Efek Saraf Dari Empat Glikosida Fenitoletanoid Pada Apoptosis yang Diinduksi H2O2 Pada Sel PC12 Melalui Jalur Nrf2/ARE

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Maiquan Li 1, Tao Xu 1, Fei Zhou 1, Mengmeng Wang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao dan Baiyi Lu 1,*

1. Pendahuluan

Stres oksidatif, yang merupakan ketidakseimbangan homeostasis antioksidan, menginduksi peroksidasi lipid, cedera protein dan DNA, penuaan sel, dan kematian sel. Proses ini kemungkinan berkontribusi pada beberapa gangguan neurodegeneratif, seperti penyakit Alzheimer (AD), penyakit Parkinson (PD), dan iskemia/reperfusi [1]. Hidrogen peroksida (H2O2), yang merupakan salah satu spesies oksigen reaktif utama (ROS), diketahui menyebabkan peroksidasi lipid dan kerusakan DNA [2]. Selain itu, H2O2 adalah sumber endogen radikal bebas hidroksil yang berkontribusi pada tingkat latar belakang stres oksidatif seluler [3,4]. Oleh karena itu, strategi terapeutik untuk mencegah apoptosis yang diinduksi stres oksidatif mungkin memiliki potensi dalam pengobatan penyakit neurodegeneratif.

Faktor nuklir erythroid 2-related factor 2 (Nrf2), adalah faktor transkripsi yang sangat terkait dengan stres oksidatif. Aktivasi Nrf2 menginduksi transkripsi berbagai gen antioksidan dan detoksifikasi, termasuk heme oxygenase-1 (HO-1), NAD(P)H quinone oxidoreductase 1, anti-inflamasi [13], dan imunomodulator [14] bioaktivitas. Osmanthusfragrans adalah bahan umum dalam beberapa makanan Asia dan telah lama dikonsumsi. Kami sebelumnya menunjukkan bahwa ekstrak bunga O.fragrans meningkatkan pembelajaran spasial dan memori, menghambat kerusakan oksidatif, dan menunjukkan aktivitas saraf dalam penuaan yang diinduksi d-galaktosa dalam model tikus ICR [15]. Salidroside, acteoside, dan isoacteoside adalah respons PhGs utama untuk aktivitas antioksidan ekstrak bunga O.fragrans [16].

Studi tentang efek neuroprotektif PhGs telah memperoleh hasil yang diinginkan. Salidroside secara signifikan mengurangi apoptosis sel sel PC12 yang terpapar dalam MPP+ [17,18]. Acteoside juga mengurangi apoptosis yang diinduksi MPP+ dan stres oksidatif pada sel PC12 [19] dan cedera sel SH-SY5Y yang diinduksi p25-35 [20]. Echinacoside diselidiki pada tumor necrosis factor-a (TNFa)-induced apoptosis dalam sel SH-SY5Y [21], toksisitas dopaminergik yang diinduksi MPTP pada tikus [22], kultur primer sel kortikal tikus yang terluka glutamat [23], dan kerusakan yang diinduksi 6-OHDA pada sel PC12 [24]. Hasilnya menunjukkan bahwa PhG menunjukkan efek sitoprotektif dan merupakan agen potensial untuk mengobati penyakit neurodegeneratif. Penelitian telah menunjukkan sifat antioksidan PhG di bawah banyak bioaktivitas lain untuk senyawa ini [25]. Namun, beberapa penelitian telah menyelidiki mekanisme molekuler PhG terhadap toksisitas oksidatif.

Dalam penelitian kami, kami memilih empat PhG khas sebagai berikut: salidroside (fenilaletanoid monosakarida), aktinida (fenilaletanoid disakarida), isoaktosida (fenilaletanoid disakarida), dan echinacoside (fenylethanoid trisakarida). Kami menggunakan model kematian neuronal menggunakan sel PC12 yang dibedakan [26] untuk menyelidiki efek perlindungan dan mekanisme molekuler PhG pada model sel PC12 yang diinduksi H2O2. Kami menunjukkan bahwa PhG mengaktifkan jalur Nrf2/ARE dengan mengikat protein terkait ECH 1 (Keap1) mirip Kelch. Proses ini mengregulasi enzim antioksidan dan meningkatkan ketahanan sel PC12 terhadap stres oksidatif.

