Meta-analisis Hasil Kuantifikasi NAD(P)(H) Menunjukkan Variabilitas di Seluruh Jaringan Mamalia
Jun 01, 2023
Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD plus ) memainkan peran penting dalam metabolisme energi dan jalur pensinyalan yang mengendalikan fungsi seluler penting. Itupeningkatan minat pada NAD plus metabolismeDanNAD plus -terapi penguattelah memperkuat perlunya NAD plus kuantifikasi yang akurat. Untuk memeriksa ukuran NAD(P)(H) yang dipublikasikan di seluruh jaringan mamalia, kami melakukan ameta-analisis dari data yang ada. Pencarian basis data Ovid MEDLINE mengidentifikasi artikel dengan hasil kuantifikasi NAD(P)(H) yang diperoleh dari jaringan mamalia yang diterbitkan antara tahun 1961 dan 2021. Kami menyaring 4890 catatan dan mengekstraksi data kuantitatif, sertametode kuantifikasi, kondisi pra-analitik, dan karakteristik subjek. Konsentrasi NAD(P)(H) fisiologis yang diekstrak dalamberbagai tisudari tikus, tikus, dan manusia, mengungkapkan variabilitas antar dan intra-metode yang penting yang diperluas ke publikasi terbaru. Ini menyoroti potensi yang relatif buruk untuk analisis lintas-eksperimental untuk data kuantitatif NAD(P)(H) dan pentingnya standardisasi untuk metode kuantifikasi NAD(P)(H) danprosedur pra-analitikuntuk masa depan praklinis danstudi klinis.
Klik Di Sini Untuk Mendapatkan Sifat Anti-Oksidasi Cistanche dan Produk Anti-Penuaan
Nicotinamide adenine dinucleotide memainkan peran ganda sebagai areduksi-oksidasi (redoks)ko-enzim, dalam bentuk teroksidasi (NAD(P) plus ) danbentuk tereduksi (NAD(P)H)., dan sebagaico-substrat (NAD(P) plus ) untuk enzim yang terlibat dalam deasilasi1, mono- dan poli-ADP-ribosilasi2,3, dan pembuatan pembawa pesan kedua berbasis adenin4–7. Rasio Te NAD(P) plus /NAD(P)H merupakan indikator penting dari keadaan redoks intraseluler dan memainkan peran penting dalam pengaturan jalur metabolisme utama8,9. Sebagai contoh, NAD plus sangat penting untuk glikolisis, bersama dengan siklus asam trikarboksilat (TCA), untuk memberikan ekuivalen pereduksi selama pembentukan adenosin trifosfat (ATP), sumber energi utama untuk sel8,9. Ketika NAD plus terbatas, ia juga dapat diregenerasi dari NADH melalui fermentasi piruvat untuk menghasilkan laktat dalam sel mamalia, sehingga mempertahankan keseimbangan redoks seluler25. NAD plus dan NADH juga dapat difosforilasi menjadi NADP dan NADPH, masing-masing, oleh NAD plus Kinases (NADKs)10,11. NADPH sangat penting untuk biosintesis reduktif, transduksi sinyal, respons antioksidan seluler, dan khususnya, reduksi glutathione12–14. Dalam sitosol, NADP plus direduksi menjadi NADPH oleh glukosa-6-fosfat dehidrogenase dan 6-fosfoglukonat dehidrogenase dari jalur pentosa fosfat (PPP), di antara reaksi lainnya13. Sedangkan di mitokondria, produksi NADPH didukung oleh berbagai reaksi, termasuk reaksi yang bergantung pada aktivitas enzim nicotinamide nucleotide transhydrogenase (NNT) dan isocitrate dehydrogenases (IDH2). Akibatnya, status NAD(P)(H) telah terbukti memengaruhi pensinyalan dan metabolisme sel, homeostasis energi, biogenesis mitokondria, respons stres oksidatif, serta pemeliharaan dan perbaikan DNA16-18. Selanjutnya, sejak perkembangan penyakit yang berkaitan dengan usia, seperti obesitas19, penyakit hati berlemak non-alkohol20,21, neurodegenerasi22, penyakit mitokondria23 dan kardiovaskular24, dan atrofi otot atau distrofi25, telah dikaitkan dengan perubahan pada NAD plus metabolit terkait, pendekatan ditujukan untuk mempertahankan NAD plus homeostasis saat ini sedang diselidiki.
