Penipisan Makrofag Mengurangi Patologi Penyakit pada Glomerulonefritis yang Dimediasi Kompleks Imun yang Bergantung pada Faktor H Ⅱ

3. Hasil

Kami menginduksi CSS pada tikus dengan imunisasi berulang dengan apoferritin limpa kuda. Hewan menghasilkan kekebalan humoral antiapoferritin IgG aktifrespon dan deposit IgG di glomeruli. Penelitian kami sebelumnya mengungkapkan bahwa ada peningkatan Mϕinfiltrasi ke dalam ginjaldalam pengaturan ini.

3.1. Ekspresi Gen Makrofag Meningkat pada Ginjal ICGN yang Bergantung pada FH. Untuk mengevaluasi keberadaan Mϕs pada ginjal ICGN yang bergantung pada FH, qRT-PCR dilakukan dengan penanda makrofag M2, CD204 (Mϕ scavenger receptor 1) dan CD206 (Mϕ mannose receptor 1) [21-24]. Ekspresi kedua gen di ginjal diregulasi secara signifikan setelah pengobatan apoferritin pada tikus FHKO (Gambar 1) menunjukkan peningkatanpeningkatan kehadiran makrofag di ginjal.

KLIK DI SINI UNTUK MENDAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK ALAMI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK FUNGSI GINJAL

Layanan Pendukung Wecistanche-Ekspor cistanche terbesar di Cina:

Surel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Telp:+86 15292862950

Belanja Untuk Detail Spesifikasi Lebih Lanjut:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Perubahan Kursus Waktu oleh Pengobatan Klodronat pada Infiltrasi Makrofag Ginjal pada Tikus FHKO yang Diobati Apoferritin. Untuk menentukan metode efektif mengurangi Mϕs pada ICGN yang bergantung pada FH, kami menghabiskan Mϕs pada tikus fh-/-

Gambar 3: Data tambahan. Diberikan profil aliran sitometri monosit F4/80+ dari tikus kontrol dan tikus yang diobati dengan clodronat. Sel F4/80+ berkurang secara signifikan hingga kurang dari 10% dengan pengobatan clodronat. Setiap titik waktu n=6.

3.4. Penipisan Makrofag Mengurangi Glomerulus

Patologi pada ICGN yang Dimediasi FH. Deposit kompleks imun di ginjal dan gambaran histopatologis ICGN dievaluasi pada akhir percobaan. Pewarnaan imunofluoresensi untuk C3 dan IgG mengungkapkan bahwa penipisan Mϕ tidak memodulasi kompleks imun dalam keadaan ini. Pewarnaan imunofluoresensi dan histopatologi yang representatif ditunjukkan pada Gambar 5. Gambaran histopatologis utama adalah hiperseluleritas difus berkas glomerulus pada tikus fh-/- dengan CSS berkurang secara signifikan pada penipisan Mϕs.

3.5. Makrofag Memodulasi Sitokin dalam ICGN yang Bergantung pada FH.

Sekali Mϕsmenyusup ke ginjaldan terkena rangsangan inflamasi, mereka melepaskan sitokin. Kami mengevaluasi, dengan ELISA, kadar TNF dan IL-6 sirkulasi plasma dan mCSF ginjal pada tikus FHKO yang diobati dengan saline, apoferritin, atau apoferritin dan clodronate. Tingkat IL-6 yang bersirkulasi sangat rendah pada tikus tipe liar dan meningkat pada tikus FHKO dan berkurang pada tikus FHKO yang diobati dengan clodronat (Gambar 6). Ketiga sitokin, TNF , IL-6, dan mCSF meningkat secara signifikan pada tikus yang diobati dengan apoferritin dibandingkan dengan kontrol yang diberi saline. Penipisan Mϕ oleh clodronat secara signifikan membatasi peningkatan sitokin dalam kondisi ini

3.6. Makrofag Memodulasi Profibrotik

Molekul dan Laminin pada ICGN Bergantung FH. Sekaliginjal terserang penyakit, mereka cenderung menjadi fibrotik. Mϕs berpartisipasi dalam proses fibrotik dengan memproduksi molekul profibrotik secara berlebihan. PCR real-time menunjukkan peningkatan sebesar 75% pada ekspresi mRNA transforming growth factor-beta1 (TGFbeta1), peningkatan sebesar 100% pada ekspresi metalloproteinase-9 (MMP9), dan peningkatan sebesar 230% pada laminin mRNA. Sejalan dengan ekspresi mRNA, ekspresi protein laminin meningkat secara signifikan pada tikus fh-/- dengan CSS yang berkurang tanpa adanya Mϕs (Gambar 7).

