Memprediksi Peran LncRNA dalam Penuaan Ginjal Berdasarkan Urutan RNA Ⅱ

Korelasi lncRNA Gm43360 dan target mRNA potensialnya

LncRNA Gm43360 dipilih untuk penelitian karena menghubungkan dua jaringan koekspresi lncRNA-mRNA. Tingkat ekspresi Adra1a berkorelasi positif (rho=0.8650, p=0.026) dengan Gm43360, Csnk1a1 (casein kinase 1A1) berkorelasi negatif (rho{{12 }}.8084, p=0.0084) (Gbr. 5a). Untuk memverifikasi lebih lanjut korelasi lncRNA Gm43360 dan target potensial mRNA Adra1a dan Csnk1a1, plasmid ekspresi berlebih dari lncRNA Gm43360 dirancang dalam penelitian ini. Ekspresi Csnk1a1 menurun seperti yang diharapkan, dan ekspresi Adra1a juga menurun, namun tidak signifikan. Selanjutnya, kami merobohkan lncRNA Gm43360 oleh siRNA untuk mendeteksi apakah ekspresi mRNA targetnya terpengaruh. Seperti yang diharapkan, Csnk1a1 meningkat pada sel knockdown lncRNA Gm43360 relatif terhadap kelompok kontrol negatif siRNA (Gambar 5b). Sepuluh, kami mendeteksi peran lncRNA Gm43360 dalam siklus sel. Hasil kit penghitungan sel-8 (CCK-8) menunjukkan bahwa lncRNA Gm43360 meningkatkan viabilitas sel (Gbr. 5c). Hasil penelitian menunjukkan bahwa lncRNA Gm43360 meningkatkan persentase sel fase S dan menurunkan persentase sel fase G1 dibandingkan dengan kontrol negatif (Gambar 5d). Protein p53 dan p21 terlibat dalam pengaturan siklus sel dan dengan demikian merupakan tanda penuaan sel. Tingkat ekspresi p53 dan p21 menurun secara signifikan pada kelompok ekspresi berlebih dibandingkan kelompok kontrol. Tingkat ekspresi p53 dan p21 meningkat secara signifikan pada kelompok siRNA dibandingkan dengan kelompok kontrol siRNA (Gambar 5e). Ekspresi berlebih dari lncRNA Gm43360 menurunkan jumlah sel SA- -gal-positif, dan sel -gal-positif meningkat pada kelompok transfect Gm43360 (Gbr. 5f). Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa lncRNA Gm43360 menghambat penuaan sel epitel tubulus ginjal dengan caramenghambat ekspresi Csnk1a1.

KLIK DI SINI UNTUK MENDAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK ALAMI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK FUNGSI GINJAL

Diskusi

Dalam penelitian ini, kami mengevaluasi data ekspresi mRNA dari ginjal tikus muda dan tua dan melakukan analisis bio-informasi yang mengungkap fungsi mRNA yang diekspresikan secara menyimpang. Kami mengamati 347 mRNA yang diregulasi dan 355 mRNA yang diregulasi serta 130 lncRNA yang diregulasi dan 91 lncRNA yang didownregulasi diginjal tikus tua dibandingkan dengan ginjal tikus muda. Selain itu, mRNA ini terbukti terlibat dalam jalur terkait penuaan, sepertifosforilasi oksidatif, jalur pensinyalan AMPK, jalur pensinyalan Wnt, jalur pensinyalan Rap1, dan penyakit terkait usia, yang menunjukkan fungsi mRNA yang diekspresikan secara berbeda dalam patogenesis penuaan ginjal.

RNA NEAT1 noncoding yang panjang merupakan faktor protektif dalam perkembangan fibrosis ginjal pada sel epitel tubulus ginjal (21). Secara kebetulan, dalam hasil pengurutan kami, lncRNA NEAT1 diekspresikan pada tingkat yang lebih rendah di ginjal tikus tua dibandingkan tikus muda, yang konsisten dengan temuan sebelumnya. LincRNA-Gm4419 mempercepat inflamasi dan fibrosis melalui mekanisme yang dimediasi inflamasi NF-kB/NLRP3 pada nefropati diabetik [22]. Dalam hasil pengurutan kami, kami juga menemukan bahwa ekspresi Gm4419 lebih tinggi pada ginjal tikus tua dibandingkan tikus muda, namun tidak ada perbedaan yang signifikan. LncRNA Gm43360 terletak pada kromosom 5 (Chr5:122494022–122.494.908, 2887 bp). Menurut UCSC Genome Browser, Gm43360 terletak di intron gen penyandi protein Atp2a2. Namun, hingga saat ini belum ada laporan mengenai keterlibatan lncRNA Gm43360 pada penyakit. Dalam penelitian ini, knockdown lncRNA Gm43360 mendorong penuaan sel epitel tubulus ginjal. Selain itu, kami mengidentifikasi banyak lncRNA yang diekspresikan secara berbeda dalam hasil pengurutan dan menyelidikinya.

