Epigallocatechin-3-Gallate-Loaded Liposom Mendukung Anti-Peradangan Sel Mikroglia Dan Mempromosikan Perlindungan Saraf

{0}}/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrak

peradangan saraf yang dimediasi mikroglia diakui terutama berkontribusi pada perkembangan penyakit neurodegeneratif. Epigallocatechin-3-gallate (EGCG), yang dikenal sebagai antioksidan alami dalam teh hijau, dapat menghambat peradangan yang dimediasi mikroglia dan melindungi neuron tetapi memiliki kelemahan seperti ketidakstabilan yang tinggi dan bioavailabilitas yang rendah. Kami mengembangkan formulasi liposom EGCG untuk meningkatkan bioavailabilitasnya dan mengevaluasi aktivitas neuroprotektif dalam model peradangan saraf in vitro dan in vivo. Liposom yang mengandung EGCG telah dibuat dari fosfatidilkolin (PC) atau fosfatidilserin (PS) yang dilapisi dengan atau tanpa vitamin E (VE) dengan metode hidrasi dan ekstrusi membran. Ituantiinflamasiefek telah dievaluasi terhadap lipopolisakarida (LPS)-induced BV-2 aktivasi sel mikroglial dan inflamasi di substansia nigra tikus Sprague Dawley. Dalam model inflamasi seluler, sel mikroglial BV-2 murine mengubah morfologinya dari spheroid normal menjadi bentuk gelendong teraktivasi setelah 24 jam induksi LPS. Dalam uji radikal bebas 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) in vitro, EGCG menyerap 80 persen DPPH dalam waktu 3 menit. Liposom yang dimuat EGCG dapat difagosit oleh sel BV-2 setelah 1 jam kultur sel dari percobaan pengambilan sel. Liposom yang mengandung EGCG meningkatkan produksi BV-2 oksida nitrat yang diturunkan dari mikroglia dan LPS yang mengikuti TNF. Dalam model tikus sindrom Parkinson in vivo, injeksi intra-nigral simultan dari liposom yang dimuat EGCG melemahkan sitokin pro-inflamasi yang diinduksi LPS dan memulihkan kerusakan motorik. Kami menunjukkan bahwa liposom yang mengandung EGCG memberikan efek neuroprotektif dengan memodulasi aktivasi mikroglia. EGCG yang diekstraksi dari teh hijau dan liposom yang dimuat bisa menjadi kandidat yang berharga untuk terapi pengubah penyakit untukPenyakit Parkinson (PD).

Kata kunci:pelindung saraf; peradangan saraf; penyakit Parkinson; katekin; L- -fosfatidilkolin;fosfatidilserin

mencegahparkinsonpenyakitefek dari Cistanche dengancistanche

Chun-Yuan Cheng 1,2, Lassina Barro 2, Shang-Ting Tsai 2,3, Tai-Wei Feng 2,3, Xiao-Yu Wu 2, Che-Wei Chao 4,Ruei-Siang Yu 2, Ting-Yu Chin 4,* dan Ming Fa Hsieh 2,3,*

1 Divisi Bedah Saraf, Departemen Bedah, Rumah Sakit Kristen Changhua, 135 Nanxiao St., Kota Changhua, Kabupaten Changhua 500, Taiwan; 83998@cch.org.tw

2 Departemen Teknik Biomedis, Universitas Kristen Chung Yuan, No. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Kota Taoyuan 320314, Taiwan;

3 Pusat Perangkat dan Teknologi Medis Minimal Invasif, Universitas Kristen Chung Yuan, No. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Kota Taoyuan 320314, Taiwan

4 Departemen Teknologi Biosains, Universitas Kristen Chung Yuan, No. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Kota Taoyuan 320314, Taiwan.

1. Perkenalan

Ketika sistem saraf rusak atau terinfeksi, sel mikroglia diaktifkan dan diubah menjadi bercabang, menghasilkan ekspresi berlebihan dari sejumlah besar sitokin pro-inflamasi seperti tumor necrosis factor- (TNF-), interleukin-1 ( IL-1 ), interleukin 6 (IL-6), dan mediator inflamasi seperti oksida nitrat (NO) dan spesies oksigen reaktif (ROS). Akhirnya, sel-sel saraf rusak, merosot, atau mati karena mediator inflamasi ini. Baru-baru ini ditemukan bahwa di otak pasien dengan penyakit neurodegeneratif seperti penyakit Parkinson0 (PD), penyakit Alzheimer0, penyakit Huntington0, dan penyakit Creutzfeldt-Jakob , sejumlah besar sel mikroglial diaktifkan dan diekspresikan secara berlebihan [1–3]. Secara epidemiologis, penyebab PD sebagian besar terkait dengan reaksi peradangan saraf. Mediator inflamasi yang dihasilkan, seperti TNF-, IL-1, IL-6, NO, dan ROS, ditemukan di striatum otak [1,4-7]. Degradasi neuron dopaminergik dapat diatur oleh sel mikroglia [8].

