Bagian :Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides Menginduksi Apoptosis Sel Karsinoma Hepatoseluler Oleh Jalur Tergantung Mitokondria Dan MAPK Dan Meningkatkan Efek Antitumor Melalui Kombinasi Dengan Cisplatin

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

Kami selanjutnya mengevaluasi efek imunostimulasi CTPG (Cistanche Tubulosa Fenilethanoid Glikosida) pada tikus. Setelah injeksi ip, injeksi sc dan pemberian ig CTPG (200 dan 400mg/kg), tidak ada perubahan signifikan pada keadaan mencit dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi perlakuan. Berat badan tikus juga tidak memiliki perbedaan yang signifikan antara kelompok yang diobati dengan CTPG dan kelompok yang tidak diberi perlakuan (Gambar 7A). Indeks jantung, hati, limpa, paru-paru, ginjal, dan timus tikus serupa di antara semua kelompok kecuali indeks limpa tikus dalam kelompok injeksi ip CTPG 400mg/kg (Tabel 1). Hasilnya menunjukkan bahwa dosis CTPG yang dipilih tidak memiliki efek samping pada tikus. Limpa adalah organ pertahanan kekebalan yang penting pada mamalia, dan perkembangannya secara langsung mempengaruhi fungsi kekebalan individu dan kemampuan untuk melawan penyakit. Indeks organ imun mencerminkan perkembangan dan fungsi imun dari organ imun. Limpa mengandung berbagai sel kekebalan, termasuk sel T, sel B, sel pembunuh alami (sel NK), makrofag, sel dendritik (DC), dan lain-lain, yang memainkan peran penting dalam sistem kekebalan tubuh.30 Telah dilaporkan bahwa polisakarida dapat meningkatkan jumlah sel imun untuk meningkatkan daya tahan tubuhkekebalan0,31 Karena injeksi ip CTPG secara signifikan meningkatkan indeks limpa (meningkat 0.55 kali), kami selanjutnya menganalisis jumlah berbagai sel imun di limpa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa injeksi ip CTPG secara signifikan meningkatkan jumlah sel T (sel CD3 plus CD19−) (meningkat 0.49 kali), sel B (sel CD3−CD19 plus) (meningkat 0 0,49 kali), dan sel NK (CD3−CD19−CD49b plus sel) (meningkat 1,63 kali) dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi perlakuan. Sel CD4 plus dan CD8 plus, sebagai subtipe utama sel T, memainkan peran penting dalam respon imun seluler spesifik antigen.32 Oleh karena itu, kami menganalisis lebih lanjut jumlah dan status aktivasi sel CD4 plus dan CD8 plus di limpa. Hasilnya menunjukkan bahwa injeksi ip CTPG tidak hanya secara signifikan meningkatkan jumlah sel T CD4 plus dan CD8 plus (masing-masing meningkat 0.55 dan 0.34 kali) tetapi juga meningkatkan status aktivasi CD4 plus sel T (CD4 plus CD44 plus sel) (meningkat 0,84 kali) (Gambar 7B), hasil ini menunjukkan bahwa CTPG memiliki fungsi peningkatan kekebalan.

Kombinasi CTPG(Cistanche Tubulosa Fenilethanoid Glikosida) dan Cisplatin Menunjukkan Efek Antitumor yang Kuat pada Model Tikus Tumor H22

Secara umum diterima bahwa kemoterapi atau radioterapi dapat menyebabkan prognosis yang buruk dan menyebabkan banyak efek samping, yang mungkin disebabkan oleh penekanan sistem kekebalan dan kerusakan pada jaringan dan organ normal. Polisakarida dari TCM memiliki efek peningkatan kekebalan dan meringankan kerusakan organ kekebalan dan sel kekebalan yang disebabkan oleh kemoterapi, misalnya polisakarida kitosan33 dan Lycium barbarum.34 Hasil di atas menunjukkan bahwa CTPG(Cistanche Tubulosa Fenilethanoid Glikosida) dapat memperbaiki efek samping cisplatin pada sistem kekebalan tubuh. Oleh karena itu, efek antitumor CTPG yang dikombinasikan dengan cisplatin dievaluasi dalam model tikus tumor H22. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 8A, CTPG saja, cisplatin saja, dan kombinasi CTPG dan cisplatin (CTPG plus cisplatin) secara signifikan menekan pertumbuhan tumor H22 dibandingkan dengan kelompok kontrol. CTPG plus cisplatin menunjukkan efek penghambatan yang lebih kuat daripada CTPG dan cisplatin saja. Pada hari ke-20, volume tumor pada kelompok kontrol, cisplatin saja, CTPG saja, dan CTPG plus cis platin masing-masing sekitar 1707,8, 722,5, 1033,8, dan 367,5mm3. Pada hari yang sama, tumor dikumpulkan untuk observasi visual (Gambar 8B) dan perbandingan berat badan (Gambar 8C). CTPG plus cisplatin menunjukkan efek terapeutik yang lebih baik pada model tikus tumor H22 daripada CTPG atau cisplatin saja. Berat tumor pada kelompok CTPG plus cisplatin lebih rendah dari pada kelompok lain. Hasil ini menunjukkan bahwa aktivitas anti-tumor CTPG dan cisplatin menghasilkan efek sinergis.