LncRNA diklasifikasikan menjadi regulasi cis atau transregulasi berdasarkan mekanisme regulasi lncRNA. lncRNA yang bertindak cis dapat mempengaruhi ekspresi gen tetangga dengan bergantung pada elemen yang bertindak cis, seperti promotor, peningkat, dan urutan pengatur, yang jarak antara lncRNA dan mRNA kurang dari 100 kb. LncRNA yang bertransaksi mengacu pada lncRNA yang meninggalkan lokasi transfeksi dan beroperasi di lokasi yang jauh (yaitu, jarak antara lncRNA dan mRNA lebih dari 100 kb) [23]. lncRNA MAAT meningkatkan ekspresi gen tetangga Mbnl1 melalui modul regulasi cis (24). LncRNA Pnky berperan sebagai regulator trans-acting dalam pengembangan kortikal [25]. Pada penelitian ini terdapat hubungan transregulasi antara lncRNA Gm43360 dan Csnk1a1. Csnk1a1 adalah gen penekan tumor [26] yang mengkode protein yang berpartisipasi dalam siklus sel dan proses pembelahan sel [27]. Downregulasi Csnk1a1 menginduksiinflamasi terkait penuaanrespon dengan terhentinya pertumbuhan pada tumor kolorektal [26]. Csnk1a1 diturunkan regulasinya ketika Gm43360 diregulasi; dengan demikian, kemungkinan besar lncRNA Gm43360 berpartisipasipenuaan ginjalolehmengatur ekspresi Csnk1a1.

Kesimpulan

Investigasi kami terhadap jaringan koekspresi lncRNA-mRNA dipenuaan ginjalmengungkapkan lncRNA, lncRNA Gm43360, mungkin memainkan peran protektif dalam penuaan ginjal dan memperluas pemahaman kita tentang mekanisme yang terlibat dalampenuaan ginjal

Bahan dan metode

Sampel Tikus C57BL/6J jantan muda (3-berusia sebulan) dan tua (24-berusia bulan) dibeli dari Pusat Hewan Eksperimental Universitas Xiamen dan dibesarkan di lingkungan standar. Semua tikus memiliki akses bebas terhadap makanan dan air. Tikus-tikus tersebut disesuaikan dengan fasilitas baru selama sebulan sebelum dikorbankan. Tikus dibius dengan uretan melalui injeksi intraperitoneal dengan dosis 750 mg/kg sebelum pengambilan spesimen. Tikus muda dan tikus tua dikorbankan pada hari yang sama.Sisa ginjal tikusjaringan digunakan untuk pengurutan dalam setiap pengujian. RNA-seq dan histopatologi dilakukan padaginjal terpisahdari tikus yang sama. Jaringan ginjal dikumpulkan dari tikus. Satu ginjal segera direndam dalam formalin buffer netral 10% untuk penanaman bagian berikutnya, dan ginjal lainnya dibagi menjadi beberapa jaringan dan segera ditempatkan dalam nitrogen cair dan kemudian disimpan pada suhu -80 derajat. Penelitian ini didukung oleh Komite Etika Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Xi'an Jiaotong (Shaanxi, Tiongkok) (No. 2018-G-164). Semua metode dilakukan berdasarkan pedoman dan peraturan etika hewan. Penelitian ini dilakukan sesuai dengan pedoman ARRIVE.

Histopatologi ginjal

Sampel jaringan ginjal tikus muda dan tua difiksasi dalam larutan paraformaldehyde 10% semalaman. Sepuluh bagian didehidrasi, ditanamkan parafin, dan dipotong dengan ketebalan 4-µm. Pewarnaan trikromatik PAS dan Masson dilakukan dengan menggunakan protokol standar. Gambar ditangkap oleh kamera, dan area pewarnaan positif diukur. Area gambar kamera histopatologi dihitung dengan Image-Pro Plus 6.0.