Di luar transisi redoks yang umum, NADP plus dapat dikonsumsi dengan menukar gugus nikotinamidnya dengan asam nikotinat dalam reaksi yang dikatalisis oleh sintase cADPR, seperti CD38, untuk membentuk NAADP pembawa pesan kedua, yang terlibat dalam mobilisasi kalsium, sekresi hormon, dan sel imun. proliferasi6,7,26. NAD plus juga dapat dikonsumsi saat bertindak sebagai ko-substrat untuk membentuk nicotinamide (NAM), yang dapat digunakan sebagai substrat untuk meregenerasi NAD plus melalui jalur penyelamatan NAM. NAM juga dapat dimetilasi menjadi 1-metil NAM (meNAM), yang selanjutnya dapat dioksidasi menjadi produk degradasi N1-metil-2-piridon-5-karboksamida (2py) dan N1-metil-4-piridon-3-karboksamida (4py). Pada akhirnya, katabolit termetilasi dapat dibersihkan dari tubuh melalui urin27,28. Kumpulan NAD plus juga dapat dikurangi dengan konsumsi NADP plus melalui reaksi pertukaran basa untuk pembentukan pembawa pesan kedua NAADP14. Oleh karena itu, mempertahankan kumpulan NAD plus membutuhkan biosintesis melalui jalur Preiss-Handler (dimulai dengan molekul vitamin B3 niasin (NA; asam nikotinat) yang umum), jalur biosintesis de novo (dimulai dengan asam amino triptofan (Trp)) atau regenerasi dari konversi NAM melalui jalur penyelamatan ke NMN lalu ke NAD plus . Akhirnya, jalur penyelamatan juga penting untuk biosintesis NAD plus dari nicotinamide riboside (NR), bentuk alternatif vitamin B3 yang ditemukan dalam makanan, mengikuti fosforilasinya oleh nicotinamide riboside kinase menjadi NMN dan kemudian diubah menjadi NAD plus melalui jalur penyelamatan. .
Oleh karena itu, memahami dinamika NAD plus metabolom menjadi penting dan pada akhirnya membutuhkan kuantifikasi metabolit yang ketat untuk lebih memahami fux NAD plus metabolit selama fisiologi normal, atau dengan perkembangan penyakit atau penuaan yang sehat. Gambaran yang jelas tentang perubahan ini sangat penting untuk menghubungkan perubahan dalam NAD plus metabolisme ke reaksi enzimatik atau redoks hilir, yang memegang kunci perubahan fenotipe jaringan. Mengingat sejumlah besar data kuantitatif yang dilaporkan sebelumnya tentang NAD plus metabolit pada mamalia, termasuk semakin banyak laporan pada manusia, penting dan tepat waktu untuk meringkas perubahan ini selama kesehatan dan penyakit. Sejumlah penelitian telah meneliti komponen NAD plus metabolom pada hewan pengerat dan manusia di bawah kondisi metabolisme, usia, dan penyakit yang berbeda, namun bergantung pada metode yang berbeda untuk persiapan atau kuantifikasi sampel. Persiapan sampel penting untuk metabolit yang terlibat dalam reaksi redoks karena potensi degradasi dan interkonversi dalam kondisi tertentu29,30. Untuk kuantifikasi, kromatografi cair yang dipadukan dengan spektrometri massa (LC-MS) dan spektrometri resonansi magnetik (MRS) dianggap sebagai metode yang sensitif dan spesifik, sementara pengujian siklus enzim lebih umum. Metode LC-MS kuantitatif memerlukan inklusi kontrol kualitas yang komprehensif untuk masing-masing metabolit yang diukur dan untuk efek matriks keseluruhan sampel, efek yang menjelaskan respons spektrometri massa yang bervariasi untuk analit yang diberikan ketika diukur dalam larutan yang berbeda. Tanpa kontrol ini, LC-MS paling baik bersifat semi-kuantitatif. Dalam penelitian ini, kami mengidentifikasi variabilitas yang cukup besar dalam pengukuran NAD(P)(H) di seluruh penelitian hewan pengerat dan manusia, menekankan perlunya metode pelaporan yang tepat dan pemrosesan sampel standar serta protokol analitik. Secara keseluruhan, kumpulan data NAD(P)(H) yang sebanding di seluruh studi diperlukan untuk interpretasi yang berarti dari data yang ada dan yang akan datang di bidang NAD plus biologi.
