Identifikasi EST Responsif Hidrogen Peroksida yang Terlibat dalam Biosintesis Feniletanoid Glikosida pada Kultur Sel Cistanche Salsa

Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}

J.CHEN dkk

Abstrak
Hidrogen peroksida merupakan elisitor abiotik yang efektif yang dapat menginduksi biosintesis metabolit sekunder pada tanaman. Kami menunjukkan bahwa dalam kultur suspensi sel tanaman obat toleran garamBentengsalsa, produksi komponen bioaktiffeniletanoidglikosida(PeGs) meningkat setelah perlakuan H2O2. Untuk mengidentifikasi gen yang terkait dengan PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis yang dipengaruhi oleh H2O2, kami membangun perpustakaan hibridisasi subtraktif dari gen responsif H2O2 menggunakanBentengsalsagaris sel dan mengidentifikasi 105 tag urutan terekspresi (EST) dan 85 gen. Anotasi fungsional perpustakaan EST dan analisis ontologi gen menunjukkan gen yang terkait dengan berbagai respons stres, biosintesis metabolit sekunder, dan regulasi transkripsi. Di antara mereka, kami mengidentifikasi dua gen yang terkait dengan PeGs(feniletanoidglikosida)jalur biosintesis (4-coumarate coenzyme A ligase dan cinnamate 4-hydroxylase), dan dua faktor transkripsi tipe WRKY. Ekspresi gen terpilih setelah perlakuan H2O2 dianalisis dengan RT-qPCR. Peningkatan awal transkripsi PeG(feniletanoidglikosida)gen jalur biosintesis setelah perawatan mengungkapkan bahwa H2O2 menginduksi PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis melalui up-regulasi gen kuncinya.
Kata kunci tambahan: cinnamate-4-hidroksilase, 4-coumarate coenzyme A ligase, supresi hibridisasi subtraktif.Bentengsalsa. feniletanoidglikosida.

pengantar

Bentengsalsaadalah parasit tanaman tahunan pada akar Haloxylos ammodendrun, dan tumbuh di daerah gurun Cina barat. Selama berabad-abad,Bentengspesies telah digunakan sebagai obat herbal tradisional (Wang et al. 2012). Komponen bioaktif adalahfeniletanoidglikosida(PeGs) yang memiliki efek luar biasa pada pembersihan spesies oksigen reaktif (ROS), perlindungan radiasi, peningkatan kekebalan, dan anti-penuaan (Nan et al. 2013). PeG(feniletanoidglikosida)biosintesis dalamBentengdimulai dari fenilalanin (Gbr. 1 Suppl.) dan asam caffeic yang disintesis selanjutnya diglikosilasi untuk membentuk berbagai PeG(feniletanoidglikosida)(Wang dkk. 2012). Tiga PeG utama(feniletanoidglikosida), echinacoside, acteoside, dan 2'-acetylacteoside, dianggap sebagai komponen paling aktif dalamBenteng(Kobayashi dkk. 1984). Untuk meningkatkan konten mereka diBentengkultur sel, berbagai elisitor telah diuji termasuk kitosan, putresin, Ag plus, dan tekanan osmotik (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu dan Cheng 2008). Namun, gen yang terlibat dalam PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis dalamBenteng, terutama gen jalur metabolisme fenilalanin, telah jarang diidentifikasi. Hanya gen yang mengkode fenilalanin amonia-liase (PAL) baru-baru ini diidentifikasi di Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). Gen lain yang mengkode, misalnya, sinamat-4-hidroksilase (C4H), yang dapat mengkatalisis konversi sinamat menjadi asam cumarat, dan 4-koenzim koumarat A ligase (4CL), gen penting untuk lignin dan flavanoid biosintesis, belum ditemukan diBenteng.
Kami menggunakan kultur sel dariBentengsalsauntuk mempelajari PeG(feniletanoidglikosida)biosintesis dan ekspresi gen terkait. Kami juga menyelidiki efek elisitor H2O2 yang efektif pada PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis. Selanjutnya, untuk menemukan gen responsif awal yang terlibat dalam PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis, kami melakukan supresi subtraktif hibridisasi (SSH) untuk membangun perpustakaan cDNA gen responsif H2O2-.