4. Diskusi

Penelitian terbaru kami menunjukkan bahwa tanpa adanya FH, tikus mengalami perkembangan yang menyebarglomerulonefritis proliferatif(GN) dengan F4/80+ Mϕs di sekitar lokasi IC [10]. Selain itu, penelitian kami menunjukkan bahwa tikus Cd11b−/− fh−/− telah memperburuk gambaran glomerulonefritis [26]. Mengingat bahwa kehadiran makrofag M1 inflamasi yang meningkat dan aktivasi berkelanjutannya dapat menyebabkan patologi jaringan, dan repolarisasi mereka menjadi fenotip anti-inflamasi akan membantu dalam penyelesaian patologi penyakit, penelitian ini dilakukan untuk lebih memahami peran Mϕs dalam fh. -/- tikus dengan ICGN. Peningkatan kehadiran Mϕs di ginjal dan resolusi patologi penyakit dengan berkurangnya makrofag selama ICGN yang dimediasi FH menunjukkan peran penting Mϕs dalam keadaan ini, dan oleh karena itu, mereka dapat berfungsi sebagai target terapi yang penting dalam keadaan ini.

Gambar 5: Penipisan Mϕs mengurangi patologi glomerulus pada ICGN yang bergantung pada FH. Diberikan gambar representatif glomeruli dari tikus yang diberi perlakuan saline (a), yang diberi apoferritin (b), dan tikus yang kekurangan FH yang diberi apoferritin+klodronat. Pada (A), bagian diwarnai dengan C3 (hijau) dan IgG (merah), sedangkan (B) menunjukkan bagian diwarnai dengan PAS. Deposit IgG yang meningkat dengan pengobatan apoferritin tetap tidak berubah, sementara glomeruli tampak mendekati normal pada penipisan makrofag.

Tidak adanya FH menyebabkan peningkatan produksi C5a. C5a berikatan dengan C5aR1 yang memberi sinyal Mos ke ginjal di mana mereka menambah lingkungan peradangan. Selain itu, penelitian kami juga menunjukkan bahwa dalam kondisi produksi C5a yang berlebihan, inaktivasi C5a tampaknya membatasi penyakit [10]. Aktivasi Mos menyebabkan mereka menjadi terpolarisasi, namun mereka tetap berada dalam keadaan kontinum [27]. Hasil kami dalam penelitian ini menunjukkan bahwa penyakit glomerulus pada CSS berkurang pada tikus fh−/− yang Mϕsnya terkuras dibandingkan dengan tikus fh-/- tanpa penipisan makrofag. Dengan demikian, menghilangkan Mϕs alle melalui ICGN pada tikus fh−/− mengurangi patologi penyakit. Namun, Mϕs juga diperlukan untuk proses perbaikan, dan karena Mϕs mengubah keadaan dari keadaan pro ke anti-inflamasi dan sebaliknya, ini akan menjadi upaya kita di masa depan untuk memahami apakah mengubah lanskap Mϕs tanpa menghabiskannya dapat mengubah patologi penyakit.

Mϕs memainkan peran penting dalam inisiasi dan pemeliharaan fibrosis dan juga terlibat dalam penekanan, resolusi, dan pembalikan fibrosis [28]. Hasil kami menunjukkan peningkatan ekspresi penanda CD204+ dan CD206+ Mϕ yang menunjukkan peningkatan kehadirannya dalam pengaturan ini. Karena Mϕ ini adalah sumber utama molekul profibrotik, hasil kami menunjukkan peningkatan TGF -1 serta MMP9 menunjukkan bahwa Mϕ ini dapat berkontribusi baik secara langsung maupun tidak langsung terhadap proses fibrotik pada ICGN yang dimediasi FH melalui mekanisme yang berbeda ( 1,3,8,44). TGF -1 dapat mengubah fibrosis melalui regulasi sitokin. Selain itu, TGF -1 memodulasi biosintesis dan ekspresi C3 dan faktor B dalam monosit [29], dan perubahan komplemen dalam sel imun dan sel ginjal dapat memfasilitasi fibrosis jaringan [30]. Namun, interaksi yang tepat antara makrofag dan komplemen, mekanisme yang terlibat, peran mereka, dan kompartementalisasi jaringan perlu diuraikan [31]. Penelitian kami menunjukkan penurunan ekspresi laminin pada tikus yang kekurangan Mϕs dibandingkan dengan tikus yang mencukupi Mϕ. Untuk lebih memahami bagaimana FH mengatur proses fibrotik, kita perlu mengidentifikasi subset Mϕ spesifik yang ada dalam ICGN yang dimediasi FH dan menjelaskan kontribusi dari setiap subset populasi. Studi-studi ini penting karena terapi komplementer telah menjadi kenyataan klinis. Inhibitor telah dan terus dikembangkan terhadap target berbeda dalam kaskade komplemen yang akan menghalangi langkah hilir dalam jalur aktivasi. Saat ini, salah satu inhibitor komplemen yang digunakan secara klinis adalah antibodi anti-C5, Eculizumab [32]. Oleh karena itu, mengidentifikasi komponen pelengkap patogen dalam penyakit dan melengkapinya dengan regulasi populasi Mϕs bukanlah hal yang sepele.

