Bagian Satu DsbA-L Berinteraksi Dengan VDAC1 dalam Apoptosis Sel Tubular yang dimediasi Mitokondria Dan Berkontribusi Terhadap Perkembangan Penyakit Ginjal Akut

Ringkasan

1. Latar Belakang

kami menunjukkan bahwa ikatan disulfida A oksidoreduktase-seperti protein (DsbA-L) terlibat dalam perkembangan fibrosis ginjal. Namun, fungsi DsbA-L yang tepat pada cedera ginjal akut (AKI), dan mekanisme yang terlibat, belum dijelaskan.

2. Metode

Kami mengilustrasikan DsbA-L yang berinteraksi dengan VDAC1 melalui co-IP (co-imunopresipitasi) in vitro dan Viv dan menemukan bagian interaksinya melalui percobaan mutasi. Temuan di atas diverifikasi oleh co-localization dari mereka. Selain itu, kami membuat dua model tikus PT-DsbA-L dan VDAC1 KO untuk memverifikasi fungsi DsbAL dan VDAC1 dalam model AKI yang diinduksi VAN, CL, P, dan I/R.

3. Temuan

Tikus PT-DsbA-L-KO menunjukkan perbaikan perkembangan AKI yang diinduksi I/R, VAN-, dan CLP melalui downregulasi VDAC1. Akhirnya, kami mengonfirmasi perubahan molekul sinyal ini dengan memeriksa sel HK-2 dan biopsi ginjal yang diambil dari pasien dengan AKI yang diinduksi iskemik atau nefritis interstisial akut (AIN). Secara mekanis, DsbA-L berinteraksi dengan asam amino 9-13 dan 22-27 dari VDAC1 dalam mitokondria sel BUMPT untuk menginduksi apoptosis sel ginjal dan cedera mitokondria.

4. Interpretasi

Pekerjaan ini menunjukkan bahwa DsbA-L, yang terletak di sel tubular proksimal, mendorong perkembangan AKI, dengan secara langsung meningkatkan level VDAC1.Judul Berjalan: Peran DsbA-L dalam AKI.

5. Pendanaan

Yayasan Ilmu Pengetahuan Alam Nasional Tiongkok, hibah dari Proyek Utama inovasi sains dan teknologi provinsi Hunan, Departemen Sains dan Teknologi Proyek Kerjasama dan Pertukaran Internasional Provinsi Hunan, proyek Biro Sains dan Teknologi Changsha, Yayasan Ilmu Pengetahuan Alam Provinsi Hunan, Fundamental Dana Penelitian untuk Universitas Pusat Universitas Pusat Selatan, Yayasan Inovasi Provinsi Hunan Untuk Pascasarjana Departemen Sains dan Teknologi Provinsi Hunan Cina.

Kata kunci

DsbA-L; VDAC_I; Bax; Cyt-c; AKI

Klik di sini untuk mendapatkan manfaat Cistanche dan membeli pil Cistanche

Perkenalan

Cedera ginjal akut (AKI), komplikasi klinis yang menghancurkan dengan tingkat morbiditas dan mortalitas yang tinggi, mempengaruhi jutaan pasien di seluruh dunia (1). AKI biasanya diinduksi oleh sepsis, agen nefrotoksik, dan cedera iskemia-reperfusi (IRI)(2). Sampai sekarang, mekanisme molekuler yang mendasari AKI belum sepenuhnya dijelaskan. Akibatnya, tidak ada strategi pengobatan efektif yang tersedia untuk AKI.

Cedera sel tubular telah diakui selama beberapa dekade sebagai pendorong penting AKI.3 Seiring dengan kemajuan penelitian, semakin banyak peneliti telah mengidentifikasi bahwa kerusakan mitokondria memainkan peran kunci dalam cedera sel tubular dan kerusakan awal ini disebabkan oleh akumulasi ROS, produksi sitokin, dan kematian sel (termasuk nekrosis dan apoptosis); secara kolektif, semua proses ini berkontribusi pada AKI.4-6 Meskipun semakin banyak penelitian yang berfokus pada mekanisme yang mendasari kerusakan mitokondria pada AKI,7- 12 mekanisme tepat yang bertanggung jawab atas cedera mitokondria belum diidentifikasi.

