MicroRNA Berasal dari Eksosom Susu-2478 Menekan Melanogenesis Melalui Jalur Akt-GSK3

Kontak:{0}}/ WhatsApp: 008618081934791

In-Seon Bae dan Sang Hoon Kim

Abstrak:Eksosom berpartisipasi dalam komunikasi antar sel dengan mentransfer molekul dari donor ke sel penerima. Eksosom ditemukan dalam berbagai cairan tubuh, termasuk darah, urin, cairan serebrospinal, dan susu. Eksosom susu mengandung banyak molekul microRNA endogen. MicroRNA adalah RNA non-coding kecil dan memiliki peran penting dalam proses biologis. Fungsi biologis spesifik dari eksosom susu tidak dipahami dengan baik. Dalam penelitian ini, kami menyelidiki efek darimilkexosomespada produksi melanin dalam sel melanoma dan melanosit. Kami menemukan bahwaeksosom susu menurunkandungan melanin, aktivitas tirosinase, dan ekspresi gen terkait melanogenesis dalam sel melanoma dan melanosit. MiR spesifik sapi-2478 dalam eksosom menghambat produksi melanin. Kami menemukan bahwa Rap1a adalah gen target langsung miR-2478 dalam sel melanoma dan melanosit. Ekspresi berlebih MiR-2478menurunkan ekspresi Rap1a, yang menyebabkan produksi melanin menurun dan ekspresi gen terkait melanogenesis. Penghambatan ekspresi Rap1a menurunmelanogenesismelalui jalur sinyal Akt-GSK3. Hasil ini mendukung peran miR-2478 yang berasal dari milkexosomes sebagai pengaturmelanogenesismelalui penargetan langsung Rap1a. Hasil ini menunjukkan bahwa eksosom susu dapat menjadi bahan kosmetik yang berguna untuk ditingkatkanpemutih.

Kata kunci: melanogenesis;susu eksosom; miR{}; Rap1a

tanaman herbaladalah bahan penghambat melanin

1. Perkenalan

Cosmeceutical adalah kata majemuk yang menggabungkan kosmetik dan farmasi dan mengacu pada kosmetik dengan bahan fungsional yang memiliki efek medis [1]. Di masa lalu, kulit diperbaiki melalui prosedur dermatologis, tetapi baru-baru ini, minat pada kosmetik telah meningkat karena keinginan konsumen untuk mendapatkan efek ini melalui kosmetik. Industri kosmetik juga telah menunjukkan peningkatan minat dalam beberapa tahun terakhir dalam penggunaan bahan kosmetik baru [ 2]. Kosmetik fungsional termasuk produk yang membantu memutihkan kulit dengan mencegah pengendapan melanin pada kulit.

Melanin, elemen penting yang menentukan warna kulit dan rambut, melindungi kulit dari sinar ultraviolet [3]. Namun, pembentukan melanin yang berlebihan menyebabkan warna kulit tidak merata, misalnya bintik-bintik dan bintik-bintik [4]. Faktor transkripsi mikroftalmia (MITF) adalah pengatur utama perkembangan melanosit. Tirosinase (TYR) adalah enzim yang paling penting dari sintesis melanin. Proses sintesis melanin diinduksi oleh aktivasi TYR melalui MITF, yang merupakan enzim penting yang terlibat dalam tahap awal proses sintesis melanin dan menggunakan bentuk-L dari tirosin atau DOPA sebagai substrat untuk membentuk melanin [5].

MicroRNAs (miRs) adalah RNA non-coding pendek yang berpartisipasi dalam banyak proses biologis dengan mengendalikan ekspresi gen pasca-transkripsi [6]. Studi juga mengungkap kontrol biosintesis melanin oleh microRNAs. Misalnya, telah dilaporkan bahwa miR-143-5p menargetkan gen Tak1 dan mengurangi ekspresi MITF, sehingga menghambat sintesis melanin [7]. MiR-125b, regulator negatif darimelanogenesis, telah ditunjukkan untuk mengatur gen pigmentasi SH3BP4 [8], dan miR-675 dalam eksosom yang disekresikan dari keratinosit menghambatmelanogenesisdengan menargetkan MITF [9].