Proses peradangan saraf yang menyebabkan PD didahului oleh kerusakan primer neuron yang disebabkan oleh racun lingkungan, termasuk rotenon [9], lipopolisakarida (LPS) [5,7], dan efek akumulasi protein abnormal [10]. Kerusakan akan menyebabkan lesi dan bahkan apoptosis neuron dopaminergik. Kemudian sel mikroglia diaktifkan untuk melepaskan sitokin, mengakibatkan peradangan dan kematian neuron dan akhirnya menyebabkan PD.

Ketika sel mikroglia dirangsang oleh LPS, LPS berikatan dengan reseptor permukaan CD14 tempat pengikatan sel mikroglia. Kompleks LPS-CD14 dihubungkan dengan MD2 linker melalui protein transmembran reseptor seperti tol-4 (TLR4) dan kemudian terlibat dalam beberapa jalur transmisi pesan yang dihasilkan oleh mitogen-activated protein kinase (MAPK) dan faktor transkripsi yang mengaktifkan (faktor nuklir -kappa B, NF-κB). Setelah transkripsi gen [5,11,12], sel mikroglial melepaskan sitokin seperti TNF- dan IL-1 , atau mengekspresikan gen dari inducible nitric oxide synthase (iNOS) dan cyclo-oxygenase-2 (COX{ {17}}), menghasilkan pelepasan prostaglandin atau NO. Selain itu, radikal bebas ONOO destruktif dihasilkan dengan menggabungkan anion superoksida yang dihasilkan dari nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oksidase dengan NO yang dihasilkan dari iNOS, yang menyebabkan kematian neuron dopaminergik [13]. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, LPS digunakan untuk menginduksi peradangan saraf sel mikroglia sebagai model in vitro PD.

Katekin merupakan antioksidan alami yang dapat mencegah kerusakan sel dan memberikan banyak manfaat farmakologi seperti anti tumor, anti kanker, anti aging, anti radiasi farmakologi, dan penangkal radikal bebas. Teh hijau mengandung sekitar 10 persen polifenol menurut beratnya, termasuk sejumlah besar katekin yang disebut epigallocatechin gallate (EGCG). EGCG memiliki aktivitas antioksidan tertinggi dan kapasitas penangkapan radikal bebas di semua katekin teh hijau dan dapat menangkap ROS untuk melindungi sel dari kerusakan stres oksidatif [15]. EGCG juga memiliki efikasi anti inflamasi yang tinggi, yang secara efektif dapat menghambat sekresi sitokin (TNF-, IL-2, dan IL-8) oleh makrofag [16], fosforilasi protein pensinyalan Akt dan protein IκB di jalur inflamasi untuk mengurangi ekspresi NF-κB, atau transkripsi AP-1 dengan menghambat fosforilasi protein MAPK upstream untuk menyeimbangkan ekspresi COX-2 dan mengurangi produksi sitokin pro-inflamasi [17].

Baru-baru ini, EGCG dilaporkan berpotensi terapeutik atau profilaksis untuk PD karena menekan oligomer aktif -synuclein (S) [18]. EGCG juga mencegah agregasi S in vitro [19-21], dan agregasi S sitoplasma dalam neuron dopaminergik adalah salah satu kemungkinan patogenesis PD yang menyebabkan kerusakan neuron dopaminergik di substansia nigra [22]. Selanjutnya, EGCG dapat memulihkan 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) yang diinduksi neurokimia atau kerusakan fungsional dan mengatur ferroportin di substansia nigra dan mengurangi stres oksidatif [23]. EGCG juga memiliki efek perlindungan saraf dan kekebalan pada tikus yang diobati dengan MPTP dan dapat memodulasi peradangan saraf dan melindungi hilangnya neuron dopaminergik pada PD yang diinduksi MPTP [24].

Efek anti-inflamasi EGCG diselidiki. EGCG menekan LPS menginduksi produksi NO dan ekspresi iNOS dalam sel mikroglial BV-2. EGCG dapat secara efektif menghambat ekspresi sitokin pro-inflamasi seperti TNF- dan IL-1 dalam sel BV-2 [25]. Pretreatment EGCG dari makrofag manusia secara signifikan menghambat ekspresi sitokin pro-inflamasi yang diinduksi LPS seperti TNF-, IL-1, dan IL-6 [26]. Selain itu, pasca pengobatan EGCG pada tikus yang cedera LPS menurunkan produksi sitokin pro-inflamasi melalui modulasi jalur TLR4-NF-κB [27]. Selain itu, mikrosfer poli(laktida-co-glikolida) (PLGA) yang sarat dengan EGCG dan dioptimalkan dengan penambahan -siklodekstrin ( -CD) dapat secara efektif menekan produksi NO dari sel BV-2 dalam model in vitro murine BV -2 sel mikroglial dirangsang oleh LPS, menunjukkan mikrosfer dapat menekan inflamasi sel mikroglial diaktifkan [28].

Meskipun teh hijau adalah minuman sehari-hari, khasiat katekin tidak efektif karena bioavailabilitas oral yang rendah; dengan demikian, bentuk sediaan farmasi yang efektif diperlukan. Pembawa obat nano memiliki manfaat untuk menghindari metabolisme dini, memperpanjang waktu kerja obat, dan menargetkan penghantaran obat. Oleh karena itu, penelitian ini bermaksud untuk mengembangkan liposom yang mengandung phosphatidylcholine (PC) dan phosphatidylserine (PS), komponen yang mirip dengan membran sel, sebagai bentuk sediaan antiinflamasi. EGCG yang diekstraksi dari daun teh hijau dimuat dalam liposom untuk memperlambat reaksi inflamasi pada sel mikroglia yang diinduksi oleh LPS. Efek terapeutik liposom yang mengandung EGCG pada model PD in vivo untuk perlindungan saraf juga dievaluasi.