Gambar 1. Ekspresi gen relatif ditentukan oleh RT-qPCR setelah perlakuan H2O2. CsWRKY1 - Faktor transkripsi WRKY (Contig07), CsC4H1 - cinnamate 4-hidroksilase (Contig09), Cs4CL1 - 4-coumarate: ligase (Contig03), CsHSP1 - protein kejut panas 70 kDa (Contig 01), dan CsSOD1 - superoksida dismutase (Contig16). Sel diperlakukan dengan 80 ug dm-3 H2O2 dalam media cair selama 2 jam dan ekspresi dibandingkan dengan kontrol diperlakukan dengan air. Berarti plus - SD dari tiga pengulangan biologis; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Bahan dan metode

Garis sel CS2001 dibuat dari kelopak bungaBentengsalsa(CA Mey.) Beck dikumpulkan di provinsi Neimenggu dan disubkultur. Metode kultur mirip dengan protokol yang diterbitkan sebelumnya (Liu et al. 2007). Umumnya, media padat Murashige dan Skoog (1962; MS) digunakan untuk subkultur dan media cair untuk PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis (ini adalah media MS yang dimodifikasi yang dilengkapi dengan 30 g dm-3 glukosa dan 2.0 mg dm-3 indol-3-asam asetat). Untuk perlakuan H2O2, 5.0 ± 0,2 g sel dalam masa pertumbuhan cepat, biasanya 20 sampai 30 hari setelah disubkultur dalam medium padat, diinokulasi ke dalam medium cair 50 cm3 dalam labu Erlenmeyer 250 cm3 dan dikultur dalam gelap dengan atau tanpa konsentrasi H2O2 yang berbeda. PeG(feniletanoidglikosida)konten setelah 10 hari induksi oleh H2O2 dianalisis menurut metode yang diterbitkan sebelumnya (Liu et al. 2007) berdasarkan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik dengan elusi gradien metanol.

Sel-sel 2 jam setelah perlakuan H2O2 dikumpulkan dari media dengan kertas saring menggunakan corong Büchner, dan kemudian dibekukan dalam nitrogen cair dan digiling menjadi bubuk. Setiap 2 g bubuk sel dilisiskan menggunakan campuran 1 cm3 2-mercaptoethanol, 1 cm3 dari 200 g dm{{10}} sarcosyl, dan 8 cm3 buffer GTC (5 M guanidinium isothiocyanate, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM thiourea, dan 10 mM dithiothreitol). Sel-sel kemudian diinkubasi di atas es selama 15 menit, kemudian ditambahkan 1/3 volume 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, dan sel-sel diinkubasi di atas es selama 15 menit dan kemudian disentrifugasi pada 15 000 g selama 15 menit . Supernatan ditambahkan ke volume yang sama dari isopropanol untuk mengendapkan RNA total. Total RNA selanjutnya dimurnikan dengan kit mini RNeasy (Qiagen, Hilden, USA) sesuai dengan instruksi pabrik. Messenger RNA diisolasi dari total RNA menggunakan Oligotex mRNA midi kit (Qiagen).

feniletanoidglikosidadiBentengsalsa

Pustaka SSH dihasilkan dari kontrol dan 30 persen H2O2-menghasilkan sampel sel 2 jam setelah elisitasi menggunakan kit pengurangan cDNA pilihan PCR (Clontech, Mountain View, USA). Untuk konstruksi perpustakaan, produk dimurnikan secara terpisah menggunakan kit pemurnian gel (Qiagen) dan diklon ke vektor pGEM menggunakan kit kloning TA (Tiangen, Beijing, Cina). Plasmid dari klon independen diisolasi dan diurutkan menggunakan primer T7. Semua urutan tag urutan (EST) yang diekspresikan dari perpustakaan (dengan urutan vektor dihapus) digunakan untuk perakitan contig dengan CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST dikelompokkan menjadi contigs dan singletons; mereka digunakan untuk pencarian homologi menggunakan program BLASTx di NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Urutan kemudian dianotasi, dianalisis, dan diklasifikasikan menurut istilah ontologi gen (GO) menggunakan Blast2GO (http://www.blast2go.com).
Reaksi berantai polimerase kuantitatif real-time (RT-qPCR) dilakukan menurut Bustin et al. (2009). Sampel cDNA disintesis menggunakan kit reagen PrimeScript RT (Takara, Dalian, Cina) dari 0,5 ug total RNA. RT-qPCR dilakukan menggunakan SYBR Premix Ex Taq II dan ROX plus kit (Takara) pada sistem PCR real-time ABI 7300 (Applied Biosystems, Foster City, USA) dengan tiga ulangan teknis. Primer dirancang menggunakan perangkat lunak Primer3 online sesuai dengan instruksi yang diberikan oleh Takara; primer yang digunakan dalam penelitian ini tercantum pada Tabel 1 Suppl. Ekspresi gen dinormalisasi menjadi 18S RNA, ekspresi yang stabil di semua sampel.

