Penilaian Lebih Lanjut Salvia Haenkei Sebagai Strategi Inovatif Untuk Menangkal Penuaan Kulit dan Mengembalikan Integritas Penghalang

Mohon hubungi{0}}untuk informasi lebih lanjut

abstrak:Kulit adalah penghalang penting dari tubuh manusia yang melakukan banyak fungsi. Faktor endogen, bersama dengan serangan eksternal, terus menerus mempengaruhi integritas kulit, menyebabkan perubahan struktural yang berbeda yang mempengaruhi tidak hanya penampilan kulit tetapi juga berbagai fungsi fisiologisnya. Perubahan fungsi penghalang menyebabkan peningkatan risiko pengembangan penyakit dan reaksi samping, sehingga pentingnya menjaga integritas penghalang epidermis dan memperlambat proses penuaan kulit terbukti.pertumbuhan penis cistancheSalvia hankie (SH) baru-baru ini diidentifikasi sebagai agen anti-penuaan potensial; ekstraknya mampu menurunkan tingkat sel tua dengan mempengaruhi pelepasan ll.1a dan mengurangi pembentukan spesies oksigen reaktif (ROS). Dalam penelitian ini, ekstrak SH diuji pada human keratinocyte cell line (HaCaT) yang terpapar faktor stres terkait penuaan dini sel seperti radikal bebas dan radiasi ultraviolet B. Kami mengkonfirmasi bahwa SH bertindak sebagai pemulung ROS dan menemukan kemampuannya untuk mengembalikan integritas penghalang kulit dengan memperkuat struktur sitoskeleton, menyegel persimpangan yang ketat, dan meningkatkan laju migrasi sel. Mengingat hasil ini, pekerjaan ini menjadi relevan, mengidentifikasi Salvia hankie sebagai senyawa yang berguna untuk perawatan kulit anti-penuaan dalam kinerja klinis.

Silakan klik di sini untuk tahu lebih banyak

pengantar

Kulit yang sehat dan berfungsi sangat penting untuk melindungi dehidrasi dan penetrasi berbagai 100 persen mikroorganisme, alergen, iritasi, dan radiasi. Paparan harian agen ekstrinsik dikombinasikan dengan beberapa faktor intrinsik, seperti genetika, metabolisme sel, hormon, dan proses metabolisme, menyebabkan penuaan alami kulit [1]. Secara khusus, fenomena penuaan kulit sangat terkait dengan radiasi ultraviolet, polusi, penggunaan otot berulang, dan gravitasi [2, 3]. Penuaan kulit, oleh karena itu, hasil dari perubahan struktural dan fisiologis kumulatif dan modulasi progresif lapisan kulit [2, 4, 5]. Bahkan jika penuaan tidak dianggap sebagai kondisi patologis, melainkan proses biologis dan tak terelakkan, korelasinya dengan berbagai penyakit kulit sekarang sudah mapan. Mempertimbangkan bahwa penyakit kulit terkait usia yang paling relevan adalah kelainan degeneratif, neoplasma jinak dan ganas, dll., pentingnya perawatan kulit untuk mengobati atau mencegah hasil kelainan kulit tertentu menjadi jelas.[6-8]. Saat ini, strategi anti-penuaan kulit bertindak untuk membalikkan tanda-tanda penuaan foto/kronologis dermal dan epidermal. Berdasarkan pendekatan mereka, mereka dapat diklasifikasikan sebagai berikut: perawatan tata rias, agen topikal, prosedur invasif, agen sistemik, menghindari faktor eksogen penuaan, koreksi gaya hidup dan kebiasaan, dan pengobatan pencegahan [9]. Ada dua kelompok utama agen yang dapat digunakan sebagai komponen formulasi anti-penuaan: 1. Pengatur sel, seperti retinol, peptida, dan faktor pertumbuhan, yang secara langsung bekerja pada metabolisme dan produksi kolagen; 2. Antioksidan, seperti vitamin, polifenol, dan flavonoid, mampu mengurangi degradasi kolagen [9].

Bukti substansial mendukung gagasan bahwa penuaan kulit terutama didorong oleh ROS, yang dihasilkan selama metabolisme sel oksidatif endogen [10,11]. Diketahui bahwa akumulasi ROS bertanggung jawab atas kerusakan sel termasuk peroksidasi lipid, kerusakan protein membran, dan mutasi DNA yang menyebabkan perubahan struktural dan fungsional kulit. Dalam perjalanan waktu, sel-sel manusia mendukung peningkatan alami tingkat ROS, terkait dengan hilangnya sebagian pertahanan antioksidan. Kondisi yang tak terhindarkan ini selanjutnya dipupuk oleh penyinaran ultraviolet harian (UVR) yang menginduksi sintesis matriks metaloproteinase (MMPs) dan, akibatnya, penghancuran kolagen yang dimediasi MMP [12, 13]. Studi in vivo menunjukkan hubungan kausal antara kerusakan oksidatif mitokondria, penuaan seluler, dan fenotipe penuaan [10, 14].

