Bagian 1: Senyawa Bioaktif Dari Ephedra Fragilis: Optimalisasi Ekstraksi, Karakterisasi Kimia, Aktivitas Antioksidan Dan AntiGlikasi

Untuk informasi lebih lanjut. kontak{0}}

Abstrak: Metodologi permukaan respons (RSM) dengan desain Box-Behnken (BBD) digunakan untuk mengoptimalkan ekstraksi senyawa bioaktif dari Ephedra fragilis. Hasilnya menunjukkan bahwa ekstraksi dengan etanol 61,93 persen pada 44,43 derajat selama 15,84 jam adalah solusi terbaik untuk kombinasi variabel ini. Ekstrak etanol mentah (CEE) yang diperoleh pada kondisi ekstraksi optimum difraksinasi secara berurutan dengan pelarut yang polaritasnya meningkat. Kandungan total phenolic (TP) dan total flavonoid (TF) sertaantioksidandan aktivitas antiglikasi diukur. Profil sidik jari fitokimia fraksi dengan aktivitas tertinggi dikarakterisasi dengan menggunakan RP-HPLC. Fraksi etil asetat (EAF) memiliki kandungan TP dan TF tertinggi dan menunjukkan aktivitas antioksidan dan antiglikasi yang paling kuat. Hasil analisis korelasi Pearson menunjukkan bahwa kandungan TP dan TF berkorelasi sangat nyata dengan aktivitas antioksidan dan antiglikasi. Secara total, enam senyawa diidentifikasi dalam EAF E. fragilis, termasuk empat asam fenolik dan dua flavonoid. Selain itu, analisis docking molekuler juga menunjukkan kemungkinan hubungan antara senyawa bioaktif yang teridentifikasi dan mekanisme kerjanya. Hasil kami menunjukkan bukti baru pada aktivitas antioksidan dan antiglikasi senyawa bioaktif E. fragilis yang dapat diterapkan dalam pengobatan dan pencegahan penuaan dan komplikasi terkait glikasi.

Kata kunci: Ephedra fragilis; metodologi permukaan respon; Desain kotak-Behnken; senyawa bioaktif; RP-HPLC; aktivitas antioksidan dan antiglikasi

Klik di sini untuk mempelajari lebih banyak produk

1. Perkenalan

Paparan terus menerus terhadap agresor dari berbagai sumber dapat menyebabkan peningkatanRadikal bebasproduksi dalam tubuh manusia, melebihi kapasitasnya untuk mengaturnya, dan, dari waktu ke waktu, berkontribusi pada pengembangan beberapa penyakit terkait stres oksidatif termasuk penuaan dan diabetes[1]. Karenanya,antioksidanSuplementasi dapat membantu mempertahankan sistem biologis yang optimal dengan menghilangkan konsentrasi radikal bebas yang berlebihan [2]. Telah ditunjukkan bahwa radikal bebas berpartisipasi dalam proses glikasi. Glikasi, reaksi nonenzimatik spontan antara gugus amino yang tersedia dari residu asam amino dalam protein dan gula pereduksi, terjadi pada tingkat yang lebih tinggi di bawah penuaan dan hiperglikemia, menghasilkan produksi dan akumulasi produk akhir glikasi lanjut (AGEs) 3]. Selain mengganggu protein dan mengubah fungsinya, AGE juga dapat

terlibat dengan reseptor untuk AGEs (RAGE), reseptor permukaan sel multi-ligan 45 KDa milik superfamili imunoglobulin [4], dan mengaktifkan beberapa jalur sinyal intraseluler hilir disertai dengan peningkatan produksi radikal bebas yang berkontribusi terhadap komplikasi patologis terkait untuk diabetes [5].

Telah diketahui dengan baik bahwa antioksidan dan molekul pemulung radikal adalah pelindung yang baik terhadap proses ini [6]. Penggunaan tanaman obat dalam mencegah dan mengimbangi penyakit yang berhubungan dengan stres oksidatif adalah tradisi medis lama. Baru-baru ini, banyak penelitian menunjukkan bahwa metabolit sekunder seperti tanin, asam fenolik, dan flavonoid dengan potensi antioksidan dan antiglikasi ganda lebih efektif dalam mengobati diabetes mellitus [7]. Oleh karena itu, mengidentifikasi sumber fitokimia baru yang efektif menangkap radikal bebas dan mengurangi glikasi non-enzimatik sangat menarik.