Hasil
Meta-analisis metode kuantifikasi umum, bersama dengan spesies, jenis kelamin, dan jaringan dipelajari.
Secara historis, metode awal yang digunakan untuk kuantifikasi NAD(P)(H) bergantung pada sifat spektrofotometri atau fluorometri dari metabolit ini34,35. Baru-baru ini, metode siklus enzim digabungkan dengan deteksi spektrofotometri atau fluorometrik lebih umum digunakan untuk membedakan kadar koenzim NAD(P)(H)36–38. Meningkatnya kebutuhan akan sensitivitas dan resolusi tinggi dalam kuantifikasi ko-enzim ini, bersama dengan kebutuhan untuk mengukur metabolit terkait NAD plus lainnya, mengarah pada penggunaan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dan teknik LC-MS. Dari pendekatan ini, LC-MS telah menjadi metode yang lebih disukai, karena spektrometri massa yang dikombinasikan dengan kromatografi cair memungkinkan identifikasi spesifik senyawa terelusi bersama dengan manfaat tambahan untuk memasukkan metabolit isotop NAD(P)(H) sebagai kualitas lonjakan internal. kontrol. Terlepas dari keunggulannya dibandingkan uji spektrofotometri atau fluorometrik klasik, HPLC dan LC-MS keduanya tetap mahal dan memakan waktu, yang menjelaskan mengapa uji siklus enzim tetap ada dalam penelitian terbaru.
Dengan menggunakan pendekatan sistematis, dari 241 studi yang memenuhi syarat (Bahan Tambahan 2), 205 studi yang menyertakan meta-analisis kuantitatif konsentrasi NAD(P)(H) pada tikus, tikus, dan jaringan manusia dipilih untuk analisis lebih lanjut. Dari studi ini, 46,7 persen menggunakan uji siklus enzim, yang meliputi deteksi kolorimetri (40,9 persen) atau fluorometrik (5,8 persen), sedangkan 17,8 persen menggunakan metode HPLC (digabung dengan detektor UV atau fluoresensi) dan 13,2 persen menggunakan uji LC–MS ( Gambar 1a). Sebagian besar penelitian tidak memasukkan penjelasan rinci tentang prosedur ekstraksi metabolit. Namun, prosedur ekstraksi yang umum digunakan terdiri dari buffer ekstraksi dengan atau tanpa surfaktan (Triton®, Tris, Dodecyl trimetil amonium bromida), atau pelarut organik polar seperti asetonitril, metanol, etanol, atau kloroform. Studi sebelumnya telah menunjukkan bahwa inaktivasi enzim dan pH optimal serta kondisi suhu yang efisien dalam menjaga stabilitas berbagai bentuk NAD(P)(H)30,39,40. Ketika diungkapkan, sampel diproses di bawah kondisi suhu rendah, dan tidak ada aditif redoks yang disebutkan dalam studi yang disertakan. Reaksi redoks dibatasi oleh inaktivasi enzim dalam sampel sebelum pengukuran metabolit NAD(P)(H), biasanya dengan pengendapan dengan pelarut seperti etanol, metanol, asetonitril, atau asam perklorat (PCA). Namun, penggunaan PCA jarang karena sifat labil asam dari bentuk tereduksi (yaitu NADH dan NADPH), serta perlunya tahap netralisasi tambahan. Di antara penelitian yang melaporkan penggunaan PCA selama ekstraksi metabolit (5,4 persen ), 3,7 persen melaporkan NAD(P) ditambah hasil saja atau menggunakan metode ekstraksi non-asam kedua untuk kuantifikasi NAD(P)H yang tepat. Hanya 1,7 persen penelitian yang melaporkan hasil NADH, total NAD(H), dan/atau NAD plus /NADH hanya dengan menggunakan ekstraksi PCA. Potensi bias dari studi ini tidak dapat dianalisis karena keterbatasan data.
