Kontak:{0}}/ WhatsApp: 008618081934791

Klik di sini untuk informasi tentang Bagian I (Pengantar, materi, dan metode) artikel ini.

Bagaimana obat-obatan Cina yang menguatkan ginjal menghambat apoptosis neuron dopaminergik?

Shaogang Lin,1 Shuifen Ye,2 Jinmu Huang,1 Yun Tian,3 Yihui Xu,2 Mengqi Wu,2 Jingxia Wang,2 Songying Wu,4 and Jing Cai, MD, Ph.D.2

BAHAN DAN METODE

Rancangan

Pengamatan komparatif in vitro dari farmakologi serum.

Time and setting

Percobaan dilakukan di Laboratorium Sitobiologi, Universitas Pengobatan Tradisional Tiongkok Fujian, Tiongkok dari 2010 hingga 2011.

Bahan:

Hewan

Sebanyak 60 ekor tikus Wistar jantan, umur 8 minggu, dengan berat 200–220 g, dibeli dari SLAC Laboratory Animal Co., Ltd., Shanghai, China (No. Lisensi SCXK (Hu) {{4} }). Mereka ditempatkan di Laboratorium Pusat Hewan Universitas Fujian Pengobatan Tradisional Cina di Cina pada 20-22 derajat dengan kelembaban 40-60 persen dan penerangan dari 7:00 sampai 19:00 Makanan disediakan oleh Pusat Hewan Laboratorium Pengobatan Tradisional Tiongkok Universitas Fujian. Semua prosedur eksperimental sesuai dengan Saran Panduan untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium, yang dirumuskan oleh Kementerian Sains dan Teknologi Tiongkok[33].

Cistanche untuk meningkatkan fungsi ginjal

Narkoba

Herba Epimedii, bagian udara dari Epimedium sagittatum Maxim berasal dari Provinsi Sichuan, Cina; Semen Cuscutae, benih kering Cuscuta Chinensis Lam., berasal dari Provinsi Shandong, Cina; dan Herba Cistanches, daun sisik chylocaulous dari Cistanche deserticola YCMa, berasal dari Daerah Otonomi Uygur Xinjiang. Semua obat-obatan disediakan oleh Fujian Pharmaceutical Co., Ltd., Provinsi Fujian, Cina. Herba Epimedii, Semen Cuscutae, dan Herba Cistanches, masing-masing 97,2 g, direndam dalam bejana rebusan yang berisi 1 500 mL air suling, dipanaskan dengan cepat, direbus, dipertahankan pada suhu 100 sampai biarkan komponen aktif obat larut dan terkondensasi menjadi 540 mL. Jumlah kasar obat dalam larutan obat adalah 0,180 g/mL. Larutan disaring, dimasukkan ke dalam botol, ditutup rapat, disterilkan, dan disimpan pada suhu 4 derajat . Selegiline, 5 mg × 10 tablet per kit, dibeli dari Nanjing Sike Pharmaceutical Co., Ltd. (Provinsi Jiangsu, Cina). Selegiline, 21,6 mg, dilarutkan dalam air suling ganda untuk menyiapkan larutan air 540 mL. Konsentrasi larutan obat adalah 0,04 mg/mL. Larutan obat ditempatkan dalam botol, disegel, disterilkan, dan disimpan pada suhu 4 derajat .

Metode

Persiapan serum yang mengandung obat

Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches, dan kelompok selegiline diperfusi intragastrik dengan serum yang mengandung obat yang mengandung 0.180 g/mL Herba Epimedii, Semen Cuscutae, atau Herba Cistanches, atau {{ 5}}.04 mg/mL selegiline, dua kali sehari, dengan dosis 0.1 mL/kg, selama 14 hari berturut-turut. Kelompok serum kosong diberi volume air suling yang sama. Hewan-hewan itu tidak diberi makanan dan air selama 12 jam setelah pemberian terakhir. Tikus dibius dengan injeksi intraperitoneal dengan 0,3 mL/100 g ketamin hidroklorida. Darah diambil dari aorta perut dan disentrifugasi pada 1 000 putaran/menit selama 15 menit. Supernatan dipanen, dinonaktifkan dalam penangas air pada suhu 56 derajat selama 30 menit, disaring melalui membran mikropori 0,22 m, dan disimpan pada suhu –20 derajat.

Persiapan larutan 50×Sato

Campuran 60 mL DMEM/F12 (Gibco, Carlsbad, CA, USA), 15 mg insulin sapi (Sigma, St. Louis, MO, USA), 15 mg transferrin (Sigma), 145,8 mg natrium piruvat (Biosharp, Korea), 12 mg putrescine (Solarbio, Beijing, China), 25 L sodium selenite (1 mg/mL, 100 mg/100 mL H2O; Sigma), dan 100 L progesteron (0,315 mg /mL, 15,75 mg/50 mL; Biosharp) menjadi sasaran ultrasonografi dalam penangas es selama 1,5 jam, disaring melalui filter 0,22 m, dipisahkan dan disimpan pada -20 derajat.