Ikatan disulfida Protein mirip oksidoreduktase (DsbAL) pertama kali diidentifikasi sebagai protein mitokondria dalam sel hati tikus.13 Studi sebelumnya telah menunjukkan bahwa DsbA-L mencegah diet atau nefropati diabetik (DN) yang menginduksi obesitas, peradangan, resistensi insulin, atau cedera ginjal.14-18 Menariknya, penelitian terbaru kami menemukan bahwa DsbA-L memediasi fibrosis ginjal yang diinduksi obstruksi ureter unilateral (UUO). Namun, peran dan mekanisme tubular DsbA-L pada AKI masih belum diketahui sepenuhnya.

Dalam penelitian ini, penghapusan tubular proksimal DsbA-L (PT-DsbA-L-KO) dalam model tikus menghasilkan pelemahan I / R yang terkenal, bersama dengan vankomisin (VAN) - dan ligasi cecal dan tusukan (CLP ) - AKI yang diinduksi. Secara konsisten, DsbA-L juga memediasi apoptosis yang diinduksi I / R, VAN-, dan LPS dalam sel epitel tubulus proksimal ginjal (BUMPT) ginjal tikus. Menariknya, kami menemukan bahwa DsbA-L berinteraksi dengan 9-13 dan 22 27 wilayah saluran anion 1 (VDAC1) yang bergantung tegangan, anggota kunci dari keluarga protein VDAC19 21; efek ini diamati pada sampel mitokondria in vivo dan in vitro dan sampel AKI manusia. Selain itu, kami menunjukkan bahwa PTVDAC1-KO juga memperbaiki apoptosis sel ginjal pada model AKI in vitro dan in vivo. Secara kolektif, kami menunjukkan bahwa DsbA-L berinteraksi dengan VDAC1 dalam apoptosis sel tubular yang dimediasi mitokondria dan karenanya menyebabkan perkembangan AKI.

Cistanche tubulosa

Bahan dan metode

1. Pernyataan etika

Studi ini disetujui oleh Dewan Peninjau Rumah Sakit Xiangya Kedua, Republik Rakyat Tiongkok (NO. 2018065) ​​dan studi ini merekrut 18 pasien. Semua peserta sebelum dimasukkan dalam penelitian direkrut dengan persetujuan tertulis. Semua percobaan hewan mematuhi prinsip panduan yang disetujui oleh Komite Etika Perawatan Hewan Rumah Sakit Xiangya Kedua, Republik Rakyat Tiongkok (NO. 2020310).

2. Antibodi dan reagen

Anti-COXIV (ab33985, RRID: AB_879754), VDAC1 (ab14734, RRID: AB_443084), and PGC-1a (ab191838, RRID: AB_2721267) antibodies were obtained from Abcam (Cambridge Science Park, Cambridge, UK). Anti-Caspase3 (9662, RRID: AB_331439) and cleavedcapase3 (9664, RRID: AB_2070042) antibodies were purchased from Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Anti-Bax (50599-2-Ig, RRID: AB_2061561), Cyt-c (10993-1-AP, RRID: AB_2090467), NRF1 (12482- 1-AP, RRID: AB_2282876), GAPDH (60004-1-Ig, RRID: AB_2107436), and b-tubulin (10094-1-AP, RRID: AB_2210695) antibodies were obtained from Proteintech (Rosemont, IL, USA). The anti-DsbA-L antibody was provided by Dr. Feng Liu(14). All secondary antibodies (MitoTracker Green FM and MitoTracker Red CMXRos) were obtained from Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). The calcium ionophore was purchased from Sigma-Aldrich (Shanghai, China). Antimycin A (>95 persen murni, ab141904) dan Kit Fraksinasi Mitokondria/Sitosol (ab65320) dibeli dari Abcam (Cambridge Science Park, Cambridge, UK). Urutan target untuk mouse DsbAL telah dijelaskan sebelumnya.22