2. Hasil

2.1. Ekstraksi EGCG

2.1.1. Ekstrak EGCG

Data karakterisasi epigallocatechin{{0}}gallate dapat ditemukan di File Tambahan (Gambar S1 dan S2). 2.1.2. Berbagai Formulasi EGCG Pada Tabel 1, diameter partikel rata-rata liposom plasebo PS-, PS-EGCE-, dan PS-EGCG-VE lebih kecil dibandingkan dengan plasebo PC-, PC-EGCE-, dan PC-EGCG-VE- liposom, masing-masing. Karena PC bersifat netral dan PS bermuatan negatif [29], hal ini menunjukkan bahwa potensial permukaan aditif mempengaruhi ukuran partikel. Indeks polidispersitas (PDI) semua liposom kurang dari 0,22, menunjukkan bahwa struktur liposom dalam larutan stabil. Muatan negatif PS menyebabkan gaya tolak pada potensial permukaan antara liposom PS, menghindari agregasi dan mengurangi ukuran liposom PS.

Efisiensi enkapsulasi / ukuran liposom yang mengandung PS yang dijelaskan pada Tabel 1 lebih besar / lebih kecil daripada liposom yang mengandung PC yang sesuai [30]. Efisiensi enkapsulasi liposom PC-EGCG-VE dan liposom PS-EGCG-VE lebih luas daripada liposom PC-EGCG dan liposom PS-EGCG, masing-masing. Ini karena vitamin E larut dalam lemak, tertanam dalam membran bilayer fosfolipid, dan memberikan pelindung antioksidan untuk EGCG.

2.2. Analisis Sel In Vitro

2.2.1. Viabilitas Sel

Viabilitas sel sel yang diobati dengan EGCG dari 50 hingga 400 M menurun secara signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar 1A). Sebaliknya, kelangsungan hidup sel yang menerima 5 sampai 25 M mirip dengan kelangsungan hidup sel kelompok kontrol. Konsentrasi EGCG yang digunakan dalam penelitian ini ditentukan menjadi 25 M. Demikian pula, konsentrasi LPS yang digunakan untuk induksi peradangan sel ditentukan menjadi 50 ng/mL menurut Gambar 1B. Pada Gambar 1C, viabilitas sel dari sel yang dikultur bersama dengan liposom plasebo dari semua konsentrasi tidak signifikan secara statistik dibandingkan dengan kelompok kontrol. Oleh karena itu, liposom plasebo tidak sitotoksik terhadap sel mikroglia.

2.2.2. Morfologi Sel

Morfologi sel kelompok kontrol (Gambar 2A) dan morfologi sel yang diobati dengan 25 M EGCG (Gambar 2B）) berbentuk bulat, sedangkan morfologi sel yang diobati dengan 50 ng/mL LPS (Gambar 2C) berbentuk gelendong. Namun, morfologi sel yang diobati dengan 25 uM EGCG dan diaktifkan oleh LPS (Gambar 2D) berbentuk bulat. Hal ini menunjukkan bahwa EGCG dapat menghambat aktivasi yang diinduksi oleh LPS. Oleh karena itu, pretreatment EGCG memiliki efek penghambatan pada peradangan saraf, melindungi sel-sel mikroglia dari aktivasi.

2.2.3. TANPA Rilis

Pada Gambar 3A, pelepasan NO dari sel BV-2 yang diinduksi dengan 5-1000 ng/mL LPS selama inkubasi 24 jam secara statistik signifikan dibandingkan dengan pelepasan NO dari kelompok kontrol. Konsentrasi LPS yang digunakan untuk mengaktifkan inflamasi sel agar bekerja ditentukan menjadi 50 ng/mL.

Pelepasan NO dari sel BV-2 yang diobati dengan 25 M EGCG tidak signifikan secara statistik dibandingkan dengan kelompok kontrol, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3B. Namun, peradangan sel yang diinduksi dengan LPS selama 24 jam menunjukkan peningkatan yang signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol. Sel-sel yang diobati dengan 25-200 M EGCG selama 1 jam dan kemudian diaktifkan dengan LPS menunjukkan penurunan yang signifikan secara statistik dibandingkan dengan kelompok sel yang diaktifkan dengan LPS saja. Pelepasan NO tidak berkurang ketika EGCG meningkat dari 50-200 M karena viabilitas sel menurun ketika EGCG meningkat dari 50-200 M, menurut Gambar 1A.

