Lampiran 5), 18–30. [Referensi Silang]

39. Vailati-Riboni, M.; Kanwal, M.; Bulgari, O.; Meier, S.; Imam, NV; Burke, CR; Kay, JK; McDougall, S.; Mitchell, MD; Pejalan, CG; dkk. Skor kondisi tubuh dan bidang nutrisi prepartum mempengaruhi transkriptom jaringan adiposa pengatur metabolisme dan inflamasi pada sapi perah penggembalaan selama masa transisi. J. Ilmu Susu. 2016, 99, 758–770. [Referensi Silang]

40. Trevisi, E.; Minuti, A. Penilaian respon imun bawaan pada sapi periparturien. Res. Dokter hewan. Sains. 2018, 116, 47–54. [Referensi Silang]

41. Pemabuk, SA; Siksik, R.; van Straten, M.; Astaga, T.; Kedmi, M.; Raz, T. Diagnosis endometritis sitologi pada sapi perah primipara versus multipara. J. Ilmu Susu. 2022, 105, 665–683. [Ref Silang] [PubMed]

42. Hamzeh-Cognasse, H.; Laradi, S.; Osselaer, JC; Cognasse, F.; Garraud, O. Pengurangan patogen Amotosalen-HCl-UVA tidak mengubah metabolisme ligan CD40 terlarut, ligan Ox40 dan interkeukin-27 pasca penyimpanan, sitokin yang umumnya berhubungan dengan efek samping yang serius. Suara Sang. 2015, 108, 205–207. [Ref Silang] [PubMed]

43. de Greeff, A.; Zadoks, R.; Aturan, L.; Toussaint, M.; Nguyen, TK; Jatuh, A.; Pemberontak, J.; Stockhofe-Zurwieden, N.; Smith, H. Respon inang awal pada kelenjar susu setelah percobaan tantangan Streptococcus uberis pada sapi dara. J. Ilmu Susu. 2013, 96, 3723–3736. [Ref Silang] [PubMed]

44. Cheng, Z.; Chauhan, L.; Barry, AT; Abudureyimu, A.; Oguejiofor, CF; Chen, X.; Wathes, DC Infeksi virus diare virus sapi akut menghambat ekspresi gen yang distimulasi interferon tau pada endometrium sapi. biologi. mereproduksi. 2017, 96, 1142–1153. [Referensi Silang]

45. Schoggins, JW Gen yang Distimulasi Interferon: Apa Fungsinya? Ann. Pendeta Virol. 2019, 6, 567–584. [Ref Silang] [PubMed]

46. ​​Ohto, U. Mekanisme aktivasi dan regulasi reseptor mirip NOD berdasarkan biologi struktural. Depan. imunol. 2022, 13, 953530. [Referensi Silang]

47. Cheng, Z.; Palma-Vera, S.; Buggiotti, L.; Salavati, M.; Becker, F.; Werling, D.; Jam Tangan, DC; Gplus, EC Analisis transkriptomik leukosit yang bersirkulasi diperoleh selama pemulihan dari mastitis klinis yang disebabkan oleh Escherichia coli pada sapi perah Holstein. Hewan 2022, 12, 2146. [CrossRef]

48. Loria, V.; Dato, saya.; Graziani, F.; Biasucci, LM Myeloperoxidase: Sebuah biomarker baru peradangan pada penyakit jantung iskemik dan sindrom koroner akut. Mediasi. Peradangan. 2008, 2008, 135625. [Referensi Silang]

49. Olivera, A.; Beaven, MA; Metcalfe, DD Sel mast menandakan pentingnya sel tersebut dalam kesehatan dan penyakit. J. Klinik Alergi. imunol. 2018, 142, 381–393. [Referensi Silang]

50. Dickinson, SE; Griffin, BA; Elmore, MF; Kriese-Anderson, L.; Elmore, JB; Pewarna, PW; Batang, SP; Biase, Profil transkriptome FH pada sel darah putih perifer pada saat inseminasi buatan membeda-bedakan sapi dara dengan potensi fertilitas berbeda. Genom BMC. 2018, 19, 129. [Referensi Silang]

