Mengevaluasi Sifat Antioksidan, Pemutih Dan Antipenuaan Dari Hidrolisat Protein Beras

Kontak:{0}}/ WhatsApp: 008618081934791

Hui-Ju Chen 1,2, Fan-Jhen Dai 2, Cheng-You Chen 3, Siao-Ling Fan 2, Ji-Hong Zheng 4, Yu-Chun Huang 2,Chi-Fai Chau 1, Yung-Sheng Lin 3, 4,5,* dan Chin-Shuh Chen 1,*

Abstrak:Hidrolisat protein yang berasal dari tumbuhan memiliki aplikasi potensial dalam nutrisi. Protein hidrolisat beras (RPH), sumber protein yang sangat baik, telah menarik perhatian untuk pengembangan kosmetik. Namun, beberapa penelitian telah melaporkan aplikasi potensial dari analisis RPH, dan penelitian ini menelitiantioksidanaktivitas dan aktivitas penghambatan enzim skinaging. Hasil penelitian menunjukkan bahwa total konsentrasi fenolik dan flavonoid adalah2.06 ± 0.13 mg asam galat ekuivalen/g RPH dan 25,96 ± 0.52 g quercetin setara/g RPH, masing-masing. RPH menunjukkan aktivitas yang bergantung pada dosis untuk menangkap radikal bebas dari 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil [konsentrasi penghambatan setengah maksimal (IC50)=42.58 ± 2,1 mg/g RPH] dan 2 ,20-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-asam sulfonat) (IC50=2.11 ± 0,88 mg/g RPH), kapasitas pengurangan tergantung dosis (6,95 ± 1,40 mg setara vitamin C/g RPH) dan kapasitas serapan radikal oksigen (473 mol setara Trolox/g RPH). Konsentrasi larutan RPH yang diperlukan untuk mencapai 50 persen penghambatan hyaluronidase dantirosinaseaktivitas ditentukan menjadi 8,91 dan 107,6 mg/mL, masing-masing. Studi ini menunjukkan bahwa RPH memilikiantioksidan, antihyaluronidase, dan aktivitas antitirosinase untuk aplikasi kosmetik masa depan.

Kata kunci:hidrolisat protein beras;antioksidan; hialuronidase;tirosinase; kosmetik

cistanchepemutihmemengaruhipada kulit untukanti-oksidasi

1. Perkenalan

Paparan radiasi ultraviolet bertanggung jawab untuk photoaging (atau penuaan ekstrinsik); Sebaliknya, spesies oksigen reaktif yang diproduksi dalam metabolisme sel dan penurunan fungsi biologis bertanggung jawab atas penuaan intrinsik [1,2]. Makanan olahan seringkali mengandung bahan alamiantioksidanseperti katekin, asam askorbat, tokoferol, asam rosmarinic, dan ekstrak fenolik dari berbagai tanaman. Penelitian yang dilakukan terhadap antioksidan alami sekarang mempertimbangkan sumber nontradisional. Bersumber alamiantioksidanlebih diinginkan daripada diproduksi secara kimiaantioksidankarena beberapa antioksidan sintetik telah dilaporkan bersifat karsinogenik [3]. Beras (Oryza sativa) adalah makanan pokok utama bagi orang-orang di seluruh dunia, terutama mereka yang tinggal di Asia. Produksi beras tahunan dunia sekitar 741 juta ton [4]. Di negara-negara Asia, beras dilaporkan menjadi sumber 75 persen dari asupan energi lebih dari 2 miliar orang [5]. Produksi beras yang ekstensif menghasilkan jumlah produksi sampingan yang sesuai. Produk sisa dari proses produksi beras mengandung sebagian besar protein biji-bijian (~60–85 persen ) tetapi dibuang atau digunakan untuk memberi makan hewan [6-8]. Peptida yang diperoleh dari berbagai hidrolisat protein dilaporkan bertindak sebagai potensialantioksidan[9]. Oleh karena itu, antioksidan alami dan tidak beracun berpotensi diekstraksi dari hidrolisat protein makanan. Banyak ilmuwan telah menggunakan model kaya lipid dan melaporkan hidrolisat protein serta susu, zein, dan peptida protein kedelai untuk memiliki karakteristik antioksidan penting, termasuk pemulungan radikal bebas, penghambatan makanan dan peroksidasi lipid in-vitro, dan khelasi logam transisi [10- 12].

Asam hialuronat (HA) membantu meremajakan kulit karena meningkatkan viskositas, mengandung kelembapan, dan membuat cairan ekstraseluler kurang permeabel. Karena kapasitas menahan airnya yang sangat baik, HA meningkatkan keremajaan, kelembapan, dan kehalusan kulit serta mengurangi tingkat kerutan [13,14]. Sayangnya, tingkat HA di kulit secara alami menurun seiring bertambahnya usia. Hyaluronidase adalah enzim yang menghancurkan HA, menyebabkan hilangnya kekuatan, fleksibilitas, dan kelembaban kulit, yang pada gilirannya menyebabkan penuaan kulit. Oleh karena itu, keriput dapat diobati dengan menghambat hyaluronidase dan mempertahankan kandungan HA pada kulit [15,16]. Enzim penghasil melanintirosinasememberikan kontribusi vital pada langkah pembatas laju dari proses di mana melanin diproduksi. Oleh karena itu, gangguan pigmentasi umumnya diobati dan pencerahan kulit dicapai dengan menghambat atau menurunkan regulasitirosinaseaktivitas [17,18].

Dalam beberapa penelitian, hidrolisat protein biji-bijian dan peptida yang dapat diperoleh darinya telah ditemukan memiliki aktivitas antioksidan, antihipertensi, dan antitumor [19,20]. Kontribusi positif bagi kesehatan manusia dari peptida dan protein yang berasal dari makanan secara bertahap diakui [21]. Konsumen semakin menuntut agar industri kosmetik dan perawatan kesehatan menggunakan senyawa bioaktif alami. Protein hidrolisat beras (RPH) telah menarik perhatian sebagai sumber protein yang sangat baik. Namun, beberapa penelitian telah melaporkan karakterisasi dan analisis fungsional RPH. Oleh karena itu, penelitian ini mengevaluasi aktivitas antioksidan dan hyaluronidase dantirosinase-menghambat aktivitas RPH.

2. Hasil dan Pembahasan

2.1. Konsentrasi Fenolik Total (TPC) dan Kandungan Flavonoid Total (TFC)

Standar dalam uji TPC adalah asam galat dari beberapa konsentrasi. Penyerapan yang lebih tinggi menunjukkan TPC yang lebih tinggi. TPC sampel RPH diperoleh dengan memasukkan nilai absorbansi optik sampel RPH ke dalam kurva kalibrasi asam galat. Dengan memplot konsentrasi RPH terhadap konsentrasi fenolik (Gambar 1a), diperoleh TPC rata-rata 2.06 ± 0.13 mg GAE/g RPH. TFC sebesar 25,96 ± 0.52 g QE/gRPHs diperoleh dengan mengikuti prosedur yang sama (Gambar 1b). Gambar 1c lebih lanjut menghubungkan TPC dan TFC dari sampel RPH. Ini mengungkapkan bahwa hubungan antara TPC dan TFC dapat dinyatakan sebagai y=0.0121x ditambah 0,0659, di mana x dan y masing-masing adalah TPC dan TFC.