Penuaan seluler didefinisikan sebagai penghentian stabil pertumbuhan sel yang terjadi di semua sel manusia selama penuaan [15-17]. Sebagai akibat dari peristiwa stres, seperti over-ekspresi onkogen, generasi ROS, dan kerusakan DNA (misalnya disebabkan oleh UVR, khususnya oleh sinar UVB), sel dapat menjadi tua sebelum waktunya [18].manfaat cistanche salsaDalam skenario ini, tampak jelas pentingnya mengembangkan strategi inovatif yang mampu mencegah akumulasi sel-sel tua atau membunuhnya secara selektif, sehingga menangkal penuaan dan gangguan terkait penuaan. Baru-baru ini, kami mengidentifikasi Salvia hankie(SH), tanaman Bolivia yang kaya akan vitamin B dan sifat antioksidan, sebagai agen anti-penuaan yang potensial [18].

Akumulasi sel-sel tua dari waktu ke waktu dikenal sebagai salah satu mekanisme yang paling penting di mana jaringan mengalami proses penuaan, yang tampaknya terutama dipicu oleh persistensi status inflamasi yang khas. Faktanya, meskipun sel-sel tua tidak dapat berkembang biak, mereka memiliki aktivitas metabolisme yang tinggi dan mereka secara efisien menghasilkan beberapa molekul pro-inflamasi [19]. Dengan menggunakan model epidermis kulit manusia (EpiSkin), memang ditunjukkan bahwa ekstrak SH menurunkan kadar sel-sel tua dengan mempengaruhi pelepasan Illa dan mengurangi pembentukan ROS [18].

Dalam kondisi homeostatis, kulit merupakan penghalang efisien yang melindungi dari serangan eksternal dan faktor endogen dan mengatur hilangnya cairan, elektrolit, dan protein. Tugas penting ini terutama dianggap berasal dari epidermis, epitel yang dinamis dan sangat berlapis. Dua konstituen epidermis utama adalah stratum korneum, lapisan eksternal, dan tight junction (TJs), sambungan antar sel yang menutup keratinosit yang berdekatan di stratum granulosum [20]. Adhesi sel-sel diperlukan untuk mempertahankan integritas penghalang epidermis.cistanche tubulosa dosis redditFungsi penting ini dipenuhi oleh sambungan sel-sel khusus: sambungan adherens (AJs), desmosom, dan sambungan ketat. Struktur ini tidak hanya memungkinkan koneksi fisik antar sel, tetapi secara keseluruhan mengatur elemen sitoskeletal, dan memodulasi jalur pensinyalan yang terlibat dalam perkembangan jaringan, struktur, dan fisiologi. Studi genetik terbaru secara tak terduga mengungkapkan peran non-kanonik protein junctional, membawa pentingnya crosstalk junctional, saling ketergantungan, dan kompensasi untuk memungkinkan ketahanan jaringan [21].

Di sini kami mempelajari aktivitas ekstrak Salvia haenkei untuk memahami mekanisme molekuler yang bertanggung jawab atas efek perlindungannya pada penuaan kulit foto/kronologis. Dengan perspektif ini, keratinosit manusia yang diabadikan secara spontan (HaCaT) digunakan sebagai model in vitro, dan mekanisme aksi SH dianalisis di bawah rejimen basal serta di bawah kondisi stres yang disebabkan oleh iradiasi H202 dan/atau UVB.

HASIL

Profil aman ekstrak SH dan sifat antipenuaan Stres oksidatif pada kulit memainkan peran utama dalam proses penuaan dan dalam patogenesis beberapa gangguan kulit [22]. Matic dkk. sudah menunjukkan aktivitas anti-penuaan Salvia haenkei juga berkorelasi dengan sifat pemulungnya [18]. Efek perlindungan ini dapat dimanfaatkan untuk mengembangkan perawatan perbaikan kulit baru yang mampu menjaga integritas penghalang. Dengan tujuan menyelidiki sifat SH secara mendalam, aktivitas ekstrak pada viabilitas sel dan generasi ROS dalam model sel HaCaT pertama kali diverifikasi.