3. Pembuatan model AKI dengan reperfusi iskemik, CLP, dan VAN

Tikus jantan C57BL/6J (RRID: MGI:5657312) berusia 8-10 minggu dibeli dari Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (flox/flox) tikus (disediakan oleh Dr. Feng Liu) atau tikus VDAC1 (flox/flox) (diperoleh dari organisme model Shanghai) dengan tikus PEPCK-Cre (disediakan oleh Dr. Volker Haase (Universitas Pennsylvania, Philadelphia, PA ) seperti yang dijelaskan sebelumnya.22,23 Tikus jantan (8-10 usia minggu) menjadi sasaran iskemia, CLP, dan AKI nefrotoksik VAN, seperti yang dijelaskan sebelumnya.23 27 Untuk AKI iskemik, arteri ginjal bilateral terus dipotong untuk 28 menit diikuti dengan reperfusi selama 24 jam atau 48 jam.Suhu tubuh tikus dipertahankan sekitar 37 derajat.Untuk AKI yang diinduksi CLP, sekum diikat erat pada posisi 1,5 cm dari ujung.Ini diikuti oleh tusukan selama 18 jam Untuk cedera VAN, tikus diinjeksi secara intraperitoneal dengan dosis tunggal VAN dengan dosis 600 mg/kg selama 7 hari berturut-turut, seperti yang dijelaskan sebelumnya.28,29 Selain itu, tikus C57BL/6 disuntik dengan Plasmid DsbA-L atau VDAC1, atau VDAC1 siRNA (dengan dosis 15 mg/kg) melalui vena ekor dua kali seminggu22; saline digunakan sebagai injeksi kontrol. Untuk setiap studi, kami menganalisis sampel bersama untuk menghindari bias, berdasarkan studi sebelumnya, dan menggunakan perangkat lunak PASS untuk menentukan ukuran sampel(n=6). Kami mengecualikan sampel yang mati atau gagal dalam pembentukan model sebelum titik akhir. Tikus percobaan dikelompokkan berdasarkan tabel angka acak. Penyelidik tidak dibutakan selama percobaan tetapi dibutakan selama alokasi, pengumpulan sampel, dan analisis data. Semua eksperimen hewan mematuhi prinsip panduan yang disetujui oleh Komite Etika Perawatan Hewan Rumah Sakit Xiangya Kedua, Republik Rakyat Tiongkok. Tikus ditempatkan di lingkungan 12-h terang/gelap dengan akses gratis ke makanan dan air hewan pengerat standar.