TPC dari RPH termasuk konsentrasi asam amino fenolik dan senyawa fenolik dari peptida. Interaksi senyawa protein-fenolik umumnya melibatkan ikatan kovalen dan nonkovalen. Senyawa fenolik dilepaskan selama hidrolisis enzimatik. Enzim spesifik mungkin paling mampu menghancurkan kompleks protein-polifenol; ini menghasilkan lebih banyak senyawa fenolik dan peptida dengan gugus fenolik, seperti tirosin, yang dilepaskan [22]. Korelasi kuat telah dilaporkan antara kandungan polifenol total biji-bijian dan aktivitas biologisnya. Polifenol diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang kuat [23]. Meskipun ditemukan dalam jumlah yang lebih sedikit, terpen [24] atau sekuiterpen [25] dalam beras juga dapat berkontribusi pada aktivitas antioksidan.

2.2. Aktivitas Antioksidan

2.2.1. Kegiatan Pemulung Radikal DPPH Radikal Bebas

Gambar 2 menggambarkan aktivitas pemulungan radikal bebas DPPH dalam larutan RPH. Konsentrasi larutan yang lebih tinggi ditemukan menghasilkan aktivitas yang lebih tinggi. Konsentrasi hambat setengah-maksimal (IC50), yang merupakan konsentrasi ekstrak dimana setengah dari semua radikal bebas DPPH dapat ditangkap, adalah 42,58 ± 2,1 mg/mL peptida beras.

2.2.2. Kegiatan Pemulungan Radikal Bebas ABTS

Aktivitas pemulungan radikal bebas ABTS RPH, diilustrasikan pada Gambar 3, lebih tinggi ketika konsentrasi ekstrak yang lebih besar digunakan. IC50 adalah 2,11 ± 0,88 mg/mL peptida beras. Hasil ini menunjukkan bahwa RPH memiliki aktivitas penangkal radikal bebas ABTS yang kuat. Asam amino yang mengandung sulfur, termasuk Met dan Cys, dan asam amino hidrofobik, termasuk Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try, dan Pro, mungkin menjadi faktor penting terkait dengan radikal bebas ABTS. aktivitas mengais.

Dalam penelitian ini, nilai IC50 aktivitas penangkap radikal bebas ABTS lebih rendah dari aktivitas penangkap radikal bebas DPPH, sesuai dengan hasil cangkang dan kernel biji jarak pagar [28] dan biji buah jujube dan ampas kulit [29]. Temuan ini juga sesuai dengan laporan hidrolisat protein dedak padi dengan 43,98–66,25 moL setara Trolox/g sampel dan 403,28–430,12 moL setara Trolox/g sampel untuk aktivitas penangkapan radikal bebas DPPH dan aktivitas penangkapan radikal bebas ABTS, masing-masing [27].

Salah satu alasan yang mungkin adalah perbedaan kelarutan antara radikal bebas DPPH (larut dalam minyak) dan radikal bebas ABTS (larut dalam minyak/air) [30,31]. Potensi antioksidan hidrolisat protein dedak padi dipengaruhi oleh profil berat molekul, komposisi asam amino dan hidrofobisitasnya [32].

2.2.3. Kapasitas Pengurangan

Temuan uji kapasitas reduksi untuk RPH disajikan pada Gambar 4. Kapasitas reduksi meningkat dengan konsentrasi RPH. Kapasitas reduksi adalah 6,95 ± 1,40 mg VCE/g RPH, menunjukkan bahwa RPH merupakan antioksidan yang efektif.

2.2.4. Kapasitas Penyerapan Radikal Oksigen (ORAC)

Uji ORAC memiliki keunggulan dibandingkan pendekatan lain untuk penentuan aktivitas antioksidan, termasuk reaktan yang digunakan adalah radikal peroksi dengan mekanisme reaksi dan potensi redoks yang serupa dengan oksidan fisiologis; muatan keseluruhan dan keadaan protonasi dimanaantioksidanbereaksi menyerupai yang ada di tubuh manusia [33]. Metode ORAC juga memiliki relevansi biologis terhadap khasiat antioksidan dalam tubuh manusia. Gambar 5 menggambarkan hasil analisis ORAC terhadap RPH dan standar Trolox dalam berbagai konsentrasi. ORAC diturunkan dari persamaan regresi kurva kalibrasi yang menghubungkan AUC bersih dengan konsentrasi Trolox. Hasilnya menunjukkan bahwa RPH memiliki ORAC sebesar 473 mol TE/g RPH.

Peptida antioksidan atau asam amino dapat diperoleh dengan hidrolisis protein enzimatik, sehingga sangat aktif melawan oksidan [34]. Pengkhelatan ion logam, penghambatan peroksidasi lipid, dan radikal bebas dari peptida yang aktif secara biologis bertanggung jawab atas aktivitas antioksidannya. Radikal bebas dapat dipadamkan dan ekspresi protein dan enzim pereduksi stres oksidatif diregulasi oleh peptida antioksidan. Kemanjuran antioksidan hidrolisat protein dan peptida dilaporkan tergantung pada urutan asam amino dan ukuran peptida, yang dipengaruhi oleh kondisi hidrolisis, sumber protein, dan jenis protease [35]. Menurut Adebiyi dkk. [36], protein dedak padi terbesar yang dapat dicerna dapat dipecah menjadi potongan-potongan yang lebih kecil oleh subtilisin, menghasilkan hasil dan kandungan protein yang lebih besar. TPC hidrolisat dan aktivitas antioksidan mungkin dipengaruhi oleh spesifisitas enzim. Oleh karena itu, aktivitas antioksidan suatu peptida dapat dipengaruhi oleh karakteristik sumber protein, spesifisitas enzim, dan tingkat hidrolisis [37].

Ada banyak laporan yang menggunakan protease (seperti Alcalase, nama komersial asubtilisin A dari spesies Bacillus) untuk menghidrolisis protein yang berasal dari tumbuhan untuk mendapatkan peptida antioksidan. Dalam hal ini, protein kedelai adalah salah satu protein yang paling banyak dilaporkan [38]. Selain itu, hidrolisis Alcalase protein dedak padi juga ditemukan. Pada kondisi optimal, hidrolisat alcalase dedak padi menghasilkan protein hidrolisat dengan nilai IC50 sebesar0.87 ± 0,02 mg/mL dalam penangkal radikal bebas DPPH [39]. Dalam penelitian kami, nilai IC50 dari RPH adalah 42,58 ± 2,1 mg/mL. Meskipun nilai IC50 dalam penangkal radikal bebas DPPH dalam penelitian ini tidak seefektif protein dedak padi, namun penangkal radikal bebas ABTS (IC50=2.11 mg/mL) lebih efektif daripada hidrolisat protein kedelai yang diperoleh dengan hidrolisa Alcalase ( IC50=2.93 mg/mL) [40].