Pengobatan gangguan neurodegeneratif:PhG dari cistanche

2. Hasil

2.1. PhGs Menekan sitotoksisitas yang Diinduksi H2O2 dalam Sel PC12

Efek sitotoksik dari H2O2 dan PhGs (0,1,1,5, dan 10 卩g/mL) pada sel PC12 diuji. Hasil penelitian menunjukkan bahwa H2O2 menyebabkan hilangnya viabilitas sel PC12 dalam perilaku yang bergantung pada konsentrasi dan bergantung pada waktu (Gambar 1A). Paparan sel PC12 terhadap 200 H2O2 selama 2 jam menghasilkan viabilitas sel sebesar 57,4%. Pretreatment sel dengan PhG pada 0,1,1, 5, dan 10 昭/mL tidak berpengaruh pada viabilitas sel (Gambar 1B) dan sel PC12 yang dilindungi secara nyata dari kerusakan yang diinduksi H2O2 dengan meningkatkan viabilitas sel masing-masing sebesar 9,549-22,141%, 12,092-25,289%, 1,470-9,289%, dan 3,411-11,441%, (Gambar 1C). Namun, pretreatment salidroside (0,1 ^g/mL), isoacteoside (0,1, 1, 5, dan 10 ^g/mL), echinacoside (0,1,1, dan 5 ^g/mL) menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan pada cedera sel yang diinduksi HzOz. Pretreatment sel dengan PhG juga menghilangkan karakteristik morfologis yang diinduksi oleh H2O2 (Gambar 1D).

Gambar 1.PhG menekan sitotoksisitas yang diinduksi H2O2 dalam sel PC12. Viabilitas sel terdeteksi oleh uji MTT. Efek sitotoksik H2O2 (A) dan PhGs (B) pada konsentrasi yang berbeda pada sel PC12. (C) PhG melemahkan penurunan viabilitas sel yang diinduksi H2O2. Sel PC12 diinkubasi dengan PhG (0,1, dan 10 mg/mL) selama 24 jam, dan kemudian diinkubasi dengan 200 pM H2O2 selama 2 jam lagi setelah PhG dihapus. (D) Pengamatan morfologis. Sel-sel setelah pengobatan diamati oleh mikroskop fase-kontras (x100), CK: kelompok normal, H2O2: H2O2 kelompok yang diobati, HL: kelompok yang diobati dosis rendah salidroside, HH: kelompok yang diobati dosis tinggi salidroside, ML: kelompok yang diobati dosis rendah aktinida, MH: kelompok yang diobati dosis tinggi aktinida, IL: kelompok yang diobati dosis rendah isoaktinida, IH: kelompok yang diobati dosis tinggi isoaktin, SL: echinacoside dosis rendah kelompok yang diobati, SH: echinacoside dosis tinggi diobati kelompok. ** hal< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" #="" p="">< 0.05,="" versus="" h2o2="" treated="" group;="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">

2.2. PhGs Ditekan H2O2-Induced Intracellular Akumulasi ROS, Lipid Peroxidation (MDA), dan Peningkatan Superoksida Dismutase (SOD) Aktivitas dalam Sel PC12

Paparan sel PC12 terhadap 200 pM H2O2 selama 2 jam meningkatkan kadar ROS, kandungan MDA, dan penurunan aktivitas SOD (Gambar 2). Pretreatment PhGs melemahkan tingkat ROS, salidroside, dan aktinida, dan dosis tinggi isoacteoside dan pretreatment echinacoside secara signifikan melemahkan tingkat ROS (p< 0.01).="" salidroside="" pretreatment="" showed="" no="" effect="" on="" mda="" content,="" but="" acteoside="" pretreatment="" significantly="" attenuated="" mda="" content="" (p="">< 0.05).="" isoacteoside="" and="" echinacoside="" pretreatment="" significantly="" attenuated="" mda="" content="" to="" a="">

Gambar 2.PhG memblokir akumulasi ROS dan MDA dan meningkatkan aktivitas SOD dalam sel PC12. Sel PC12 diinkubasi dengan PhG (0,1, dan 10 四g/mL) selama 24 jam, dan kemudian diinkubasi dengan 200 |^M H2O2 selama 2 jam lagi setelah PhG dihapus. (A) PhG memblokir akumulasi ROS dan MDA. (B) PhG memblokir akumulasi MDA. (C) PhGs meningkatkan aktivitas SOD. CK: kelompok normal, Model: Kelompok yang diobati H2O2, Salidroside: kelompok yang diobati salidroside, Acteoside: kelompok yang dirawat di aktinida, Isoacteoside: kelompok yang diobati isoakeoside, Echinacoside: kelompok yang diobati echinacoside. ** hal< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" #="" p="">< 0.05,="" versus="" h2o2="" treated="" group,="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">