Gambar 7: Deposisi laminin diGinjal yang kekurangan FHdengan ICGN dikurangi dengan penipisan Mϕs. (a) qRT-PCR untuk TGFB, MMP9, dan laminin darimRNA ginjaldiisolasi dari tikus setelah 5 minggu pemberian saline dan apoferritin dan 3 minggu clodronate. Ekspresi dinormalisasi menjadi GAPDH (n=6/grup). (b) Fotomikrograf IF yang representatif untuk pewarnaan laminin pada ginjal kelompok tikus yang sama. ∗P < 0:01.

Singkatnya, di sini kita mempelajari peran Mϕs dalam model ICGN yang bergantung pada FH. Hasilnya juga dapat diterapkan dalam rangkaian aktivasi komplemen yang tidak diatur dengan kompleks imun seperti yang diamati pada berbagai penyakit termasuk nefritis lupus, nefropati IgA, dan nefropati membranosa. Kami menunjukkan pentingnya regulasi komplemen oleh FH dan status Mϕs pada penyakit ini. Dengan demikian, penargetan farmakologis dari kaskade komplemen dan status Mϕs pada GN yang dimediasi IC memiliki potensi relevansi klinis.

Referensi

[1] T. Mijovic, A. Zeitouni, dan I. Colmegna,"Gangguan pendengaran sensorineural autoimun: antarmuka otologi-reumatologi," Reumatologi, jilid. 52, tidak. 5, hal.780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin, dan AP Robertson,"Morantel kolinomimetik sebagai pemblokir saluran terbuka Ascaris suum ACR-16 nAChR," Ilmu Saraf Invertebrata, jilid. 16, tidak. 4, 2016.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath, dan FC Fer venza,"Penyakit ginjal yang disebabkan oleh disregulasi jalur alternatif komplemen: pendekatan etiologi," Jurnal Persatuan Nefrologi Amerika, jilid. 26, tidak. 12, hal.2917– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Penyakit glomerulus komplemen dan autoimun," Arah Saat Ini dalam Autoimunitas, jilid. 7, hal.165– 180, 2003. 

[5] MC Caroll,"Sistem komplemen dalam pengaturan imunitas adaptif," Imunologi Alam, jilid. 5, tidak. 10, hal.981– 986, 2004. [6] MV Carroll dan RB Sim,"Pelengkap dalam kesehatan dan penyakit," Tinjauan Pengiriman Obat Tingkat Lanjut, jilid. 63, tidak. 12, hal.965–975, 2011. 

[7] M.Noris dan G.Remuzzi,"Ikhtisar aktivasi dan regulasi komplemen," Seminar Nefrologi, jilid. 33, tidak. 6, hal.479–492, 2013. 

[8] Wakil Presiden Ferreira, AP Herbert, C. Cortes dkk.,"Pengikatan faktor H ke kompleks polianion fisiologis dan C3b pada sel terganggu pada sindrom uremik hemolitik atipikal," Jurnal Imunologi, jilid. 182, tidak. 11, hal.7009–7018, 2009.

[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe, dan RJ Quigg,"Faktor pelengkap H membatasi pengendapan kompleks imun dan mencegah masukflperadangan dan jaringan parut pada glomeruli tikus dengan penyakit serum kronis," Jurnal Persatuan Nefrologi Amerika, jilid. 16, tidak. 1, hal.52–57, 2005.

[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang, dan RJ Quigg,"Reseptor C5a mempunyai peran kunci dalam glomerulonefritis kompleks imun pada faktor komplemen H-defitikus kuno," Ginjal Internasional, jilid. 82, tidak. 9, hal.961–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph, dan PM Henson,"Monosit difffungsi esensiasi dan penyajian antigen," Ulasan Alam. Imunologi, jilid. 17, tidak. 6, hal.349–362, 2017. 

[12] Q.Cao, Y.Wang, dan DC Harris,"Heterogenitas makrofag, fenotipe, dan perannya dalam ginjalfibros," Ginjal Internasional. Suplemen, jilid. 4, tidak. 1, hal.16–19, 2014.

[13] Q.Cao, Y. Wang, XM Wang dkk.,"Fagosit mononuklear F4/80+ CD11c+ ginjal menampilkan karakteristik fenotipik dan fungsional makrofag dalam kesehatan dan pada nefropati adriamycin," Jurnal Persatuan Nefrologi Amerika, jilid. 26, tidak. 2, hal.349–363, 2015.