Cistanche untuk merawat fungsi ginjal

Budaya sel

Sel diunggulkan dalam DMEM/F12 yang dilengkapi dengan 5 persen (v/v) serum janin sapi (Gibco), 1 persen (v/v) glutamin (Sigma), 2 persen (v/v) 50×Sato's larutan, dan 2 persen (v/v) penisilin/streptomisin. Sel kemudian diinkubasi dalam 5 persen (v/v) CO2 dan dipertahankan pada kelembaban jenuh pada 37 derajat. Sel-sel ditripsinisasi dengan tripsin 0,25 persen (b/v) dan dilewatkan. Sel-sel dalam fase logaritmik dikumpulkan untuk percobaan selanjutnya.

Pengaruh H2O2 pada pertumbuhan sel MES23.5

Sel diunggulkan dalam 96-pelat kultur sumur (5 × 105 sel/sumur), diinkubasi dengan larutan kultur H2O2 50, 100, 150, 200, 300, dan 400 mol/L (Shanghai Shiyi Chemicals Reagent Co., Ltd. ., Shanghai, China) setelah 24 jam selama 1, 3, 6, 9, 12, 24 jam, diikuti oleh MTT (Sigma) selama 4 jam. Solusi di sumur dibuang, dan 150 L dimetil sulfoksida (Sigma) ditambahkan. Pelat kultur dikocok selama 10 menit, dan absorbansi sampel pada 570 nm ditentukan menggunakan pembaca pelat mikro otomatis (EXL800; Biotek, Winooski, VT, USA). Larutan kultur DMEM/F12 yang baru disiapkan digunakan sebagai kontrol negatif. Dua sumur paralel dipasang pada setiap titik waktu. Percobaan dilakukan dalam rangkap tiga.

Pengaruh serum yang mengandung obat pada konsentrasi yang berbeda pada pertumbuhan sel MES23.5 yang diobati dengan H2O2-

Sel diunggulkan dan dipapar serum yang mengandung obat yang mengandung 5, 10, 15, 20, 25, dan 30 persen (v/v) Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches, dan selegiline atau serum kosong selama 24 jam. Sel dikultur lebih lanjut dengan larutan kultur yang mengandung 100 mol/L H2O2 selama 3 jam, diikuti dengan MTT selama 4 jam. Tiga sumur paralel dipasang di setiap kelompok. Larutan kultur DMEM/F12 yang baru disiapkan digunakan sebagai kontrol negatif. Sel yang dikultur dalam larutan kultur yang mengandung 100 mol/L H2O2 dan serum kosong berfungsi sebagai kelompok model, dan sel yang dikultur dalam serum kosong saja berfungsi sebagai kelompok serum kosong. Percobaan dilakukan dalam rangkap tiga. Nilai rata-rata absorbansi masing-masing kelompok dihitung sebagai tingkat kelangsungan hidup sel.

Flow cytometry untuk ekspresi FasL, Fas, caspase-3, dan Bcl-2 dalam sel MES23.5

Sel diunggulkan dan diperlakukan seperti sebelumnya. Sel yang dikultur dalam 100 mol/L H2O2 saja dianggap sebagai kelompok model. Antibodi FasL berlabel fikoeritrin dan kontrol isotipe FasL (masing-masing 5 L), ditambahkan ke dalam dua tabung (BD, San Jose, CA, USA), dicampur secara merata dengan sel, disimpan pada suhu kamar dalam gelap selama 15 menit, disentrifugasi pada 1 000 r/min selama 5 menit setelah penambahan 2 mL PBS. Supernatan dibuang, dan sel disuspensikan kembali menggunakan 500 L PBS. Panjang gelombang perangkat laser untuk flow cytometry (Faccalibur; BD) adalah 488 nm. Tingkat ekspresi sel FasL-positif dianalisis dan dihitung dengan perangkat lunak Cell Quest (BD). Laju ekspresi sel positif Fas-, caspase-3-, dan Bcl-2-dideteksi menggunakan metode yang sama.

ELISA untuk kandungan faktor pertumbuhan saraf, faktor neurotropik yang diturunkan dari otak, dan faktor neurotropik yang diturunkan dari sel glial dalam sel

Sel diunggulkan dan diperlakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya. Supernatan dipanen, dan faktor pertumbuhan saraf, faktor neurotropik yang diturunkan dari otak, dan kandungan faktor neurotropik yang diturunkan dari sel glial diukur sesuai dengan instruksi pabrik (BD). Absorbansi diukur pada 450 nm menggunakan pembaca pelat mikro otomatis (EXL800; Biotek, Winooski, VT, USA).