2.3. Aktivitas Penghambatan Hyaluronidase

Sebuah enzim proteolitik, hyaluronidase, ditemukan di dermis dan mengkatalisis degradasi HA dalam matriks ekstraseluler [41]. Penelitian ini menggunakan asam tanat sebagai kontrol positif untuk tujuan perbandingan. Gambar 6 mengungkapkan bahwa asam tanat memiliki penghambatan aktivitas hyaluronidase yang lebih tinggi; IC50 adalah 0.14 mg/mL, mirip dengan nilai yang diperoleh Nishida et al. (0,121 mg/mL; 71,1 mM) [42]. Sebaliknya, IC50 sebesar 8,91 mg/mL dihitung untuk larutan RPH. Hasil larutan RPH ini sesuai dengan nilai IC50 kami sebelumnya, 7,61 mg/mL [43]. Protein, polisakarida, dan senyawa yang berasal dari tumbuhan dan sintetik adalah di antara berbagai senyawa yang mengandung penghambat hialuronidase. Inhibitor ini membantu menjaga keseimbangan sintesis-degradasi HA [44]. Konsentrasi HA yang rendah di kulit menyebabkan kekeringan dan kerutan. Oleh karena itu, penghambatan aktivitas hyaluronidase merupakan jalan yang melaluinya morfologi kulit dapat diperbaiki dan penuaannya tertunda.

2.4. Aktivitas Penghambatan Tirosinase

Hidrolisat protein dari sumber alami berpotensi menghambataktivitas tirosinase. Tes penghambatan tirosinase in-vitro biasanya digunakan untuk mengevaluasi bagaimana agen pemutih kulit secara langsung mempengaruhi aktivitas tirosinase [45]. Dengan berpartisipasi dalam langkah pembatasan laju sintesis melanin, tirosinase mengkatalisis hidroksilasi L-tirosin menjadi L-DOPA dan kemudian oksidasi yang terakhir menjadi o-dopakuinon. Ketika diinginkan untuk mencegah biosintesis melanin, penghambatan aktivitas L-tirosinase dapat menjadi sangat penting. Di Sini,tirosinasedigunakan untuk mengukur aktivitas antitirosinase RPH. Seperti digambarkan pada Gambar 7, konsentrasi107,6 mg/mL mencapai 50 persen penghambatan aktivitas tirosinase. Asam askorbat menunjukkan aktivitas penghambatan tirosinase tinggi (IC50=0.098 mg/mL), yang serupa dengan 0,102 mg/mL yang Seo et al. dilaporkan [46].

Hidrolisat protein dedak padi dipamerkan secara signifikantirosinase-aktivitas penghambatan [47,48]. Aktivitas penghambatan tirosinase dari larutan RPH dapat dihasilkan dari profil asam amino peptida. Schurink dkk. menggambarkan bahwa efektiftirosinase-inhibitorypeptides terdiri dari residu arginin dan fenilalanin [49]. Aktivitas penghambatan tirosinase dapat ditingkatkan oleh residu asam amino hidrofobik (misalnya, alanin), dan produksi melanin dapat terganggu oleh alanin [50]. Selain itu, Zhang dkk. juga melaporkan bahwa hidrolisat protein beras dapat mengurangi kandungan melanin dan aktivitas tirosinase dalam model sel yang diinduksi UVB [51].

binaraga cistanche

2.5. Profil Asam Amino dan MWs dari RPHs

Kandungan protein beras setelah penghilangan pati dalam penelitian ini adalah 23,56 persen berat, dan derajat hidrolisis sampel yang dihidrolisis oleh protease adalah 9,36 persen. Tabel 1 merinci komposisi asam amino dalam RPH. Dalam sampel, setiap 100 g mengandung 5,18 g asam amino. Mengenai komponen asam amino, RPH kaya akan alanin, leusin, arginin, asam glutamat, dan asam aspartat. Setiap 100 g sampel mengandung 1,73 g asam amino hidrofobik (alanin, valin, leusin, isoleusin, prolin, fenilalanin, dan sistein) secara total. Hasil ini benar-benar berbeda dari laporan kami sebelumnya [43] dalam larutan amilase dan suhu perlakuannya untuk menghilangkan pati. Kandungan asam amino hidrofobik adalah 1,90 kali lebih tinggi dari laporan kami sebelumnya. Perlakuan suhu yang lebih rendah (60 C) dalam penelitian ini dapat mencegah denaturasi protein dalam jumlah besar, sehingga aktivitas asam amino dapat lebih terjaga. Selain itu, kesimpulan serupa juga diperoleh dari amilase dan glukoamilase jamur lain untuk menyakarifikasi pati dalam dedak beras putih [52].

Penelitian telah menemukan asam amino hidrofobik menyerupaiantioksidandengan meningkatkan kelarutan berbasis lipid dalam hidrolisat protein dan peptida dari berbagai sumber protein, sehingga mendorong interaksi dengan radikal bebas [38,53]. Beberapa asam amino dilaporkan oleh Chen et al. [54] secara umum menjadiantioksidan; asam yang disebutkan termasuk triptofan, sistein, metionin, tirosin, dan histidin. Dalam penelitian ini, asam amino aromatik (fenilalanin, tirosin, dan triptofan) terdiri dari 0.53 g/100 g RPH. Oleh karena itu, asam amino yang berasal dari peptida ini mungkin bertanggung jawab atas aktivitas antioksidan RPH.

Selain itu, protein yang dihidrolisis menjadi peptida yang lebih pendek memiliki distribusi MW yang berbeda, dan beberapa gugus hidrofobik yang terlipat di bagian dalam molekul protein alami yang lengkap biasanya terpapar ke fase berair. Hal ini terkait dengan molekul protein yang secara struktural diatur ulang dan oleh karena itu dengan sifat fungsional protein [55,56]. Data tricine-SDS-PAGE menunjukkan bahwa MW RPH berada di kisaran 5–35 kDa (Gambar 8a).

Gambar 8b menggambarkan kandungan relatif berbagai MW dalam RPH. Secara keseluruhan, 45,24 persen dari semua protein berada di pita utama (MW 2,4 kDa). Hasil serupa diperoleh mengenai peptida hidrolisat protein dedak padi. Aktivitas antioksidan tertinggi diperoleh Thamnarathip et al. [37] adalah untuk peptida MW=6–50 kDa. Selain itu, ada hubungan antara fungsi hidrolisat protein dan distribusi MW dan komposisi asam amino [57]. Ini menjelaskan aktivitas antioksidan RPH yang diamati dalam penelitian ini.

2.6. Uji Toksisitas Sel

Toksisitas sel rendah diperlukan untuk aplikasi masa depan. Untuk mengevaluasi sitotoksisitas dan biokompatibilitas RPH, viabilitas sel dari 264,7 sel mentah dalam larutan RPH diukur melalui metode MTT. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 9, viabilitas sel di atas 100 persen ketika diobati dengan 25-2000 g/mL RPH selama 24 jam dan 48 jam. Hasil menunjukkan sitotoksisitas RPH yang sangat rendah. Oleh karena itu, RPH dapat berpotensi digunakan sebagai aplikasi kosmetik dengan sitotoksisitas yang sangat rendah.

3. Bahan dan Metode

3.1. Reagen

Besi(III) klorida, 2,20-azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-asam sulfonat) (ABTS), Trolox(6-hidroksi-2,5 ,7,8-tetrametilkroman-2-asam karboksilat), l-3,4-dihidroksifenilalanin(L-DOPA), 1,1-difenil-2- picrylhydrazyl (DPPH), dan asam trikloroasetat diperoleh dari Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA). 2,20-azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride (AAPH), reagen fenol Folin–Ciocalteu, asam galat, asam askorbat, jamurtirosinase, dan natrium fluorescein diperoleh dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Natrium karbonat diperoleh dari Riedel-de Haën (Seelze, Jerman). Akhirnya, kalium ferisianida, natrium hidrogen fosfat, dan natrium dihidrogen fosfat diperoleh dari Showa Chemical (Tokyo, Jepang).