Eksosom adalah vesikel yang dibatasi membran berukuran 30-200 nm dan mengandung DNA, RNA, dan peptida [10]. Komponen internal eksosom dapat dengan aman mengirimkan informasi ke sel yang berdekatan atau jauh tanpa terdegradasi oleh enzim dalam cairan biologis, sehingga mempengaruhi lingkungan mikro di sekitar berbagai sel [11].Eksosom susuadalah vesikel dekstraseluler turunan susu yang stabil dalam proses pencernaan manusia [12]. Eksosom yang diekstraksi dari susu sapi tidak hanya mengandung beberapa protein seperti kasein dan laktoglobulin, tetapi juga mikroRNA, yang bertindak sebagai muatan [13-15]. Susu sapi mengandung mikroRNA terkait kekebalan seperti miR-15b, miR-27b, miR-34a, dan miR-10. MikroRNA ini terutama berlimpah di kolostrum [16].

Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa komponen susu menghambatmelanogenesisdalam melanosit; misalnya, protein seperti -laktoglobulin dan -kasein dalam susu mengatur melanogenesis [17,18]. Supernatan susu fermentasi Lactobacillus helveticus NS8-telah ditemukan dapat menghambat kerusakan UV dan hiperpigmentasi pada kulit [19]. Namun, belum ada laporan apakah microRNA dalam susu sapi terlibat dalam kulitpemutih, meskipun 79 microRNA ada disusu eksosom[13]. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, kami menyelidiki apakah eksosom susu yang mengandung microRNAs menghambat sintesis melanin pada sel melanoma tikus dan manusia dan melanosit.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Budaya sel

Sel melanoma tikus B16F10 dikultur dalam media Eagle yang dimodifikasi Dulbecco (DMEM, Hyclone, Logan, UT, USA). Sel melanoma MNT-1 manusia ditumbuhkan di Minimum Essential Medium (MEM, Hyclone). Semua media dilengkapi dengan 10 persen serum fetalbovine (FBS, Hyclone, USA) dan 1 persen larutan penisilin-streptomisin. Melanosit epidermis manusia normal (NHEM, PromoCell, Heidelberg, Jerman) pada bagian nomor 5 atau 6 dipertahankan dalam media pertumbuhan melanosit (PromoCell). Sel-sel ini diinkubasi pada suhu 37 C dalam kondisi atmosfer yang dilembabkan yang mengandung 5 persen CO2.

2.2. Pemurnian Eksosom

Susu komersial (1 mL) disentrifugasi pada 2000× g selama 10 menit, kemudian supernatan disentrifugasi pada 10,000× g selama 10 menit. Supernatan susu dilewatkan melalui filter a0,45 m dan kemudian filter 0,2 m. Solusi yang dihasilkan (300 L) dicampur dengan saline buffer fosfat (PBS) dan 300 L larutan presipitasi eksosom Exoquick (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, USA) dan diinkubasi selama 30 menit. Campuran disentrifugasi pada 10.000 × g selama 30 menit untuk mendapatkan pelet eksosom, yang selanjutnya disuspensikan kembali dalam PBS. Distribusi ukuran eksosom ditentukan pada Zetasizer Nano ZS 90 (Malvern Instruments, Almelo, Prancis). Eksosom disimpan pada suhu -80 C untuk digunakan lebih lanjut.