Hasil dianalisis menggunakan R versi 3.1.1, signifikansi perbedaan diverifikasi dengan uji-t Student.

Hasil

Hidrogen peroksida-menginduksi biosintesis ketiga PeGs utama(feniletanoidglikosida)diBentengsalsasel suspensi (Tabel 1) tetapi tanpa efek yang jelas pada pertumbuhan sel (Gbr. S2). Kandungan echinacoside sudah meningkat setelah perlakuan 10 ug dm-3 H2O2 (P < 0.05),="" peningkatan="" yang="" lebih="" tinggi="" tercatat="" setelah="" 20="" ug="" dm="" -3="" perlakuan="" h2o2="" (p="">< 0,01),="" dan="" peningkatan="" tertinggi="" terjadi="" setelah="" perlakuan="" h2o2="" 40,="" 80,="" dan="" 160="" ug="" dm-3.="" hasil="" serupa="" ditunjukkan="" untuk="" akteosida,="" tetapi="" kandungannya="" memuncak="" setelah="" perlakuan="" h2o2="" 80="" ug="" dm-3.="" biosintesis="" 2'-acetylacteoside="" kurang="" sensitif="" terhadap="" perlakuan="" h2o2;="" peningkatan="" signifikan="" kandungannya="" (p=""><0,05) terjadi="" pada="" konsentrasi="" h2o2="" lebih="" dari="" 40="" ug="" dm-3.="" setelah="" perlakuan="" h2o2="" 80="" ug="" dm-3,="" jumlah="" ketiga="" peg="">(feniletanoidglikosida)meningkat secara signifikan (P < 0.01)="" di="" atas="" kontrol.="" oleh="" karena="" itu,="" konsentrasi="" ini="" digunakan="" dalam="" percobaan="" lebih="">
Untuk menghasilkan perpustakaan yang diperkaya untuk gen responsif awal yang diregulasi oleh H2O2, kami menggunakan cDNA dariBentengsalsasel suspensi diperlakukan dengan 80 ug dm-3 H2O2 selama 2 jam. Pengurutan single-pass 129 klon rekombinan di perpustakaan SSH menghasilkan 105 EST bersih setelah pengecualian urutan vektor. EST yang jelas ini digunakan untuk perakitan oleh CAP3, dan 18 contigs dan 67 lajang dihasilkan (Tabel 2). Dengan demikian, 85 gen diisolasi di perpustakaan ini. Panjang rata-rata dari 105 EST bersih adalah 527 bp, yang memadai untuk klasifikasi fungsional berbasis kesamaan urutan.