Perbandingan rata-rata kadar NAD(P)(H) fisiologis di seluruh jaringan untuk hewan pengerat dan manusia.
Untuk membantu mengidentifikasi tingkat NAD(P)(H) fisiologis yang diharapkan untuk tikus, tikus, dan jaringan manusia yang paling sering dipelajari, kami mengumpulkan data dari semua kohort kontrol dan tipe liar dari masing-masing studi yang disertakan (Bahan Tambahan 2 ). Secara khusus, kami mencatat tingkat rata-rata NAD(P)(H) yang dinormalisasi menjadi berat jaringan atau, dalam kasus darah, volume. Data dari penelitian yang menormalkan kadar metabolit menjadi kandungan protein dimasukkan dalam kumpulan data kami yang dikompilasi (Bahan Tambahan 2) tetapi tidak digunakan untuk analisis lebih lanjut mengingat rendahnya jumlah hasil yang dilaporkan. Selain itu, jika memungkinkan, kami menghitung rasio NAD(P) plus /NAD(P)H, sebagai cerminan keadaan redoks, serta total level NAD(P)(H) (NAD(P) plus plus NAD (P)(H)) yang merupakan output pelaporan umum untuk perbaikan NAD(P)(H). Data yang diekstraksi juga mencakup spesies, galur, umur, jenis kelamin, metode kuantifikasi, diet dan jadwal makan, jenis sampel, metode pengumpulan sampel, dan waktu panen (sebelum atau sesudah kematian).
Meta-analisis data NAD(H) mengidentifikasi konsentrasi fisiologis rata-rata untuk NAD plus dan NADH pada jaringan tikus (Gambar 2a,b, Gambar Tambahan. 1a,b) dan tikus (Gambar Tambahan. 2a,b), dari hewan lebih muda dari 14 bulan untuk tikus dan 18 bulan untuk tikus. Kisaran nilai rasio NAD plus / NADH fisiologis yang diekstraksi dan level total NAD (H) (NAD plus plus NADH) diplot untuk tikus (Gambar 2c, d) dan tikus (Gambar Tambahan 2c, d). Berbeda dengan studi tikus, sebagian besar data tikus yang dilaporkan tidak memasukkan umur hewan; namun, kami memilih untuk memasukkan data ini asalkan penelitian tidak mengklasifikasikan kohort mereka sebagai usia. Dari jaringan yang paling menonjol dipelajari, meta-analisis ini menunjukkan bahwa tingkat NAD plus rata-rata untuk hati (596 nmol/g, n=26) lebih tinggi daripada semua jaringan lain pada tikus, sementara secara mengejutkan otot rangka (162,8 nmol /g, n=9) menunjukkan salah satu nilai median terendah per gram jaringan (Gbr. 2a). Hasil ini dapat menyiratkan penurunan efisiensi dalam NAD ditambah ekstraksi metabolit, karena sifat otot yang sangat berserat atau bahwa ada perbedaan penting dalam NAD otot ditambah metabolisme bila dibandingkan dengan jaringan dengan metabolisme tinggi lainnya, seperti hati dan ginjal.