2.3. Mikroskop Cryo-Electron

Sebanyak 3 L alikuot suspensi eksosom segar diadsorbsi ke kisi berlapis karbon berlubang-pijar (2/2-3 C C-flat; Protochips, Morrisville, NC, USA), yang kemudian disaring selama 3 detik pada 4 C dan dibekukan menggunakan Vitrobot Mark IV (Thermo FisherScientific, Lafayette, CO, USA). Grid disimpan dalam nitrogen cair, kemudian dipindahkan ke pemegang spesimen cryo Gatan 626 (Gatan, Pleasanton, CA, USA). Sampel dicitrakan pada perbesaran nominal 29,000× dalam mikroskop cryo-electron (FEI Tecnai F20 TEM,FEI, Hillsboro, OR, USA), dilengkapi dengan pistol emisi medan standar (s-FEG) dan kamera K2Summit (Gatan) pada tegangan percepatan 200 kV.

2.4. Uji Viabilitas Sel (Pengujian WST)

Sel melanoma (B16F10, MNT-1) dan melanosit manusia (NHEM) diunggulkan pada 4 × 103 sel/sumur di 96-piring sumur dan diperlakukan dengansusu eksosom(20 dan 50 g/mL) atau mimikroRNA (RNA untai ganda oligonukleotida) untuk setiap percobaan. Pada titik waktu yang ditunjukkan, viabilitas sel diukur dengan menggunakan kit uji viabilitas sel yang ditingkatkan EZ-CyTox (Layanan Lab Daeil, Seoul, Korea) sesuai dengan instruksi pabrik. Absorbansi diukur pada 450 nm pada spektrofotometer microplate Vmax (Molecular Devices, San Jose, CA, USA).

2.5. Pengukuran Kandungan Melanin

Sel melanoma dan melanosit diobati dengansusu eksosom(20 dan 50 g/mL) selama 48 jam. Setelah dicuci dua kali dengan PBS dingin, sel disentrifugasi pada 2500 × g selama 10 menit. Pelet sel disuspensikan kembali pada 90 C selama 30 menit dalam 1 N NaOH yang mengandung 10 persen dimetil sulfoksida. Kandungan melanin total diukur pada microplatespectrophotometer Vmax (Molecular Devices) pada 405 nm.

2.6. Uji Aktivitas Tirosinase

Sel melanoma dan melanosit diinkubasi dengansusu eksosomselama 48 jam. Sel-sel dicuci dua kali dengan PBS dan dilisiskan dengan PBS yang mengandung 1 persen Triton X-100 dan 0.1 mMphenylmethanesulfonyl fluoride. Setelah sentrifugasi, supernatan dikumpulkan dan dipindahkan ke pelat sumur 96-. Setelah penambahan 0.1 ML-3,4-dihidroksifenilalanin, sampel diinkubasi pada suhu 37 C selama 1 jam. Aktivitas tirosinase diukur berdasarkan absorbansi pada 475 nm menggunakan spektrofotometer lempeng mikro (Molecular Devices).

tanaman herbal

2.7. Jaringan Kulit Manusia

Setara epidermis yang mengandung melanosit (MelanoDerm, MEL-300B) diperoleh dari MatTek (Ashland, MA, USA) dan dipertahankan dalam medium EPI-100-NMM-113-.Eksosom susudiaplikasikan pada jaringan MelanoDerm pada Hari 1, 3, 7, 9, dan 12.PBS digunakan sebagai kontrol negatif. Jaringan difoto pada Hari 3, 7, 9, 12, dan 14. Pigmentasi diukur dengan membandingkan perubahan nilai L (Adobe PhotoshopCC 2015). Kandungan melanin dalam jaringan kulit manusia diukur pada Hari ke-14 dengan uji Solvablemelanin. Secara singkat, jaringan MelanoDerm dilarutkan menggunakan Solvable (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) dan diinkubasi semalaman pada suhu 60 C. Sampel divorteks kemudian disentrifugasi pada 16.500 × g selama 5 menit. Supernatan dipindahkan ke wells dari 96-well plate dan dibaca pada 490 nm oleh spektrofotometer.