Ephedra fragilis adalah anggota dari genus Ephedra (famili Ephedracea) yang berisi lebih dari 60 spesies yang tumbuh di kondisi gurun dan semi kering di kedua belahan bumi di enam benua [8]. Selama lebih dari 5000 tahun, banyak spesies dalam genus Ephedra telah umum digunakan dalam pengobatan tradisional Tiongkok (TCM) untuk pengobatan beberapa penyakit; ada beberapa penelitian yang melaporkan berbagai manfaat kesehatan mereka seperti anti-inflamasi [9, anti-invasif, anti-angiogenik, [10], antimikroba, antiproliferatif, pro-apoptosis [11], neuroprotektif [12], hepatoprotektif, dan anti -sifat oksidan [13]. Flavonoid, alkaloid, asam fenolik, dan senyawa lain dalam tanaman Ephedra telah dianggap sebagai komponen fitokimia utama untuk sifat farmakologis tersebut [14]. Dalam industri farmasi, kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik (RP-HPLC) banyak digunakan sebagai metode analisis untuk mendeteksi dan mengidentifikasi senyawa kimia berdasarkan sifat hidrofobiknya yang berbeda, meskipun beberapa studi dijelaskan dalam literatur untuk analisis kimia spesies Ephedra.

Proses ekstraksi senyawa bioaktif ini dari sumber tanaman yang berbeda adalah langkah penting pertama yang terlibat dalam analisis kualitatif dan kuantitatif mereka [15]. Faktor yang berbeda mis. metode ekstraksi, jenis dan konsentrasi pelarut, suhu, waktu, dan lain-lain secara signifikan dapat mempengaruhi komposisi dan laju ekstraksi senyawa tersebut [16]. Oleh karena itu, optimasi proses ekstraksi diperlukan untuk menghasilkan kandungan senyawa aktif tanaman yang tinggi. Awalnya dikembangkan pada 1950-an oleh Box dan Wilson, metodologi permukaan respons (RSM) saat ini adalah alat yang paling umum digunakan untuk melakukan, meningkatkan, dan mengoptimalkan proses seperti itu di mana faktor independen memiliki efek gabungan pada respons yang diinginkan. Salah satu desain yang paling sering dipilih dalam RSM oleh peneliti adalah desain Box-Behnken (BBD) karena membutuhkan uji coba terbatas dan, oleh karena itu, merupakan alternatif yang menghindari eksperimen lama dan mengurangi biaya [17-19].

Sampai saat ini, tidak ada penelitian yang tersedia dalam literatur mengenai optimasi ekstraksi senyawa bioaktif E. fragilis. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengoptimalkan ekstraksi kandungan total phenolic (TP) dan flavonoid (TF) dari E.fragilis dengan menerapkan BBD. Ekstrak etanol mentah (CEE) yang diperoleh pada kondisi ekstraksi optimum difraksinasi secara berurutan dengan pelarut yang polaritasnya meningkat, dan aktivitas antioksidan dan antiglikasinya diselidiki menggunakan uji in vitro yang berbeda. Akhirnya, kami melakukan analisis in silico untuk lebih memahami mekanisme di mana senyawa bioaktif di EAE, seperti yang diidentifikasi oleh kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik (RP-HPLC), mengikat BSA dan RAGE sebagai protein target.