feniletanoidglikosidadiBentengsalsa

Semua 85 gen yang diperoleh di perpustakaan diambil oleh BLASTx terhadap database protein non-redundan GenBank untuk kesamaan urutan (Nilai E Kurang dari atau sama dengan 0.001). Dua puluh satu gen tidak menunjukkan hit di database, mereka mungkin spesifik untukBentengsalsa. Hasil dengan BLASThits diimpor ke perangkat lunak Blast2GO untuk analisis pengayaan jalur GO dan KEGG lebih lanjut. Dari 64 gen dengan hit BLAST, 50 diberi keterangan sesuai dengan deskripsi gen homolog dari spesies lain. Gen beranotasi diberi nama sesuai dengan deskripsi hit BLAST. Analisis GO (Gbr. 3 Suppl.) menunjukkan bahwa di antara 50 gen ini, ada 14 gen yang terlibat dalam respons terhadap rangsangan, dan lebih dari 30 gen yang terkait dengan proses metabolisme (Tabel 1 dan 2). Di antara gen-gen ini, dua homolog gen jalur biosintesis PeG diisolasi seperti yang diharapkan: 4-koenzim koumarat A ligase (bernama Cs4CL1: Contig03) dan sinamat 4-hidroksilase (bernama CsC4H1: Contig14). Selanjutnya, RT-qPCR dilakukan untuk mengkonfirmasi ekspresi gen yang diinduksi dari perpustakaan setelah perawatan H2O2.

Untuk mengkonfirmasi bahwa gen esensial yang diidentifikasi dari perpustakaan SSH responsif terhadap pengobatan H2O2, ekspresi dua PeG(feniletanoidglikosida)gen terkait jalur biosintesis (Cs4CL1, CsC4H1), dua gen yang diinduksi ROS (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099), dan satu gen seperti faktor transkripsi keluarga WRKY (CsWRKY1: Contig 07) diukur dengan RT-qPCR setelah perawatan dengan H2O2 (Gbr. 1). Ekspresi CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1, dan CsWRKY1 diatur ke atas lebih dari 15-kali lipat, 3-kali lipat, 45-kali lipat, dan 4-kali lipat, masing-masing 2 jam setelah H2O2 perlakuan. Ekspresi CsHSP1 diubah hanya 1,8 kali lipat setelah perlakuan H2O2.
Perjalanan waktu ekspresi CsWRKY1, CsC4H1, dan Cs4CL1 setelah perlakuan H2O2 dianalisis lebih lanjut dengan RT-qPCR (Gbr. 2). Ekspresi CsC4H1 dan Cs4CL1 sangat meningkat (masing-masing lebih dari 80-kali lipat dan 50-kali lipat) setelah perlakuan 16-h dan kemudian diatur ke bawah setelah 32 jam. Ekspresi CsWRKY1 diatur ke atas lebih dari 20-kali lipat pada 4 jam dan kemudian menurun dari 8 jam sesudahnya (Gbr. 2).

Gambar 2. Ekspresi relatif CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B), dan Cs4CL1 (C) pada waktu yang berbeda setelah perlakuan dengan 80 ug dm-3 H2O2. Ekspresi dinormalisasi ke kontrol; (diolah dengan air). Berarti plus - SD dari tiga pengulangan biologis; * - P < 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Diskusi

Hidrogen peroksida adalah elisitor tanaman terkenal yang menunjukkan berbagai efek pada tanaman. Seperti ROS, ia dapat menginduksi sistem pemulung ROS yang terdiri dari superoksida dismutase, katalase, peroksidase, dll., dan berfungsi sebagai sinyal hilir garam, osmotik, dan dehidrasi.

tekanan (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Disarankan bahwa pembentukan H2O2 pada tanaman disertai dengan biosintesis metabolit sekunder yang diinduksi dalamBentengsalsabudaya sel. Seperti yang diharapkan, hasil kami mengungkapkan bahwa PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis diCistanche salsakultur sel diinduksi setelah perlakuan H2O2 (Tabel 1). Konten dari tiga PeG utama(feniletanoidglikosida)meningkat setelah pengobatan H2O2 menunjukkan peran penting dalam biosintesis PeGs. Gen yang diperkaya di perpustakaan SSH lebih lanjut menyarankan efeknya pada PeGs(feniletanoidglikosida)induksi biosintesis dalamCistanche salsa.