3. Hasil

3.1. Karakterisasi Eksosom yang Terisolasi dari Susu

Untuk menyelidiki karakteristik eksosom yang diekstraksi dari susu sapi, pertama-tama kami mengukur ukuran eksosom dengan hamburan cahaya dinamis. Akibatnya, eksosom yang diekstraksi dari susu ditemukan memiliki diameter 80-190 nm (Gambar 1A). Untukmilkexosomapemurnian, campuran supernatan Exoquick-susu disentrifugasi untuk mendapatkan pelet eksosom susu. Ekspresi CD9, TSG101, dan HSP70 sebagai penanda eksosom terdeteksi dalam pelet, tetapi protein ini tidak ada dalam supernatan (Gambar 1A). Selain itu, morfologi bulat dan ukuran eksosom dikonfirmasi oleh mikroskop cryo-elektron (Gambar 1A). 1B). Eksosom ditemukan memiliki bentuk bulat dengan diameter hingga 200 nm. Selanjutnya, kami menyelidiki apakah eksosom yang diekstraksi dari susu diambil oleh sel. Sel tikus B16F10 diinkubasi dengansusu eksosomdiberi label dengan pewarna fluoresen lipofilik PKH26. Akibatnya, kami mengamati bahwa eksosom berlabel ada di dalam sel (Gambar S1).

3.2. Aktivitas Tirosinase dan Produksi Melanin Ditekan oleh Eksosom Susu di Sel B16F10

Selanjutnya, kami memeriksa efek eksosom yang diekstraksi pada viabilitas sel. Seperti yang digambarkan pada Gambar 2A, kami mengungkapkan bahwa tidak ada perbedaan yang signifikan dalam viabilitas sel, terlepas dari konsentrasi eksosom.

Untuk menyelidiki kemungkinan sel kulit-pemutihefek darisusu eksosom, sel-sel diperlakukan dengan eksosom susu. Kami menemukan bahwa aktivitas tirosinase dalam sel yang terpapar milkexosom pada konsentrasi 20 atau 50 g/mL masing-masing berkurang 43 persen dan 59 persen (Gambar 2B). Karena penurunan aktivitas enzim tirosinase dapat menghambat biosintesis melanin, kandungan melanin diukur setelah perlakuan dengan eksosom susu. Kami mencatat penghambatan sintesis melanin dalam sel yang terpaparsusu eksosom(20 atau 50 g/mL) masing-masing sebesar 45 persen dan 55 persen (Gambar 2C). Selanjutnya, ekspresi mRNA MITF menurun seiring dengan peningkatan konsentrasi eksosom susu. Tingkat mRNA MITF menurun 59 persen dalam sel yang diobati dengan 20 g/mL eksosom dan 84 persen dalam sel yang diobati dengan 50 g/mL eksosom, masing-masing (Gambar 2D). Ekspresi mRNA tirosinase (TYR) juga berkurang sebesar 49 persen dan 76 persen dalam sel yang terpapar konsentrasi eksosom ini (Gambar 2D). Kadar protein MITF dan tirosinase juga menurun seiring dengan konsentrasi susueksosommeningkat (Gambar 2E). Hasil ini menunjukkan bahwa eksosom susu menghambat melanogenesis dalam sel tikus B16F10.

3.3. MiR Spesifik Sapi-2478 dari Eksosom Susu Menekan Melanogenesis

Untuk menentukan apakah miR-2478 berasal darisusu eksosomlangsung mempengaruhi melanogenesis, inhibitor miR-2478 ditransfusikan ke dalam sel yang terpapar milkexosom (50 g/mL). Dengan adanya eksosom susu, sel B16F10 yang ditransfeksi dengan inhibitor miR-2478 menunjukkan aktivitas tirosinase yang secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan yang di kontrol (Gambar 4A). Kandungan melanin juga lebih tinggi pada sel yang diobati dengan inhibitor miR-2478 daripada di sel kontrol (Gambar 4B). Ekspresi mRNA MITF adalah –2.5-kali lipat lebih tinggi pada sel yang diobati dengan inhibitor miR 2478 daripada di sel kontrol, dan ekspresi mRNA TYR adalah –2-kali lipat lebih tinggi ketika miR-2478 dihambat (Gambar 4C ). Tingkat protein MITF dan TYR juga pulih dalam sel yang terpaparsusu eksosomsetelah sel-sel ini ditransfeksi dengan inhibitor miR-2478 (Gambar 4D). Hasil ini menunjukkan bahwa miR-2478 yang berasal dari eksosom susu secara langsung menekan melanogenesis dalam sel melanoma tikus.