Herba Cistanche

4. Kultur sel dan model iskemia-reperfusi

Sel BUMPT yang diperoleh dari Dr. Wilfred Lieberthal (Sekolah Kedokteran Universitas Boston) atau sel HK{{0}} yang diperoleh dari Shanghai Zhongqiaoxinzhou Biotech dikultur dengan DMEM (Gibco, 11965092) ditambahkan 10 persen FBS (Gibco,10100147) dan 1 persen Penicillin-Streptomycin (Gibco, 15140163) pada 37 derajat dalam 5 persen CO2. Untuk model sel iskemik, sel BUMPT diobati dengan 10mM antimisin A (penghambat kompleks mitokondria III, Abcam, ab141904) dan 1,5mM kalsium ionofor (Sigma, A23187) dalam Larutan Garam Seimbang Hanks (Hyclone, SH30030.02) untuk 2 jam.30 Kami kemudian mengganti HBSS dengan media DMEM selama 0, 2, dan 4 jam untuk tahap reperfusi. Apoptosis sel dideteksi dengan morfologi dan immunoblotting untuk indikator apoptosis, termasuk cleaved-caspase3, Bax, dan Cyt-c. Beberapa plasmid dibuat dan ditransfeksi menjadi sel dengan lipofeksi: DsbA-L, HA-VDAC1-1-25, HA-VDAC1-26-366, HA-VDAC1-panjang penuh, HA-VDAC{{33 }}D9-13,22-27, HAVDAC1-D39-45,55-57, dan HA- VDAC1-D9-13, 22-27 D39-45,55-57, dan siRNA untuk DsbA-L dan VDAC1. Enam hingga delapan jam setelah transfeksi, media kultur diganti dengan DMEM. Urutan DsbA-L siRNA dan VDAC1 siRNA untuk tikus masing-masing adalah 50 - GCAUGGAGCAACCAGAUTT -30 dan 50 - CCAGAGCAACTTCGCAGTT -30; urutan untuk siRNA NC yang diacak adalah 50 -UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-30. Urutan DsbA-L siRNA dan VDAC1 siRNA untuk manusia masing-masing adalah 50 - UCAUUUGCCAUGUAUAGUCCU-30 dan 50 -UAUUAAGCCAAAUCCAUAGCC -30; urutan untuk siRNA NC yang diacak adalah 50 -AACCACUCAACUUUUUCC CAA -30. Model IR kemudian diinduksi ketika kepadatan sel mencapai 90 persen.

5. Alur sitometri

Flow cytometry dioperasikan sesuai dengan instruksi Kit Deteksi Apoptosis FITC Annexin V (BD, 556547). BUMPT atau HK-2 Sel dengan perlakuan berbeda dikumpulkan menggunakan trypsin tanpa EDTA dan dicuci tiga kali dengan PBS diikuti oleh FITC selama 15 menit dan PI selama 5 menit pada suhu kamar, dan terakhir diperiksa dengan flow cytometry.

6. Pasien AKI dan pengambilan sampel

Protokol tersebut telah disetujui oleh Dewan Peninjau Rumah Sakit Xiangya Kedua, Republik Rakyat Tiongkok. Penelitian ini merekrut 18 pasien, termasuk 12 laki-laki dan 6 perempuan. Prinsip perekrutan didasarkan pada biopsi ginjal. Informasi pasien dilengkapi dalam Tabel 1. Spesimen biopsi ginjal diperoleh dari pasien yang hidup dengan penyakit perubahan minimal (MCD) (n=6) dan AKI yang diinduksi iskemik atau nefritis interstisial akut (AIN) (n{{6} }). Kami menyatakan bahwa semua penelitian mematuhi semua peraturan etika yang relevan untuk penelitian dengan partisipan manusia dan dilakukan sesuai dengan prinsip-prinsip Deklarasi Helsinki dan bahwa penelitian ini sesuai dengan panduan Kementerian Sains dan Teknologi untuk Peninjauan dan Persetujuan Sumber Daya Genetik Manusia. Kriteria inklusi dan eksklusi MCD dijelaskan dalam penelitian kami sebelumnya.23 Untuk IR: Kriteria inklusi:1 Biopsi untuk pasien iskemia-reperfusi,2 Usia kurang dari 75 tahun; Kriteria eksklusi1: mengecualikan pasien dengan tumor yang ditemukan dalam pemeriksaan medis pasca operasi,2 mengecualikan pasien dengan riwayat diabetes, asam urat, hipertensi, tuberkulosis saluran kemih atau infeksi. Untuk AIN: Kriteria inklusi1: Secara klinis didiagnosis sebagai nefritis interstisial akut2 Pasien AIN dikonfirmasi dengan biopsi,3 Usia kurang dari 75 tahun; Kriteria eksklusi1: Singkirkan pasien dengan kreatinin darah abnormal sebelum masuk,2 singkirkan pasien dengan riwayat diabetes, asam urat, hipertensi, tuberkulosis saluran kemih, atau infeksi. Spesimen ini kemudian digunakan untuk pewarnaan HE, TUNEL, dan imunohistokimia serta imunopresipitasi (IP) dan imunoblotting.