Berat badan tikus diukur untuk mencerminkan status kesehatan tikus. Berat badan sangat menurun setelah pengobatan cisplatin, menunjukkan toksisitas sistemik parah yang diinduksi cisplatin.35 Sebagai perbandingan, CTPG dikombinasikan dengan cisplatin secara signifikan memperbaiki penurunan berat badan yang disebabkan oleh cisplatin, sedangkan CTPG(Cistanche Tubulosa Fenilethanoid Glikosida) saja tidak berpengaruh signifikan terhadap berat badan tikus (Gambar 8D). Organ termasuk limpa, jantung, hati, paru-paru, ginjal, dan timus juga diisolasi untuk menghitung indeks organ. Dibandingkan dengan kelompok yang tidak diobati, indeks limpa secara signifikan menurun dan meningkat dengan cisplatin dan CTPG, masing-masing. CTPG plus cisplatin memulihkan indeks limpa dibandingkan dengan cisplatin saja. Indeks organ lain menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan antara semua kelompok (Tabel 2). CTPG(Cistanche Tubulosa Fenilethanoid Glikosida) Dikombinasikan dengan Cisplatin MeningkatkanKekebalandari Tikus Tumor.

Hasil di atas menunjukkan bahwa CTPG(Cistanche Tubulosa Fenilethanoid Glikosida) meningkatkan kekebalantikus dan menghambat apoptosis splenosit yang diinduksi oleh cisplatin. Kami menyelidiki lebih lanjut apakah efek antitumor CTPG plus cisplatin berkorelasi dengan peningkatan kekebalan. Dalam proses terjadinya dan perkembangan tumor, sistem kekebalan tubuh memainkan fungsi pengawasan kekebalan yang penting, dan kekebalan seluler yang dimediasi sel T memainkan peran kunci. Sel CD4 plus T memiliki fungsi membantu imunitas seluler dan respon imun humoral, dan sel CD8 plus T merupakan sel efektor utama dari respon imun, yang secara spesifik dapat membunuh sel target dan berperan penting dalam imunitas tumor dan imunitas antivirus.32 Limpa tikus pembawa tumor dikumpulkan untuk mendeteksi jumlah sel T dan sel B dengan flow cytometry. Frekuensi dan jumlah sel T termasuk CD4 plus dan CD8 plus sel T pada kelompok CTPG plus cisplatin secara signifikan lebih tinggi daripada kelompok kontrol (meningkat 0.55 dan 0.7 kali, masing-masing) dan kelompok cisplatin (masing-masing meningkat 0,92 dan 1,16 kali) (Gambar 9A dan B). Dibandingkan dengan kelompok kontrol, CTPG saja juga sebagian meningkatkan jumlah sel T CD4 plus dan CD8 plus meskipun tidak ada perbedaan yang signifikan. Frekuensi dan jumlah sel B tidak memiliki perbedaan yang signifikan di antara semua kelompok.

Sel penekan turunan myeloid (MDSCs) dan sel T regulator (Tregs) berkembang di tumor dan menghambat respons imun antitumor; mereka menekan aktivasi dan perluasan sel CD4 plus T, fungsi sel T efektor, aktivasi dan/atau proliferasi, dan pembentukan sitokin sel CD4 plus dan CD8 plus T, proliferasi sel B dan produksi imunoglobulin dan pergantian kelas, fungsi sitotoksik NK dan sel T pembunuh alami (NKT), dan fungsi dan pematangan DC.36-38 Frekuensi dan jumlah MDSC (CD11b plus Gr-1 plus ), makrofag (CD11b plus Gr -1−), dan Treg (Treg alami: CD4 plus CD25 plus Foxp3 plus ; Treg yang diinduksi: CD4 plus CD25−Foxp3 plus ) di limpa tikus tumor dianalisis dengan flow cytometry. Dibandingkan dengan kelompok kontrol, frekuensi dan jumlah MDSC menurun secara signifikan setelah injeksi dengan cisplatin saja (menurun 1,56 kali) atau dalam kombinasi dengan CTPG(Cistanche Tubulosa Fenilethanoid Glikosida) (menurun 0,62 kali). Jumlah makrofag CD11b plus Gr-1− juga menurun secara signifikan meskipun tidak ada perubahan signifikan dalam frekuensinya (Gambar 9C). Selain itu, CTPG(Cistanche Tubulosa Fenilethanoid Glikosida) sendiri dan pengobatan CTPG plus cisplatin secara signifikan menurunkan frekuensi Treg yang diinduksi (berturut-turut menurun {{0}},33 dan 0,37 kali) (Gambar 9D). Hasil ini menunjukkan bahwa efek antitumor CTPG plus cisplatin mungkin berkorelasi dengan peningkatan kekebalan yang ditandai dengan peningkatan jumlah sel T dan penurunan jumlah MDSC dan Treg.