Pewarnaan SA‑ gal

Aktivitas SA{{0}}gal dianalisis menggunakan kit pewarnaan SA- -gal (Cell Signaling Technology #9860) sesuai dengan protokol pabrikan. Area pewarnaan positif diukur, dan sel SA- -gal-positif dihitung menggunakan Image-Pro Plus 6.0.

Konstruksi dan pengurutan perpustakaan ekstraksi RNA

Samples (each 5 mice in young and old mice) were used for lncRNA and mRNA expression analyses. Young mice were numbered 3M1, 3M2, 3M3, 3M4, and 3M5, and old mice were numbered 24M1, 24M2, 24M3, 24M4, and 24M5. Total RNA was extracted using Trizol reagent (thermofsher, 15,596,018) following the manufacturer's instruction. The total RNA quantity and purity were analyzed of Bioanalyzer 2100 and RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent, CA, USA, 5067−1511), and high-quality RNA samples with RIN number>7.0 digunakan untuk membuat perpustakaan pengurutan. Setelah ekstraksi RNA total, mRNA dimurnikan dari RNA total (5ug) menggunakan Dynabeads Oligo (dT) (Thermo Fisher, CA, USA) dengan dua putaran pemurnian. Setelah pemurnian, mRNA dipecah menjadi fragmen pendek menggunakan kation divalen pada suhu tinggi (Modul Fragmentasi Magnesium RNA (NEB, cat. e6150, USA) di bawah 94 derajat 5-7 mnt). Kemudian fragmen RNA yang dibelah ditranskrip mundur untuk mendapatkan cDNA dengan SuperScript™ II Reverse Transcriptase (Invitrogen, cat. 1.896.649, USA), yang selanjutnya digunakan untuk mensintesis DNA untai kedua berlabel U dengan E. coli DNA polimerase I ( NEB, cat.m0209, USA), RNase H (NEB, cat.m0297, USA) dan Solusi dUTP (Termo Fisher, cat.R0133, USA). Basis A kemudian ditambahkan ke ujung tumpul setiap untai, mempersiapkannya untuk ligasi ke adaptor yang diindeks. Setiap adaptor berisi overhang basis-T untuk mengikat adaptor ke DNA terfragmentasi berekor A. Adaptor indeks ganda diikat ke fragmen, dan pemilihan ukuran dilakukan dengan manik-manik AMPureXP. Setelah perlakuan enzim UDG yang labil terhadap panas (NEB, cat.m0280, USA) pada DNA untai kedua berlabel U, produk yang diikat diamplifikasi dengan PCR dengan kondisi berikut: denaturasi awal pada 95 derajat selama 3 menit; 8 siklus denaturasi pada 98 derajat selama 15 detik, anil pada 60 derajat selama 15 detik, dan ekstensi pada 72 derajat selama 30 detik; dan kemudian ekstensi akhir pada 72 derajat selama 5 menit. Panjang penyisipan rata-rata untuk perpustakaan cDNA akhir adalah 300±50 bp. Terakhir, kami melakukan pengurutan ujung berpasangan 2×150 bp (PE150) pada Illumina Novaseq™ 6000 (LC-Bio Technology CO., Ltd., Hangzhou, Cina) sesuai dengan protokol pabrikan [28].

Analisis bioinformatika Urutan dan penyaringan Clean Reads

Perpustakaan cDNA yang dibangun oleh teknologi dari kumpulan RNA darisampel ginjaltikus diurutkan dan dijalankan dengan platform urutan Illumina NovaseqTM 6000. Dengan menggunakan pendekatan RNA-seq ujung berpasangan Illumina, kami mengurutkan transkriptom, menghasilkan total jutaan pembacaan ujung berpasangan 2×150 bp. Bacaan yang diperoleh dari mesin pengurutan mencakup bacaan mentah yang berisi adaptor atau basis berkualitas rendah yang akan memengaruhi perakitan dan analisis berikutnya. Oleh karena itu, untuk mendapatkan pembacaan bersih berkualitas tinggi, pembacaan disaring lebih lanjut oleh Cutadapt [29] (https://cutadapt.readthedocs.io/en/stable/, version:cutadapt-1.9). Parameternya adalah sebagai berikut:

1) menghapus bacaan yang berisi adaptor;

2) menghapus bacaan yang mengandung poliA dan poli;

3) menghilangkan bacaan yang mengandung lebih dari 5% nukleotida (N) yang tidak diketahui;

4) menghapus bacaan berkualitas rendah yang mengandung lebih dari 20% basis berkualitas rendah (nilai Q Kurang dari atau sama dengan 20).