3.4. Eksosom Susu Menekan Melanogenesis melalui Jalur Akt-GSK3

Selanjutnya, kami memeriksa bagaimana caranyasusu eksosommengaturmelanogenesisuntuk mengidentifikasi jalur yang terpengaruh yang relevan dalam sel melanoma. Meskipun tidak diketahui apakah Rap1a secara langsung mengontrol melanogenesis, telah dilaporkan bahwa Rap1a menghambat sel kanker fosforilasi Akt [20]. Atas dasar informasi ini, kami menyelidiki apakah Rap1a memodulasi jalur Akt untuk dipromosikan.

Dalam Akt-terkaitmelanogenesisjalur, Akt yang diaktifkan menginduksi fosforilasi Gsk3 di Ser9 dan dengan demikian menonaktifkannya; perubahan ini menghambat aktivitas transkripsi MITF dan menurunkan regulasi tirosinase [21,22]. Dalam penelitian ini, kami mengevaluasi ekspresi Akt dan GSK3 dalam sel yang diobati dengan Rap1a siRNA. Dalam sel-sel ini, aktivasi fosforilasi Akt meningkat dan jumlah pGSK3 juga meningkat (Gambar 7A). GSK3 dinonaktifkan oleh aktivasi Akt dengan cara yang bergantung pada konsentrasi dalam sel yang diobati dengan 20 atau 50 g/mLsusu eksosom(Gambar 7B). Tingkat protein Akt dan GSK3 dalam sel yang diperlakukan dengan miR-2478mimik konsisten dengan hasil di atas (Gambar 7C). Selanjutnya, kami menguji apakah miR-2478dari eksosom susu memengaruhi jalur Akt-GSK3. Dengan adanya eksosom susu, fosforilasi protein Akt dan GSK3 lebih rendah pada sel yang diobati dengan inhibitor miR-2478 (Gambar 7D). Selain itu, pengobatan dengan inhibitor AKT GSK690693meningkatkan ekspresi gen yang terkait denganmelanogenesisdalam sel yang diperlakukan dengan eksosom susu. (Gambar 7E). Temuan ini berarti bahwa miR-2478 disusu eksosomdownregulatesRap1a dan menekan melanogenesis melalui jalur Akt-GSK3.