51. Van Meulder, F.; Van Coppernolle, S.; Borloo, J.; Rinaldi, M.; Li, RW; Chiers, K.; Van den Broeck, W.; Vercruysse, J.; Claerebout, E.; Geldhof, P. Granule eksositosis granulysin dan granzyme B sebagai mekanisme kunci potensial dalam kekebalan yang diinduksi vaksin pada sapi terhadap nematoda Ostertagia ostertagi. Menulari. kekebalan. 2013, 81, 1798–1809. [Ref Silang] [PubMed]

52. Taylor, JL; Brown, BL Dasar struktural untuk disregulasi sintase asam aminolevulinat pada penyakit manusia. J.Biol. kimia. 2022, 298, 101643. [CrossRef] [PubMed]

53. Trapani, JA; Sutton, VR Granzyme B: Fungsi pro-apoptosis, antivirus dan antitumor. Saat ini. Pendapat. imunol. 2003, 15, 533–543. [Ref Silang] [PubMed]

54. Lonceng, G.; Baruselli, PS; Limone, A.; D'Occhio, MJ Tindakan lokal sitokin dan sel kekebalan dalam komunikasi antara konseptus dan rahim selama periode kritis perkembangan awal embrio, perlekatan dan implantasi-Implikasi terhadap kelangsungan hidup embrio pada sapi: Sebuah tinjauan. Teriogenologi 2021, 167, 1–12. [Ref Silang] [PubMed]

55. Bougarne, N.; Weyers, B.; Desmet, SJ; Deckers, J.; Ray, DW; Staels, B.; De Bosscher, K. Tindakan Molekuler PPARalpha dalam metabolisme lipid dan peradangan. Endokr. Wahyu 2018, 39, 760–802. [Referensi Silang]

56. Sobolev, VV; Tchepourina, E.; Korsunskaya, IM; Geppe, NA; Chebysheva, SN; Soboleva, AG; Mezentsev, A. Peran faktor transkripsi PPAR-gamma dalam patogenesis psoriasis, Sel kulit, dan sel kekebalan. Int. J.Mol. Sains. 2022, 23, 9708. [Referensi Silang]

57. Lagu, S.; Attia, RR; Connaughton, S.; Niesen, MI; Ness, GC; Elam, MB; Hori, RT; Masak, GA; Park, EA Peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) dan PPAR gamma coactivator (PGC-1alpha) menginduksi karnitin palmitoyltransferase IA (CPT-1A) melalui elemen gen independen. mol. Sel. Endokrinol. 2010, 325, 54–63. [Referensi Silang]

58. Ziouzenkova, O.; Plutzky, J. Metabolisme retinoid dan respons reseptor nuklir: Wawasan baru tentang regulasi terkoordinasi dari kompleks PPAR-RXR. FEBS Lett. 2008, 582, 32–38. [Referensi Silang]

59. Espenshade, PJ; Hughes, AL Regulasi sintesis sterol pada eukariota. Ann. Pendeta Genet. 2007, 41, 401–427. [Referensi Silang]

60. Van Meer, G.; Voelker, DR; Feigenson, GW Membran lipid: Di mana letaknya dan bagaimana perilakunya. Nat. Pendeta Mol. Sel. biologi. 2008, 9, 112–124. [Referensi Silang]

61. Aguilar-Ballester, M.; Herrero-Cervera, A.; Vinue, A.; Martinez-Hervas, S.; Gonzalez-Navarro, H. Dampak metabolisme kolesterol pada fungsi sel kekebalan dan aterosklerosis. Nutrisi 2020, 12, 2021. [CrossRef] [PubMed]

62. Mamedova, LK; Yuan, K.; Laudick, AN; Fleming, SD; Mashek, Dirjen; Bradford, Pensinyalan reseptor mirip Tol BJ 4 diperlukan untuk induksi ekspresi gen glukoneogenik oleh palmitat dalam sel karsinoma hati manusia. J.Nutr. Biokimia. 2013, 24, 1499–1507. [Ref Silang] [PubMed]

63. Soto-Heredero, G.; Gomez de Las Heras, MM; Gabande-Rodriguez, E.; Oller, J.; Mittelbrunn, M. Glikolisis-Pemain kunci dalam respon inflamasi. FEBS J.2020, 287, 3350–3369. [Ref Silang] [PubMed]

64. Kominsky, DJ; Campbell, EL; Colgan, SP Pergeseran metabolik dalam imunitas dan peradangan. J. Imunol. 2010, 184, 4062–4068. [Referensi Silang]