Cistanche dapat anti-penuaan

Uji viabilitas sel dilakukan untuk mengatasi kemungkinan efek sitotoksik ekstrak Salvia haenkei pada keratinosit. Sel HaCaT diperlakukan dengan ekstrak SH 0.01-10 ug/ml） selama 24 dan 48 jam. Viabilitas sel dinilai dengan Trypan blue Exclusion Assay. Gambar 1A dan 1B menunjukkan bahwa pengobatan dengan ekstrak SH tidak mempengaruhi viabilitas sel yang mengkonfirmasi profil keamanan ekstrak pada sel HaCaT di bawah kondisi percobaan yang digunakan.

Aktivitas ekstrak Salvia haenkei pada generasi ROS diuji dalam sel HaCaT setelah 3-24 jam pengobatan dan sebelum dan sesudah paparan H2O2.

Hasil pada Gambar 2A menunjukkan bahwa SH mampu mengurangi kadar ROS basal di dalam sel, terutama selama 3-jam waktu perawatan. Selain peningkatan kadar ROS yang signifikan setelah stimulasi H-Oz (Gambar 2C), SH mampu mencegah produksi ROS. Ekstrak SH (0.01 ug/ml) secara signifikan mengurangi (-25 persen ) generasi ROS yang diinduksi oleh stimulus oksidatif (Gambar 2B), menunjukkan efek yang sebanding dengan NAC setelah 3 jam pengobatan. 24 jam pengobatan SH tampaknya lebih efektif menangkal kenaikan ROS, secara signifikan mengurangi tingkat ROS pada 1 dan 10 ug/ml (Gambar 2B). Hasil ini mengkonfirmasi Salvia haenkei

efek antioksidan, seperti yang diamati sebelumnya [18], menunjukkan efek basal antioksidan yang sudah dimulai dari perawatan singkat; efek dalam mencegah peningkatan yang diinduksi stimulus oksidatif paling relevan untuk waktu perawatan yang lebih lama.

Dilaporkan bahwa radiasi ultraviolet menginduksi peningkatan tingkat intraseluler ROS pada kulit manusia yang menyebabkan kerusakan dan penuaan dini dan patologi lainnya [23-25]. Oleh karena itu, pengaruh ekstrak SH pada produksi ROS yang dimediasi UVB telah dievaluasi. Seperti yang diharapkan, hasil pada Gambar 3C menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam tingkat ROS intraseluler setelah stimulasi UVB. Pengobatan dengan SH, yang menginduksi kecenderungan untuk mengurangi kadar ROS basal di dalam sel (Gambar 3A), mampu mencegah peningkatan yang disebabkan oleh stimulasi UVB (Gambar 3B). 3 jam pengobatan SH menginduksi kecenderungan untuk mengurangi kadar ROS; pengobatan SH lebih lama lebih efektif dalam melawan stres oksidatif, menunjukkan penurunan yang signifikan seperti yang dilaporkan pada Gambar 3A. Data ini menggarisbawahi aktivitas antioksidan Salvia haenkei juga dalam stres oksidatif yang dimediasi UVB.

Seperti disebutkan, semakin banyak bukti menunjukkan bahwa sel-sel tua terakumulasi di kulit secara kronologis dan foto-aging, berkontribusi pada perubahan dan patologi kulit terkait usia [26]. Oleh karena itu, efek Salvia hankie dievaluasi pada penanda penuaan p21 dan p27 (yang mencegah fosforilasi protein retinoblastoma (Rb) dan dengan aktivitas penghambatan pada CDK2-cyclin E, masing-masing [27]) setelah foto-stres yang diinduksi oleh radiasi ultraviolet. Hasil pada Gambar 4 menunjukkan bahwa iradiasi UVB menginduksi peningkatan yang signifikan pada tingkat mRNA p21 dan p27 dibandingkan dengan kontrol yang tidak distimulasi.cistancheTren serupa dalam pencegahan peningkatan diamati pada sel yang diobati dengan SH. SH 1 ug/ml menginduksi penurunan kadar p21 yang signifikan dibandingkan dengan kontrol terstimulasi UVB, sedangkan konsentrasi lainnya menginduksi kecenderungan untuk mengurangi (Gambar 4A). Tingkat P27 berkurang secara signifikan dengan pretreatment dengan SH 0.01,0.1 dan 10 ug/ml (Gambar 4B).