Produksi NO dari sel yang diobati dengan 25 M EGCG diikuti oleh inflamasi yang diinduksi dengan 50 ng/mL LPS tidak signifikan secara statistik dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar 3C). Namun demikian, pelepasan NO pada kelompok sel yang diobati dengan liposom PC-EGCG atau liposom PC-EGCG-VE diikuti dengan aktivasi LPS dengan 50 ng/mL menunjukkan penurunan yang signifikan dibandingkan dengan kelompok sel yang hanya diobati dengan LPS. Pelepasan NO dari sel yang diperlakukan dengan liposom PC-EGCG atau PC-EGCG-VE-liposom lebih tinggi daripada pelepasan NO dari kelompok sel yang diberi perlakuan sebelumnya oleh EGCG, yang seharusnya dijelaskan oleh pelepasan EGCG yang lambat dari liposom.

2.2.4. Analisis Sitokin

Pada Gambar 4A, konsentrasi sel TNF- yang diobati dengan LPS setelah 24 jam menunjukkan peningkatan yang signifikan secara statistik dibandingkan dengan kelompok kontrol atau media kultur sel (DMEM). Plasebo PC-liposom dekat dengan sel yang diobati dengan LPS. Namun, konsentrasi TNF- dalam kelompok sel yang diberi liposom PS-EGCG atau liposom PS-EGCG-VE yang diikuti dengan aktivasi LPS menunjukkan penurunan yang signifikan secara statistik dibandingkan dengan sel yang diobati dengan LPS. Penurunan konsentrasi TNF- ini menunjukkan bahwa liposom yang mengandung EGCG dapat mengurangi aktivasi sel mikroglia yang diinduksi oleh LPS. Efek penghambatan liposom PS-EGCG-VE lebih baik daripada liposom PS-EGCG.

Fosfolipid pada membran sel dapat dihidrolisis oleh sitosol fosfolipase A2 (cPLA2) untuk menghasilkan asam arakidonat. Cyclo-oxygenase (COX) adalah enzim kunci yang mengubah asam arakidonat menjadi prostaglandin. COX-2 dan cPLA2 sering dihasilkan dari peradangan atau penyakit ganas [31-34]. Pada Gambar 4B, peradangan diinduksi oleh LPS 5-50 ng/mL selama 24 jam, dan ekspresi cPLA2 meningkat ketika konsentrasi LPS meningkat. Gambar 4C menunjukkan peningkatan aktivitas COX-2, yang diinduksi oleh LPS (5–50 ng/mL) selama 24 jam. Ekspresi COX-2 meningkat dari 5–25 ng/mL LPS, sementara itu menurun pada 50 ng/mL. Pada Gambar 4D, ekspresi cPLA2 berkurang ketika sel BV-2 diberi perlakuan awal dengan EGCG dan diinduksi oleh LPS. Ekspresi COX-2 ketika LPS mengaktifkan sel BV-2 meningkat dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar 4E). Terjadi penurunan COX-2 yang signifikan pada kelompok sel yang diberi EGCG, liposom PS plasebo, liposom PS-EGCG, dan liposom PS-EGCG-VE, diikuti dengan induksi inflamasi LPS. Khususnya, ekspresi COX-2 sel yang diberi plasebo PS-liposom memiliki perbedaan yang signifikan secara statistik dari sel yang diinduksi oleh LPS.

2.3. Dalam Uji Hewan Vivo

2.3.1. Perilaku Hewan

Uji Jumlah lingkaran yang diselesaikan oleh tikus Parkinsonian setelah pemberian amfetamin (ditunjukkan pada Gambar 5A) meningkat secara signifikan dibandingkan dengan jumlah lingkaran yang diselesaikan oleh tikus kelompok kontrol. Perilaku tikus parkinson0 yang diobati dengan berbagai formulasi EGCG serupa dengan tikus kelompok kontrol. Data ini menunjukkan bahwa EGCG melemahkan lesi unilateral yang diinduksi LPS pada sistem nigrostriatal. 2.3.2. Analisis Penanda Inflamasi Rasio TNF-/GAPDH pada kelompok perlakuan secara signifikan lebih rendah dibandingkan dengan rasio yang ditemukan pada tikus sindrom. Tren IL-1 mirip dengan tren TNF-. Hasil in vivo konsisten dengan hasil studi in vitro. Ekspresi faktor neurotropik yang diturunkan dari otak (BDNF) pada kelompok yang diobati mirip dengan kelompok yang diinduksi LPS (Gambar 5D). Namun, hasil ini dapat menunjukkan bahwa peningkatan koordinasi tungkai pada tikus sindrom Parkinson oleh liposom yang dimuat PC-EGCG disebabkan oleh pengurangan respons peradangan saraf, tetapi tidak dengan peningkatan ekspresi BDNF.

Hal ini juga sesuai dengan laporan sebelumnya bahwa penurunan produksi TNF- dan NO dengan perlakuan awal tikus dengan EGCG (10 mg/kg) selama 24 jam dan induksi dengan LPS setelah 7 hari menurun dibandingkan dengan tikus yang diberi perlakuan LPS, dan menyimpulkan bahwa EGCG memiliki efek terapeutik potensial untuk neurotoksisitas yang diinduksi LPS karena pengurangan pelepasan TNF- dan NO.