7. Imunopresipitasi

Sitoplasma dan mitokondria dari sel BUMPT dan jaringan ginjal dari tikus dan pasien AKI dipisahkan menggunakan Kit Fraksinasi Mitokondria/Sitosol (Abcam, ab65320); kit itu digunakan sesuai instruksi pabriknya. Antibodi (DsbA-L, VDAC1, HA, atau IgG) terikat pada manik-manik magnetik. Selanjutnya, kami menambahkan lisat mitokondria/sitoplasma dan menginkubasinya selama tiga jam. Selanjutnya, campuran dielusi dan diselidiki untuk ekspresi penanda terkait dengan immunoblotting.

8. PCR kuantitatif relatif (qPCR)

RNA diekstraksi dari sel BUMPT atau jaringan ginjal dengan reagen Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). RNA kemudian ditranskripsi balik menjadi cDNA untai pertama menggunakan kit Reagen Prime Script RT dan gDNA Eraser (TaKaRa, RR037A), seperti yang dijelaskan sebelumnya.31'34 Selanjutnya, kami menggunakan cDNA sebagai template dengan TB green (TaKaRa, RR820A) dan Light cycler 96 (Roche) dengan pasangan primer berikut: DsbA-L: 5 - AAATATGGGGCCTT TGGGCT-3'(maju) dan 5'- TAGCAACTCCAAGCGGTCA G-3'(balik); dan GAPDH: 5'-GGTCTCCTCTGACTTCACA-3'(maju) dan 5'-GTGAGGGTC TCTCTCTTCCT-3'(balik); PGC- 1a: 5'-ATGTGTCGCCTTCTTGCTCTTCC-3 (maju) dan 5'-CTCCCGCTTCTCGTGCTCTTTG-3'(balik); NrF1:5'-TCTGCTGTGGCTGATGGAGA GG-3'(maju) dan NrF1:5'-GATGCTTGCGTCGTCTGGATGG-3 (mundur);

9. Deteksi BUN dan kreatinin

Deteksi BUN dan kreatinin dilakukan sesuai dengan protokol BUN (Urea Nitrogen Content Assay Kit Beijing Boxbio Science & Technology Co, Ltd.) dan creatinine Assay kit (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China).

10. Pewarnaan HE, pewarnaan TUNEL, imunokimia, imunofluoresensi, dan imunobloting

Jaringan ginjal tertanam dalam parafin dan kemudian dipotong menjadi beberapa bagian untuk berbagai jenis pewarnaan, seperti yang dijelaskan sebelumnya.26,35 Histologi dinilai dengan pewarnaan hematoxylin dan eosin. Kriteria yang digunakan untuk menilai cedera tubulus ginjal telah dijelaskan sebelumnya. Pewarnaan TUNEL digunakan untuk mengevaluasi apoptosis pada sel ginjal. Proporsi ( persen ) sel TUNEL-positif dalam 10-20 bidang mikroskopis per bagian jaringan digunakan sebagai indikator kuantitatif apoptosis.26 Untuk pewarnaan imunokimia, bagian jaringan diinkubasi semalaman pada suhu 4 derajat C dengan antibodi primer spesifik ( DsbA-L 1:200 atau VDAC1 1:100). Pagi berikutnya, bagian diinkubasi dengan antibodi sekunder selama 30 menit pada suhu 37 derajat dan kemudian direaksikan dengan DAB selama 5-10 menit. Untuk pewarnaan imunofluoresensi, bagian diinkubasi dengan antibodi primer spesifik (DsbA-L 1:200, VDAC1 1:100) semalaman pada suhu 4 derajat diikuti dengan antibodi fluoresen sekunder selama 1 jam pada suhu 37 derajat dalam gelap. DAPI kemudian ditambahkan selama 3-5 menit dan bagian diamati dengan mikroskop fluoresen. Pewarnaan mitokondria dilakukan dengan protokol standar. Protein lisat dari sel BUMPT atau ginjal dipanen dan kemudian disentrifugasi untuk mengumpulkan supernatan yang mengandung protein. Supernatan menjadi sasaran SDS-PAGE dan kemudian dipindahkan ke membran PVDF. Membran kemudian diinkubasi dengan antibodi primer semalaman pada suhu 4 derajat diikuti dengan antibodi sekunder selama 1 jam pada suhu kamar. Konsentrasi antiCOXIV, VDAC1, PGC-1a, Bax, Cyt-c, NRF1, GAPDH, dan b-tubulin adalah 1:1000. Konsentrasi anti-Caspase3 dan cleaved-capase3 adalah 1:2000.