2.3.PhGs Membalikkan Apoptosis yang Diinduksi H2O2 dalam Sel PC12

Pengobatan H2O2 (200 |1M) selama 2 jam secara signifikan meningkatkan apoptosis pada sel PC12, dengan tingkat apoptosis total hingga 16,02% (Gambar 3). Namun, pretreatment dengan PhGs (0,1 dan 10 卩g/mL) selama 24 jam menurunkan tingkat apoptosis dengan cara yang bergantung pada konsentrasi (p< 0.01).="" salidroside,="" acteoside,="" isoacteoside,="" and="" echinacoside="" markedly="" decreased="" the="" percentage="" of="" cell="" apoptosis="" by="" 4.750-6.627%,="" 4.413-5.800%,="" 6.593-10.047%,="" and="" 1.530-7.510%,="">

Gambar 3. PhG membalikkan apoptosis yang diinduksi H2O2 dalam sel PC12. Sel PC12 diinkubasi dengan PhG (0,1, dan 10 卩g/mL) selama 24 jam, dan kemudian diinkubasi dengan 200 pM H2O2 selama 2 jam lagi setelah PhG dihapus. Kemudian, apoptosis diukur dengan flow cytometry menggunakan probe fluoresen PI/FITC. CK: kelompok normal, Model: Kelompok yang diobati H2O2, Salidroside: kelompok yang diobati salidroside, Acteoside: kelompok yang dirawat di aktinida, Isoacteoside: kelompok yang diobati isoakeoside, Echinacoside: kelompok yang diobati echinacoside. ** hal< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">

2.4. PhGs Membalikkan Downregulasi Ekspresi Protein yang Diinduksi H2O2 dari HO-1, NQO1, GCLC, dan GCLM

HO-1, NQO1, dan glutamat-Sistein ligase (GCL) adalah enzim antioksidan seluler yang penting, dan HO-1, NQO1, dan subunit katalitik atau modifikasi GCL (GCLC atau GCLM) adalah gen hilir yang diatur Nrf2 [27]. Ekspresi protein HO-1, NQO1, GCLC, dan GCLM diamati setelah perawatan. Perbedaan yang jelas ditemukan antara ekspresi protein HO-1 dan NQO1 dengan atau tanpa H2O2 (Gambar 6A-C) (p< 0.01).="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" p^g/ml)="" reversed="" the="" h2o2-induced="" downregulation="" of="" protein="" expression="" of="" ho-1="" (except="" salidroside="" at="" 0.1="" pg/ml),="" nqo1="" (except="" acteoside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" h2o2="" also="" downregulated="" gclc="" and="" gclm="" protein="" expression="" (p="">< 0.05)="" (figure="" 6a,d,e).="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" pg/ml)="" reversed="" h2o2-induced="" downregulation="" of="" protein="" expression="" of="" gclc="" (except="" echinacoside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01)="" and="" gclm="" (except="" salidroside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" then,="" the="" chemical="" inhibitors="" for="" ho-1="" were="" used="" to="" further="" evaluate="" the="" roles="" of="" the="" antioxidant="" enzymes="" in="" regulating="" the="" protection="" of="" phgs="" against="" h2o2-induced="" cytotoxicity.="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" pg/ml)="" prevented="" h2o2-induced="" cytotoxicity,="" but="" such="" protective="" effect="" was="" reversed="" by="" ho-1="" inhibitor="" znpp="" (p="">< 0.01)="" at="" 20="" pm="" (figure="" 6f,="" p=""><>

2.5. Analisis Ekspresi dan Docking Molekuler Keap1

Dalam kondisi fisiologis, Keap1 bertindak sebagai protein represor Nrf2 dengan mengikat domain Neh2 Nrf2 dan menargetkan Nrf2 ke ligase ubiquitin E3 berbasis Cul3 untuk ubiquitination dan degradasi berikutnya oleh proteasome 26S [28]. Kapasitas pengikatan ke Keap1 PhG dievaluasi dengan analisis docking molekuler untuk menyelidiki mekanisme di bawah efek antioksidannya.