65. Afacan, NJ; Yeung, AT; Pena, OM; Hancock, RE Potensi terapeutik peptida pertahanan inang pada infeksi yang resistan terhadap antibiotik. Saat ini. farmasi. Des. 2012, 18, 807–819. [Referensi Silang]

66. Auvynet, C.; Rosenstein, Y. Peptida pertahanan inang multifungsi: Peptida antimikroba, pemain kecil namun besar dalam imunitas bawaan dan adaptif. FEBS J.2009, 276, 6497–6508. [Referensi Silang]

67. Hilchie, AL; Wuerth, K.; Hancock, RE Modulasi imun oleh peptida pertahanan kationik multifaset (antimikroba). Nat. kimia. biologi. 2013, 9, 761–768. [Referensi Silang]

68. Cheng, Z.; Buggiotti, L.; Salavati, M.; Marchitelli, C.; Palma-Vera, S.; Wylie, A.; Takeda, H.; Tang, L.; Gagak, MA; Jam Tangan, DC; dkk. Profil transkriptomik global leukosit yang bersirkulasi pada sapi laktasi awal dengan mastitis klinis atau subklinis. mol. biologi. Rep.2021, 48, 4611–4623. [Referensi Silang]

69. Foley, C.; Chapwanya, A.; Callanan, JJ; Whiston, R.; Miranda-CasoLuengo, R.; Lu, J.; Meijer, WG; Lynn, DJ; O'Farrelly, C.; Meade, KG Analisis terpadu perubahan lokal dan sistemik sebelum perkembangan endometritis sitologi post-partum. Genom BMC. 2015, 16, 811. [Referensi Silang]

70. Machado, VS; Silva, TH Imunitas adaptif pada rahim pascapersalinan: Potensi penggunaan vaksin untuk mengendalikan metritis. Teriogenologi 2020, 150, 201–209. [Referensi Silang]

71. Ley, K.; Hoffman, HM; Kube, P.; Cassatella, MA; Zychlinsky, A.; Hedrick, CC; Catz, SD Neutrofil: Wawasan baru dan pertanyaan terbuka. Sains. imunol. 2018, 3, eaat4579. [Ref Silang] [PubMed]

72. Wahl, SM; Feldman, GM; McCarthy, JB Regulasi adhesi leukosit dan sinyal pada peradangan dan penyakit. J.Leukoc. biologi. 1996, 59, 789–796. [Ref Silang] [PubMed]

73. Schubert, K.; Polte, T.; Bonisch, U.; Schader, S.; Holtappels, R.; Hildebrandt, G.; Lehmann, J.; Simon, JC; Anderegg, U.; Saalbach, A. Thy-1 (CD90) mengatur ekstravasasi leukosit selama peradangan. euro. J. Imunol. 2011, 41, 645–656. [Ref Silang] [PubMed]

74. Dreymueller, D.; Pruessmeyer, J.; Schumacher, J.; Fellendorf, S.; Hess, FM; Seifert, A.; Babendreyer, A.; Bartsch, JW; Ludwig, A. Metalloproteinase ADAM8 mendorong rekrutmen leukosit in vitro dan pada peradangan paru akut. Saya. J.Fisiol. Sel Paru-paru. mol. Fisiol. 2017, 313, L602–L614. [Referensi Silang]

75. Kostelnik, Biro Desain; Barker, A.; Schultz, C.; Mitchell, TP; Rajeeve, V.; Putih, IJ; Aurrand-Singa, M.; Nourshargh, S.; Cutillas, P.; Nightingale, TD Perdagangan dinamis dan pergantian JAM-C sangat penting untuk migrasi sel endotel. Biol PLoS. 2019, 17, e3000554. [Ref Silang] [PubMed]

76. Stillie, R.; Farooq, SM; Gordon, JR; Stadnyk, AW Signifikansi fungsional di balik ekspresi dua tipe reseptor IL-8 pada PMN. J.Leukoc. biologi. 2009, 86, 529–543. [Referensi Silang]

77. Bouton, AH; Riggins, RB; Bruce-Staskal, PJ Fungsi protein adaptor Cas: Konvergensi sinyal dan penentuan respons seluler. Onkogen 2001, 20, 6448–6458. [Referensi Silang]