2. Hasil dan Pembahasan

2.1. Memasang Model

RSM with a BBD was applied to investigate the effect of ethanol concentration (%, Xj), temperature(°C, X2), and time (h, X3)on the extraction yield of TP and TF from E. fragilis. The results of 15 trials after the BBD are given in Table 1. Analysis of variance(ANOVA)(Table 2) indicates that the models were significant as evidenced by F and p-values. The coefficient of multiple determinations (R')of the models were 0.9935 and 0.9939 for TP and TF, respectively, suggesting that only 0.65 and 0.61%of the total variations are not explained by the models. A comparable value of adjusted R2 to R2 represents an excellent statistical model. As given in Table 2, the adjusted R2(0.9818 and 0.983 for TP and TF contents, respectively) is close to R2, which means that the insignificant terms were not included in the models. Moreover, predicted R2(0.9012 and 0.9338 for TP and TF contents, respectively) is in reasonable agreement with adjusted R2 and confirms that the models are highly significant. The"fitness" of the models was also confirmed using the lack of fit test The insignificant p-value for lack of fit (p >{{0}}.05) untuk dua tanggapan menunjukkan kesesuaian model untuk prediksi yang akurat dari variasi hasil [20]. Presisi yang baik digambarkan sebagai rasio signal-to-noise lebih besar dari 4, yang dianggap diinginkan [21]. Nilai presisi yang memadai adalah 29,4772 dan 28,729 untuk konten TP dan TF, masing-masing, menunjukkan sinyal yang memadai. Secara bersamaan, nilai koefisien variasi yang lebih kecil (persen CV) (1,52 dan 0,4246 persen untuk konten TP dan TF, masing-masing) menunjukkan presisi dan reliabilitas nilai eksperimen yang lebih baik. Untuk setiap faktor respon, pengaruh faktor ekstraksi XI (konsentrasi etanol), X2 (suhu ekstraksi), dan X3 (waktu ekstraksi) diperiksa dengan cermat (Tabel 2). Signifikansi masing-masing koefisien diuji menggunakan F dan nilai p, mengingat nilai F yang lebih besar dan nilai p yang lebih kecil selalu menyebabkan korespondensi yang lebih signifikan antara berbagai variabel independen [22]. Secara kolektif, hasil ini menunjukkan bahwa model dapat direproduksi dan cocok untuk optimasi.

2.2. Pengaruh Variabel Ekstraksi pada Konten TP

Seperti yang diberikan pada Tabel 2, hasil ANOVA menunjukkan signifikan linear (X, dan X2), kuadrat (Xj, X5, dan X), dan interaktif (X1X, dan X2X3) efek pada konten TP. Di antaranya, konten TP terutama bergantung pada X, X3 pada p<0.001 followed="" by="" x1="" and="" x1x,="" at=""><0.01. the="" following="" second-order="" polynomial="" equation="" could="" be="" used="" to="" express="" the="" relationship="" between="" tp="" content="" and="">

Nilai kecocokan yang tidak signifikan (F-value =11.02, p-value=0.0843), menunjukkan bahwa model memiliki prediksi yang baik (R{ {9}}.9935; Adj R2=0.9818)(Tabel 2).

Interaksi antara konsentrasi etanol dan suhu ekstraksi (XjX2) menghasilkan (p .) yang sangat signifikan<0.01)effect on="" tp="" content="" (table2).="" as="" ethanol="" concentration="" (x1)="" and="" extraction="" temperature="" (x)increase="" in="" the="" range="" of="" 40-61.80%="" and="" 25-44.30°c="" respectively,="" the="" tp="" content="" increases="" rapidly.="" however,="" beyond="" 61.80%and="" 44.30°c,="" tp="" content="" decreases="" slightly(figure="" 1a).="" however,="" the="" interaction="" of="" the="" extraction="" temperature="" and="" extraction="" time="" (x2x3)showed="" a="" highly=""><0.001) effect="" on="" tp="" content="" (table="" 2).="" as="" shown="" in="" figure="" 1b,="" tp="" content="" slightly="" improved="" with="" increasing="" extraction="" temperature="" (x2)and="" extraction="" time="" (x3)up="" to="" 44.37℃c="" and="" 15.77="" h,="" respectively,="" but="" diminished="" slowly="">

Efek ini dapat disebabkan oleh fakta bahwa senyawa fenolik adalah molekul polar yang secara alami terjadi dengan glukosida, yang membuatnya lebih larut dalam air [23]. Karena ekstraksi senyawa fenolik sangat bergantung pada polaritas pelarut, campuran air-alkohol lebih efektif dalam ekstraksi daripada alkohol saja [20]. Berkenaan dengan prinsip "seperti-larut-seperti", penurunan konsentrasi etanol menyebabkan peningkatan polaritas pelarut, yang membantu melarutkan TP[15]. Namun demikian, konsentrasi etanol yang tinggi dapat mempengaruhi laju ekstraksi dengan mencegah pembubaran senyawa fenolik. Demikian juga, peningkatan suhu ekstraksi meningkatkan pemulihan senyawa fenolik target dengan pelunakan jaringan, melemahkan integritas dinding sel, meningkatkan transfer massa dan penetrasi pelarut ke dalam matriks tanaman, dan meningkatkan kelarutan dan laju difusi; namun, suhu yang terlalu tinggi untuk waktu ekstraksi yang diperpanjang dapat meningkatkan kemungkinan degradasinya [23]. Lebih lanjut, periode ekstraksi yang lama telah ditemukan berpotensi memperpanjang paparan oksigen dan cahaya, yang pada akhirnya meningkatkan risiko pembentukan radikal bebas yang dapat ditangkal oleh senyawa fenolik [23]. Oleh karena itu, perpanjangan waktu ekstraksi tidak membantu untuk memaksimalkan hasil ekstraksi [24].