Efek antioksidan: CistanchePhGs

3. Diskusi

Kami menyelidiki neuroproteksi PhG pada H2O2 induced-cytotoxicity dalam sel PC12. Hasilnya menunjukkan bahwa pretreatment PhGs secara signifikan menekan sitotoksisitas yang diinduksi HzOz, melemahkan tingkat ROS intraseluler, meningkatkan tingkat enzim antioksidan intraseluler, dan akhirnya membalikkan sitotoksisitas yang diinduksi H2O2 dalam sel PC12. Selain itu, PhG meningkatkan aktivasi transkripsi Nrf2, membalikkan downregulasi ekspresi protein yang diinduksi HzOz dari ekspresi protein HO-1, NQO1, GCLC, dan GCLM. Selain itu, PhG menunjukkan interaksi potensial dengan situs pengikatan Nrf2 dalam protein Keap1.

Dalam cedera sel PC12 yang diinduksi H2O2, peroksidasi lipid, yang mengacu pada degradasi oksidatif lipid, meningkatkan permeabilitas membran, yang menyebabkan kerusakan sel [29]. Pembentukan MDA banyak digunakan sebagai indeks peroksidasi lipid [30]. H2O2 meningkatkan produksi ROS dan enzim pertahanan antioksidan yang habis, seperti SOD, katalase, dan GPx. Proses ini menyebabkan stres oksidatif [31], yang memainkan peran kunci dalam sebab-akibat dan perkembangan sebagian besar gangguan neurodegeneratif. Konsisten dengan penelitian sebelumnya, kami mengamati peningkatan tingkat ROS, berkurangnya enzim antioksidan intraseluler, dan peningkatan apoptosis sel PC12 setelah perawatan H2O2. Pretreatment PhGs secara signifikan melemahkan peningkatan ROS intraseluler yang diinduksi HzOz, meningkatkan enzim antioksidan intraseluler, dan akhirnya membalikkan sitotoksisitas yang diinduksi HzOz dalam sel PC12.

Kuang et al. [32] melaporkan bahwa echinacoside menunjukkan efek saraf yang signifikan pada sitotoksisitas yang diinduksi H2O2 pada sel PC12 melalui jalur apoptosis mitokondria. Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa echinacoside, salidroside, acteoside, dan isoacteoside menunjukkan efek neuroprotektif dengan meningkatkan aktivitas antioksidan sel PC12 karena mereka meningkatkan aktivasi transkripsi Nrf2 dan upregulated ekspresi protein hilir HO-1, NQO1, GCLC, dan GCLM. Sejumlah penelitian telah dengan jelas menunjukkan bahwa aktivasi gen target Nrf2, khususnya HO-1, pada astrosit dan neuron sangat melindungi terhadap peradangan, kerusakan oksidatif, dan kematian sel. Sistem HO-1 telah dilaporkan sangat aktif dalam sistem saraf pusat, dan modulasinya tampaknya memainkan peran penting dalam patogenesis gangguan neurodegeneratif [33]. Studi terbaru juga mengklarifikasi peran Nrf2 dalam perkembangan dan risiko PD [9] dan Keap1 sebagai target yang efisien untuk reaktivasi Nrf2 pada AD [34]. Hasilnya mendukung bukti baru untuk Nrf2 sebagai target terapi pada penyakit neurodegeneratif.

Analisis docking molekuler menunjukkan bahwa PhG dapat mengikat Keap1, dengan kapasitas pengikatan berikut: echinacoside > isoacteoside > acteoside > salidroside. Konsisten dengan hasil ini, pretreatment PhGs menyebabkan translokasi nuklir Nrf2, dengan ekspresi Nrf2 berikut dalam nukleus: echinacoside > isoacteoside * acteoside > salidroside. Kami berasumsi bahwa jumlah glikosida mempengaruhi kemungkinan mode pengikatan PhG dan Keap1, dan mode pengikatan selanjutnya menyebabkan pelepasan Nrf2 dari Keap1. Proses ini menghasilkan aktivasi Nrf2 dan gen hilir dan pada akhirnya melindungi sel PC12 dari stres oksidatif yang diinduksi H2 O2.