cistanche herbalefek pemutihan pada kulit menjadi anti oksidasi

3.8. Eksosom Susu Menghambat Melanogenesis pada Sel Melanoma Manusia, Melanosit, dan Jaringan MelanoDerm

Mengingat bahwasusu eksosomterhambatmelanogenesisdalam sel tikus, kami selanjutnya menentukan apakah eksosom susu sama efektifnya dalam sel manusia. Pertama, viabilitas sel melanoma manusia MNT-1 dan melanosit manusia NHEM diperiksa setelah inkubasi dengan 20 atau 50 ug/mL eksosom susu. Seperti yang disajikan pada Gambar 8A, tidak ada perbedaan dalam viabilitas. Aktivitas tirosinase dihambat oleh masing-masing 43 persen dan 85 persen, dalam sel MNT-1 yang terpapar 20 ug/mL atau 50 ug/mL eksosom susu (Gambar 8B). NHEM juga berkurang masing-masing sebesar 34 persen dan 66 persen, melalui pengobatan dengan 20 ug/mL atau 50 ug/mL eksosom susu (Gambar 8B). Selanjutnya, kandungan melanin diukur dalam sel MNT-1 dan NHEM yang terpapar eksosom susu. Akibatnya, sintesis melanin dalam sel MNT-1 terkena 20 ug/mL atau 50 ug/mLsusu eksosommasing-masing dihambat oleh 37 persen dan 58 persen, dan dalam sel NHEM, perlakuan eksosom susu menghambat sintesis melanin masing-masing sebesar 36 persen dan 62 persen (Gambar 8C). Selain itu, efek pencerah kulit darisusu eksosomdikonfirmasi lebih lanjut menggunakan jaringan kulit manusia. Setelah perawatan dengan eksosom susu di jaringan manusia, relatifpemutih efek diamati pada Hari 3, 9, 12, dan 14. Hasilnya, kami menemukan bahwa warna kulit pada jaringan yang terpapar eksosom susu tampak lebih cerah daripada di jaringan kontrol (Gambar 8D). Derajat pigmentasi dihitung sebagai nilai L, yang merupakan nilai yang mewakili kecerahan. Pigmentasi berkembang lebih lambat pada jaringan kulit yang diobati dengan eksosom susu daripada di jaringan kulit kontrol (Gambar 8D). Kelompok eksperimen diberi perlakuansusu eksosommenunjukkan ukuran partikel melanin yang lebih kecil dan jumlah pigmen melanin yang rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar 8E). Sebagai hasil pengukuran kandungan melanin setelah 14 hari eksosom susu menghambat sintesis melanin dalam jaringan manusia (Gambar 8F). Oleh karena itu, kami menyimpulkan bahwa milkexosom menghambatmelanogenesisdalam sel dan jaringan manusia.

4. Diskusi

Studi tentang pengaturan eksosommelanogenesistelah melaporkan bahwa eksosom yang berasal dari keratinosit memiliki efek memutihkan. Melanosit dan keratinosit sekitarnya secara fungsional terhubung untuk membentuk unit melanin di epidermis kulit [23,24]. Faktor larut yang diturunkan dari keratinosit mengatur melanogenesis melanosit tetangga. Eksosom yang disekresikan dari keratinosit normal mendorong melanogenesis dengan meningkatkan ekspresimelanogenesisprotein terkait [23-25]. Selain itu, dalampemutihpenelitian menggunakan eksosom yang diekstraksi dari sel, baru-baru ini dilaporkan bahwa eksosom yang diekstraksi dari sel punca/stroma yang diturunkan dari jaringan adiposa menunjukkan kemanjuran pencerah kulit pada sel melanoma tikus [26]. Ada juga laporan bahwa eksosom yang diekstraksi dari tanaman memiliki efek memutihkan. Vesikel ekstraseluler yang diekstraksi dari daun dan batang tanaman D. morbifera menunjukkan efek anti-melanogenik pada sel melanoma tikus dan kulit manusia yang sehat [27]. Dalam penelitian kami, efek pemutihan eksosom yang diturunkan dari susu diselidiki.

Dibandingkan dengan eksosom yang diekstraksi dari plasma darah atau cairan kultur, eksosom yang berasal dari susu memiliki keunggulan tidak hanya memiliki eksosom dalam jumlah besar yang dapat diekstraksi per unit volume tetapi juga harganya yang murah [26,27]. Karenasusu eksosommemiliki komposisi kimia yang mirip dengan membran sel, mereka menunjukkan imunogenisitas dan sitotoksisitas yang lebih rendah dan memiliki biokompatibilitas yang tinggi [28,29]. Baru-baru ini, ketika eksosom susu diumpankan ke tikus model kolitis yang diinduksi DSS (dextran sulfate sodium salt), ekspresi sitokin proinflamasi IL-6 dan TNF menurun dibandingkan dengan kelompok kontrol, sehingga mengurangi peradangan dan memperbaiki enteritis nekrotikans [30, 31]. Selain itu, konsumsi eksosom susu pada model tikus dengan penyakit osteoporosis meningkatkan artritis dengan meningkatkan kepadatan tulang dan mengurangi sitokin pro-inflamasi [32,33]. Sejauh ini, efek eksosom susu telah difokuskan pada fenomena imunologis yang mengurangi sitokin proinflamasi, dan pada perkembangan tulang, seperti pengurangan enteritis dan perbaikan osteoporosis. Dalam penelitian ini selain cara pengambilansusu eksosom, ditegaskan bahwa ketika dioleskan ke kulit, itu efektif di kulitpemutih. Hal ini menunjukkan bahwa dapat diterapkan untuk pengobatan berbagai penyakit dengan meningkatkan aktivitas fisiologis menggunakan eksosom susu di masa depan.