3.2. Persiapan RPH

RPH disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya, kecuali bahwa amilase jamur diadopsi untuk menyakar pati dalam tepung beras, menghindari kerusakan asam amino yang disebabkan oleh hidrolisis bakteri amilase pada suhu tinggi [43,58]. Seratus gram tepung beras direndam dalam 1000 mL akuades yang mengandung 0,5 persen amilase jamur (Genencor, NY, USA); campuran tersebut kemudian dipanaskan selama 24 jam hingga 60 C ( pH 4,2), setelah itu dibiarkan dingin sampai suhu kamar. Sentrifugasi dilakukan selama 10 menit pada 1968 × g untuk menghilangkan supernatan yang tersisa. Setelah 20-lipat air dan 2 mL protease hidrolitik 0,1 persen (Healthmate, Changhua, Taiwan) ditambahkan ke bagian yang tidak larut, larutan dikocok dan diinkubasi selama 4 jam pada suhu 55 C. Metode pH-stat digunakan untuk menjaga pH larutan pada tingkat optimal, dan pemanasan 85 C kemudian dilakukan selama 10 menit untuk inaktivasi enzim. Fraksi tidak larut yang tersisa dihilangkan melalui sentrifugasi selama 15 menit pada 3075 × g. Liofilisasi dilakukan pada supernatan, yang kemudian disimpan pada suhu -20 C sebelum digunakan.

3.3. Aktivitas Antioksidan RPH

3.3.1. Konsentrasi Fenolik Total (TPC)

Metode Folin–Ciocalteu untuk menemukan TPC RPH digunakan [59]. Pertama, 200 L reagen fenol Folin–Ciocalteu (0,3M) dicampur secara merata melalui5-menit pengocokan dengan 200 L larutan RPH, dan ke dalam campuran ini, 400 L air deionisasi(DI) dan 200 L larutan natrium karbonat 10 persen (b/v) ditambahkan. Campuran larutan menjalani inkubasi 60 menit dalam kegelapan pada suhu kamar. Kemudian disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Pengukuran menggunakan 100 L supernatan. Untuk menentukan TPC (satuan: mg) setara asam galat (GAE) per gram sampel RPH kering (satuan: mg GAE/g RPH), data absorbansi optik dimasukkan ke kurva standar yang mewakili asam galat. Absorbansi diperoleh pada 700 nm dengan menggunakan EpochMicroplate Spectrophotometer (BioTek, VT, USA).

3.3.2. Kandungan Flavonoid Total (TFC)

TFC diperoleh mengikuti pendekatan Wathoni et al. dengan sedikit modifikasi [60]. Pertama, masing-masing 500 L sampel dan larutan aluminium klorida 2 persen (b/v) dicampur. Solusi reaksi dicampur secara menyeluruh dan dibiarkan selama 10 menit, dan absorbansi pada 415 nm dievaluasi. Hasilnya dilaporkan dalam mikrogram setara quercetin (QE) per gram sampel RPH kering (µg QE/g RPH).

binaraga cistanche

3.3.3. Kegiatan Pemulungan Radikal Bebas DPPH

Pertama, 198 M larutan etanol DPPH (50 L) dan larutan RPH atau air DI (masing-masing 0,5 L; sampel dan kontrol) dicampur dan kemudian didiamkan selama 30 menit dalam keadaan gelap pada suhu kamar. Absorbansi larutan pada 517 nm kemudian diperoleh. Aktivitas pembilasan relatif dihitung dengan menentukan perbedaan absorbansi antara sampel dan kontrol. Aktivitas penangkal radikal bebas DPPH yang tinggi dicerminkan oleh absorbansi optik yang rendah. Dalam penilaian aktivitas pembersihan radikal bebas DPPH larutan RPH, standar yang digunakan adalah vitamin C [61-63].

3.3.4. Kegiatan Pemulungan Radikal Bebas ABTS

Pendekatan yang dilaporkan oleh Wu et al. digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan larutan RPH [64]. Pertama, 7 mM larutan stok ABTS (250 L) direaksikan dengan 2,45 mM kalium persulfat (250 L) untuk menghasilkan kation radikal bebas ABTS (ABTS• plus ), dengan campuran dipertahankan selama 16 jam pada 4 C dalam kegelapan sebelum digunakan. Setelah kesetimbangan dalam kegelapan pada suhu kamar, 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS; pH 7,4) digunakan untuk mengencerkan larutan menjadi 0,70 ± 0,02 absorbansi pada 734 nm. Kemudian, ke 180 L larutan ABTS encer, 20 L Trolox (kontrol positif) atau larutan RPH (sampel) ditambahkan. Campuran tersebut kemudian diinkubasi selama 10 menit pada suhu kamar. Penelitian ini menentukan absorbansi optik pada 734 nm; absorbansi yang lebih rendah berhubungan dengan aktivitas penangkapan radikal bebas ABTS yang lebih tinggi. Standar yang digunakan untuk menilai aktivitas radikal bebas ABTS larutan RPH adalah antioksidan Trolox.

3.3.5. Kapasitas Pengurangan

Uji kekuatan antioksidan pereduksi besi digunakan untuk menentukan aktivitas antioksidan total larutan RPH. Seperti yang dilaporkan oleh Lin et al. [29], larutan RPH (200 L) dicampur secara merata dengan 1 persen (b/v) K3Fe(CN)6 dan 0.2 M buffer PBS (pH 6,6; 100 L masing-masing) .Selama 20 menit, penangas air 50 C digunakan untuk memanaskan campuran; setelah mengeluarkan campuran dari bak, dengan cepat didinginkan selama 3 menit. Selanjutnya dilakukan penambahan 10 persen (b/v) asam trikloroasetat (100 L) dan 10-menit sentrifugasi pada 3000 rpm. Ini diikuti dengan ekstraksi supernatan (400 L) dan pencampuran seragam dengan 0. 1 persen (b/v) FeCl3 (100 L) dan air DI (400 L). Fe4[Fe(CN)6]3 diperoleh melalui10-min reaksi campuran ini dalam kegelapan. Selanjutnya, absorbansi optik yang lebih tinggi (diukur pada 700 nm) menunjukkan kapasitas reduksi yang lebih tinggi. Vitamin C standar digunakan untuk menentukan kandungan vitamin C setara (VCE) per gram RPH.

3.3.6. Kapasitas Penyerapan Radikal Oksigen (ORAC)

Penelitian ini memperoleh ORAC dengan memodifikasi metode yang dilaporkan sebelumnya [65]. Setelah sampel RPH dilarutkan dalam air suling, larutan RPH (50 L) dicampur dengan fluorescein (10 M) dalam pelat mikrotiter 96-sumur. Larutan tersebut mengalami inkubasi 15-min pada suhu 37 C diikuti dengan penambahan 50 L AAPH (500 mM). Setiap 5 menit dan selama total 120 menit, fluoresensi dicatat (λex dan em=485 dan 528 nm, masing-masing). Kapasitas antioksidan RPH ditemukan dari kinetika peluruhan fluoresensi dengan menghitung area di bawah kurva (AUC ). Dalam menghitung RPH ORAC, standarnya adalah 15–250 M Trolox. ORAC dilaporkan sebagai mikromol setara Trolox (TE) pergram sampel RPH kering (µmol TE/g RPH).