Sepuluh kualitas urutan diverifikasi menggunakan FastQC [30] (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/, 0.11.9). termasuk konten Q20, Q30, dan GC dari data bersih. Setelah itu, total G bp pembacaan yang dibersihkan dan dipasangkan dihasilkan. Data urutan mentah telah diserahkan ke kumpulan data NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) dengan nomor akses GSE154223.

Genom/anotasi referensinya adalah Mus_musculus.GRCm38. Sumber dan versi anotasi gen yang digunakan untuk analisis adalah Ensembl_v88.

Perakitan transkrip

Pertama, Cutadapt [29] digunakan untuk menghapus bacaan yang mengandung kontaminasi adaptor, basis berkualitas rendah, dan basis yang tidak dapat ditentukan. Sepuluh kualitas urutan diberi makan menggunakan FastQC (http://www.bioinformatics.Babra ham.ac.uk/projects/fastqc/). Kami menggunakan Bowtie2 (31) dan Hisat2 (32) untuk memetakan bacaan ke genom tikus. Pembacaan yang dipetakan dari setiap sampel dikumpulkan menggunakan StringTie [33]. Sepuluh, semua transkrip darisampel ginjaldigabungkan untuk merekonstruksi transkriptom komprehensif menggunakan skrip Perl. Setelah transkriptom akhir dihasilkan, StringTie [33] dan edgeR [34] digunakan untuk memperkirakan tingkat ekspresi semua transkrip.

Identifikasi LncRNA

Pertama-tama, transkrip yang tumpang tindih dengan mRNA yang diketahui dan transkrip yang lebih pendek dari 200 bp dibuang. Kemudian kami menggunakan CPC [35] dan CNCI [36] untuk memprediksi transkrip dengan potensi pengkodean. Semua transkrip dengan skor BPK<-1 and CNCI score<0 were removed. The remaining transcripts were considered as lncRNAs.

Analisis gen analisis yang diekspresikan secara berbeda (DGE).

StringTie [33] was used to perform expression levels for mRNAs and lncRNAs by calculating FPKM [37]. Genes differential expression analysis was performed by DESeq2 software between two different groups (and by edgeR between two samples) [34, 38]. The genes with the parameter of q value below 0.6 and absolute fold change>2 dianggap sebagai gen yang diekspresikan secara berbeda.

Prediksi gen target dan analisis fungsional lncRNA

Untuk mengeksplorasi fungsi fungsi lncRNA, kami memperkirakan gen target cis dari lncRNA. LncRNA mungkin memainkan peran cis dalam bertindak pada gen target tetangga. Dalam penelitian ini, gen pengkode di 100,000 hulu dan hilir dipilih dengan skrip Perl. Kemudian, kami menunjukkan analisis fungsional gen target lncRNA dengan menggunakan skrip BLAST2GO [39]. Tautan perintah lengkap ke domain publik adalah Jie-Li/README.md di main · dandan-li/Jie-Li (github.com).

Kategori ontologi gen (GO) dan analisis Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG).

Analisis bioinformatika untuk sekuensing RNA dilakukan menggunakan alat OmicStudio (//www.omicsudio.cn/tool). Analisis pengayaan fungsional Gene Ontology (GO) dan analisis pengayaan Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) [37-39] digunakan untuk menganalisis fungsi biologis dari gen target yang diprediksi. Analisis GO memperjelas proses biologis utama melalui tiga aspek: komposisi sel, fungsi molekuler, dan proses biologis (//www.geneontology.org/). Analisis ini pertama-tama menempatkan semua gen yang diekspresikan secara berbeda dan gen latar belakang dalam database GO. Setiap item dipetakan, jumlah gen pada setiap item dihitung, dan distribusi hipergeometri digunakan untuk melakukan pengujian hipotesis guna memperoleh nilai P dari hasil pengayaan. Semakin rendah nilai P maka hasil pengayaan semakin nyata. KEGG adalah sumber basis data yang menganalisis mRNA yang diekspresikan secara berbeda oleh biologi genetik untuk mengeksplorasi jalur penting yang terkait dengan gen target (https://www.genome.jp/kegg/). Hasilnya dinyatakan dengan nilai p; semakin rendah nilai p maka semakin signifikan hasil pengayaannya.

qRT–PCR

GAPDH digunakan sebagai kontrol endogen. Kemudian, tingkat ekspresi relatif dari gen yang tidak diketahui dihitung. Semua primer dirancang dan disintesis secara khusus untuk percobaan ini. Primer untuk GAPDH telah dikomersialkan. Spesifisitas primer Adra1a dan Csnk1a1 diidentifikasi oleh puncak tunggal kurva leleh.