Meskipun beberapa studi penuaan kuantitatif, tingkat NAD plus dari tikus tua rata-rata berkurang di hati, otot, dan epitel berpigmen retina (RPE), jika dibandingkan dengan kohort muda mereka, dan dibandingkan dengan rata-rata semua penelitian yang dilakukan dengan tikus yang lebih muda. dari usia 14 bulan (Gambar Tambahan 3). Sebuah meta-analisis NADH dan rasio NAD plus / NADH pada hewan tua tidak mungkin diberikan karena hanya satu dari studi kuantitatif yang melakukan pengukuran ini.
Data ini menunjukkan kurangnya data kuantitatif NAD(H) pada hewan yang menua.
Untuk data yang diambil dari penelitian yang menggunakan manusia sehat, rentang usia sangat bervariasi antar penelitian (dari 15 hingga 92,3 tahun) dan dalam banyak kasus, data tidak dikelompokkan berdasarkan usia ini. Jaringan manusia yang paling sering diukur termasuk otot rangka dan komponen darah, karena sifat pengumpulannya yang kurang invasif (Gbr. 3a-d). Hasil dari jaringan manusia lainnya (n= 1–2) ditampilkan pada Gambar Tambahan. 4. Analisis ini menunjukkan median NAD plus konsentrasi 44,62 nmol/ml (n=23) dalam darah utuh, dengan Konsentrasi NAD plus dilaporkan untuk sel darah merah pada 46,96 nmol/ml (n=7) (Gbr. 3a; Tabel Tambahan 1). Namun, kadar NAD plus plasma darah secara substansial lebih rendah dengan median 0.37 nmol/ml (n=8) (Gbr. 3a). Tingkat rata-rata NAD plus yang ditemukan dalam otot rangka manusia adalah 191,9 (n=4) nmol/g dalam sediaan otot basah versus 1713 (n=3) nmol/g dalam sediaan beku-kering, suhu rendah proses dehidrasi yang kemungkinan memusatkan metabolit (Gbr. 3a). Dalam jaringan yang lebih umum diselidiki untuk pengukuran NADH, tingkat rata-rata dalam sel darah merah manusia, plasma dan otot rangka beku-kering adalah 1,75 nmol/ml (n =7), 0.39 nmol/ml (n=8) dan 136,8 nmol/g (n=6), masing-masing (Gbr. 3b). Rasio median NAD plus /NADH yang sesuai adalah 23,65 (n=8), 1,57 (n=7) dan 12,7 (n=3) (Gbr. 3c). Menariknya, rasio median NAD plus / NADH untuk sel darah merah (23,65) dan otot rangka kering-beku (12,7) (Gbr. 3c) beberapa kali lipat lebih tinggi daripada kebanyakan jaringan tikus dan tikus (Gbr. 2c dan Gbr. Tambahan 2c) , menunjukkan keadaan redoks yang sangat oksidatif dengan kelimpahan NAD plus yang tersedia di jaringan manusia ini. Dalam kasus jaringan otot, ini dapat berimplikasi ketika mempertimbangkan potensi translasi dari studi hewan pengerat yang telah mengidentifikasi manfaat meningkatkan kadar NAD plus dalam otot. Namun, rasio NAD plus / NADH yang meningkat pada otot juga dapat menjadi hasil dari prosedur pembekuan sampel yang tertunda di lingkungan klinis, yang dapat menyebabkan perubahan non-fisiologis dalam status redoks sampel.