3.4. Aktivitas Penghambatan Hyaluronidase

Uji penghambatan hyaluronidase dilakukan dengan menggunakan microplate sumur {{0}}dan metode yang dilaporkan sebelumnya dengan sedikit modifikasi [40]. N-asetilglukosamin dilepaskan dengan mereaksikan hialuronidase dengan substrat HA. Dengan adanya inhibitor apapun, pelepasan N-asetilglukosamin berkurang, dengan pelepasan ini dideteksi dengan memperoleh absorbansi 600-nm. HA diendapkan dengan larutan albumin asam yang terdiri dari 0.1 buffer asetat M (pH 3,9) dan albumin serum sapi (1 mg/mL). Larutan sampel dan 5 mg/mL hyaluronidase menjalani inkubasi 20-min pada suhu 37 C. Untuk campuran inkubasi, HA (1{{20}}0 L; 5,0 mg/mL dalam 0,1 M buffer asetat) kemudian ditambahkan. Selanjutnya dilakukan inkubasi pada suhu 37 C selama 40 menit. 0,1 mL larutan borat alkali 0,4 M ditambahkan untuk menghentikan reaksi enzimatik.

3.5. Aktivitas Penghambatan Tirosinase

Penelitian ini mengevaluasi aktivitas antitirosinase RPH dengan menggunakan protokol yang dilaporkan sebelumnya dengan modifikasi [66]. Suatu larutan enzim (135 U/mL) dibuat dengan melarutkan tirosinase dalam 20 mM dapar fosfat (pH 6,8). Selain itu, DIwater digunakan untuk preparasi larutan L-DOPA 1,25 mM. Kemudian, 40 L berbagai konsentrasi larutan sampel RPH dicampur dengan 40 L larutan tirosinase dan 120 L larutan L-DOPA. Selama 30 menit, campuran ini disimpan pada suhu 37 C dalam uji penghambatan RPH terhadaptirosinaseaktivitas. Spektrofotometer (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, Jerman) digunakan untuk mendapatkan absorbansi 475-nm. Semua pengukuran dilakukan tiga kali. Absorbansi dari kelompok yang sesuai ketikatirosinasetidak hadir dikurangi. Tingkat penghambatan enzim ditentukan sebagai:

3.6. Karakterisasi RPH

3.6.1. Profil Asam Amino

Penelitian ini menemukan komposisi asam amino RPH. Pertama, selama 24 jam dan pada 115 C, asam metanasulfonat 4 M digunakan untuk menghidrolisis sampel dalam tabung tertutup yang dievakuasi. Dua sistem pengiriman pelarut Waters 510 dan penganalisis asam amino (L 8900; Hitachi, Tokyo, Jepang) digunakan untuk pemisahan asam amino turunan pada kolom aSpherisorb ODS2 berukuran 25 m × 64,6mm. Penelitian ini menggunakan pelarut berikut: (a) natrium asetat (0,14 M) dan trietilamina (850 L/L; pH 5,6) dan (b) 60 persen asetonitril, dengan gradien 0 persen selama 2 menit; 0–42 persen selama 15,5 menit (kurva cembung); dan 100 persen selama 4 menit. Sampel duplikat diambil untuk pengukuran profil asam amino pada 254 nm [67,68].

3.6.2. Berat Molekul (MW) Protein

Sesuai dengan metode Schägger [69] dan dalam kondisi reduksi, penelitian ini memperoleh distribusi MW melalui tricine-sodium dodecyl sulfate (SDS)-polyacrylamidegel electrophoresis (PAGE) dengan sedikit modifikasi. Buffer sampel (30 g/L SDS, 0.375 MTris-HCl, 0.125 g/L Coomassie Brilliant Blue G-250, dan 75 g/ L gliserol; pH 7) digunakan untuk membubarkan sampel beku-kering, dengan sentrifugasi kemudian dilakukan sebelum pemuatan. Sebanyak 20 L 2-mercaptoethanol ditambahkan ke 1 mL sampel tricine-SDS-PAGE. Sampel dipanaskan pada suhu 100 C selama 90 detik. Sumur sampel diisi dengan masing-masing sampel dan Unstained Protein Standard Broad Range (Bio-Rad Laboratories, Jerman) dengan menggunakan microsyringe. Elektroforesis kemudian dilakukan-pertama pada konstanta 30 mV sampai seluruh sampel terkandung dalam gel susun dan setelah itu sampai selesai pada konstan 100 mV. Selanjutnya, 0,02 persen larutan Coomassie Brilliant Blue R-250 diaplikasikan untuk pewarnaan gel. Pewarnaan latar belakang mutlak dari gel dilakukan dengan mengocok gel dalam 10 persen asam asetat semalaman. Akhirnya, citra gel dianalisis untuk mengidentifikasi pita protein di jalur; analisis ini dilakukan di ImageJ (USNational Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). Penanda standar digunakan untuk mendapatkan kurva kalibrasi dari mana MW diperkirakan. Secara singkat, langkah pertama adalah menentukan panjang migrasi masing-masing pita (Rf) dari bagian atas gel pemisah. Langkah kedua adalah perhitungan kurva kalibrasi dengan menggunakan Rf dan log (MW) untuk penanda standar dengan MW yang diberikan. Penentuan MW dilakukan dengan menggunakan pita Rf protein di RPH.

3.7. Uji Sitotoksisitas

264,7 sel mentah dikultur dalam Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) glukosa tinggi yang mengandung 10 persen serum janin sapi (FBS), 4,5 g/L Glukosa, larutan antibiotik 1 persen (100 unit/ mL penisilin dan 100 g/mL Streptomisin), 4 mM L-Glutamin dan 1,5 g/Lsodium bikarbonat pada 37 C dan 5 persen CO2. Toksisitas sel dari 264,7 sel mentah untuk RPH diukur dengan 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 metode uji proliferasi difenil-tetrazolium bromida (MTT) . Sekitar 1 × 104 sel per sumur dilapisi di 96-pelat sumur. Setelah 24 jam, berbagai konsentrasi RPH (0-2000 g/mL) ditambahkan ke dalam sel. Setelah inkubasi 24 dan 48 jam, 100 L larutan MTT (0,5 mg/mL) ditambahkan. Formazancrystals biru diamati ketika diperiksa di bawah mikroskop. DMEM telah dihapus dan 100 L dimetil sulfoksida (DMSO) ditambahkan per sumur. Absorbansi diukur dengan menggunakan pembaca pelat mikrotiter. Viabilitas sel ( persen ) kemudian dihitung sebagai [A570 (sel yang dirawat) A570 (latar belakang)] / [A570 (sel yang tidak dirawat) A570 (latar belakang)] × 100 persen [70].