Suplemen cistanche

11. Statistik

Semua data disajikan sebagai sarana § SD. Uji-t Student dua sisi digunakan untuk perbandingan dua kelompok. Oneway ANOVA diikuti oleh analisis post hoc Tukey digunakan untuk beberapa perbandingan. Uji Kruskal Walls digunakan untuk data dengan distribusi tidak normal. Perangkat lunak Graph Pad 8.0 digunakan untuk menganalisis data dan P<0.05 was considered statistically significant.

12. Peran sumber pendanaan

Para penyandang dana tidak terlibat dalam desain studi, pengumpulan data, analisis, interpretasi, atau penulisan naskah.

Referensi

1 Zuk A, Bonventre JV. Cedera ginjal akut. Annu Rev Med. 2016;67:293–307.

2 Zhou D, Tan RJ, Lin L, Zhou L, Liu Y. Aktivasi reseptor faktor pertumbuhan hepatosit, c-met, di tubulus ginjal diperlukan untuk renoproteksi setelah cedera ginjal akut. Ginjal Int. 2013;84(3):509– 520.

3 O'Neal JB, Shaw AD, Billings FT. Cedera ginjal akut setelah operasi jantung: pemahaman saat ini dan arah masa depan. Perawatan Kritis. 2016;20(1):187.

4 Ishimoto Y, Inagi R. Mitokondria: target terapi pada cedera ginjal akut. Transplantasi Nephrol Dial. 2016;31(7):1062–1069. publikasi resmi Asosiasi Dialisis dan Transplantasi Eropa - Asosiasi Ginjal Eropa.

5 Linkermann A, Chen G, Dong G, Kunzendorf U, Krautwald S, Dong Z. Kematian sel yang diatur dalam AKI. J Am Soc Nephrol. 2014;25(12):2689–2701.

6 Agarwal A, Dong Z, Harris R, dkk. Mekanisme seluler dan molekuler dari AKI. J Am Soc Nephrol. 2016;27(5):1288–1299.

7 Morigi M, Perico L, Rota C, dkk. Peningkatan dinamis mitokondria yang bergantung pada sirtuin 3-melindungi dari cedera ginjal akut. Investigasi J Clinic. 2015;125(2):715–726.

8 Yu X, Xu M, Meng X, dkk. PXR reseptor nuklir menargetkan AKR1B7 untuk melindungi metabolisme mitokondria dan fungsi ginjal pada AKI. Sci Transl Med. 2020;12(543):7591–7605.

9 Stoppe C, Averdunk L, Goetzenich A, dkk. Peran protektif faktor penghambat migrasi makrofag pada cedera ginjal akut setelah operasi jantung. Sci Transl Med. 2018;10(441):4886–4898.

10 Wei Q, Sun H, Song S, dkk. MicroRNA-668 menekan MTP18 untuk mempertahankan dinamika mitokondria pada cedera ginjal akut iskemik. Investigasi J Clinic. 2018;128(12):5448–5464.