2.3.Pengaruh Variabel Ekstraksi pada Konten TF

Seperti terlihat dari Tabel2, efek linier dari X dan X3; efek kuadrat dari X, dan X; dan efek interaksi X1X2 dan XjXg menunjukkan efek signifikan pada konten TF. Di antara semua faktor signifikan, TF terutama bergantung pada X3,X,X,X,,dan X1X2 pada p<0.001 followed="" by="" x="" andx1x3="" at=""><0.01. the="" fitted="" second-order="" polynomial="" of="" tf="" content="" is="" as="">

Nilai ketidaksesuaian yang tidak signifikan(F-value=1.13; p-value=0.5024) menunjukkan bahwa model yang diusulkan cocok dengan pengaruh spasial variabel terhadap respon dengan baik. prediksi (R2=0.9939; Adj R2= 0.9830) (Tabel 2).

Berbagai grafik permukaan respons 3D dihasilkan untuk konten TF dan ditunjukkan pada Gambar 1D-F. Pengaruh interaksi konsentrasi etanol dan suhu ekstraksi (X1X2) menunjukkan pengaruh yang signifikan (p<0.001) effect="" on="" tf="" content.="" from="" figure="" 1d,="" tf="" content="" increased="" at="" first="" and="" then="" decreased="" quickly="" with="" the="" rise="" of="" the="" two="" parameters,="" and="" a="" maximum="" tf="" content="" was="" achieved="" when="" ethanol="" concentration="" (xj)="" and="" extraction="" temperature="" (xo)were="" 61.89%="" and="" 44.23°c,="" respectively.="" this="" phenomenon="" is="" similar="" to="" tp,="" which="" might="" also="" be="" attributed="" to="" the="" fact="" that="" a="" rise="" in="" the="" extraction="" temperature,="" the="" solubility,="" extraction="" rate,="" and="" diffusion="" rate="" increase,="" which="" ultimately="" helps="" tf="" to="" dissolve="" insolvent="">

Demikian pula, interaksi antara konsentrasi etanol dan waktu ekstraksi (XIX3) menunjukkan korelasi yang sama (Gambar 1F). Hasil ekstraksi TF secara bertahap meningkat dengan meningkatnya konsentrasi etanol (Xj) dan waktu ekstraksi (X3). Dekat titik tengah plot respon (61,89 persen dan 15,81 jam untuk X dan X3, masing-masing), hasil TF mencapai tertinggi tetapi menurun perlahan setelahnya. Fenomena ini kemungkinan besar disebabkan oleh hukum kedua Fick tentang prinsip difusi yang mengungkapkan bahwa keseimbangan akhir antara konsentrasi larutan dalam matriks padat dan pelarut akan tercapai setelah durasi tertentu, yang menyebabkan perlambatan dalam hasil ekstraksi senyawa target [26] .

2.4. Validasi Kondisi yang Dioptimalkan

Tujuan dari optimasi adalah untuk menentukan kondisi ekstraksi yang akan memberikan kandungan TP dan TF tertinggi secara bersamaan. Perangkat lunak ahli desain digunakan untuk melakukan optimasi. BBD mengusulkan konsentrasi etanol optimal, suhu ekstraksi, dan waktu menjadi 61,93 persen, 44,43 derajat, dan 15,84 jam, untuk ekstraksi senyawa bioaktif E. fragilis. Pada titik optimal ini, kandungan TP dan TF yang diprediksi masing-masing adalah 15,335 mg GAE/g dw dan 2,972 mg OE/g dw (Tabel 3). Validasi kapasitas prediksi model dilakukan secara eksperimental di bawah kondisi optimal yang diperoleh dari RSM. Eksperimen dilakukan dalam rangkap tiga di bawah kondisi yang diperoleh, dan rata-rata kandungan TP dan TF adalah 14,98±0.29GAE/g DW dan 2,92±0.09 QE/g dw, masing-masing. Nilai eksperimental dari respons yang diselidiki sebanding dan sejalan dengan nilai prediksi, yang menegaskan bahwa model cukup untuk mencerminkan optimasi yang diharapkan.