3.8. Analisis statistik

Laporan untuk setiap sampel hidrolisat adalah nilai rata-rata dari tiga percobaan dan penentuan berulang yang independen. Hasil yang dinyatakan dalam mean ± standar deviasi (SD) dianalisis dengan ANOVA satu arah dan uji post hoc Duncan menggunakan Sistem Analisis Statistik (versi 20.0; SPSS, Armonk, NY, USA). Nilai p <0,05 dianggap="" signifikan="" secara="">

4. Kesimpulan

Penelitian ini mengkaji fungsi RPH. Hasil percobaan mengungkapkan bahwa RPH mengandung senyawa fenolik dan flavonoid dan menunjukkan berbagai aktivitas antioksidan, seperti aktivitas pemulungan DPPH dan ABTS, kapasitas reduksi, dan ORAC. Selain itu, RPH secara efektif menghambattirosinasedan aktivitas hialuronidase. Protease merupakan faktor penting yang mempengaruhi pola MW dari RPH. Analisis RPH menunjukkan potensinya untuk digunakan sebagai bahan kosmetik.

binaraga cistanche

Referensi

1. Ichihashi, M.; Ando, ​​H.; Yoshida, M.; Niki, Y.; Matsui, M. Fotoaging kulit. Obat Anti Penuaan. 2009, 6, 46–59. [CrossRef]

2. Kim, J.-S.; Kim, D.; Kim, H.-J.; Jang, A. Efek perlindungan hidrolisat gelatin kulit keledai pada fotoaging yang diinduksi UVB dari fibroblas kulit manusia. Proses. Biokimia. 2018, 67, 118–126. [CrossRef]

3. Carocho, M.; Ferreira, IC Sebuah tinjauan tentang antioksidan, prooksidan dan kontroversi terkait: Senyawa alami dan sintetis, metodologi penyaringan dan analisis dan perspektif masa depan. Kimia Makanan. racun. 2013, 51, 15-25. [CrossRef]

4. Guo, X.; Zhang, J.; Mungkin.; Tian, ​​S. Optimalisasi hidrolisis terbatas protein dalam residu beras dan karakterisasi sifat fungsional produk. J. Makanan Proc. Pertahankan. 2013, 37, 245–253. [CrossRef]

5. Taman, H.-Y.; Lee, K.W.; Choi, H.-D. Konstituen dedak padi: Aktivitas imunomodulator dan terapeutik. Fungsi Makanan. 2017, 8.935–943. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhou, K.; Pengalengan, C.; Sun, S. Pengaruh hidrolisat protein beras disiapkan oleh protease mikroba dan ultrafiltrasi pada radikal bebas dan oksidasi lemak daging. LWT 2013, 50, 331–335. [CrossRef]

7. Piu', LD; Tassoni, A.; Serrazanetti, DI; Feri, M.; Babini, E.; Tagliazucchi, D.; Gianotti, A. Eksploitasi produk samping cair industri pati untuk menghasilkan peptida bioaktif dari protein terhidrolisis beras. Kimia Makanan. 2014, 155, 199-206. [CrossRef]

8. Feri, M.; Graen-Heedfeld, J.; Bretz, K.; Guillon, F.; Michelini, E.; Calabretta, MM; Lamborghini, M.; Gruarin, N.; Roda, A.;Kraft, A.; dkk. Fraksi Peptida yang Diperoleh dari Produk Sampingan Beras Melalui Proses Ramah Lingkungan Ditampilkan Secara In VitroHealth-Related Bioactivities. PLOS SATU 2017, 12, e0170954. [CrossRef]

9. Wen, C.; Zhang, J.; Zhang, H.; Duan, Y.; Ma, H. Peptida antioksidan yang diturunkan dari protein nabati: Isolasi, identifikasi, mekanisme aksi dan aplikasi dalam sistem pangan: Tinjauan. Tren Makanan Sci. teknologi. 2020, 105, 308–322. [CrossRef]

10. Phelan, M.; Aherne, A.; FitzGerald, RJ; O'Brien, NM Peptida bioaktif yang diturunkan dari kasein: Efek biologis, penggunaan industri, aspek keamanan, dan status peraturan. Int. Susu J. 2009, 19, 643–654. [CrossRef]

11. Udenigwe, CC; Aluko, RE Food peptida bioaktif yang diturunkan dari protein: Produksi, pemrosesan, dan potensi manfaat kesehatan. J. Food Science. 2012, 77, 11-24. [CrossRef] [PubMed]

12. Fardet, A.; Rock, E. Potensi antioksidan in vitro dan in vivo susu, yoghurt, susu fermentasi dan keju: Sebuah tinjauan naratif bukti. nutrisi Res. Wahyu 2018, 31, 52–70. [CrossRef]

13. Leach, JB; Kathryn, AB; Charles, WPJ; Christine, ES Fotosilang hidrogel asam hialuronat: Perancah rekayasa jaringan alami yang dapat terurai secara hayati. Bioteknologi. Bioeng. 2003, 82, 578–589. [CrossRef]

14. Jegasothy, SM; Zabolotniaia, V.; Bielfeldt, S. Khasiat Asam Nano-hyaluronic Topikal Baru pada Manusia. J.klin. Estetika. Dermatol. 2014, 7, 27-29.

15. Ndlovu, G.; Fouche, G.; Tselanyane, M.; Cordier, W.; Steenkamp, ​​V. Penentuan in vitro potensi anti-penuaan dari empat tanaman obat Afrika selatan. Komplemen BMC. Alternatif Med. 2013, 13, 304. [CrossRef]

16. Jiratchayamaethasakul, C.; Ding, Y.; Hwang, O.; Saya, S.-T.; Jang, Y.; Myung, S.-W.; Lee, JM; Kim, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H. Skrining in vitro dari elastase, kolagenase, hyaluronidase, dan aktivitas penghambatan dan antioksidan tirosinase dari 22 ekstrak halophyteplant untuk kosmetik baru. Ikan. air. Sci. 2020, 23, 1–9. [CrossRef]

17. Kang, M.; Taman, S.-H.; Oh, SW; Lee, SE; Yoo, JA; Tidak, YH; Lee, S.; Han, BS; Cho, JY; Lee, J. Efek anti-melanogenik dari resorsinol dimediasi oleh penekanan pensinyalan cAMP dan aktivasi pensinyalan p38 MAPK. Biosci. Bioteknologi. Biochem.2018, 82, 1188–1196. [CrossRef]

18. Chatatikun, M.; Yamauchi, T.; Yamasaki, K; Aiba, S.; Chiabchalard, A. Efek antimelanogenik dari daun Croton roxburghii dan Crotonsublyratus di -MSH merangsang sel B16F10. J.Tradisi. Melengkapi. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef] [PubMed]

19. Rizzello, CG; Nionelli, L.; Coda, R.; Gobbetti, M. Sintesis Lunasin Peptida Pencegah Kanker oleh Bakteri Asam Laktat Selama Fermentasi Sourdough. nutrisi Kanker 2012, 64, 111-120. [CrossRef] [PubMed]

20. Rizzello, CG; Tagliazucchi, D.; Babini, E.; Rutella, GS; Saa, DLT; Gianotti, A. Peptida bioaktif dari matriks makanan nabati: Tren penelitian dan bioteknologi baru untuk sintesis dan pemulihan. J.Fungsi. Makanan 2016, 27, 549–569. [CrossRef]

21. Coscueta, UGD; Campos, DA; Osorio, H.; Nerli, BB; Pintado, M. Hidrolisis protein kedelai enzimatik: Alat untuk produksi bahan pangan biofungsional. Kimia Makanan. X 2019, 1, 100006. [CrossRef]

22. Aydemir, LY; Yamanicioglu, A. Apakah Antioksidan Fenolik Terikat Protein dalam Pulsa Bagian Tak Terlihat dari Gunung Es? J. Tanaman. Biokimia.Fisiol. 2013, 1, 1-3. [CrossRef]

23.Huang, SH; Ng, LT Kuantifikasi kandungan polifenol dan konstituen bioaktif dari beberapa varietas padi komersial di Taiwan. J. Makanan Kompos. dubur. 2012, 26, 122–127. [CrossRef]