Analisis statistik

Hasil dinyatakan sebagai mean ± SD. Data dianalisis menggunakan perangkat lunak SPSS 18.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Analisis varians satu arah dilanjutkan dengan uji beda paling signifikan komparasi berganda. Nilai P < 0.05="" dianggap="" signifikan="" secara="">

Cistanche untuk fungsi ginjal

Ucapan Terima Kasih

Kami berterima kasih kepada Chen B, Laboratorium Neurobiologi, Universitas Kedokteran Modal, karena dengan murah hati menyediakan MES23.5dopaminergiksel saraf.

Catatan kaki

Pendanaan: Penelitian ini didukung oleh Development Fund of Chen Keji Integrative Medicine, No. CKJ2010025 dan Key Foundation of Society Development di Provinsi Fujian, No. 2013Y0059.

Konflik kepentingan: Tidak ada yang diumumkan.

Persetujuan etis: Penelitian ini mendapat izin dari Komite Etika Hewan dari Universitas Pengobatan Tradisional Cina Fujian, Cina.

(Ditinjau oleh Diwakarla S, Norman C, Cheng HY, Wang JM)

(Diedit oleh Wang LM, Su LL, Li CH, Song LP, Liu WJ, Zhao M)

REFERENSI

[1] Zhang ZX, Roman GC, Hong Z, dkk. Penyakit Parkinson di Cina: prevalensi di Beijing, Xian, dan Shanghai. Lanset. 2005;365(9459)::595–597. [PubMed] [Google Cendekia]

[2] Dia JC, Wang WW. Pengaruh Tianma Gauteng Yin padaapoptosisdaridopaminergikneuron pada tikus model penyakit Parkinson. Zhongyi Zazhi. 2010;51(11):1024–1027. [Beasiswa Google]

[3] Perier C, Bové J, Vila M. Mitokondria dan kematian sel terprogram pada penyakit Parkinson:apoptosisdan seterusnya. Sinyal Redoks Antioksidan. 2012;16(9):883–895. [PubMed] [Google Cendekia]

[4] Gallagher DA, Schapira AH. Etiopatogenesis dan pengobatan penyakit Parkinson. Curr Top Med Chem. 2009;9(10):860–868. [PubMed] [Google Cendekia]

[5] Rangasamy SB, Soderstrom K, Bakay RA, dkk. Terapi faktor neurotropik untuk penyakit Parkinson. Prog Otak Res. 2010;184:237–264. [PubMed] [Google Cendekia]

[6] Zuccato C, Cattaneo E. Faktor neurotropik yang diturunkan dari otak pada penyakit neurodegeneratif. Nat Rev Neurol. 2009;5(6):311–322. [PubMed] [Google Cendekia]

[7] Cai DF, Chen XQ, Gao Y. Pengaruh resep yangban semak pada fungsi nigrostriatal pada tikus model parkinson setelah pengobatan levodopa jangka panjang. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2002;22(1):43–46. [PubMed] [Google Cendekia]

[8] Yang MH, Wang HM, Liu Y. Pengaruh Rebusan Bushen Huoxue pada reseptor yatim piatu dan tirosin hidroksilase di otak tikus dengan penyakit Parkinson. Chin J Integral Med. 2011;17(1):43–47. [PubMed] [Google Cendekia]

[9] Li SD, Liu Y, Yang MH. Efek semak-semak Huo Xue yin pada konten NF-kB dan NO otak pada tikus model penyakit Parkinson. J Tradit Chin Med. 2012;32(1):67–70. [PubMed] [Google Cendekia]

[10] Tian Y, Cai J, Chen XZ, dkk. Efek perlindungan dari nutrisi Cinaginjalherbal pada neuron neuron striatal pada tikus model penyakit Parkinson. Zhongguo Laonian Xue Zazhi. 2011;31(3):440–443. [Beasiswa Google]

[11] Yu H, Li YH, Feng XL, dkk. Identifikasi dan uji aktivitas tirosin hidroksilase dalam sel MES23.5. Zhongguo Shengwu Huaxue yu Fenzi Shengwu Xuebao. 2004;20(1):95–100. [Beasiswa Google]

[12] Wang XR. Beijing: Rumah Penerbitan Medis Rakyat; 2007. Metode dan Teknologi Eksperimen Toksikologi. [Beasiswa Google]

[13] Lv SJ. Beijing: Pers Ilmu Kedokteran China; 2010. Uji Imunologi Klinik. [Beasiswa Google]

[14] Eriksen JL, Wszolek Z, Petrucelli L. Patogenesis molekuler penyakit Parkinson. Neurol Lengkung. 2005;62(3):353–357. [PubMed] [Google Cendekia]

[15] Christen Y. Stres oksidatif dan penyakit Alzheimer. Am J Clin Nutr. 2000;71(2):621S–629S. [PubMed] [Google Cendekia]