2.5. Hasil Ekstraksi dan Analisis Fitokimia

Tabel 4 menunjukkan hasil ekstraksi E.fragilis CEE dan fraksinya. Hasil kami menunjukkan bahwa hasil ekstraksi dalam fraksi yang berbeda berbeda secara signifikan dari 0.78 hingga 10.6 persen (w/wo). Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 4, CEE(1{{14} },6 persen ) memiliki persentase hasil tertinggi, diikuti oleh WF (2,73 persen ), WBF (2,04 persen ), DMF (0,64 persen ), dan EAF (0,93 persen ), sedangkan HF (0,78 persen ) memiliki persentase hasil terendah.

Kandungan TP E. fragilis CEE dan fraksinya ditentukan melalui persamaan regresi kurva kalibrasi (y {{0}}.009x-0.{{ 25}}154; R2=0.9973) dan dinyatakan dalam miligram setara asam galat (GAE) per gram berat kering (Tabel 4). Secara umum, EAF memiliki kandungan TP tertinggi (32,78±0,49 mg GAE/g DW) diikuti berturut-turut oleh WBF, DMF, dan CEE (25,02±1,01,19,21±0,22 dan 14,98±0,29 mg GAE/g DW), sedangkan WF dan HF menyajikan kandungan terendah (10,47±0,71 dan 8,14±0,17 mg GAE/g DW, masing-masing). Kandungan TF E. fragilis CEE dan fraksinya dievaluasi dengan uji kolorimetri aluminium klorida menggunakankuersetinas a standard (y=0.0295x+0.0361; R2=0.9986)(Table 4). Similar to the TP content, the same results were observed in the TF content with the highest and lowest content being detected in the EAF(10.50 ± 0.11 mg OE/g of DW)and HF(1.65± 0.13 mg OE/g of DW), respectively. The TF content is arranged as the following sequence: EAF>WBF>DMF> CEE>WF>HF. Menariknya, kandungan TP dan TF dalam EAF adalah 2,18 dan 3,59-kali lipat lebih tinggi daripada CEE, menunjukkan bahwa etil asetat mungkin merupakan pelarut yang tepat untuk mengkonsentrasikan senyawa fenolat dan flavonoid yang lebih tersedia selama fraksinasi CEE. Data kami mengenai konten TP dan TF konsisten dengan data Yao et al. [27] yang melaporkan bahwa EAF yang diperoleh dari tanaman obat Pyrola asarifolia memiliki kadar fenolat dan flavonoid tertinggi dibandingkan dengan fraksi lainnya (petroleum eter, n-butanol, dan air). Dalam penelitiannya, Bhardwaj et al. [28] juga melaporkan hasil yang sama ketika menggunakan beberapa pelarut dengan peningkatan polaritas (n-heksana, kloroform, etil asetat, dan n-butanol) dalam pemisahan tanaman obat Codonopsis clematidea. Menurut penulis ini, EAF memiliki kandungan TP dan TF tertinggi diikuti oleh n-butanol, kloroform, dan heksana. Variasi yang signifikan dalam hasil ekstraksi, komposisi, dan kemurnian senyawa fenolik antara fraksi mungkin disebabkan oleh perbedaan polaritas konstituen yang ditemukan dalam bahan tanaman, struktur kimianya, derajat polimerisasinya, dan interaksinya satu sama lain. ].

2.6. Aktivitas Antioksidan In Vitro

2.6.1.DPPH "Aktivitas Memulung

DPPH" adalah salah satu di antara beberapa radikal bebas stabil yang banyak digunakan untuk menyelidiki potensi antioksidan ekstrak tumbuhan [30]. Potensi pemulung ekstrak sering dikaitkan dengan kemampuannya untuk mengais radikal bebas yang stabil, yang disebabkan oleh kemampuannya mendonorkan hidrogen. .