Banyak gen responsif H2O2-yang diketahui, seperti askorbat peroksidase (CISTH069, Karyotou dan Donaldson 2005), h-quinone oxidoreductase (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014), dan gen respon resistensi penyakit (Contig10, Nanda, et al. 2010), diperkaya di perpustakaan SSH (Tabel 3, Tabel 2 Suppl.). Beberapa gen responsif ROS yang khas ini dengan ekspresi yang diinduksi setelah pengobatan H2O2 dikonfirmasi lebih lanjut oleh RT-qPCR (Gbr. 1 dan 2) yang menunjukkan bahwa perpustakaan SSH yang memenuhi syarat dibangun di sini. Dua gen jalur biosintesis PeG, CsC4H1 dan Cs4CL1, juga ditemukan di perpustakaan ini dan kedua ekspresi gen ini diinduksi oleh perlakuan H2O2 dengan cara yang bergantung pada waktu (Gbr. 2). Ini menunjukkan bahwa pengobatan H2O2 menginduksi PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis pada tingkat genetik melalui regulasi gen jalur PAL. Namun, PAL dan gen biosintesis PeGs hilir lainnya (Wang et al. 2012) tidak diidentifikasi di perpustakaan SSH; mungkin karena perpustakaan belum cukup diurutkan. Hubungan antara ekspresi yang diinduksi CsC4H1 dan Cs4CL1 dan peningkatan biosintesis PeGs setelah perlakuan H2O2 harus diklarifikasi dengan analisis lebih lanjut.

Selain gen jalur PAL yang diinduksi oleh pengobatan H2O2, dua faktor transkripsi keluarga WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) ditemukan di perpustakaan SSH (Tabel 3 dan Tabel 2 Suppl.), dan ekspresi yang diinduksi CsWRKY1 dikonfirmasi oleh RT-qPCR . Ekspresinya responsif terhadap pengobatan H2O2 lebih awal dari ekspresi dua gen jalur PAL, Cs4CL1 dan CsC4H1 (Gbr. 2). Dari penelitian sebelumnya, ko-ekspresi beberapa faktor transkripsi WRKY dan gen jalur PAL telah diamati pada padi (Gupta et al. 2012). Lebih lanjut, ekspresi gen PAL diatur ke atas dalam mutan ekspresi berlebih OsWRKY03 (Liu et al. 2005). Dua faktor transkripsi keluarga WRKY yang disebutkan di atas mungkin juga terlibat dalam PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis dalamBentengsalsa. Menariknya, EST terkait dehidrasi (CISTH067, CISTH064) ditemukan di perpustakaan SSH, yang mungkin menyarankan bahwa pengobatan H2O2 terkait dengan ekspresi gen responsif dehidrasi diBentengsalsaseperti yang diamati pada tanaman lain (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Satu gen terkait pensinyalan giberelin (GA), giberelin reseptor gid1b-like (CISTH092), diidentifikasi di perpustakaan SSH yang menyiratkan hubungan pensinyalan GA dan perawatan H2O2 diBentengsalsa, yang juga dilaporkan dalam jelai (Bahin et al. 2011). Namun, penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mengkonfirmasi apakah gen ini terkait dengan PeGs(feniletanoidglikosida)biosintesis. Selain gen yang disebutkan di atas, perpustakaan SSH yang dibangun di sini juga menyajikan gen dengan atau tanpa hit BLAST. Ini meningkatkan pemahaman kita tentang efek H2O2 pada C. salsa dan pertama-tama memasok informasi gen-gennya yang terlibat dalam biosintesis PeGs.

Sebagai kesimpulan, kami menilai efek H2O2 pada PeGs(feniletanoidglikosida)induksi diBentengsalsabudaya sel. Pustaka SSH dibangun setelah perawatan H2O2, dan ekspresi gen yang dipilih dikonfirmasi oleh RT-qPCR. Dua gen terkait jalur biosintesis PeG dan gen responsif H2O2-lainnya diidentifikasi. Temuan ini akan memperluas pemahaman kita tentang H2O2-PeGs yang diinduksi(feniletanoidglikosida)biosintesis dalamBentengsalsake tingkat molekuler, memberikan informasi untuk manipulasi genBentengsalsakultur sel untuk meningkatkan PeGs(feniletanoidglikosida)produksi.