Juga ditetapkan bahwa sel-sel tua secara negatif mempengaruhi lingkungan mikro dengan mengeluarkan campuran pro-inflamasi kemokin, sitokin, hormon pertumbuhan dan protease, yang dikenal sebagai fenotipe sekretori terkait penuaan (SASP) [28]. Hasil pada Gambar 5 menunjukkan bahwa stimulasi UVB menginduksi peningkatan yang signifikan pada tingkat ILla (A), IL6(B), dan IL18(C)mRNA sehubungan dengan kontrol yang tidak distimulasi. Pretreatment dengan SH menyajikan aktivitas yang kuat dalam menangkal peningkatan kadar sitokin. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5A, SH 10 ug/ml secara signifikan menurunkan kadar ILA; peningkatan IL6 secara signifikan dilawan oleh SH 0.01,0.1 dan 10 ug/ml (Gambar 5B) sementara semua konsentrasi yang diuji mampu secara signifikan mengurangi kadar IL18 (Gambar 5C). Pemeliharaan penghalang kulit Mengingat hasil yang dilaporkan di atas pada garis sel epitel, efek ekstrak SH pada beberapa protein dan proses yang terlibat dalam pemeliharaan penghalang kulit dan perbaikan kerusakan jaringan dievaluasi.

Sirtuin{} ekspresi

Beberapa penelitian in vitro melaporkan bahwa radiasi UVB menginduksi penurunan kadar protein Sirtuinl (SIRT1) dari fibroblas manusia, menunjukkan keterlibatan SIRT1 dalam kerusakan yang dimediasi UVB [29]. Jadi, pengaruh ekstrak Salvia haenkei pada ekspresi protein Sirtuinl dievaluasi dengan uji western blot (Gambar 6). Seperti yang diharapkan, stimulasi UVB menginduksi penurunan yang signifikan dalam ekspresi protein SIRTI dalam sel HaCaT. Oleh karena itu, aktivitas ekstrak SH pada tingkat SIRT1 diselidiki. Menariknya, hasil menunjukkan bahwa 1 ug/ml ekstrak SH, dibandingkan dengan kontrol, menginduksi peningkatan ekspresi SIRTl (ditambah 40 persen) di bawah kondisi basal, menunjukkan efek stimulasi potensial pada tingkat SIRT1. Seperti yang diharapkan, stimulasi UVB menginduksi penurunan level SIRT1 yang signifikan. Hasil menunjukkan bahwa perlakuan awal dengan ekstrak SH 0,01 ug/ml menunjukkan efek perbaikan pada tingkat Sirtuin 1, dibandingkan dengan kontrol yang diobati dengan UVB.

Tes penyembuhan luka

Keratinosit adalah konstituen utama dari epidermis, menyediakan penghalang antara organisme dan lingkungan. Oleh karena itu, proliferasi dan migrasinya memainkan peran kunci dalam pemeliharaan penghalang yang efektif dan dalam penyembuhan luka setelah cedera [30, 31]. Dengan demikian, efek SH pada migrasi sel HaCaT dievaluasi. Gambar pada Gambar 7A menunjukkan bahwa pengobatan dengan SH menyebabkan pengurangan ketebalan goresan yang menunjukkan efek pada migrasi sel HaCaT. Gambar 7B melaporkan konstruksi kymogram dari kecepatan migrasi sel HaCaT; gambar menunjukkan peningkatan yang bergantung pada konsentrasi dalam migrasi sel. Grafik pada Gambar 7C menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam kecepatan migrasi sel setelah 4-8 jam pengobatan dengan ekstrak SH 0,01 ug/ml. Peningkatan maksimum dicapai dalam interval 8-12 jam, di mana laju dalam sel kecepatan migrasi sel adalah sekitar 165 persen sehubungan dengan kontrol. Data ini, sebagai hasil yang diperoleh pada proliferasi sel, menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak SH terendah mampu menginduksi peningkatan kecepatan migrasi sel yang tidak terkait dengan fenotipe hiperproliferatif.

Pemeliharaan persimpangan ketat

Selain stratum korneum, tight junctions (TJs) memainkan peran penting dalam integritas kulit, bertindak sebagai penghalang air dan zat terlarut, dan terlibat dalam diferensiasi, proliferasi, polaritas sel, dan proses transduksi sinyal sel. Studi terbaru menunjukkan bahwa sinar UV mengubah ekspresi dan lokalisasi protein tunggal dari struktur TJ, yang pada gilirannya mengganggu fungsi penghalang kulit [32].