78. Chen, X.; Cheng, Z.; Zhang, S.; Werling, D.; Wathes, DC Menggabungkan studi asosiasi genom dan analisis data ekspresi gen diferensial mengidentifikasi gen kandidat yang mempengaruhi mastitis yang disebabkan oleh dua patogen berbeda pada sapi perah. Buka J.Anim. Sains. 2015, 5, 358–393. [Referensi Silang]

79. Chang, GW; Hsiao, CC; Peng, YM; Vieira Braga, FA; Kragten, NA; Remmerswaal, EB; van de Garde, MD; Straussberg, R.; Konig, GM; Kostenis, E.; dkk. Reseptor berpasangan protein G adhesi GPR56/ADGRG1 adalah reseptor penghambat pada sel NK manusia. Sel. Rep.2016, 15, 1757–1770. [Referensi Silang]

80. Bi, J.; Tian, ​​Z. Disfungsi sel NK dan imunoterapi pos pemeriksaan. Depan. imunol. 2019, 10, 1999. [Referensi Silang]

81. Minuti, A.; Gallo, A.; Lopreiato, V.; Bruschi, S.; Piccioli-Cappelli, F.; Uboldi, O.; Trevisi, E. Pengaruh ukuran anak pada metabolisme prepartum dan profil asam amino pada kelinci. Hewan 2020, 14, 2109–2115. [Ref Silang] [PubMed]

82. Crookenden, MA; Moyes, KM; Kuhn-Sherlock, B.; Lehnert, K.; Pejalan, CG; Loor, JJ; Mitchell, MD; Murray, A.; Dukkipati, VSR; Vailati-Riboni, M.; dkk. Analisis transkriptomik neutrofil yang bersirkulasi pada sapi perah penggembalaan peripartal yang mengalami stres metabolik. J. Ilmu Susu. 2019, 102, 7408–7420. [Ref Silang] [PubMed]

83. Sharma, JN; Al-Omran, A.; Parvathy, SS Peran oksida nitrat dalam penyakit inflamasi. Inflammofarmakologi 2007, 15, 252–259. [Ref Silang] [PubMed]

84. Martino, BAPAK; Gutierrez-Aguilar, M.; Yiew, NKH; Lutkewitte, AJ; Penyanyi, JM; McCommis, KS; Ferguson, D.; Lis, KHH; Yoshino, J.; Renkemeyer, MK; dkk. Membungkam alanin transaminase 2 pada hati penderita diabetes melemahkan hiperglikemia dengan mengurangi glukoneogenesis dari asam amino. Perwakilan Sel 2022, 39, 110733. [CrossRef] [PubMed]

85. Tinggi, AR; Yvan-Charvet, L. Kolesterol, peradangan dan kekebalan bawaan. Nat. Pendeta Imunol. 2015, 15, 104–116. [Referensi Silang]

86. Jam Tangan, D.; Cheng, Z.; Mareiy, W.; Fouladi-Nasht, A. Asam lemak tak jenuh ganda dan kesuburan pada mamalia betina: Pembaruan. CABI Rev.2013, 8, 1–14. [Referensi Silang]

87. Alipour, A.; van Oostrom, AJ; Israel, A.; Verseyden, C.; Collins, JM; Frayn, KN; Plokker, TW; Elte, JW; Castro Cabezas, M. Aktivasi leukosit oleh lipoprotein kaya trigliserida. Arterioskler. bekuan darah. Vas. biologi. 2008, 28, 792–797. [Referensi Silang]

88. Castoldi, A.; Monteiro, LB; van Teijlingen Bakker, N.; Sanin, DE; Rana, N.; Korrado, M.; Cameron, SAYA; Pengganggu, F.; Matsushita, M.; Caputa, G.; dkk. Sintesis triasilgliserol meningkatkan fungsi inflamasi makrofag. Nat. Komunitas. 2020, 11, 4107. [Referensi Silang]

89. Bell, AW Regulasi metabolisme nutrisi organik selama transisi dari akhir kehamilan ke awal menyusui. J.Anim. Sains. 1995, 73, 2804–2819. [Referensi Silang]

90.Moore, DAPSU; Varga, G. BUN, dan MUN: Pengujian nitrogen urea pada sapi perah. Ringkasan 1996, 18, 712–720.