3. Diskusi

Dalam penelitian ini, kemurnian EGCG yang diekstraksi dari teh hijau terdeteksi menjadi 90,5 persen , dan aktivitas penangkapan radikal bebas EGCG lebih luas dari 80 persen dalam waktu 3 menit. Itu meningkat dengan konsentrasi EGCG yang lebih tinggi atau waktu reaksi yang lebih lama. Ukuran partikel liposom PC-EGCG-VE- dan PS-EGCG-VE adalah 161,5 dan 142,9 nm, yang lebih kecil dari EGCG yang dimuat dalam mikrosfer PLGA [28] dengan tambahan -siklodekstrin (berkisar dari 1–14 m) . Efisiensi enkapsulasi liposom PC-EGCG-VE-dan PS-EGCG-VE masing-masing adalah 60,2 persen dan 76,8 persen . Hasil ini menunjukkan bahwa liposom yang mengandung PS lebih kecil, lebih stabil, dan memiliki efisiensi enkapsulasi yang lebih tinggi karena muatan pada PS dan menghasilkan gaya tolak antar liposom untuk menghindari agregasi.

Ekspresi TNF- dalam sel yang diberi liposom PS-EGCG- dan PS-EGCG-VE dan kemudian diinduksi oleh LPS memiliki perbedaan yang signifikan secara statistik dibandingkan dengan sel yang diinduksi dengan LPS, dan hasil yang serupa diamati pada pra-perawatan EGCG pada LPS -ekspresi TNF- yang diinduksi dalam sel BV-2 [25] dan makrofag manusia [26]. Singkatnya, morfologi sel, dan ekspresi TNF- dari kelompok yang diobati dengan EGCG menunjukkan efek penghambatan peradangan yang disebabkan oleh LPS.

Dalam penelitian ini, pretreatment EGCG dapat mengurangi pelepasan NO. Penekanan produksi NO dari sel BV yang diinduksi LPS-2 oleh pretreatment mikrosfer PLGA bermuatan EGCG juga diselidiki dalam penelitian kami sebelumnya [28].

Dalam penelitian ini, sindrom Parkinson pada tikus disebabkan oleh kerusakan pada daerah substantia nigra unilateral yang disebabkan oleh LPS. Temuan penting lainnya adalah bahwa, melalui analisis kuantitatif statistik, liposom yang mengandung EGCG dapat meringankan sindrom karena kerusakan pada daerah nigrosine otak tengah unilateral dari otak tikus yang diinduksi oleh LPS dalam uji rotasi, dan produksi faktor neuroinflamasi TNF- di substansia. area nigra otak tikus juga dapat dikurangi dengan liposom yang mengandung EGCG. Studi ini menunjukkan bahwa peningkatan koordinasi tungkai dan pengurangan peradangan neuron pada sindrom Parkinson yang diinduksi LPS disebabkan oleh pemberian liposom bermuatan EGCG secara lokal tetapi tidak dengan peningkatan ekspresi BDNF. Namun, hasil anti-peradangan saraf diperlukan untuk efek neuroprotektif [35]. Aktivasi BV-2 melepaskan faktor pro-inflamasi, yang bersifat neurotoksik dan menyebabkan kerusakan sel. Dengan mencegah aktivasi BV-2, EGCG memberikan efek neuroprotektif. Beberapa pasca pengobatan EGCG untuk meningkatkan proliferasi, tingkat kelangsungan hidup, dan diferensiasi neuron sel induk saraf dewasa di dentate gyrus yang diinduksi oleh LPS menunjukkan bahwa EGCG mungkin menjadi agen terapi potensial untuk penyakit neuroinflamasi [27].

Studi farmakokinetik sebelumnya menunjukkan bahwa PS eksogen dapat melintasi sawar darah-otak (BBB), di mana ia tampaknya memiliki afinitas untuk hipotalamus [6], dan pemberian oral menghasilkan tingkat puncak dalam 1-4 jam. Selain itu, ditemukan bahwa liposom yang mengandung PS meniru sel apoptosis untuk mempromosikan sekresi mediator antiinflamasi, seperti transforming growth factor- 1 (TGF- 1) (untuk menurunkan regulasi NO yang dihasilkan dari makrofag) [36] dan prostaglandin E2 (PGE2) oleh makrofag dan sel mikroglia in vitro [6,37], dan juga mempromosikan pengentasan inflamasi in vivo [38]. Dengan demikian, liposom bermuatan EGCG yang mengandung PS yang ditunjukkan dalam penelitian ini memiliki keuntungan dari ukuran partikel yang lebih kecil, efisiensi enkapsulasi yang lebih tinggi, dan menghambat aktivasi sindrom Parkinson baik dalam sel mikroglia dan pada model tikus Vivo, menunjukkan peningkatan fungsi anti-inflamasi dan pelindung saraf.

Keterbatasannya adalah bahwa penelitian kami dilakukan dengan beberapa analisis yang hilang, seperti dalam kasus efek neuroprotektif, dan pewarnaan NeuN tidak diselidiki. Kami juga menganalisis hanya BDNF sebagai faktor neurotropik. FGF2 dan IGF2 juga merupakan faktor neurotropik yang harus dipertimbangkan [39].