Dari: ' Identifikasi EST responsif hidrogen peroksida yang terlibat dalam biosintesis glikosida fenilethanoid dalam kultur sel salsa Cistanche' olehJ.CHEN dkk.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN dkk. DOI: 10.1007/dtk10535-015-0541-y

Referensi

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Crosstalk antara spesies oksigen reaktif dan jalur sinyal hormonal mengatur dormansi biji-bijian di barley. - Lingkungan Sel Tumbuhan. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: Spesies oksigen reaktif yang dihasilkan oleh produk penginduksi heat shock protein (Hsp) berkontribusi pada produksi Hsp70 dan Hsp{{1} }dimediasi kekebalan protektif di Artemia franciscana terhadap vibrio patogen. - Dev. Komp. kekebalan. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: Ekspresi NAD(P)H: quinone oxidoreductase 1 dalam sel HeLa peran hidrogen peroksida dan fase pertumbuhan. - J.biol. Kimia 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: Standarisasi qPCR dan RT-qPCR. - Gen. Ind. Bioteknologi. Berita 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:BentengKultur suspensi sel deserticola:feniletanoidglikosidabiosintesis dan aktivitas antioksidan. - Proses Biokimia. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Peningkatanfeniletanoidglikosidabiosintesis dalamBentengkultur suspensi sel deserticola oleh elisitor kitosan. - J. Bioteknologi. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Asam absisat memediasi produksi hidrogen peroksida dalam kacang tanah yang disebabkan oleh stres air. - Biol. Tanaman. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Gen ketahanan ledakan fungsional tunggal Pi54 mengaktifkan mekanisme pertahanan kompleks dalam beras. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Karakterisasi molekuler gen fenilalanin amonia-liase dariBentenggurun pasir. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Respon tanaman terhadap cekaman air: peran spesies oksigen reaktif. - Perilaku Sinyal Tanaman 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Askorbat peroksidase, pemulung hidrogen peroksida dalam membran glioksisomal. - Busur h. Biokimia. Biofis. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Studi tentang konstituencistancheadalah herbal. 4. Isolasi dan struktur 2 glikosida fenilpropanoid baru, cistanoside-C, dan cistanoside-D. - Kimia. Farmasi. Banteng. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Peningkatanfeniletanoidglikosidabiosintesis dalam kultur selBentengdeserticola oleh stres osmotik. - Perwakilan Sel Tanaman 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Peningkatan akumulasifeniletanoidglikosidadengan memberi makan prekursor ke kultur suspensiBentengsalsa. - Biokimia. Ind. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, aktivator transkripsi beras yang berfungsi dalam jalur sinyal pertahanan hulu OsNPR1. - Res. Sel 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Media yang direvisi untuk pertumbuhan cepat dan bioassay dengan kultur jaringan tembakau. - Fisiol. Tanaman. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Feniletanoidglikosidadengan aktivitas anti-inflamasi dari batangBentengdeserticola dibudidayakan di gurun Tarim. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Spesies oksigen reaktif selama interaksi awal tanaman-mikroorganisme. - J. Integrasi. Tumbuhan Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Peningkatan produksifeniletanoid glikosidadengan memberi makan prekursor ke kultur selBentenggurun pasir. - Proses Biokimia. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Peningkatan produksifeniletanoidglikosidaolehBentengsel deserticola dikultur dalam bioreaktor pengangkutan udara loop internal dengan penambah ayakan. - Enzim Mikrobiol. Teknologi. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Karakterisasi anatomi dan histokimia haustorium in vitro dari akar Castilleja tenuiflora. - Biol. Tanaman. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: Aklimasi hidrogen peroksida meningkatkan toleransi garam dengan mengaktifkan protein terkait pertahanan di Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 mengatur pensinyalan yang bergantung pada spesies oksigen reaktif selama respons awal terhadap stres garam
dalam nasi. - Sel Tumbuhan 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Bentengdeserticola YC Ma, "Ginseng Gurun": ulasan. - Amer. J. dagu. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Pola pengendapan hidrogen peroksida dalam pelepah daun padi di bawah tekanan garam. - Biol. Tanaman. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 mengatur respons cekaman kekeringan dan pembukaan stomata yang diinduksi cahaya biru oleh menghambat akumulasi spesies oksigen reaktif di Arabidopsis. - Fisiol Tumbuhan. 162: 1030-1041, 2013.