Efek neuroprotektif dari cistanchePhGs

4. Bahan dan Metode

4.1. Senyawa Kimia dan Reagen

Salidroside (CAS No. 10338-51-9), acteoside (CAS No. 61276-17-3), isoacteoside (CAS No. 61303-13-7), dan echinacoside (CAS No. 82854-37-3) dibeli dari YYuanye Biotechnology Company (Shanghai, Cina). PhG dilarutkan dalam PBS untuk menghasilkan larutan stok 10 mg/mL, yang disimpan pada suhu -20 °C. H2O2 dibeli dari Aladdin® (Shanghai, Cina). Rpmi-1640 medium dan serum sapi janin dibeli dari Hyclone (Logan, UT, USA), dan 0,5% tripsin EDTA, penisilin, dan streptomisin dibeli dari Keyi (Hangzhou, Cina). MDA, kit diagnostik SOD, MTT, dan DCFH-DA dibeli dari Beyotime Institute of Biotechnology (Nanjing, Jiangsu, Cina). Annexin V-FITC/PI double staining Kit dibeli dari Solarbio Life Sciences (Beijing, Cina). Antibodi terhadap Nrf2, Histone H3, Keap1, HO-1, NQO1, GCLC, GCLM, dan p-aktin, IgG anti-tikus-lobak peroksida (HRP), dan anti-kelinci-HRP-IgG dibeli dari Abcam (London, Inggris). Inhibitor HO-1 dan ZnPP dibeli dari Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). RNAiso Plus, Kit reagen PrimeScript™RT dengan Penghapus gDNA, dan SYBR® Premix Ex Taq™ II dibeli dari Takara (Shiga, Jepang). Lipofectamine® RNAiMAX Transfection Reagent dibeli dari Thermo Fisher Scientific (Waltham, Inggris). Urutan siRNA Nrf2 adalah sebagai berikut: maju, CCGAAUUACAGUGUCUUAA; dan sebaliknya, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Sedangkan urutan siRNA kontrol adalah sebagai berikut: forward, UUCUCCGAACGUGUCACGU; dan sebaliknya, ACGUGACACGUUCGGAGAA.

4.2. Kultur Sel

Garis pheochromocytoma adrenal tikus (sel PC12) diperoleh dari Institute of Biochemistry and Cell Biology, SIBS, (CAS, Shanghai, Cina). Sel-sel tersebut dipertahankan dalam RPMI-1640 (Hyclone) yang mengandung 10% serum sapi janin (Hyclone), 100 U/mL penisilin, dan 0,1 mg/mL streptomisin pada suhu 37 °C dengan 5% CO2. Media diganti setiap hari.

4.3. Viabilitas SelAssay

Sel PC12 diunggulkan dalam pelat 96 sumur pada 2 x 104 sel/sumur. Setelah perlekatan, sel-sel disibukkan dengan atau tanpa inhibitor selama 20 menit, diinkubasi dengan atau tanpa PhG selama 24 jam, dan kemudian diinkubasi dengan H2O2 selama 2 jam setelah PhG dihapus. Setelah inkubasi, sel-sel diperlakukan dengan MTT 5 mg/mL selama 4 jam pada37 °C, dan media dikeluarkan dengan hati-hati. Kristal formazan yang telah terbentuk oleh sel-sel yang masih hidup dilarutkan dalam 150 rL DMSO untuk menghasilkan warna biru [35], dan absorbansi diukur pada 570 nm pada pembaca pelat. Kontrol menggunakan konsentrasi medium yang sama dengan DMSO saja. Kelangsungan hidup sel dinormalisasi sebagai persentase kontrol.

Konsentrasi PhG (0,1,1,5, dan 10 Rg/mL) dipilih tergantung pada analisis sitotoksisitas PhG dan efek sitoprotektif yang dilaporkan dari echinacoside [32]. Menurut laporan tersebut, tidak ada efek sitotoksisitas yang ditunjukkan di bawah 10 Rg/mL, dan echinacoside dilaporkan menunjukkan efek sitoprotektif pada model sel yang terluka HzOz.

4.4. Uji Apoptosis

Apoptosis terdeteksi dengan Annexin V-FITC/PI double staining Kit (Solarbio). Sel PC12 diunggulkan dalam pelat 6 sumur pada 2 x 105 sel/sumur. Setelah perlekatan, sel-sel diobati dengan PhG (0,1 dan 10 Rg/mL) selama 24 jam dan diinkubasi dengan H2O2 selama 2 jam lagi setelah PhG dihapus. Setelah inkubasi, sel-sel dicuci dalam PBS dingin, disentrifugasi dua kali pada 1500 rpm selama 10 menit, dan disuspensikan kembali dalam 500 rL buffer pengikat. Annexin V berlabel FITC (5 rL) dan propidium iodida.