11 Tran M, Tam D, Bardia A, dkk. PGC-1alpha mendorong pemulihan setelah cedera ginjal akut selama peradangan sistemik pada tikus. Investigasi J Clinic. 2011;121(10):4003–4014.

12 Lan R, Geng H, Singha PK, dkk. Patologi mitokondria dan pergeseran glikolitik selama atrofi tubulus proksimal setelah AKI iskemik. J Am Soc Nephrol. 2016;27(11):3356–3367.

13 Harris JM, Meyer DJ, Coles B, Ketterer B. Sebuah novel glutathione transferase (13-13) yang diisolasi dari matriks mitokondria hati tikus memiliki kemiripan struktural dengan enzim kelas theta. Biochem J. 1991;278(Pt 1):137–141.

14 Bai J, Cervantes C, Liu J, dkk. DsbA-L mencegah peradangan yang diinduksi obesitas dan resistensi insulin dengan menekan jalur cGAS-cGAMP-STING yang diaktifkan oleh pelepasan mtDNA. Proc Natl Acad Sci USA. 2017;114(46):12196–12201.

15 Chen H, Bai J, Dong F, dkk. DsbA-L hati melindungi tikus dari hepatosteatosis akibat diet dan resistensi insulin. FASEB J. 2017;31(6):2314–2326.

16 Liu M, Xiang R, Wilk SA, dkk. Ekspresi berlebihan DsbA-L yang spesifik lemak mendorong multimerisasi adiponektin dan melindungi tikus dari obesitas yang diinduksi diet dan resistensi insulin. Diabetes. 2012;61(11):2776–2786.

17 Chen X, Han Y, Gao P, dkk. Ikatan disulfida Protein mirip oksidoreduktase melindungi dari deposisi lemak ektopik dan kerusakan ginjal terkait lipid pada nefropati diabetik. Ginjal Int. 2019;95(4):880–895.

18 Dai XG, Xu W, Li T, dkk. Keterlibatan putatif kinase yang diinduksi fosfatase dan tensin homolog 1-mitofag yang dimediasi-parkin pada cedera ginjal akut septik. Chin Med J (Inggris). 2019;132(19):2340–2347.

19 Shoshan-Barmatz V, Nahon-Crystal E, Shteinfer-Kuzmine A, Gupta R. VDAC1, disfungsi mitokondria, dan penyakit Alzheimer. Pharmacol Res. 2018;131:87–101.

20 Geisler S, Holmstrom KM, Skujat D, dkk. Mitofag yang dimediasi PINK1/Parkin bergantung pada VDAC1 dan p62/SQSTM1. Bio Sel Nat. 2010;12(2):119–131.

21 Lipper CH, Stofleth JT, Bai F, dkk. Gerbang VDAC yang bergantung pada redoks oleh mitoNEET. Proc Natl Acad Sci USA. 2019;116(40):19924–19929.

22 Li X, Pan J, Li H, dkk. DsbA-L memediasi fibrosis tubulointerstitial ginjal pada tikus UUO. Nat Komun. 2020;11(1):4467.

23 Zhang D, Liu Y, Wei Q, dkk. Tubular p53 mengatur banyak gen untuk memediasi AKI. J Am Soc Nephrol. 2014;25(10):2278–2289.

24 Xu X, Wang J, Yang R, Dong Z, Zhang D. Penghambatan genetik atau farmakologis dari EGFR memperbaiki AKI yang diinduksi sepsis. Oncotarget. 2017;8(53):91577–91592.

25 Wang J, Li H, Qiu S, Dong Z, Xiang X, Zhang D. MBD2 meningkatkan regulasi miR-301a-5p untuk menginduksi apoptosis sel ginjal selama AKI yang diinduksi vankomisin. Kematian Sel Dis. 2017;8(10):e3120.