Tingkat NADP(H) fisiologis dalam jaringan hewan pengerat dikompilasi, dengan pengukuran paling umum berada di hati. Hati tikus menunjukkan nilai median 124,2 nmol/g NADP plus (n=13) dan 140,2 nmol/g NADPH (n=4) (Gbr. 4a,b ), sedangkan hati tikus menunjukkan median 95,11 nmol/g NADP plus (n=10) dan 240,7 nmol/g NADPH (n=9) (Gambar Tambahan 5a,b). Rasio median NADP plus / NADPH, berasal dari penelitian yang mengukur kedua metabolit, lebih rendah dari 1 di sebagian besar jaringan tikus dan tikus (Gambar 4c, Gambar Tambahan. 5c). Tingkat median total NADP(H) (NADP plus plus NADPH) pada hati tikus dan tikus adalah 244,4 (n=3) (Gbr. 4d) dan 342,1 (n=9) (Gambar Tambahan. 5d) , masing-masing. Pada manusia, pengukuran NADP(H) yang paling umum dilakukan dalam sel darah merah yang menunjukkan median 33,2 nmol/ml untuk NADP plus (n=14) dan 22,4 nmol/ml untuk NADPH (n{{30} }) dari studi yang tidak cocok, dengan median rasio NADP plus /NADPH 1,27 dan median total NADP(H) 52,0 nmol/ml dari studi yang mengukur kedua metabolit (n=11) (Gbr. 4e– H). Secara keseluruhan, jumlah data yang tersedia untuk NADP(H) jarang pada semua spesies yang mengarah pada kepercayaan yang lebih rendah pada nilai median untuk setiap jaringan.
Analisis bias dan variabilitas dalam metode kuantifikasi NAD(P)(H).
Mengingat bahwa sebagian besar penelitian yang termasuk dalam meta-analisis ini memeriksa NAD plus level dalam sampel hati hewan pengerat (Gbr. 1c, e), kami menggunakan NAD fisiologis hati tikus dan tikus plus level untuk mengidentifikasi potensi bias dalam hasil yang sesuai. ke metode kuantifikasi (Gbr. 5a, b). Usia rata-rata mencit yang dimasukkan dalam analisis ini adalah 17,9 minggu (Kisaran: 2–55 minggu), dengan 6 penelitian tidak mengungkapkan usia hewan. Untuk tikus, sebagian besar penelitian tidak mengungkapkan umur hewan kecuali tiga yang berkisar antara 2 hari sampai 8 bulan. Tidak ada penelitian yang melaporkan penggunaan hewan tua. Dalam hati tikus, kisaran besar konsentrasi yang dilaporkan untuk NAD plus berkisar dari 1,8 hingga 1132 nmol/g hati dengan nilai rata-rata 596.0 (n=26) (Gbr. 5a) , sedangkan konsentrasi NADH berkisar dari 0.9 hingga 109 nmol/g jaringan dengan nilai rata-rata 66.43 (n=6) (Gambar Tambahan 6a). Yang penting, koefisien variasi 52,5 persen dan 76,5 persen dihitung untuk hasil rata-rata fisiologis NAD plus dan NADH di hati tikus, yang diukur dengan beberapa metode kuantifikasi, menunjukkan tingkat variabilitas di seluruh studi. Seperti yang diperkirakan dari hasil ini, rasio rata-rata NAD plus / NADH dalam hati tikus (3,41 plus /− 3,16 SD, n=19) menunjukkan rentang variabilitas yang sama besar dengan CV 92,7 persen (Tambahan Gambar. 6c) . Variabilitas serupa dalam ukuran NAD plus dan NADH juga diamati pada hati tikus (CV=42.6 persen untuk NAD plus dan CV=44.4 persen untuk NADH). Konsentrasi yang sesuai untuk NAD plus dan NADH dalam hati tikus masing-masing berkisar antara 159 hingga 796 (n=16) dan 65 hingga 265 (n=12) nmol/g (Gbr. 5b, Gbr. Tambahan. 6b ), sedangkan rasio NAD plus /NADH menunjukkan CV sebesar 50.1 persen (Rata-rata: 3,219 plus /− 1,612 SD, n=23) (Gambar Tambahan 6d). Nilai rata-rata dan deviasi standar untuk NAD plus , NADH, total NAD(H) dan data rasio NAD plus / NADH dalam hati tikus dan tikus, dikelompokkan berdasarkan metode kuantifikasi, ditunjukkan pada Tabel Tambahan 2. Mengenai kadar NADP(H) dan rasio NADP plus / NADPH, variabilitas serupa diamati pada jaringan hati. Level NADP plus berkisar dari 50.4 hingga 247,4 nmol/g jaringan untuk tikus (Gambar Tambahan 8a) dan dari 45,7 hingga 171 nmol/g jaringan untuk tikus (Gambar Tambahan 8b), sedangkan level NADPH berkisar dari 28 hingga 236, 9 nmol / g jaringan untuk tikus (Gambar Tambahan 8c) dan dari 90 hingga 409 nmol / g jaringan untuk tikus (Gambar Tambahan 8d). Terakhir, rasio NADP plus / NADPH berkisar antara 0, 12 hingga 0, 55 di hati tikus (Gambar Tambahan 8e) dan dari 0, 12 hingga 1, 44 di hati tikus (Gambar Tambahan 8f).