5. Kesimpulan

Untuk meningkatkan bioavailabilitas katekin oral yang rendah, EGCG dimuat dalam liposom dalam penelitian ini. Ditemukan bahwa liposom yang mengandung PS lebih kecil dan lebih stabil. Ini memiliki efisiensi enkapsulasi yang lebih tinggi, dan penambahan vitamin E dapat melindungi EGCG dari oksidasi dan meningkatkan efisiensi enkapsulasi. Dalam studi in vitro, ekspresi produksi TNF- dan NO dari sel BV-2 semuanya berkurang setelah perlakuan awal liposom yang dimuat EGCG pada sel BV yang diinduksi LPS-2. Oleh karena itu, liposom yang mengandung EGCG telah memainkan peran penting dalam respons peradangan saraf sebagai penghambat. Efek yang menguntungkan telah mencegah sel dari apoptosis dalam reaksi neuroinflamasi.

Dalam studi in vivo, sindrom Parkinson pada tikus yang diinduksi oleh LPS ke wilayah substantia nigra otak tengah unilateral telah diperbaiki. Mekanisme peradangan saraf, termasuk sekresi TNF, telah dihambat oleh pasca pengobatan liposom yang mengandung EGCG. Kami menunjukkan bahwa EGCG akan menjadi kandidat yang lebih berharga untuk mengobati penyakit neurodegeneratif dengan mengurangi peradangan di otak. Penyelidikan selanjutnya harus fokus pada jalur inflamasi dengan menggunakan pelacak lisosom untuk melacak pintu masuk liposom ke dalam sel dan pelepasan EGCG dari liposom.

Referensi

1 Tenang, AKU; Blok, ML aktivasi mikroglial dan neurodegenerasi kronis. Neuroterapi 2010, 7, 354–365. [CrossRef]

2. Ekdahl, C.; Kokaia, Z.; Lindvall, O. Peradangan otak dan neurogenesis dewasa: Peran ganda mikroglia. Ilmu saraf 2009, 158, 1021-1029. [CrossRef] [PubMed]

3. Weissleder, R.; Nahrendorf, M.; Pittet, MJ Pencitraan makrofag dengan nanopartikel. Nat. ibu. 2014, 13, 125-138. [CrossRef]

4. Papageorgiou, IE; Fetani, AF; Lewen, A.; Heinemann, U.; Kann, O. Aktivasi luas sel mikroglia di hipokampus tikus epilepsi kronis hanya berkorelasi sebagian dengan neurodegenerasi. Struktur Otak. Fungsi. 2015, 220, 2423–2439. [CrossRef] [PubMed]

5. Dutta, G.; Zhang, P.; Liu, B. Model hewan penyakit Parkinson lipopolisakarida: Studi mekanistik dan penemuan obat. Dasar. klinik farmasi. 2008, 22, 453–464. [CrossRef] [PubMed]

6. Otsuka, M.; Tsuchiya, S.; Aramaki, Y. Keterlibatan ERK, suatu MAP kinase, dalam produksi TGF- oleh makrofag yang diobati dengan liposom yang terdiri dari fosfatidilserin. Biokimia. Biofis. Res. komuni. 2004, 324, 1400–1405. [CrossRef]

7. Li, R.; Huang, Y.-G.; Fang, D.; Cabul. (-)-Epigallocatechin gallate menghambat aktivasi mikroglial yang diinduksi lipopolisakarida dan melindungi terhadap cedera saraf dopaminergik yang dimediasi peradangan. J. Neurosci. Res. 2004, 78, 723–731. [CrossRef]

8. Liu, J.; Hong, Z.; Ding, J.; Liu, J.; Zhang, J.; Chen, S. Rilis dominan enzim lisosom oleh mikroglia tikus yang baru lahir setelah pengobatan LPS diungkapkan oleh studi proteomik. J. Proteome Res. 2008, 7, 2033–2049. [CrossRef]

9. Cho, H.-S.; Kim, S.; Lee, S.-Y.; Taman, JA; Kim, S.-J.; Chun, HS Efek perlindungan komponen teh hijau, L-theanine pada kematian sel saraf yang diinduksi racun lingkungan. Neurotoksikologi 2008, 29, 656-662. [CrossRef]

10. Mariani, MM; Kielian, T. Microglia pada penyakit menular dari sistem saraf pusat. J. Neuroimun Pharmacol. 2009, 4, 448–461. [CrossRef]

11. Santiago, RM; Barbieiro, J.; Lima, MM; Dombrowski, PA; Andreatini, R.; Vital, MA perubahan perilaku seperti depresi yang disebabkan oleh MPTP intraneural, 6-OHDA, LPS, dan model rotenone penyakit Parkinson sebagian besar terkait dengan serotonin dan dopamin. Prog. Neuro-Psikofarmakol. Biol. Psikiatri 2010, 34, 1104-1114. [CrossRef] [PubMed]

12. Liu, M.; Bing, model hewan G. Lipopolisakarida untuk penyakit Parkinson. Dis. Parkinson 2011, 2011, 327089. [CrossRef] [PubMed]

13. Wu, D.-C.; Teismann, P.; Tieu, K.; Vila, M.; Jackson-Lewis, V.; Ischiropoulos, H.; Przedborski, S. NADPH oksidase memediasi stres oksidatif dalam model 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine penyakit Parkinson. Prok. Natal akad. Sci. AS 2003, 100, 6145–6150. [CrossRef]