Membangun jaringan koekspresi mRNA‑lncRNA

Transregulasi didasarkan pada penelitian, kemudian energi trans dihitung. Semakin kecil energi transnya, semakin tinggi kemungkinan pengikatannya. Kemudian dihitung juga koefisien korelasi mRNA-lncRNA. Jaringan mRNA-lncRNA dibangun dengan memilih koefisien korelasi Spearman yang melebihi 0.9. Jaringan koekspresi mRNA-lncRNA dibangun menggunakan perangkat lunak Cytoscape (v3.7.1).

Budaya sel

Sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus (MRPT-EpiCs) dikultur dalam medium sel epitel hewan (EpiCM-a, Kucing #4131) yang mengandung 2% serum janin sapi (FBS, Kucing #0010) dan Suplemen Pertumbuhan Sel Epitel-hewan (EpiCGS-a, Cat. #4182) tanpa antibiotik dalam inkubator yang dilembabkan pada suhu 37 derajat dan 5% CO2. Media kultur diganti setiap 2-3 hari. Sel-sel dalam fase pertumbuhan logaritmik disubkultur ketika pertumbuhannya mencapai 90%. Suspensi sel yang dicerna oleh trypsin dimasukkan ke dalam 6-pelat sumur dengan 2*104 -5*104 sel di setiap sumur. Sel-sel yang digunakan untuk transfeksi semuanya antara generasi 2 dan 5.

Konstruksi plasmid dan transfeksi sel

Plasmid ekspresi berlebih lncRNA Gm43360 dibuat oleh GeneChem (Shanghai, Cina). Tulang punggung plasmidnya adalah GV658, dan promotor CMV mendorong ekspresi lncRNA. Urutan nukleotida kloning disediakan dalam materi tambahan. Untuk knockdown lncRNA Gm43360, tiga lncRNA ENS HARUS00000197656-menargetkan siRNA (lncRNA Gm43360- siRNA1, 5'-CCUUCACUCCAGCUGGUAATT-3'; lncRNA Gm43360-siRNA2, 5'-CCCUGUCACUCA UGAAGUUTT-3'; dan lncRNA Gm43360-siRNA3, 5'-GGUCAAAUAACUCAAUGGGTT-3') dirancang dan disintesis di GenePharma (Shanghai, Cina). Menurut protokol pabrikan, sel ditransfeksi dengan 2500 ng plasmid atau 100 pmol siRNA dengan 6 μl Reagen Transfeksi Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen, USA) per sumur. Tingkat ekspresi RNA dan protein terdeteksi pada 48 jam setelah transfeksi, dan setiap percobaan diulang setidaknya tiga kali. PCR kuantitatif waktu nyata digunakan untuk memvalidasi efisiensi ekspresi berlebih dan knockdown lncRNA Gm43360.

Analisis Western blot

Sel yang dikultur dicuci dengan PBS dingin, 120 μl buffer RIPA (Heart, China) ditambahkan, dan protease inhibitor dan PMSF (Heart, China) ditambahkan selama 30 menit di atas es. Setelah mengumpulkan sel dalam tabung mikrosentrifugasi yang berbeda, konsentrasi protein diukur. Loading buffer ditambahkan ke setiap sampel dan kemudian direbus selama 7 menit. Tiga puluh mikrogram sampel dipisahkan oleh 12% SDS-PAGE (Beyotime, China) dan ditransfer secara elektrik ke membran PVDF (Thermo Fisher, USA). Kemudian membran diblok dengan susu 5%. Membran diinkubasi dengan antibodi primer spesifik: anti-p21 (1:1000, Abcam, ab109199), anti-p53 (1:1000, Proteintech, 10442-1-AP), dan anti-GAPDH (1:3000, Profintech , 60004-1-Ig) semalam pada suhu 4 derajat . Setelah dicuci dengan TBST, membran diinkubasi dengan antibodi sekunder selama 1 jam pada suhu kamar. Pita protein diamati menggunakan kit chemiluminescence (Millipore, USA). Ekspresi GAPDH digunakan untuk menormalkan kadar protein.