Meskipun penelitian ini menyarankan bahwasusu eksosommenghalangimelanogenesis, sudah diketahui bahwa protein whey seperti kasein, -laktoglobulin, dan -laktalbumin memiliki efek memutihkan. -laktoglobulin menurunkan aktivitas tirosinase pada melanosit manusia [18], dan k-kasein menghambat melanogenesis pada sel melanoma B16 tikus [17]. Menariknya, banyak dari komponen ini juga ada dalam eksosom susu. Menurut hasil proteomer dari eksosom susu, kasein, -laktoglobulin, dan -laktalbumin didistribusikan dalam eksosom [15,34,35]. Eksosom susu mengandung microRNAs serta protein. Sebagai hasil dari microarray miRNA menggunakan eksosom susu oleh Izumi dan rekan, miR-2478, miR-1777b,miR-1777a, let-7b, dan miR{{16 }} sangat terdistribusi dalam eksosom susu [13]. Dalam penelitian ini, dengan pengecualian miR-2478, di antara microRNA ini, miR-1777b, miR-1777a,let-7b, dan miR-1224 menunjukkan tidak ada perbedaan aktivitas tirosinase dari kelompok kontrol (Gambar S2). miR-2478 paling melimpah disusu eksosomdan penurunan aktivitas tirosinase. Namun, ekspresi gen MITF dan TYR terkait pemutihan menurun lebih banyak pada sel yang diobati dengansusu eksosomdaripada di sel yang diperlakukan dengan miR-2478mimic saja. Hasil ini menunjukkan bahwa beberapa komponen, termasuk microRNA dalam milkexosom, terlibat dalampemutihtindakan.

Sebagian besar microRNA dalam eksosom susu mengerahkan fungsi biologis dengan menghambat ekspresi gen target dalam sel penerima. Dalam penelitian ini, miR-2478 juga menghambat sintesis melanin dengan menargetkan Rap1a sebagai gen target. Meskipun mereka bukan microRNA yang diturunkan dari susu, microRNA yang mengontrol ekspresi gen terkait pemutihan telah dilaporkan. Ketika miR-27a-3p mimik manusia diterapkan pada melanosit tikus, ini menghambat ekspresi Wnt3a dan dengan demikian menghambat sintesis melanin [36], dan miR-218 ektopik menghambat aktivitas TYR dengan mengurangi ekspresi MITF dalam melanosit melanoma murine [37]. miR-203 mempromosikanmelanogenesismelalui jalur CREB1/MITF/Rab27 dengan menargetkan Kif5b pada melanoma [38]. Ada 79 microRNA dalam eksosom susu

mikroRNA disusu eksosomberasal dari sapi [13]. Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai aktivitas fisiologis eksosom susu.

5. Kesimpulan

Temuan kami menunjukkan bahwasusu eksosomadalah kandidat untuk agen anti-melanogenik yang mengurangi pigmentasi dengan menghambat ekspresi gen terkait melanin (Gambar 10). Pada sel melanoma dan melanosit, eksosom susu menunjukkan penghambatan TYR dan pengurangan kandungan melanin dibandingkan dengan kontrol negatif. Selain itu, efek ini dimediasi oleh miR-2478 darisusu eksosom. Oleh karena itu, eksosom susu mungkin berguna untuk pengembangan fungsionalpemutihkosmetik dengan sitotoksisitas rendah.

cistancheefek pemutihan pada kulit menjadi anti oksidasi