14. Rahman, I.; Biswas, SK; Kirkham, PA Regulasi peradangan dan pensinyalan redoks oleh polifenol makanan. Biokimia. farmasi. 2006, 72, 1439–1452. [CrossRef] [PubMed]

15. Valko, M.; Rhodes, C.; Moncol, J.; Izakovic, M.; Mazur, M. Radikal bebas, logam dan antioksidan pada kanker yang diinduksi stres oksidatif. Kimia Biol. Berinteraksi. 2006, 160, 1–40. [CrossRef]

16. Tentu, Y.-J.; Chun, K.-S.; Cha, H.-H.; Han, SS; Keum, Y.-S.; Park, K.-K.; Lee, SS Mekanisme molekuler yang mendasari aktivitas kemopreventif fitokimia anti-inflamasi: Down-regulation COX-2 dan iNOS melalui penekanan aktivasi NF-κB. mutasi. Res. Dasar. mol. mekanisme Mutagenesis 2001, 480, 243–268. [CrossRef]

17. Renaud, J.; Nabavi, SF; Daglia, M.; Nabawi, SM; Martinoli, M.-G. Epigallocatechin-3-gallate, molekul yang menjanjikan untuk penyakit Parkinson? Peremajaan Res. 2015, 18, 257–269. [CrossRef]

18. Yang, JE; Rho, KY; Lee, S.; Lee, JT; Taman, JH; Bhak, G.; Paik, SR EGCG-dimediasi Perlindungan Gangguan Membran dan Sitotoksisitas Disebabkan oleh 'Oligomer Aktif' dari -Synuclein. Sci. Rep. 2017, 7, 1–10. [CrossRef]

19. Bieschke, J.; Russ, J.; Friedrich, RP; Ehrnhoefer, DE; Terkejut, H.; Neugebauer, K.; Wanker, EE EGCG merombak fibril -synuclein dan amiloid- matang dan mengurangi toksisitas seluler. Prok. Natal akad. Sci. AS 2010, 107, 7710-7715. [CrossRef]

20. Yoshida, W.; Kobayashi, N.; Sasaki, Y.; Ikebukuro, K.; Sode, K. Peptida parsial dari -synuclein yang dimodifikasi dengan inhibitor molekul kecil secara khusus menghambat fibrilasi amiloid -synuclein. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 2590–2600. [CrossRef] [PubMed]

21. Xu, Y.; Zhang, Y.; Quan, Z.; Wong, W.; Guo, J.; Zhang, R.; Yang, Q.; Dai, R.; McGeer, PL; Qing, H. Epigallocatechin gallate (EGCG) menghambat agregasi alpha-synuclein: Agen potensial untuk penyakit Parkinson. Neurokimia. Res. 2016, 41, 2788–2796. [CrossRef] [PubMed]

22. Li, Y.; Chen, Z.; Lu, Z.; Yang, Q.; Liu, L.; Jiang, Z.; Zhang, L.; Zhang, X.; Qing, H. "Cell-adiktif" dual-target terlacak nanodrug untuk pengobatan penyakit Parkinson melalui jalur armada. Theranostics 2018, 8, 5469. [CrossRef]

23. Xu, T.; Langley, M.; Kanthasamy, AG; Reddy, MB Epigallocatechin gallate memiliki efek penyelamatan saraf pada model tikus dengan penyakit Parkinson. J. Nutr. 2017, 147, 1926–1931. [CrossRef] [PubMed]

24. Zhou, T.; Zhu, M.; Liang, Z. (-)-Epigallocatechin-3-gallate memodulasi kekebalan perifer pada model tikus penyakit Parkinson yang diinduksi MPTP. mol. Med. Rep. 2018, 17, 4883–4888. [CrossRef]

25. Taman, E.; Chun, HS Polifenol teh hijau Epigallocatechin gallate (EGCG) mencegah aktivasi sel mikroglial BV yang diinduksi LPS-2. J. Ilmu Kehidupan. 2016, 26, 640–645. [CrossRef]

26. Liu, J.-B.; Zhou, L.; Wang, Y.-Z.; Wang, X.; Zhou, Y; Ho, W.-Z.; Li, J.L. Aktivitas Neuroprotektif dari ()-Epigallocatechin Gallate terhadap Sitotoksisitas yang Dimediasi Lipopolisakarida. J. Imun. Res. 2016, 2016, 4962351. [CrossRef] [PubMed]

27. Seong, K.-J.; Lee, H.-G.; Kook, MS; Ko, H.-M.; Jung, J.-Y.; Kim, W.-J. Epigallocatechin-3-gallate menyelamatkan neurogenesis hippocampal dewasa yang terganggu LPS dengan menekan jalur pensinyalan TLR4-NF-κB pada tikus. Korea J.Fisiol. farmasi. 2016, 20, 41. [CrossRef] [PubMed]

28. Cheng, C.-Y.; Pho, Q.-H.; Wu, X.-Y.; Dagu, T.-Y.; Chen, C.-M.; Fang, P.-H.; Lin, Y.-C.; Hsieh, M.-F. Mikrosfer PLGA sarat dengan kompleks -siklodekstrin epigallocatechin-3-gallate untuk sifat anti-inflamasi dalam sel mikroglial yang diaktifkan. Polimer 2018, 10, 519. [CrossRef]

