Efek Total Glikosida Cistanche Deserticola Terhadap Proliferasi, Apoptosis Dan Ekspresi Wnt/-Catenin Signalling Pathway-related Protein Dari Sel HepG2

FENG Duo1,2, WANG Jing2 , JIANG Yong-jun3 , ZHOU Shi-qi1 , DUAN Hao1 ,GUO Yu1 , ZHAO Jian1 , YAN Wen-jie1,*

（1.Laboratorium Kunci Zat Bioaktif dan Pangan Fungsional Beijing, Sekolah Tinggi Teknik Biokimia, Universitas Union Beijing, Beijing 100023, Tiongkok; 2. Institut Pengembangan Pangan dan Gizi, Kementerian Pertanian dan Pedesaan, Beijing 100081, China; 3. Mongolia Dalam Sankou Biotechnology Co., Ltd., Ordos, Mongolia Dalam 017000, Tiongkok）

Abstrak: Untuk mengeksplorasi efek penghambatan dariTotal Glikosida dariCistanche deserticola(TG) pada sel HepG2 dan mekanismenya. Dalam makalah ini, konsentrasi TG yang berbeda (0, 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 ug/mL) diobati selama 24 jam pada sel kanker hati HepG2, dan viabilitas sel HepG2 terdeteksi menggunakan uji CCK8 . Metode pewarnaan ganda Hoechst33342/PI dan Annexin V-FITC/PI digunakan untuk mendeteksi apoptosis sel HepG2. Fenomena migrasi sel dideteksi dengan uji migrasi sel. Sementara itu, perubahan perkembangan siklus sel terdeteksi oleh flow cytometry. Dan ekspresi -fetoprotein(AFP), -catenin, Disheveled (Dsh), dan GSK-3 terdeteksi oleh western blot. Hasilnya menunjukkan bahwa TG dapat mengurangi proliferasi sel HepG2 dengan cara yang bergantung pada konsentrasi, dengan viabilitas sel hanya 31,04 persen ketika TG adalah 42 ug/mL. Selain itu, TG dapat merusak struktur sel dan menginduksi apoptosis sel, dan tingkat apoptosis dapat mencapai 32,44 persen dengan deteksi AV/PI. Selain itu, TG juga dapat meningkatkan nekrosis sel, dan membatasi migrasi sel. Ada perbedaan yang signifikan antara kelompok perlakuan dan kelompok kontrol. Sementara itu, konsentrasi TG yang tinggi dapat menahan sel HepG2 pada fase G2/M. Terakhir, dibandingkan dengan kelompok kontrol, ekspresi relatif -catenin dan Dsh menurun, sementara GSK-3 meningkat pada kelompok yang diobati dengan TG. Sebagai kesimpulan, TG dapat menghambat pertumbuhan sel HepG2 dengan memengaruhi perkembangan siklus sel, mendorong apoptosis, dan membatasi migrasi sel. Mekanismenya mungkin melalui jalur pensinyalan Wnt/ -catenin, yang mengaktifkan GSK-3 untuk mendegradasi -catenin untuk mencapai penghambatan kanker hati.

Kata kunci: Cistanche deserticola; glikosida total; sel HepG2; anti-hepatoma; Jalur sinyal Wnt/ -Catenin

Cistanche deserticola mamilik zat homolog obat dan makanan dan merupakan tanaman parasit herba abadi dari Orobaceae.Ini memiliki efek antioksidan, anti-kelelahan, anti-penuaan, anti-tumor, perlindungan hati, regulasi endokrin, meningkatkan kemampuan memori, dan anti-osteoporosis. Ini dikenal sebagai "Ginseng Gurun". Setelah memastikan bahwa deserticola deserticola telah menjadi zat homolog obat dan makanan pada tahun 2018, ia telah menarik banyak perhatian. Ini tidak hanya dapat memainkan nilai aplikasi klinis jamu Cina tetapi juga mempengaruhi efek intervensi nutrisi dari makanan.Ini juga menunjukkan potensi besar dalam pengembangan produk anti kanker hati alami yang baru [2-3]. Penelitian nutrisi dan efek fungsional makanan deserticola deserticola menjadi semakin mendalam [4].