Untuk mengevaluasi efek ekstrak Salvia haenkei sebagai agen pelindung yang mungkin terhadap gangguan TJ, ekspresi occludin diukur dengan imunositokimia setelah paparan radiasi UVB. Gambar pada Gambar 8A, dan 8B menunjukkan bahwa pengobatan dengan kedua konsentrasi SH menginduksi peningkatan ekspresi protein occludin, mempromosikan pembentukan persimpangan berguna untuk pemeliharaan integritas penghalang epidermis. Seperti yang diharapkan, setelah paparan radiasi UVB, sel menunjukkan cincin membran yang tidak teratur dan tidak jelas (Gambar 8A). Perlakuan SH, terutama pada konsentrasi yang lebih tinggi, mempertahankan morfologi membran mempertahankan struktur yang sebanding dengan kontrol yang tidak distimulasi. Ekstrak SH mempromosikan penguatan persimpangan dan mencegah kerusakan yang disebabkan oleh paparan UVB, mempertahankan fungsionalitas penghalang kulit.

Ekspresi Filaggrin

Pengaruh ekstrak Salvia haenkei pada ekspresi protein filaggrin (FLG) dievaluasi dengan imunositokimia. Filaggrin adalah protein struktural fundamental dalam pengembangan dan pemeliharaan penghalang kulit. Hasil pada Gambar 9A, dan 9B menunjukkan peningkatan ekspresi protein filaggrin yang bergantung pada konsentrasi setelah pengobatan selama 24 jam dengan ekstrak SH. Lebih lanjut, ekspresi protein F-aktin menunjukkan distribusi sel yang teratur, setelah pengobatan dengan SH, yang mengarah pada kontinuitas struktural penghalang epitel yang terorganisir dengan baik. Data ini menunjukkan bahwa SH memiliki dampak menguntungkan pada penghalang kulit, meningkatkan ekspresi filaggrin, yang penting untuk pembentukan dan fungsi kulit yang benar.

Ekspresi metaloproteinase

Paparan kulit terhadap radiasi ultraviolet menginduksi gangguan pada matriks ekstraseluler (ECM) yang menyebabkan kulit berkerut, kendur, dan kendur, karakteristik utama penuaan kulit. Matrix metalloproteinases (MMPs) adalah prinsip yang bertanggung jawab untuk mendegradasi komponen ECM seperti kolagen, elastin, fibronektin, dan proteoglikan [33].berapa banyak cistanche yang harus diambil?Sejumlah besar penelitian menggarisbawahi bahwa paparan kulit terhadap iradiasi UV menginduksi upregulasi MMP yang berbeda, yang berdampak pada penampilan dan kesehatan kulit [34-37].

Hasil pada Gambar 10 menunjukkan bahwa radiasi UVB meningkatkan ekspresi mRNA dari gelatinase MMP-2 yang mendegradasi kolagen membran basal dan kolagen struktural terdenaturasi [38]. Pengobatan dengan SH mampu secara signifikan mengurangi kadar mRNA MMP-2(SH 0.01-0.1-10 ug/ml） yang menunjukkan aktivitas ekstrak SH dalam mempertahankan integritas struktural kulit, rusak oleh foto-stres.

DISKUSI

Penuaan kulit adalah efek kumulatif dari faktor intrinsik dan ekstrinsik yang menyebabkan penurunan kulit, menyebabkan penipisan, kekakuan, dan hilangnya fleksibilitas. Kulit adalah penghalang pertama antara organisme dan lingkungan, sehingga pemeliharaan integritas fungsional dan anatomisnya sangat penting. Selain proses penuaan alami dan kondisi terkait penuaan seperti diabetes, menopause, dll., faktor ekstrinsik dapat mempengaruhi struktur kulit; khususnya photodamage, polusi, atau faktor gaya hidup (merokok, diet, stres emosional, dll) dapat menghambat struktur dan fungsi kulit [39,40]. Keratinosit adalah konstituen utama dari epidermis, menyediakan dasar seluler untuk penghalang terluar; dalam karya ini, garis sel keratinosit manusia HaCaT telah terpapar faktor stres, seperti radikal bebas dan radiasi ultraviolet B, untuk meniru penuaan kulit alami, sehingga mengubah fungsi penghalang. Salvia hankie baru-baru ini diidentifikasi sebagai agen anti-penuaan potensial yang menunjukkan kemungkinan penerapannya pada penuaan kulit dan gangguan terkait penuaan kulit; Oleh karena itu, efek ekstrak tanaman ini diselidiki secara mendalam pada parameter yang berkaitan dengan penuaan kulit, pemeliharaan integritas kulit, dan kondisi fisiologis. Produksi spesies oksigen reaktif atau radikal bebas melalui proses metabolisme endogen normal atau UVR dan polusi diduga berkontribusi terhadap proses penuaan kulit. Kulit rentan terhadap berbagai reaksi redoks, dan keseimbangan redoks sangat penting dalam pemeliharaan homeostasis kulit. Konsentrasi ROS yang rendah memberikan aktivitas fisiologis, tetapi peningkatan kadar spesies ini terlibat dalam aktivasi jalur yang mengakibatkan peningkatan degradasi kolagen, akumulasi elastin, aktivasi metalloprotease pendegradasi matriks, dll. [41]. Selain itu, ROS memainkan peran penting dalam proses patologis termasuk penuaan, peradangan, cedera, dan patogenesis beberapa penyakit kulit seperti psoriasis dan vitiligo [42]. Menariknya, ekstrak Salvia haenkei telah terbukti mengurangi kadar ROS dalam kondisi basal, kondisi stres oksidatif, dan kondisi stres yang disebabkan oleh iradiasi UVB, menunjukkan efek perlindungan potensial terhadap perubahan yang dimediasi ROS [22].