24. Yoshitomi, K.; Taniguchi, S.; Tanaka, K.; Uji, Y.; Akimitsu, K.; Gomi, K. Rice terpene synthase 24 (OsTPS24) mengkodekan monoterpene synthase responsif jasmonate yang menghasilkan antibakteri -terpinene melawan patogen beras. J. Tanaman. Fisiol. 2016, 191.120–126. [CrossRef]

25. Kamolsukyeunyong, W.; Sukhaket, W.; Pitija, K.; Thorngkham, P.; Mahatheeranont, S.; Toojinda, T.; Vanavichit, A. RiceSesquiterpene Memainkan Peran Penting dalam Antixenosis terhadap Wereng Coklat pada Padi. Tanaman 2021, 10, 1049. [CrossRef][PubMed]

26. Liu, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Liang, M.; Yang, L. Aktivitas antioksidan in vitro protein beras dipengaruhi oleh derajat alkalin dan pencernaan protease gastrointestinal. J.Sci. pertanian pangan. 2016, 96, 4940–4950. [CrossRef] [PubMed]

27. Phongthai, S.; D'Amico, S.; Schoenlechner, R.; Homthawornchoo, W.; Rawdkuen, S. Sifat fraksinasi dan antioksidan hidrolisat protein dedak padi yang dirangsang oleh pencernaan gastrointestinal in vitro. Kimia Makanan. 2018, 240, 156-164. [CrossRef][PubMed]

28. Huang, S.-L.; Wang, W.-H.; Zhong, X.-Y.; Lin, C.-T.; Lin, W.-S.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Sifat Antioksidan Jatropha curcas L. Kulit Biji dan Ekstrak Kernel. aplikasi Sci. 2020, 10, 3279. [CrossRef]

29. Lin, Y.-S.; Lin, W.-S.; Tung, J.W.; Cheng, Y.-C.; Chang, M.-Y.; Chen, C.-Y.; Huang, S.-L. Kapasitas Antioksidan Biji Buah Jujube dan Pulp Kupas. aplikasi Sci. 2020, 10, 6007. [CrossRef]

30. Shahi, Z.; Sayyid-Alangi, SZ; Najafian, L. Pengaruh jenis enzim dan waktu proses pada derajat hidrolisis, pita elektroforesis dan sifat antioksidan protein terhidrolisis yang berasal dari Bunium persicum Bioss yang dihilangkan lemaknya. tekan kue. Heliyon 2020, 6,e03365. [CrossRef] [PubMed]

31. Xie, H.; Huang, J.; Woo, MW; Hu, J.; Xiong, H.; Zhao, Q. Pengaruh penonaktifan enzim dingin dan panas pada sifat struktural dan fungsional hidrolisat protein ampas beras. Kimia Makanan. 2021, 345, 128784. [CrossRef]

32. Rani, S.; Pooja, K.; Sobat, GK Eksplorasi hidrolisat dan peptida protein beras dengan referensi khusus untuk potensi antioksidan: Pendekatan turunan komputasional untuk penentuan bioaktivitas. Tren Makanan Sci. teknologi. 2018, 80, 61–70. [CrossRef]

33. Bisby, RH; Brooke, R.; Navaratnam, S. Pengaruh potensi oksidasi antioksidan dalam uji kapasitas penyerapan radikal oksigen (ORAC). Kimia Makanan. 2008, 108, 1002–1007. [CrossRef]

34. Elias, RJ; Kellerby, SS; Decker, E. Aktivitas Antioksidan Protein dan Peptida. Kritis. Pdt. Ilmu Pangan. nutrisi 2008, 48, 430–441.[CrossRef] [PubMed]

35. Milik saya, Y.; Li-Chan, E.; Jiang, B. (Eds.) Protein Bioaktif dan Peptida sebagai Makanan Fungsional dan Nutraceuticals; Wiley-Blackwell:Hoboken, NJ, AS, 2010; hal.29–42.

36. Adebiyi, AP; Adebiyi, AO; Yamashita, J.; Ogawa, T.; Muramoto, K. Pemurnian dan karakterisasi peptida antioksidan yang berasal dari hidrolisat protein dedak padi. eur. Makanan Res. teknologi. 2008, 228, 553–563. [CrossRef]

37. Thamnarathip, P.; Jangchud, K.; Nitisinprasert, S.; Vardhanabhuti, B. Identifikasi berat molekul peptida dari hidrolisat dedak padi dengan aktivitas antioksidan tinggi. J. Ilmu Sereal. 2016, 69, 329–335. [CrossRef]

38. Tacias-Pascacio, VG; Morellon-Sterling, R.; Siar, E.-H.; Tavano, O.; Berenguer-Murcia, .; Fernandez-Lafuente, R. Penggunaan Alcalase dalam produksi peptida bioaktif: Sebuah tinjauan. Int. J.Biol. Makromol. 2020, 165, 2143–2196. [CrossRef] [PubMed]

39. Sarringkarin, W.; Laokuldilok, T. Optimalisasi kondisi produksi hidrolisat protein dedak beras ketan dengan sifat antioksidan. CMU J. Nat. Sci. 2017, 16, 1–18. [CrossRef]

40. Zhang, T.; Tong, X.; Qi, B.; Wang, Z.; Li, Y.; Sui, X.; Jiang, L. Perubahan aktivitas antioksidan dari hidrolisat kedelai terhidrolisis Alcalase di bawah simulasi pencernaan gastrointestinal dan transportasi transepitel. J.Fungsi. Makanan 2018, 42, 298–305. [CrossRef]

41. Tu, PTB; Tawata, S. Sifat Anti Oksidan, Anti Penuaan, dan Anti Melanogenik Minyak Atsiri dari Dua Varietas Alpinia zerumbet. Molekul 2015, 20, 16723–16740. [CrossRef]

42. Nishida, Y.; Sugahara, S.; Wada, K; Toyohisa, D.; Tanaka, T.; Ono, M.; Yasuda, S. Efek penghambatan ekstrak etil asetat dari umbi Scilla scilloides pada aktivitas lipoxygenase dan hyaluronidase. Farmasi. Biol. 2014, 52, 1351–1357. [CrossRef]

43. Chen, H.-J.; Dai, F.-J.; Fan, S.-L.; Huang, Y.-C.; Chau, C.-F.; Lin, Y.-S.; Chen, C.-S. Kinetika Penghambatan Hyaluronidase oleh Hidrolisat Protein Beras(Oryza sativa L.) Protein. aplikasi Sci. 2020, 10, 9087. [CrossRef]

44. Girish, K.; Kemparaju, K. Hyaluronidase lem ajaib dan penghapusnya hyaluronidase: Tinjauan biologis. Ilmu Kehidupan. 2007, 80,1921–1943. [CrossRef] [PubMed]

45. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Khan, MTH; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Sebuah tinjauan komprehensif tentang inhibitor tirosinase. J. Enzim. inhib. Med. Kimia 2019, 34, 279–309. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seo, EJ; Hong, ES; Choi, MH; Kim, KS; Lee, SJ Antioksidan dan efek memutihkan kulit dari ekstrak Rhamnus yoshinoi. KoreaJ. Ilmu Makanan. teknologi. 2010, 42, 750–754.