Singkatan

GCLC glutamat-Sistein ligase-catalytic subunit

GCLM glutamat-Sistein ligase-catalytic modifier subunit

H2O2 hidrogen peroksida

HO-1 heme oksigenase 1

Keap1 Kelch ECH asosiasi protein 1

NQO1 NAD(P)H quinone oxidoreductase 1

Nrf2 faktor nuklir erythroid 2-faktor terkait 2

PhGs salidroside, acteoside, isoacteoside, dan echinacoside

Ros spesies oksigen reaktif

ZnPP seng protoporphyrin

Ekstrak Cistanche deserticola: PHG dari cistanche

Referensi

1. Matahari, A.Y.; Chen, Y.M. Stres oksidatif dan gangguan neurodegeneratif. J. Biomed. Sci. 1998, 5, 401-414. [CrossRef] [PubMed]

2. Maheshwari, A.; Mikro, M.M.; Aggarwal, A.; Sharma, R.K.; Nandan, D. Pathways terlibat dalam apoptosis sel germinal testis yang diinduksi oleh H2O2 secara in vitro. FEBS J. 2009,276, 870-881. [CrossRef] [PubMed]

3. Halliwell, B. Spesies oksigen reaktif dan sistem saraf pusat. J. Neurochem. 1992, 59,1609-1623. [CrossRef] [PubMed]

4. Richardson, JS; Subbarao, K.V.; Ang, L.C. Pada kemungkinan peran peroksidasi radikal bebas yang diinduksi zat besi dalam degenerasi saraf pada penyakit Alzheimer. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1992, 648, 326-327. [CrossRef] [PubMed]

5. Zhang, D.D. Studi mekanistik jalur pensinyalan Nrf2-Keap1. Obat Metab. Wahyu 2006, 38, 769-789. [CrossRef] [PubMed]

6. Itoh, K.; Tong, K.I.; Yamamoto, M. Mekanisme molekuler mengaktifkan jalur Nrf2-Keap1 dalam pengaturan respons adaptif terhadap elektrofil. Radic Gratis. Biol. Med. 2004, 36.1208-1213. [CrossRef] [PubMed]

7. Kong, A.N.; Owuor, E.; Yu, R.; Hebbar, V.; Chen, C.; Hu, R.; Mandlekar, S. Induksi enzim xenobiotik oleh jalur map kinase dan elemen respon antioksidan atau elektrofil (ARE/EpRE). Obat Metab. Wahyu 2001, 33, 255-271. [CrossRef] [PubMed]

8. Buendia, I.; Michalska, P.; Navarro, E.; Gameiro, I.; Egea, J.; Leon, R. Nrf2-ARE jalur: Target yang muncul terhadap stres oksidatif dan neuroinflamasi pada penyakit neurodegeneratif. Pharmacol. Ther. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]

9. Skibinski, G.; Hwang, V; Ando, D.M.; Memulaskan, A.; Lee, A.K.; Ravisankar, A.; Modan, S.; Finucane, M.M.; Lusuh, B.A.; Finkbeiner, S. Nrf2 mengurangi LRRK2- dan a-synuclein-induced neurodegeneration dengan memodulasi proteostasis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016, 114, 1165-1170. [CrossRef] [PubMed]

10. Jimenez, C.; Riguera, R. Phenylethanoid glikosida pada tanaman: Struktur dan aktivitas biologis. Rep. 1994, 11, 591-606. [CrossRef] [PubMed]

11. Georgiev, M.; Alipieva, K.; Orhan, I.; Abrashev, R.; Denev, P.; Angelova, M. Aktivitas penghambatan antioksidan dan kolinesterase Verbascum xanthophoeniceum Griseb. dan glikosida fenitoletanoidnya. Kimia Makanan 2011, 128, 100-105. [CrossRef] [PubMed]

12. Li, N.; Wang, J.; Ma, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Efek saraf dariCistanches HerbaTerapi pada Pasien dengan Penyakit Alzheimer/s Sedang. Komplemen Berbasis Evid. Altern. Med. 2015, 2015,103985. [CrossRef] [PubMed]

13. Liu, Y.L.; Dia, WJ; Mo, L.; Shi, M.F.; Zhu, Y.Y.; Pan, S.; Li, X.R.; Xu, Q.M.; Yang, S.L. Antimikroba, aktivitas anti-inflamasi dan toksikologi glikosida fenitoletanoid dari Monochasma savatieri Franch. mantan Maxim. J. Ethnopharmacol. 2013,149, 431-437. [CrossRef] [PubMed]