Untuk mendukung efek antipenuaan Salvia hankie yang diamati sebelumnya, dalam penelitian ini, kami membuktikan kemampuan ekstrak SH untuk mengurangi penuaan pada keratinosit yang dirangsang oleh radiasi UVB. Hasil penelitian menunjukkan bahwa SH mampu menurunkan ekspresi gen penanda penuaan p21 dan p27 yang dirangsang oleh radiasi UVB. Menariknya, ekstrak SH menunjukkan aktivitas yang menjanjikan dalam mengurangi respon inflamasi yang dipupuk oleh photodamage dalam sel, dengan menurunkan transkripsi interleukin. Lebih jauh, kami secara menarik telah menunjukkan bahwa ekstrak Salvia haenkei menginduksi ekspresi protein Sirtuinl tidak hanya setelah stres tetapi juga dalam kondisi basal, menunjukkan aktivitas yang menjanjikan dalam memperlambat proses penuaan. Keluarga Sirtuin, dan khususnya SIRT1, telah terbukti berperan dalam penuaan-fotoaging, terutama melalui penghambatan MMP dan degradasi kolagen berikutnya; beberapa penelitian menggarisbawahi peran protektifnya dalam photoaging yang dimediasi UVB. Senyawa alami seperti juglone (5-hidroksi-1,4-napthalenedione) telah terbukti mengembalikan SIRT1 ke tingkat normal setelah pengobatan UVB, menunjukkan bahwa SIRTI mungkin berperan dalam mencegah karsinogenesis yang diinduksi UVB [29]. Hasil kami juga menunjukkan, kemungkinan keterlibatan sirtuin dalam proses perbaikan setelah stres UVB dan perannya dalam pemeliharaan homeostasis epidermis.

Gangguan kulit inflamasi yang umum, seperti dermatitis atopik dan psoriasis, serta proses penuaan, menunjukkan penurunan fungsi penghalang, dan respons sel epidermis terhadap gangguan penghalang dapat memperburuk, mempertahankan, atau bahkan memulai kondisi tersebut. Hasil penelitian ini mengungkapkan kemampuan SH yang kuat untuk mengembalikan integritas penghalang kulit dengan modulasi beberapa protein yang terlibat dalam proses ini. Secara khusus, diamati stimulasi transkripsi occludin dan filaggrin menunjukkan tindakan penguatan pada adhesi antar sel. Defisiensi filaggrin yang diturunkan dan didapat mempengaruhi barier epidermis, mengubah organisasi

filamen keratin sitoskeleton dan struktur selubung kornifikasi kulit [43]. Lebih lanjut, defek pada ekspresi FLG menginduksi penurunan jumlah granula keratohyalin, penurunan konsentrasi faktor pelembab alami (NMF), dan alkalinisasi pH kulit [44]. Selain itu, perubahan dalam protein claudin dan occludin, yang termasuk dalam protein Tight junction (TJs), dijelaskan dengan baik mengenai proses penuaan. TJ bertanggung jawab untuk menyegel ruang antar sel antara sel epitel, untuk membentuk penghalang fungsional, dan terlibat dalam proliferasi dan diferensiasi sel [45]. Ekstrak salvia haenkei telah terbukti meningkatkan ekspresi filaggrin dan mempertahankan lokalisasi occludin pada membran sel, yang terganggu oleh radiasi UVB. Aktivitas tambahan ekstrak SH dalam pemeliharaan kesehatan kulit telah dibuktikan dengan kemampuannya untuk mengurangi transkripsi matriks metaloproteinase 2(MMP-2), yang dirangsang oleh radiasi UVB. Upregulasi MMP memfasilitasi penuaan dan patologi kulit, dengan mendegradasi kolagen dan elastin yang menyebabkan gangguan pada matriks ekstraseluler (ECM) [33, 38], sehingga pengurangan proteinase ini bermanfaat dalam konteks penuaan kulit.