Kapasitas scavenging CEE/fraksi serta VC pada dosis yang berbeda pada radikal bebas DPPH* dipelajari. Gambar 2A menunjukkan bahwa semua fraksi menunjukkan aktivitas DPPH·pemulungan yang jelas dengan cara yang bergantung pada dosis dalam kisaran 0.1 hingga 1 mg/mL.Pada dosis 1mg/mL,64.32.44.1{{22} },67.24,86.63,80.95,51.37, dan 99,62 persen radikal "DPPH masing-masing dipadamkan oleh CEE, HE, DMF, EAF, WBF, WF dan VC. IC50 terendah untuk mengais DPPH"di antara semua fraksi ditampilkan oleh EAF(0.116±{{30}}.015 mg/mL )dilanjutkan dengan WBF (0.175 ± 0.03 mg/mL), CEE (0.23 ± 0,065 mg/mL), dan DMF (0,297 ±0,044 mg/mL).WF dan HF menunjukkan nilai IC50 yang relatif lebih tinggi (0,964±0,178 dan 1,245±0,105 mg/mL).

Observed differentials in the scavenging activities of the fractions against the DPPH*radical may be assigned to the structural characteristics and the number of phenolic compounds present in each fraction. Similar results were observed in the medicinal plant Liquidambar formosana Hance leaf since the EAF was more effective than the other fractions (dichloromethane, n-butanol, and water fractions)[31]. As a standard molecule, ascorbic acid (VC) displayed the lowest IC50 value (0.039 ±0.009 mg/mL) in comparison to all fractions. The scavenging potential is in decreasing order of VC>EAF> WBF>DMF >CEE>WF>HF.

Nilai IC50 untuk penangkal radikal DPPH berkorelasi positif signifikan dengan kedua kandungan TP (r=0.963;p<0.01) and="" tf="" content(r=""><0.01)as presented="" in="" table="" 5.="" therefore,="" the="" discovered="" antioxidant="" activity="" suggested="" that="" eaf="" can="" be="" a="" source="" of="" numerous="" natural="" compounds="" with="" antioxidant="" properties="" that="" can="" act="" as="" hydrogen="" donors="" to="" terminate="" the="" process="" of="" oxidation="" by="" converting="" the="" free="" radicals="" to="" their="" stable="">

2.6.2.ABTS· ditambah Aktivitas Memulung

Uji pemulung ABTS secara luas digunakan sebagai indeks untuk menginformasikan dan menyelidiki kapasitas antioksidan senyawa murni serta ekstrak alami [32,33]. Pudarnya warna biru/hijau kromofor ABTS* pada 734 dengan adanya ekstrak tumbuhan dapat mengindikasikan aktivitas antioksidan.

Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2B, kurva scavenging CEE/fraksi pada ABTS* plus menunjukkan tren naik seiring dengan peningkatan konsentrasi. Pada 1 mg/mL, tingkat pembilasan CEE, HF, DMF, WBF, EAF, WF, dan VC adalah 80.31,40.54,88.76, 9{{2{ {22}}}}.11,82.97, 67,36, dan 94,90 persen , masing-masing. Di antara semua pecahan, nilai IC minimum0 ditunjukkan oleh EAF(0.11{{30}}±0.014 mg/ mL)dilanjutkan dengan DMF(0.196±0.023 mg/mL), WBF (0.277±0.031 mg/mL), CEE(0.429 ± 0,039 mg/mL), dan WF (0,654± 0,043 mg/mL), sedangkan HF menunjukkan nilai ICs0 tertinggi (1,314± 0,104 mg/mL). Secara kolektif, temuan ini sesuai dengan Kaewseejan dan Siriamornpun [29]. Perbandingan dengan kapasitas penghambatan VC (0,025±0,005 mg/mL) menunjukkan bahwa aktivitas scavenging CEE dan fraksinya sedikit lemah.

Seperti yang disajikan pada Tabel 5, korelasi yang sangat signifikan dari pemulungan radikal ABTS dengan konten TP (r=0.921;p<0.01), and="" a="" significant="" correlation="" with="" tf="" content="" (r=""><0.05), were="" shown.="" this="" finding="" confirms="" the="" results="" obtained="" for="" the="" dpph*scavenging="" assay,="" proving="" the="" capacity="" of="" eaf="" to="" scavenge="" free="">

2.6.3. Aktivitas Pemulungan H2O2

Menjadi kontributor utama stres oksidatif, H2O2 mudah berdifusi melalui sel melintasi membran sebagai molekul pembawa pesan [34]. Secara keseluruhan, H2O2 sendiri tidak berbahaya [35], tetapi dapat bereaksi dengan Fe2 melalui reaksi Fenton dan menimbulkan radikal hidroksil (OH*) yang sangat reaktif [36]. Dengan demikian, ini adalah ROS yang paling merusak biomolekul. Oleh karena itu, perlu untuk mengevaluasi kemampuan CCE dan berbagai fraksinya untuk mengais H2O2.