26 Xu L, Li X, Zhang F, Wu L, Dong Z, Zhang D. EGFR mendorong perkembangan AKI ke CKD melalui ekspresi berlebihan HIPK2. Theranostika. 2019;9(9):2712–2726.

27 Zhang P, Yi L, Qu S, dkk. Biomarker TCONS_00016233 menggerakkan AKI septik dengan menargetkan sumbu pensinyalan miR-22-3p/AIFM1. Asam Nukleat Mol Ter. 2020;19:1027–1042.

28 Chen J, Wang J, Li H, Wang S, Xiang X, Zhang D. p53 mengaktifkan miR-192-5p untuk memediasi AKI yang diinduksi vankomisin. Sains Rep. 2016;6:38868.

29 Xu X, Pan J, Li H, dkk. Atg7 memediasi apoptosis sel tubulus ginjal dalam nefrotoksisitas vankomisin melalui aktivasi PKC-delta. FASEB J. 2019;33(3):4513–4524.

30 Lee HT, Emala CW. Prekondisi dan adenosin melindungi sel tubulus proksimal manusia dalam model cedera iskemik in vitro. J Am Soc Nephrol. 2002;13(11):2753–2761.

31 Ge Y, Wang J, Wu D, dkk. lncRNA NR_038323 Menekan fibrosis ginjal pada nefropati diabetik dengan menargetkan sumbu miR-324-3p/ DUSP1. Asam Nukleat Mol Ter. 2019;17:741–753.

32 Wang J, Pan J, Li H, dkk. lncRNA ZEB1-AS1 ditekan oleh p53 untuk fibrosis ginjal pada nefropati diabetik. Asam Nukleat Mol Ter. 2018;12:741–750.

33 Song YX, Sun JX, Zhao JH, dkk. RNA non-coding berpartisipasi dalam jaringan pengaturan CLDN4 melalui penghindaran miRNA yang dimediasi ceRNA. Nat Komun. 2017;8(1):289.

34 Zhu M, Liu J, Xiao J, dkk. Lnc-mg adalah RNA non-coding panjang yang mempromosikan myogenesis. Nat Komun. 2017;8:14718.

35 Kishi S, Brooks CR, Taguchi K, dkk. ATR tubulus proksimal mengatur perbaikan DNA untuk mencegah respons cedera ginjal maladaptif. Investigasi J Clinic. 2019;129(11):4797–4816.

Xiaozhou Li,a,b,1 Jian Pan,a,b,1 Huiling Li,c Guangdi Li,g Bohao Liu,a,b Xianming Tang,a,b Xiangfeng Liu,f Zhibiao He,a,b Zhenyu Peng,a ,b Hongliang Zhang,a,b Luxiang Wang,a,b Yijian Li,d Xudong Xiang,a,b Xiangping Chai,a,b Yunchang Yuan,e Peilin Zheng,h dan Dongshan Zhang a,b *

Departemen Pengobatan Darurat, Republik Rakyat Tiongkok

b Institut Pengobatan Darurat dan Penyakit Sulit, Rumah Sakit Xiangya Kedua, Universitas Central South, Changsha, Hunan 410011, Republik Rakyat Tiongkok

c Departemen Oftalmologi, Republik Rakyat Tiongkok

d Departemen Bedah Saluran Kemih, Republik Rakyat Tiongkok

e Departemen Bedah Dada, Republik Rakyat Tiongkok

f Departemen Bedah Umum, Rumah Sakit Xiangya Kedua, Republik Rakyat Tiongkok

g Departemen Kesehatan Masyarakat, Central South University, Changsha, Hunan, Republik Rakyat Tiongkok

h Departemen Endokrinologi, Rumah Sakit Rakyat Shenzhen, Sekolah Tinggi Medis Klinis Kedua Universitas Jinan, Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Sains dan Teknologi Selatan, Shenzhen, Republik Rakyat Tiongkok

1 Xiaozhou Li dan Jian Pan memberikan kontribusi yang sama untuk penelitian ini