Efek positif dari pengobatan SH yang diamati dalam penelitian ini pada parameter molekuler kulit yang paling umum dikonfirmasi juga oleh uji klinis baru-baru ini, yang dilakukan dalam kohort lima puluh wanita Kaukasia berusia antara 45 dan 60 [46]. Salvia hankie telah diberikan dalam formulasi krim dan beberapa parameter, seperti kemerahan dan elastisitas kulit, kedalaman kerutan, dan potensi antioksidan, dievaluasi oleh evaluasi klinis dan instrumental serta penilaian diri oleh subjek. Hasil penelitian ini mengungkapkan kemanjuran SH dalam memperbaiki penurunan kulit bila diterapkan setiap hari dalam konteks penuaan kulit sedang. Faktanya, setelah 84 hari aplikasi, kulit wanita menjadi lebih elastis dan menunjukkan lebih sedikit area merah dan kerutan yang lebih dangkal. Selain itu, penelitian ini menunjukkan peningkatan progresif dalam kemampuan antioksidan kulit setelah penggunaan krim setiap hari [46].

Sebagai tempat perlindungan bagi tubuh dari lingkungan eksternal, kulit terus-menerus terkena potensi cedera, dan dengan demikian penyembuhan luka merupakan proses penting untuk kelangsungan hidup semua organisme. Mempertimbangkan kemampuan SH yang telah terbukti dalam menjaga kulit yang sehat dan tidak bercacat, kami berasumsi bahwa ekstrak ini juga dapat membantu meningkatkan regenerasi kulit dengan bermanfaat dalam perbaikan lesi kulit. Dengan demikian, aktivitas SH pada migrasi keratinosit, menjadi langkah kunci dalam memulihkan penghalang kulit setelah cedera, akhirnya dipertimbangkan. Perlakuan ekstrak SH mengungkapkan aktivitas menarik yang mampu meningkatkan kecepatan migrasi HaCaT, menunjukkan efek yang kuat pada pembentukan kembali cedera epitel setelah lesi. Karena migrasi merupakan elemen penting dalam proses penyembuhan luka, data kami, juga mempertimbangkan aktivitas non-hiperproliferatif ekstrak, menunjukkan efek potensial ekstrak SH dalam menangkal efek cedera pada penghalang kulit dengan lebih cepat, mengurangi risiko infeksi.

Data kami menunjukkan ekstrak Salvia haenkei sebagai senyawa yang berguna untuk membantu pembentukan kembali penghalang atau meredam respons stres epidermis. Bersamaan dengan percobaan baru-baru ini pada manusia, pekerjaan ini memberikan wawasan lebih lanjut ke dalam mekanisme yang terlibat dalam efek positif dari ekstrak pada penuaan kulit.

Karya ini, untuk mendukung karya sebelumnya [18, 46], mengidentifikasi dengan cara yang lebih aneh mekanisme molekuler terkait dengan kemanjuran Salvia hankie dalam memodulasi parameter kulit, menggarisbawahi relevansi Salvia hankie sebagai agen menarik yang berguna untuk anti-penuaan. dan gangguan kulit terkait penuaan.

BAHAN DAN METODE Kultur sel dan penyinaran UVB

Sel HaCaT (keratinosit manusia yang diabadikan secara spontan) dikultur dalam medium Eagle's (DMEM) yang dimodifikasi glukosa tinggi Dulbecco yang dilengkapi dengan 10 persen serum janin sapi (Life-Technologies, Waltham, MA, USA), 2 mM glutamin, 100 U/ml penisilin dan 100 ug/ml streptomisin (Lonza, Basilea, Swiss). Sel dipertahankan di bawah atmosfer yang dilembabkan dari 5 persen CO2 di udara dan diinkubasi pada 37 derajat.

Saat diminta oleh protokol eksperimental, sel terkena radiasi UVB 30 KJ/m², yang dipasok oleh lampu Philips Medical Narrowband UVB PL-S. Untuk mencegah penyerapan cahaya oleh media kultur jaringan, ini telah dihapus sebelum iradiasi, dan diganti dengan DMEM FBS dan bebas fenol merah, mengikuti protokol iradiasi [47]. Setelah penyinaran UVB, sel diberi makan dengan media pertumbuhan segar atau digunakan untuk eksperimen mengikuti protokol.