Scavenging activities of CEE/fractions, as well as standard antioxidants, were presented in Figure 2C. Notably, all extracts showed a strong scavenging activity on HO, which increased with the increase of sample doses ranging from 0.1 to 1 mg/mL. Moreover, the H2O2 scavenging potential decreased in the order of EAF> WBF>DMF>CEE>WF>HF, dan kemampuan mengais yang sesuai pada 1.0 mg/mL masing-masing adalah 84.56,75.24, 67.17,56.18, 50,19, dan 34,95 persen , yang jauh lebih rendah daripada VC (98,03 persen ).

Di antara semua fraksi, EAF menunjukkan nilai IC50 terendah (ICs0= 0.098±0.013 mg/mL), dan secara signifikan lebih tinggi daripada fraksi VC (0,024±0,006 mg/mL). Hal ini mungkin karena adanya senyawa fenolik dan flavonoid yang tinggi dalam EAF, yang secara luas diketahui memainkan peran penting sebagai antioksidan dalam sistem biologis. Dalam penelitian terbaru kami, kami mendemonstrasikan kapasitas EAF dari E.fragilis untuk melindungi Tetrahymena pyriformis terhadap kerusakan oksidatif yang diinduksi H2O2-[37].

Analisis data kami menggambarkan bahwa, seperti untuk hasil DPPH" dan ABTS* plus, korelasi positif yang kuat dari nilai IC0 untuk pemulungan H2O2 dicatat dengan kedua konten TP (r=0.926; p<0.01) and="" tf="" content="" (r=""><0.01)(table 5).="" in="" their="" study,="" sroka="" and="" cisowski="" [38]="" reported="" also="" a="" positive="" correlation="" between="" phenolic="" compounds="" with="" ho2-scavenging="" ability.="" according="" to="" these="" authors,="" the="" ho2-scavenging="" depended="" strongly="" on="" the="" number,="" positions,="" and="" the="" model="" of="" substitution="" of="" oh="" bonded="" to="" the="" aromatic="" ring="" of="" phenolic="">

2.6.4. Mengurangi Daya

Daya reduksi ekstrak bertindak sebagai indikator potensi aktivitas antioksidannya [39, A40]. Potensi antioksidan diperkirakan oleh kapasitas antioksidan untuk mereduksi besi (Fe3) dalam besi klorida menjadi besi (Fe2 plus). Secara umum, sifat pereduksi dikaitkan dengan keberadaan redukton dalam ekstrak tumbuhan, yang diketahui mengerahkan aksinya dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbangkan atom hidrogen [41].

Gambar 2D menunjukkan kurva dosis-respons untuk daya reduksi ekstrak E. fragilis. Diketahui bahwa semakin tinggi absorbansi pada 700 nm maka kemampuan reduksi semakin besar. Dalam studi saat ini, CEE dan lima fraksinya menunjukkan daya reduksi yang cukup besar dengan cara yang bergantung pada konsentrasi.

EAF menunjukkan aktivitas antioksidan maksimum (EC{{0}}.136± 0.{{10}}13 mg/mL) dibandingkan dengan VC(EC{{4 }}.083± 0.005 mg/mL). Ini diikuti oleh WBF (EC50=0.180 ± 0,028 mg/mL), DMF (EC50=0.319 ± 0,031 mg/mL), CEE (EC50=0.334±0.029mg/mL), dan WF(EC50=0.398±0.064 mg/mL) .HF tertinggal di belakang menunjukkan aktivitas daya reduksi minimum (EC5s0 =0.626±0,068 mg/mL) dibandingkan dengan fraksi lainnya. Temuan ini menunjukkan bahwa EAF mungkin mengandung berbagai senyawa individu yang memiliki aktivitas daya pereduksi yang efektif dan kuat. Para ilmuwan telah menemukan bahwa ekstrak etil asetat mungkin berfungsi sebagai antioksidan kuat [42].