47. Ochiai, A.; Tanaka, S.; Tanaka, T.; Taniguchi, M. Protein Dedak Padi sebagai Sumber Potensi Peptida Antimelanogenik dengan Aktivitas Penghambat Tirosinase. J.Nat. Melecut. 2016, 79, 2545–2551. [CrossRef] [PubMed]

48. Kubglomsong, S.; Theerakulkait, C.; Buluh, RL; Yang, L.; Maier, CS; Stevens, JF Isolasi dan Identifikasi Penghambatan Tirosinase dan Peptida Pengkelat Tembaga dari Albumin Berasal Dedak Padi Terhidrolisis. J. Pertanian. Kimia Makanan. 2018, 66, 8346–8354.[CrossRef]

49. Schurink, M.; van Berkel, WJ; Wichers, H.; Boeriu, CG Novel peptida dengan aktivitas penghambatan tirosinase. Peptida 2007, 28.485–495. [CrossRef]

50. Ishikawa, M.; Kawase, saya.; Ishii, F. Kombinasi Asam Amino Mengurangi Pigmentasi pada Sel Melanoma B16F0. Biol. Farmasi.Banteng. 2007, 30, 677–681. [CrossRef] [PubMed]

51. Zhang, R.; Wei, Y.; Li, M.; Cai, M.; Gu, R.; Mungkin.; Chen, L.; Wang, J. Efek melanogenesis hidrolisat protein beras dan peptida karakteristiknya Leu-Leu-Lys, Leu-Pro-Lys, dan pyroGlu-Lys pada sel melanosit epidermis manusia yang diinduksi UVB. MakananFungsi. 2020, 11, 8757–8767. [CrossRef]

52. Wang, Y.; Cai, D.; Dia, M.; Wang, Z.; Qin, P.; Tan, T. Produksi fermentasi terbuka asam l-laktat menggunakan dedak putih dengan sakarifikasi dan fermentasi simultan. Bioresour. teknologi. 2015, 198, 664–672. [CrossRef] [PubMed]

53. Pan, M.; Jiang, TS; Pan, JL Aktivitas Antioksidan dari Hidrolisat Protein Rapeseed. Bioproses Pangan. teknologi. 2009, 4, 1144–1152.[CrossRef]

54. Chen, HM; Muramoto, K.; Yamauchi, F.; Nokihara, K. Aktivitas antioksidan peptida yang dirancang berdasarkan peptida antioksidan yang diisolasi dari pencernaan protein kedelai. J. Pertanian. Kimia Makanan. 1996, 44, 2619–2623. [CrossRef]

55. Liu, T.; Kong, B.; Xiong, YL; Xia, X. Aktivitas antioksidan dan sifat fungsional hidrolisat protein plasma babi yang dipengaruhi oleh derajat hidrolisis. Kimia Makanan. 2010, 118, 403–410. [CrossRef]

56. Lemes, A.; Sala, L.; Bijih, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Tinjauan Kemajuan Terbaru dalam Peptida Bioaktif Terenkripsi dari Limbah Kaya Protein. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef] [PubMed]

57. Wang, J.-S.; Zhao, M.-M.; Zhao, Q.-Z.; Jiang, Y.-M. Sifat antioksidan papain hidrolisat gluten gandum dalam sistem oksidasi yang berbeda. Kimia Makanan. 2007, 101, 1658–1663. [CrossRef]

58. Gao, M.-T.; Kaneko, M.; Hirata, M.; Toorisaka, E.; Hano, T. Pemanfaatan dedak padi sebagai sumber nutrisi untuk produksi asam laktat fermentatif. Bioresour. teknologi. 2008, 99, 3659–3664. [CrossRef] [PubMed]

59. Huang, WY; Lin, YR; Ho, RF; Liu, HY; Lin, YS Efek larutan air pada ekstraksi daun teh hijau. Sci. Dunia J. 2013, 2013, 368350. [CrossRef]

60. Wathoni, N.; Shan, CY; Shan, WY; Rostinawati, T.; Indradi, RB; Pratiwi, R.; Muchtaridi, M. Karakterisasi dan Aktivitas Antioksidan Pektin Kulit Manggis Indonesia (Garcinia mangostana L.). Heliyon 2019, 5, e02299. [CrossRef]

61. Tsai, C.-C.; Chan, C.-F.; Huang, W.-Y.; Lin, J.-S.; Chan, P.; Liu, H.-Y.; Lin, Y.-S. Aplikasi Lactobacillus rhamnosus SpentCulture Supernatant dalam Aplikasi Antioksidan Kosmetik, Pemutih dan Retensi Kelembaban. Molekul 2013, 18, 14161–14171.[CrossRef]

62. Huang, W.-Y.; Lee, P.-C.; Hsu, J.-C.; Lin, Y.-R.; Chen, H.-J.; Lin, Y.-S. Pengaruh Kualitas Air Terhadap Pelarutan Bubuk Ekstrak Yerba Mate. Sci. Dunia J. 2014, 2014, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

63. Chan, C.-F.; Wu, C.-T.; Huang, W.-Y.; Lin, W.-S.; Wu, H.-W.; Huang, T.-K.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antioksidan dan Melanogenesis Penghambatan Berbagai Ekstrak Dendrobium tosaense. Molekul 2018, 23, 1810. [CrossRef] [PubMed]64. Wu, C.-T.; Agrawal, DC; Huang, W.-Y.; Hsu, H.-C.; Yang, S.-J.; Huang, S.-L.; Lin, Y.-S. Analisis Fungsi Ekstrak Bubuk Kopi Bekas yang Diperoleh dengan Metode Hidrotermal. J. Kimia. 2019, 2019, 1–8. [CrossRef]

65. Dorta, E.; Rodríguez-Rodriguez, EM; Jiménez-Quezada, A.; Fuentes-Lemus, E.; Speisky, H.; Lissi, E.; López-Alarcón, C. Penggunaan Uji Kapasitas Penyerapan Radikal Oksigen (ORAC) untuk Memprediksi Kapasitas Produk Sampingan Mangga (Mangifera indica L.) untuk Menghambat Oksidasi Protein Daging. Makanan Anal. Metode 2016, 10, 330–338. [CrossRef]

66. Lin, Y.-S.; Chen, H.-J.; Huang, J.-P.; Lee, P.-C.; Tsai, C.-R.; Hsu, T.-F.; Huang, W.-Y. Kinetika Aktivitas Penghambatan Tirosinase Menggunakan Ekstrak Daun Vitis vinifera. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 5232680. [CrossRef] [PubMed]

67. Bidlingmeyer, BA; Cohen, SA; Tarvin, TL Analisis cepat asam amino menggunakan derivatisasi pra-kolom. J. Kromatografi. BBM. Sci. aplikasi 1984, 336, 93-104. [CrossRef]

68. Asai, TT; Oikawa, F.; Yoshikawa, K.; Inoue, N.; Sato, K. Food-Derived Collagen Peptides, Prolyl-Hydroxyproline (Pro-Hyp), dan Hydroxyprolyl-Glycine (Hyp-Gly) Meningkatkan Pertumbuhan Fibroblast Kulit Tikus Kultur Primer Menggunakan Fetal Bovine Serum yang Bebas dari Hydroxyprolyl Peptide. Int. J. Mol. Sci. 2019, 21, 229. [CrossRef]

69. Schägger, H. Tricine-SDS-PAGE. Nat. Protoc. 2006, 1, 16–22. [CrossRef]

70. Diao, J.; Chi, Z.; Guo, Z.; Zhang, L. hidrolisat protein kacang hijau memodulasi respon imun melalui jalur NF-kB makrofag RAW 264.7 yang dirangsang inlipopolisakarida. J. Ilmu Pangan. 2019, 84, 2652–2657.[CrossRef]