dalam rentang hasil terbesar (1,8 hingga 1132,3 nmol/g). Bahkan studi LC-MS terbaru yang diperiksa mencontohkan rentang nilai plus NAD ini, termasuk nilai 1,8 nmol/g41 dan 33,8 nmol/g42 dan nilai yang jauh lebih tinggi yaitu 946,3 nmol/g43 dan 1132,3 nmol/g44. Selain itu, kisaran besar nilai LC-MS NAD plus tampaknya tidak berkorelasi dengan penelitian yang mengecualikan standar internal berlabel isotop (Gbr. 5a), metode yang digunakan untuk meningkatkan identifikasi metabolit dan keakuratan nilai terukur . Namun, dua studi LC-MS yang teridentifikasi yang hanya mengandalkan kurva standar eksternal untuk NAD plus kuantifikasi, daripada memasukkan kontrol internal, rata-rata lebih rendah daripada rata-rata untuk semua tindakan (Gbr. 5a). Selanjutnya, penelitian yang menggunakan normalisasi standar internal menggunakan berbagai jenis standar internal, seperti penyertaan metabolit referensi berlabel tunggal45,46 atau ekstrak metabolit berlabel dari ragi43,44 atau kultur sel41. Menariknya, studi-studi ini yang menggunakan standar turunan ekstrak ragi atau kultur sel memberikan ukuran turunan LC-MS tertinggi atau terendah untuk level NAD plus hati. Ini berpotensi menekankan bagaimana ekstrak seluler dari standar yang kaya isotop dapat berkontribusi pada variabilitas dalam NAD plus pengukuran karena efek matriks dari ragi standar atau ekstrak seluler yang ditambahkan dapat mengganggu efisiensi ionisasi dan akibatnya konsentrasi terukur dari metabolit target.
Keterbatasan analisis bias kuantifikasi dan variabilitas ini meliputi potensi perbedaan lingkungan, latar belakang genetik, pengorbanan, jenis kelamin, dan usia. Semua data untuk analisis ini berasal dari hewan dengan diet chow tetapi mungkin berbeda jenisnya. Setelah kurban, dilaporkan ada perbedaan dalam keadaan makan atau puasa hewan dan waktu untuk kurban. Selain itu, meskipun sebagian besar studi tikus dilakukan pada latar belakang C57BL/6, ada rentang latar belakang yang lebih luas yang digunakan untuk tikus di seluruh studi (Wistar: 38 persen , Albino Wistar: 25 persen , dan 6 persen untuk Hooded Wistar, Sprague–Dawley, tikus Holtzman, ACI, Long-Evans dan Zucker). Di seluruh studi hati tikus, tidak ada perbedaan statistik antara nilai pria atau wanita untuk NAD plus , NADH atau total NAD (H) atau untuk rasio NAD plus / NADH (Tambahan Gambar. 7). Namun, kami tidak dapat menarik kesimpulan karena terbatasnya jumlah kelompok perempuan.
Tanya lebih lanjut:
Email:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950