91. Jam Tangan, DC; Bourne, N.; Cheng, Z.; Mann, GE; Taylor, VJ; Coffey, MP Analisis korelasi ganda profil metabolik dan endokrin dengan fertilitas pada sapi primipara dan multipara. J. Ilmu Susu. 2007, 90, 1310–1325. [Ref Silang] [PubMed]

92. Abe, R.; Donnelly, SC; Peng, T.; Bukala, R.; Metz, CN Fibrosit darah tepi: jalur diferensiasi dan migrasi ke lokasi luka. J. Imunol. 2001, 166, 7556–7562. [Ref Silang] [PubMed]

93. Schreier, S.; Triampo, W. Populasi sel langka yang beredar dalam darah. Apa itu dan Apa Manfaatnya? Sel 2020, 9, 790. [CrossRef] [PubMed]

94. Lynn, AK; Yannas, IV; Bonfield, W. Antigenisitas dan imunogenisitas kolagen. J. Biomed. Materi. Res. 2004, 71, 343–354. [Referensi Silang]

95. Roche, JR; Burke, CR; Crookenden, MA; Heiser, A.; Loor, JL; Meier, S.; Mitchell, MD; Fina, CVC; Turner, SA Kesuburan dan sapi perah transisi. mereproduksi. Subur. Dev. 2017, 30, 85–100. [Referensi Silang]

96. Galvao, KN; Flaminio, MJ; Brittin, SB; Sper, R.; Fraga, M.; Caixeta, L.; Ricci, A.; Penjaga, CL; Butler, WR; Gilbert, RO Hubungan antara penyakit rahim dan indikator neutrofil dan status energi sistemik pada sapi Holstein menyusui. J. Ilmu Susu. 2010, 93, 2926–2937. [Referensi Silang]

97. Dahl, MO; Maunsell, FP; De Vries, A.; Galvao, KN; Risco, California; Hernandez, JA Bukti bahwa mastitis dapat menyebabkan keguguran pada sapi perah: Tinjauan sistematis terhadap studi observasional. J. Ilmu Susu. 2017, 100, 8322–8329. [Referensi Silang]

98.Hansen, PJ; Soto, P.; Natzke, RP Mastitis dan kesuburan pada sapi kemungkinan keterlibatan peradangan atau aktivasi kekebalan pada kematian embrio. Saya. J.Reproduksi. imunol. 2004, 51, 294–301. [Referensi Silang]

99. Malinowski, E.; Gajewski, Z. Mastitis dan gangguan kesuburan pada sapi. Pol. J.Dokter Hewan. Sains. 2010, 13, 555–560.

100. Edmonson, AJ; Bersandar, IJ; Penenun, LD; Jauh, T.; Webster, GA Grafik penilaian kondisi tubuh untuk sapi perah Holstein. J. Ilmu Susu. 1989, 72, 11. [Referensi Silang]

101. Larsen, T.; Rontved, CM; Ingvartsen, Kuala Lumpur; Vels, L.; Bjerring, M. Aktivitas enzim dan protein fase akut dalam susu digunakan sebagai indikator mastitis klinis akut yang diinduksi E. coli LPS. Hewan 2010, 4, 1672–1679. [Ref Silang] [PubMed]

102. Krogh, MA; Hostens, M.; Salavati, M.; Grelet, C.; Sorensen, MT; Jam Tangan, DC; Ferris, CP; Marchitelli, C.; Signorelli, F.; Napolitano, F.; dkk. Variasi biomarker darah dan susu antara dan dalam kawanan pada sapi Holstein pada awal laktasi. Hewan 2020, 14, 1067–1075. [Ref Silang] [PubMed]

103. Buggiotti, L.; Cheng, Z.; Jam Tangan, DC; Gplus, EC Menambang pembacaan yang belum dipetakan pada data bovine RNA-Seq mengungkapkan prevalensi virus herpes sapi-6 pada sapi perah Eropa dan perubahan terkait dalam fenotipe dan transkriptom leukositnya. Virus 2020, 12, 1451. [CrossRef] [PubMed]

104. Beltman, SAYA; Ford, N.; Furney, P.; Carter, F.; Roche, JF; Penyendiri, P.; Crowe, MA Karakterisasi ekspresi gen endometrium dan parameter metabolik pada sapi dara yang menghasilkan embrio yang dapat hidup atau tidak dapat hidup pada Hari ke 7 setelah inseminasi. mereproduksi. Subur. Dev. 2010, 22, 987–999. [Ref Silang] [PubMed]