[16] Blandini F, Armenteros MT, Fancellu R, dkk. Efek neuroprotektif rasagiline dalam model hewan pengerat penyakit Parkinson. Exp Neurol. 2004;187(2):455–459. [PubMed] [Google Cendekia]

[17] Zhang XN, Wang HH, Wang ZQ, dkk. Efek perlindungan dari icariin padaapoptosisdari neuron tikus yang dikulturkan terutama yang diinduksi oleh peptida Aâ25-35. Zhejiang Daxue Xuebao: Larangan Yixue. 2007;36(3):224–228. [PubMed] [Google Cendekia]

[18] Wang LH, Bu PC, Bao YM. Efek neuroprotektif ekstrak Cuscuta Chinensis Lam pada kerusakan sel PC12 terdiferensiasi neuronal yang disebabkan oleh spesies oksigen reaktif. Xibao Shengwu Xue Zazhi. 2005;27:69–72. [Beasiswa Google]

[19] Sun SL, Wang B, Peng HS. Penghambatan ekstrak Dodder ke miosit jantungapoptosispada tikus yang menua. Zhongguo Laonian Xue Zazhi. 2011;31:642–644. [Beasiswa Google]

[20] Yang JH, Hu JP, Rena K, dkk. Hubungan struktur-aktivitas glikosida fenilethanoid pada tanaman Cistanche salsa pada aktivitas antioksidan. Zhong Yao Cai. 2009;32(7):1067–1069. [PubMed] [Google Cendekia]

[21] Wu Y, Li L, Wen T, dkk. Efek perlindungan echinacosida pada hepatotoksisitas yang diinduksi karbon tetraklorida pada tikus. Toksikologi. 2007;232(1-2):50–56. [PubMed] [Google Cendekia]

[22] Cheng SD. Beijing: Rumah Penerbitan Medis Rakyat; 2006. Penyakit Parkinson. [Beasiswa Google]

[23] Yang T. Beijing: Rumah Penerbitan Medis Rakyat; 2010. Biologi Sel. [Beasiswa Google]

[24] Baba N, Koji T, Itoh M, dkk. Perubahan timbal balik dalam ekspresi Bcl-2 dan Bax di nukleus hypoglossal setelah axotomy pada tikus dewasa: kemungkinan keterlibatan dalam induksi kematian sel saraf. Otak Res. 1999;827(1-2):122–129. [PubMed] [Google Cendekia]

[25] Zuccato C, Cattaneo E. Faktor neurotropik yang diturunkan dari otak pada penyakit neurodegeneratif. Nat Rev Neurol. 2009;5(6):311–322. [PubMed] [Google Cendekia]

[26] Peterziel H, Unsicker K, Krieglstein K. TGFbeta menginduksi respons GDNF di neuron dengan perekrutan GFRalpha1 ke membran plasma. J Sel Biol. 2002;159(1):157–167. [Artikel gratis PMC] [PubMed] [Google Cendekia]

[27] Hong M, Mukhida K, Mendez I. Terapi GDNF untuk penyakit Parkinson. Pakar Rev Neurother. 2008;8(7):1125–1139. [PubMed] [Google Cendekia]

[28] Chaturvedi RK, Shukla S, Seth K, dkk. Faktor pertumbuhan saraf meningkatkan kelangsungan hidupdopaminergikcangkok, menyelamatkan neuron dopaminergik nigral, dan mengembalikan defisit fungsional pada model tikus penyakit Parkinson. Neurosci Lett. 2006;398(1-2):44–49. [PubMed] [Google Cendekia]

[29] Kavanagh ET, Loughlin JP, Herbert KR, dkk. Fungsi sel PC12 yang dilindungi NGF setelah terpapar 6-hidroksidopamin. Biochem Biophys Res Commun. 2006;351(4):890–895. [PubMed] [Google Cendekia]

[30] Baquet ZC, Bickford PC, Jones KR. Faktor neurotropik yang diturunkan dari otak diperlukan untuk pembentukan jumlah yang tepat daridopaminergikneuron di substansia nigra pars compacta. J Neurosci. 2005;25(26):6251–6259. [Artikel gratis PMC] [PubMed] [Google Cendekia]

[31] Hung SY, Liou HC, Fu WM. Mekanisme aksi heme oksigenase-1 terlibat dalam peningkatan ekspresi faktor neurotropik. Neurofarmakologi. 2010;58(2):321–329. [PubMed] [Google Cendekia]

[32] Duarte EP, Curcio M, Canzoniero LM, dkk. Perlindungan saraf oleh GDNF di otak iskemik. Faktor Pertumbuhan. 2012;30(4):242–257. [PubMed] [Google Cendekia]

[33] Kementerian Sains dan Teknologi Republik Rakyat Tiongkok. Saran Pedoman Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium. 2006 30 September; [Beasiswa Google]