Uji proliferasi sel

Kapasitas proliferasi sel ditentukan oleh uji penghitungan sel-8 (CCK-8). Empat puluh delapan jam setelah transfeksi, 90 μl media baru dan 10 μl larutan CCK-8 ditambahkan ke setiap sumur (Beyotime, C0042). Sel-sel diinkubasi selama 1-4 jam pada suhu 37 derajat dalam 5% CO2 dan diukur pada 450 nm oleh pembaca lempeng mikro universal (Bio-Tek, USA).

Analisis aliran sitometri

Sel-sel dilapisi dalam 6-piringan sumur sehari sebelum transfeksi. Empat puluh delapan jam setelah transfeksi, sel-sel tersebut diujicobakan dan disentrifugasi pada 1000 rpm selama 5 menit. Kemudian, sel-sel difiksasi dalam etanol 70% pada suhu 4 derajat selama minimal 4 jam. Setelah sentrifugasi, larutan pewarnaan RNase A dan propidium iodida (PI) ditambahkan ke dalam sel, dan sel kemudian diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar dalam gelap. Sel-sel yang diwarnai dianalisis menggunakan ACEA NovoCyte (Biosciences, USA).

Analisis statistik

Data pengukuran dengan distribusi normal disajikan sebagai mean±SD. Perbedaan antara dua kelompok yang berbeda ditentukan dengan menggunakan uji-t Student dua sisi yang tidak berpasangan, dan nilai p < 0,05 dianggap signifikan secara statistik. Semua perhitungan dilakukan menggunakan GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, Inc., USA).

Referensi

1. Docherty MH, O'Sullivan ED, Bonventre JV, Ferenbach DA. Penuaan Seluler di Ginjal. J Am Soc Nefrol. 2019;30(5):726–36.

2. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Menghadapi tantangan global penuaan. Alam. 2018;561(7721):45–56.

3.Pan JX. LncRNA H19 mendorong aterosklerosis dengan mengatur jalur pensinyalan MAPK dan NF-kB. Eur Rev Med Farmakol Sci. 2017;21(2):322–8.

4. Wasson CW, Abignano G, Hermes H, Malaab M, Ross RL, Jimenez SA, Chang HY, Feghali-Bostwick CA, Del Galdo F. RNA HOTAIR non-coding yang panjang menggerakkan EZH2-aktivasi myofibroblast yang bergantung pada sistem sklerosis melalui aktivasi NOTCH yang bergantung pada miRNA 34a. Ann Rematik Dis. 2020;79(4):507–17.

5. Luo J, Wang K, Yeh S, Sun Y, Liang L, Xiao Y, Xu W, Niu Y, Cheng L, Maity SN, dkk. LncRNA-p21 mengubah diferensiasi neuroendokrin kanker prostat yang diinduksi antiandrogen enzalutamide melalui modulasi pensinyalan EZH2/ STAT3. Nat Komuni. 2019;10(1):2571.

6. Wang Y, Yang L, Chen T, Liu X, Guo Y, Zhu Q, Tong X, Yang W, Xu Q, Huang D, dkk. LncRNA MCM3AP-AS1 baru mendorong pertumbuhan karsinoma hepatoseluler dengan menargetkan sumbu miR-194-5p/FOXA1. Kanker Mol. 2019;18(1):28.

7. Wu YY, Kuo HC. Peran fungsional dan jaringan RNA non-coding dalam patogenesis penyakit neurodegeneratif. J Biomed Sains. 2020;27(1):49.

8. Li Z, Wang Z. Penuaan Ginjal dan Penyakit Terkait Penuaan. Adv Eksperimen Med Biol. 2018;1086:169–87.

9. Wang X, Vrtiska TJ, Avula RT, Walters LR, Chakkera HA, Kremers WK, Lerman LO, Rule AD. Usia, fungsi ginjal, dan faktor risiko berhubungan secara berbeda dengan volume kortikal dan meduler ginjal. Ginjal Int. 2014;85(3):677–85.

10. Lin Q, Hou S, Dai Y, Jiang N, Lin Y. LncRNA HOTAIR menargetkan miR-126-5p untuk mendorong perkembangan penyakit Parkinson melalui RAB3IP. Biol Kimia. 2019;400(9):1217–28.

Layanan Pendukung Wecistanche-Ekspor cistanche terbesar di Cina:

Surel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Telp:+86 15292862950

Belanja Untuk Detail Spesifikasi Lebih Lanjut:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-toko