Korelasi positif diamati antara daya pereduksi dan konten TP dan TF (r=0.975; p<0.01 and="" r="0.987;"><0.01; respectively).these="" correlations="" confirmed="" the="" contribution="" of="" phenolic="" compounds="" in="" the="" reducing="" power="">

2.6.5. Uji Fosfomolibdenum

TAC dari CEE dan fraksinya serta VC dievaluasi menggunakan uji fosfo-molibdenum dan dinyatakan sebagai EC0, yang merupakan konsentrasi yang menyediakan 0.5 absorbansi. Metode ini didasarkan pada reduksi Mo(VI) menjadi Mo(V) oleh ekstrak untuk membentuk kompleks fosfat/Mo (V) hijau pada pH asam dengan serapan maksimum pada 695 nm [43].

As shown in Figure 2E, the total antioxidant capacity of CCE/fractions and VC correlated well with increasing concentrations in the range of 0.1 to 1 mg/mL.Of the CEE fractions, the ECs0 values ranged from 0.159±0.019 to 0.604±0.073 mg/mL, with a descending order of EAF>WBF> DMF> CEE >WF>HF(p<0.05), which="" indicates="" that="" eaf="" and="" hf="" had="" the="" highest="" and="" lowest="" antioxidant="" activity,="" respectively.="" this="" activity="" could="" be="" due="" to="" the="" presence="" in="" eaf="" of="" various="" phenolic="" compounds="" that="" might="" possess="" antioxidant="" activity.="" vc,="" which="" is="" the="" positive="" control,="" displayed="" the="" lowest="" ec5o="" value="" (0.095±="" 0.008="" mg/ml)="" in="" comparison="" to="" all="">

Korelasi yang sangat signifikan diamati antara aktivitas antioksidan total dan konten TP dan konten TF (r=0.978 untuk keduanya; p<0.01) and="" is="" shown="" as="" presented="" in="">

2.6.6. -Sistem Model Karoten-Linoleat

Dalam model asam -karoten-linoleat, molekul -karoten yang sangat tidak jenuh mengalami perubahan warna yang cepat karena radikal bebas linoleat yang dihasilkan oleh oksidasi asam linoleat [44]. Suplementasi dengan antioksidan dapat meminimalkan oksidasi -karoten dengan menetralkan radikal bebas linoleat, dan dengan demikian menghambat pemutihan -karoten [45].

Antioxidant activity of CCE/fractions and BHT, as measured by the β-carotene-linoleate model, are shown in Figure 2F. All tested extracts showed concentration-dependent scavenging activity. The EAF, which contained the highest amount of phenolics and flavonoids contents, showed a significant effect in inhibiting β-carotene bleaching, reaching 74.75%at a concentration of 1mg/mL. WBF, CCE, DMF, HF, and WF inhibited the oxidation of β-carotene by 51.61,58.12,50.09,41.39, and 31.66% respectively, at the same concentration. Overall, decreasing antioxidant activity was depicted as EAF> WBF> CEE>DMF>HF>WF.

EAF menampilkan nilai IC50 minimum(IC50=0.127 ± 0.{{10}}42 mg/mL) dibandingkan dengan BHT (IC { {5}}.049 ± 0.001 mg/mL). WBF. CCE. DME. KAMI. dan HF menampilkan nilai IC0 yang relatif lebih tinggi yaitu 0.5±0.111 mg/mL, 0.998 ± 0.101 mg/mL, 1.073± 0.084 mg/mL,1.402±0.058 mg/mL, dan 2,209±0,081 mg/mL, masing-masing.

Korelasi yang signifikan secara positif diamati antara pembersihan oksidasi -karoten dan kedua kandungan TP (r= 0.850;p<0.05) and="" tf="" content="" (r=""><0.05)(table 5).="" this="" result="" suggests="" that="" eaf="" may="" contain="" some="" antioxidants="" that="" can="" inhibit="" the="" formation="" of="" hydroperoxide="" and="" stop="" the="" radical-chain="" reaction="">

The involvement of reactive oxygen species (ROS) in several pathological situations has been growing recently. Bioactive compounds are gaining interest thanks to their potent antioxidant activity, but their complexity imposes the development of many methods to evaluate the antioxidant activity and the effectiveness of these chemical compounds. Thus, in this study, CEE and its fractions have been investigated for their antioxidant potential using six assays: DPPH, ABTS, H>O, RP, TAC, dan -karoten. Oleh karena itu, kami menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan kuat CEE dan fraksinya menunjukkan aktivitas pemulungan yang lebih tinggi, dan ini mungkin sangat disebabkan oleh komposisinya dari asam fenolik dan flavonoid seperti asam galat, rutin, dan quercetin.