14. Dong, Q.; Yao, J.; Fang, J.N.; Ding, K. Karakterisasi struktural dan aktivitas imunologis dari dua polisakarida yang dapat diekstraksi air dingin dariCistanche deserticola Y. C. Ma. Karbohidrat. Res. 2007, 342.1343-1349. [CrossRef] [PubMed]

15. Xiong, L.; Mao, S.; Lu, B.; Yang, J.; Zhou, F.; Hu, Y.; Jiang, Y.; Shen, C.; Zhao, Y. Ekstrak Bunga Osmanthusfragrans dan Acteoside Melindungi Terhadap Penuaan yang Diinduksi d-Galaktosa dalam Model Tikus ICR. J. Med. Makanan 2016, 19, 54-61. [CrossRef] [PubMed]

16. Jiang, Y.; Mao, S.; Huang, W.; Lu, B.; Cai, Z.; Zhou, F.; Li, M.; Lou, T.; Zhao, Y. Profil Glikosida Fenilalethanoid dan Aktivitas Antioksidan Osmanthusfragrans Lour. Bunga oleh UPLC / PDA / MS dan Model Pencernaan Simulasi. J. Agric. Kimia Makanan 2016, 64, 2459-2466. [CrossRef] [PubMed]

17. Li, X.; Kamu, X.; Li, X.; Matahari, X.; Liang, Q.; Tao, L.; Kang, X.; Chen, J. Salidroside melindungi terhadap apoptosis yang diinduksi MPP+ dalam sel PC12 dengan menghambat jalur NO. Otak Res. 2011,1382, 9-18. [CrossRef] [PubMed]

18. Zhang, L.; Ding, W.; Matahari, H.; Zhou, Q.; Huang, J.; Li, X.; Xie, Y.; Chen, J. Salidroside melindungi sel PC12 dari apoptosis yang diinduksi MPP+melalui aktivasi jalur PI3K/Akt. Kimia Makanan Chem. 2012, 50, 2591-2597. [CrossRef] [PubMed]

19. Sheng, G.Q.; Zhang, J.R.; Pu, X.P.; Ma, J.; Li, C.L. Efek perlindungan verbascoside pada neurotoksisitas yang diinduksi ion 1-metil-4-fenilpiridinium dalam sel PC12. Eur. J. Pharmacol. 2002, 451,119-124. [CrossRef]

20. Wang, H.; Xu, Y.; Yan, J.; Zhao, X.; Matahari, X.; Zhang, Y.; Guo, J.; Zhu, C. Acteoside melindungi sel-sel SH-SY5Y neuroblastoma manusia terhadap cedera sel yang diinduksi beta-amiloid. Otak Res. 2009, 1283, 139-147. [CrossRef] [PubMed]

21. Min, D.; Jin, Y.Z.; Yong, J.; Zheng, B.L.; Yao, HW Echinacoside menyelamatkan sel-sel saraf SHSY5Y dari apoptosis yang diinduksi TNFa. Dagu. Pharmacol. Sapi. 2005, 505,11-18.

22. Zhao, Q.; Gao, JP; Li, WW; Cai, D.F. Neurotrophic dan neurorescue efek Echinacoside dalam subakut MPTP tikus model penyakit Parkinson. Otak Res. 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

23. Koo, K.A.; Dinyanyikan, S.H.; Taman, J.H.; Kim, S.H.; Lee, K.Y.; Kim, Y.C. Aktivitas saraf in vitro glikosida fenitoletanoid dari Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

24. Liu, Y.G.; Li, X.; Xiong, C.; Yu, B.; Pu, X.; Ye, X.S. Turunan glikosida fenitoletanoid sintetis sebagai agen saraf potensial. Eur. J. Med. Kimia 2015, 95, 313-323. [CrossRef] [PubMed]

25. Fu, G.; Pang, H.; Wong, Y.H. Glikosida fenitoletanoid yang terjadi secara alami: Prospek potensial untuk terapi baru. Curr. Med. Chem. 2008, 15, 2592-2613. [CrossRef] [PubMed]

26. Greene, LA; Tischler, A.S. Pembentukan garis klonal noradrenergik sel pheochromocytoma adrenal tikus yang merespons faktor pertumbuhan saraf. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1976, 73, 2424-2428. [CrossRef] [PubMed]