Viabilitas sel - Uji eksklusi biru Trypan 35 x1 0³ sel dilapisi pada 12 pelat sumur dan, setelah inkubasi semalam, terpapar konsentrasi ekstrak hidroetanol Salvia haenkei yang berbeda sesuai dengan protokol eksperimental. Ekstrak telah disediakan dengan baik oleh IBSA Farmaceutici Italia (Lodi, Italia) dan menyajikan kandungan asam rosmarinic penanda 0,6 persen b/b oleh HPLC. Setelah perawatan, sel-sel dicuci, dipisahkan dengan 0,25 persen tripsin-0.2 persen EDTA, dan disuspensikan dalam trypan blue (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) pada rasio l:I dalam larutan sedang. Sel dihitung menggunakan hemositometer chamber Burker.

Uji fluoresensi ROS

ROS dikuantifikasi menggunakan 2',7'-dichlorofluorescein-diacetate (Hz-DCF-DA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), seperti yang dijelaskan sebelumnya [48]. Secara singkat, sel (5x10') diunggulkan ke dalam 96-piring sumur, dibiarkan menempel semalaman, dan kemudian terpapar ekstrak SH selama 3 atau 24 jam. N-acetylcysteine ​​​​5mM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) digunakan sebagai kontrol positif.

Untuk kondisi stres oksidatif, tingkat ROS diukur setelah penambahan 50 M Hz-DCF-DA dengan tidak adanya atau adanya H2Oz [48]. Intensitas fluoresensi DCF diukur pada eksitasi 485 nm—emisi 535 nm, menggunakan Pembaca Pelat Multilabel VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Untuk evaluasi tingkat ROS dalam kondisi stres UVB, protokol sedikit dimodifikasi, dengan menginkubasi sel dalam perlakuan SH - 50 M larutan Hz-DCF-DA di PBS. Setelah 25 menit inkubasi pada 37 derajat, pelat terkena radiasi UVB dan intensitas fluoresensi DCF segera diukur pada eksitasi 485 nm-emisi 535 nm, menggunakan Multilabel Plate Reader VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Mikroskop imunofluoresensi

Sel 10x104 diunggulkan pada kaca penutup yang dilapisi dengan kolagen di 24-piring sumur, dibiarkan menempel semalaman, dan diperlakukan dengan ekstrak SH sesuai dengan protokol. Untuk mendeteksi protein -catenin dan occludin, sel diekspos ke radiasi UVB, seperti yang dijelaskan dalam protokol di atas. Setelah iradiasi, sel diberi makan dengan media pertumbuhan segar atau digunakan untuk percobaan mengikuti protokol. Untuk uji imunofluoresensi, 4 jam setelah penyinaran UVB, sel dicuci, difiksasi dengan 4 persen formaldehida, ditembus dengan 0,1 persen Triton X-100 dalam PBS, dan diwarnai selama 1 jam pada 37 derajat dengan antibodi spesifik protein yang berbeda: anti-occludin monoklonal tikus (Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA), anti-filaggrin tikus (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). Setelah pencucian PBS, sel diinkubasi dengan antibodi sekunder/fluorescein isothiocyanate (Alexa Fluor 488 anti-mouse atau Alexa Fluor 536 anti-rabbit immunoglobulin G, Molecular Probe, Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA) dan dengan phalloidin selama 1 jam pada suhu kamar. Setelah 10 menit pengobatan dengan RNase, kaca penutup dipasang pada slide kaca dengan menggunakan Mowiol 40-88 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) dan menambahkan propidium iodida. Gambar diperoleh melalui mikroskop confocal LSM 800, perbesaran 60X, perangkat lunak ZN 2.1 Blue Edition (Carl Zeiss, Jena, Jerman) dan dikuantifikasi menggunakan perangkat lunak ImageJ.

Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan GraphPad Prism versi 7.02 untuk Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Kecuali dinyatakan lain, hasil disajikan sebagai mean plus SEM. Uji-t Student digunakan dan nilai p<0.05 were="" considered="" statistically="">

Singkatan

J:persimpangan patuh; ECM: matriks ekstraseluler; FLG: filaggrin; Hz-DCF-DA: 2',7'-dichlorofluorescein-diacetate; H2Oz: Hidrogen Peroksida; MMP: matriks metaloproteinase; NAC: N-asetilsistein; NMF:faktor; ROS: oksigen reaktif pelembab alami

jenis; SIRTl: Sirtuinl; SH: Salvia saputangan; TJ: persimpangan ketat; UVB: Radiasi ultravioletB.

Artikel ini diambil dari www.aging-us.com