29. Buszello, K.; Harnisch, S.; Muller, R.; Müller, B. Pengaruh asam lemak alkali pada sifat dan stabilitas emulsi O/W parenteral yang dimodifikasi dengan Solutol HS 15®. eur. J. Farmasi. Biofarmasi. 2000, 49, 143–149. [CrossRef]

30. Shashi, K.; Satinder, K.; Bharat, P. Ulasan lengkap tentang: Liposom. Int. Res. J. Farmasi. 2012, 3, 10–16.

31. Wang, W.-Y.; Tan, M.-S.; Yu, J.-T.; Tan, L. Peran sitokin pro-inflamasi dilepaskan dari mikroglia pada penyakit Alzheimer. Ann. terjemahan Med. 2015, 3. [CrossRef]

32. Smith, JA; Das, A.; Ray, SK; Banik, NL Peran sitokin pro-inflamasi yang dilepaskan dari mikroglia pada penyakit neurodegeneratif. Otak Res. Banteng. 2012, 87, 10-20. [CrossRef] [PubMed]

33. Hu, H.; Li, Z.; Zhu, X.; Lin, R.; Chen, L. Salidroside mengurangi mobilitas sel melalui pensinyalan NF-κB dan MAPK dalam sel mikroglial BV2 yang diinduksi LPS. jelas. Alternatif Pelengkap Berbasis. Med. 2014, 2014, 383821. [CrossRef]

34. Tambuyzer, BR; Ponsaerts, P.; Nouwen, EJ Microglia: Penjaga gerbang imunologi sistem saraf pusat. J. Leukok. Biol. 2009, 85, 352–370. [CrossRef] [PubMed]

35. Lee, D.-S.; Jeong, G.-S. Butein memberikan efek neuroprotektif dan anti-neuroinflamasi melalui ekspresi hem oksigenase 1 yang bergantung pada Nrf2/ARE dengan mengaktifkan jalur PI3K/Akt. sdr. J. Farmakol. 2016, 173, 2894–2909. [CrossRef]

36. Matsuno, R.; Aramaki, Y.; Tsuchiya, S. Keterlibatan TGF- dalam efek penghambatan liposom bermuatan negatif pada produksi oksida nitrat oleh makrofag dirangsang dengan LPS. Biokimia. Biofis. Res. komuni. 2001, 281, 614–620. [CrossRef] [PubMed]

37. Zhang, J.; Fujii, S.; Wu, Z.; Hashioka, S.; Tanaka, Y.; Shiratsuchi, A.; Nakanishi, Y.; Nakanishi, H. Keterlibatan COX-1 dan peningkatan regulasi prostaglandin E sintase dalam produksi prostaglandin E2 yang diinduksi liposom fosfatidilserin oleh mikroglia. J. Neuroimunol. 2006, 172, 112-120. [CrossRef]

38. Ramos, GC; Fernandes, D.; Charro, CT; Souza, Ditjen; Teixeira, MM; Assreuy, J. Apoptotic mimikri: Liposom fosfatidilserin mengurangi peradangan melalui aktivasi reseptor yang diaktifkan proliferator peroksisom (PPARs) in vivo. sdr. J. Farmakol. 2007, 151, 844–850. [CrossRef]

39. Abe, N.; Nishihara, T.; Yorozuya, T.; Tanaka, J. Microglia dan Makrofag di Sistem Saraf Pusat dan Perifer Patologis. Sel 2020, 9, 2132. [CrossRef] [PubMed]

40. Chen, C.-H.; Hsieh, M.-F.; Ho, Y.-N.; Huang, C.-M.; Lee, J.-S.; Yang, C.-Y.; Chang, Y. Peningkatan permeasi kulit katekin melalui membran hidroksi selulosa MPEG-PCL-graft-2-yang baru dibuat. J.Anggota. Sci. 2011, 371, 134-140. [CrossRef]

41. Parthasarathy, S.; Bin Azizi, J.; Ramanathan, S.; Ismail, S.; Sasidharan, S.; Dikatakan, MIM; Mansor, SM Evaluasi aktivitas antioksidan dan antibakteri ekstrak air, metanol dan alkaloid dari daun Mitragyna speciosa (keluarga Rubiaceae). Molekul 2009, 14, 3964–3974. [CrossRef] [PubMed]

42. Herrera, D.; Molina, A.; Buhlin, K.; Klinge, B. Penyakit periodontal dan hubungannya dengan penyakit aterosklerotik. Periodontologi 2000 2020, 83, 66–89. [CrossRef] [PubMed]

43. Batista, CRA; Gomes, GF; Candelario-Jalil, E.; Fiebich, BL; de Oliveira, ACP Lipopolysaccharide-Induced Neuroinflammation sebagai Jembatan untuk Memahami Neurodegenerasi. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 2293. [CrossRef]

44. Keripik, I.; Burt, DR; Snyder, SH Peningkatan pengikatan reseptor dopamin menyertai supersensitivitas perilaku yang diinduksi lesi. Sains 1977, 197, 596–598. [CrossRef] [PubMed]