27. Liang, Q.N.; Sheng, Y.C.; Jiang, P.; Ji, L.L.; Xia, Y.Y.; Min, Y.; Wang, Z.T. Perbedaan sistem antioksidan glutathione pada hati tikus yang baru disapih dan muda dan keterlibatannya dalam hepatotoksisitas yang diinduksi isoline. Lengkungan Toksikol. 2011, 85, 1267-1279. [CrossRef] [PubMed]

28. Kobayashi, A.; Kang, M.; Okawa, H.; Ohtsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T.; Igarashi, K.; Yamamoto, M. Oxidative Stress Sensor Keap1 Berfungsi sebagai Adaptor Ligase E3 Berbasis Cul3 Untuk Mengatur Degradasi Proteasomal Nrf2. Mol. Biol. 2004,24, 7130-7139. [CrossRef] [PubMed]

29. Kornelius, C.; Crupi, R.; Calabrese, V; Graziano, A.; Milone, P.; Pennisi, G.; Radak, Z.; Calabrese, E.J.; Cuzzocrea, S. Cedera otak traumatis: Stres oksidatif dan neuroproteksi. Antioksid. Sinyal Redoks. 2013, 19, 836-853. [CrossRef] [PubMed]

30. Hou, Z.; Luo, W.; Matahari, X.; Hao, S.; Zhang, Y.; Xu, F.; Wang, Z.; Liu, B. Saline kaya hidrogen melindungi terhadap kerusakan oksidatif dan defisit kognitif setelah cedera otak traumatis ringan. Otak Res Banteng. 2012, 88, 560-565. [CrossRef] [PubMed]

31. Ansari, MA; Roberts, K.N.; Scheff, S.W. Perjalanan waktu stres oksidatif yang diinduksi memar dan protein sinaptik di korteks dalam model tikus TBI. J. Neurotrauma 2008, 25, 513-526. [CrossRef] [PubMed]

32. Kuang, R.; Matahari, Y.; Yuan, W.; Lei, L.; Zheng, X. Efek perlindungan echinacoside, salah satu glikosida fenitoletanoid, pada sitotoksisitas yang diinduksi H2O2 dalam sel PC12. Planta Med. 2009, 75, 1499-1504. [CrossRef] [PubMed]

33. Scapagnini, G.; Vasto, S.; Abraham, N.G.; Caruso, C.; Zella, D.; Fabio, G. Modulasi jalur Nrf2/ARE oleh polifenol makanan: Strategi neuroprotektif nutrisi untuk gangguan kognitif dan neurodegeneratif. Mol. Neurobiol. 2011, 44, 192-201. [CrossRef] [PubMed]

34. Kerr, F.; Sofolaadesakin, O.; Ivanov, D.K.; Gatliff, J.; Gomez, P.B.; Bertrand, H.C.; Martinez, P.; Callard, R.; Snoeren, I.; Cochem, H.M. Gangguan Keap1-Nrf2 langsung sebagai target terapi potensial untuk penyakit Alzheimer/s. PLoS Genet. 2017, 13, e1006593. [CrossRef] [PubMed]

35. Hansen, M.B.; Nielsen, S.E.; Berg, K. Pemeriksaan ulang dan pengembangan lebih lanjut dari metode pewarna yang tepat dan cepat untuk mengukur pertumbuhan sel / pembunuhan sel. J. Imunol. Metode 1989, 119, 203-210. [CrossRef]

36. Press, C. Virtual Screening dalam Drug Discovery; Crc Press: Boca Raton, FL, AMERIKA SERIKAT, 2005.

37. Muegge, I.; Martin, Y.C.; Hajduk, P.J.; Fesik, S.W. Evaluasi penilaian PMF dalam docking ligan lemah ke protein pengikat FK506. J. Med. Chem. 1999, 42, 2498—2503. [CrossRef] [PubMed]

38. Kuntz, ID; Blaney, J.M.; Oatley, S.J.; Langridge, R.; Ferrin, T.E. Pendekatan geometris untuk interaksi makromolekul-ligan. J. Mol. Biol. 1982,161, 269-288. [CrossRef]

39. MD, E.; Murray, C.W.; Auton, T.R.; Paolini, G.V.; saya, R.P. Fungsi penilaian empiris: I. Pengembangan fungsi penilaian empiris yang cepat untuk memperkirakan afinitas pengikatan ligan dalam kompleks reseptor. J. Comput.-Dibantu Mol. Des. 1997,11,425-445.

© 2018 oleh penulis. Pemegang Lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah syarat dan ketentuan lisensi Creative Commons Attribution (CC BY) (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).