cistanche hidup gurun

Dalam beberapa tahun terakhir, telah dilaporkan bahwa Cistanche deserticola memilikianti tumormemengaruhi. Kamu et al. [5]telah menemukan bahwa echinacea yang diekstraksi dari garam Cistanche deserticola dapat menghambat proliferasi sel HepG2 dengan mengurangi ekspresi TREM2 dan memblokir jalur sinyal PI3K/AKT; Beberapa sarjana telah menemukan bahwa glikosida feniletanoid dari Cistanche deserticola dapat menghambat proliferasi sel HepG2 [6]; Echinoside memiliki efek penghambatan tertentu pada proliferasi sel kanker ginjal 786-O [7] dan sel kanker kolon SW480 [8]; Dalam studi lain, glikosida phenylethanoid dari Cistanche deserticola telah terbukti mengurangi kerusakan hati pada tikus pembawa tumor H22, dan meningkatkan fungsi kekebalan dengan mengurangi kadar AFP, sehingga mempengaruhi pertumbuhan tumor [9]. Rebusan Cistanche deserticola [10] dan polisakarida [11] dapat dilewatkan melalui jalur pensinyalan Wnt/-Catenin meningkatkan gejala klinis tikus Parkinson dan memainkan peran neuroprotektif. Selain itu, penelitian telah menemukan bahwa echinacea dapat menghambat Wnt oleh / - jalur pensinyalan Catenin memainkan peran anti-kanker payudara [12]; Selain itu, juga dapat mengurangi sel THP-1 pada leukemia akut manusia - ekspresi protein Catenin [13]. Selama ini, jalur pensinyalan Wnt/-Catenin mendapat banyak perhatian [14]. Dilaporkan dapat diamati pada 20 persen - 35 persen kasus HCC [15] - Aktivasi Catenin. Ada semakin banyak bukti bahwa jalur pensinyalan Wnt/ - Catenin memainkan peran penting dalam terjadinya dan perkembangan kanker hati [16], tetapi apakah total glikosida Cistanche deserticola mengatur Wnt/ - Ada beberapa laporan tentang efek anti-hepatoma dari jalur pensinyalan Catenin. Total glikosida ekstrak Cistanche deserticola, termasuk glikosida phenylethanoid dan glikosida lainnya [17], dipelajari dalam percobaan ini dengan mempelajari proliferasi, apoptosis, migrasi, dan tingkat ekspresi protein terkait sel HepG2 yang diinduksi oleh Total Glikosida dari Cistanche deserticola (TG) , untuk mengeksplorasi mekanisme TG menghambat kanker hati, dan untuk menjelaskan mekanisme potensial TG terhadap kanker hati, Untuk memberikan dasar ilmiah tertentu untuk lebih memperkaya aplikasi klinis Cistanche deserticola di bidang kanker hati.

Phenylethanol glycoside adalah komponen aktif utama Cistanche deserticola

1.Bahan dan metode

1.1 Bahan dan Instrumen

Sel HepG2 (Karsinoma Hepatoseluler Manusia) dibeli dari Pusat Sel Institut Kedokteran Dasar, Universitas Kedokteran Peking Union, Cina.Total glikosida daribubuk ekstrak Cistanche(fraksi massa Lebih besar dari atau sama dengan 75 persen , dikombinasikan dengan echinacoside dan poolside, disediakan oleh Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd.) dilarutkan dalam media DMEM ke konsentrasi TG yang sesuai untuk percobaan selanjutnya.

bubuk ekstrak Cistanche

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Extract Protect Liver

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Serum janin sapi dibeli dari Gibco, AS; Antibodi (larutan campuran penisilin-streptomisin gentamisin), media DMEM-H, kit deteksi siklus sel dan apoptosis sel, larutan Annexin V-FITC/pewarna, dan larutan pewarna Hoechst 33342/PI apoptosis dibeli dari Genview; Kit penentuan konsentrasi trypsin dan protein BCA 0,25 persen dibeli dari Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., Ltd; Antibodi anti-Catenin kelinci dibeli dari ABclonal; Antibodi kelinci anti-Dsh (ADAR1) dibeli dari Bios; Antibodi anti GSK3 kelinci dan antibodi anti-AFP kelinci dibeli dari Affinity. inkubator sel CO2 (Innova CO-170), centrifuge desktop kecepatan tinggi suhu rendah (3K15, Sigma, Jerman), alat pelabelan enzim multifungsi (INFINITE M NANO TECAN), mikroskop fluoresensi (C-SHG1, Nikon, Jepang ), flow cytometry (FACSCALIBUR, BD, USA), perangkat elektroforesis (EN027015, BIO-RAD, USA), perangkat transfer membran (043BR57802, BIO-RAD, USA).

1.2 Metode Eksperimen

1.2.1 Bagian sel

Sel HepG2 dikultur dalam media lengkap DMEM yang mengandung 10 persen serum janin sapi dan 1 persen tiga antibodi (penisilin 100 U/mL, streptomisin 100 mg/mL, dan gentamisin) dalam inkubator sel CO2 5 persen pada suhu 37 derajat . Setelah sel tumbuh hingga pertemuan 80 persen sampai 90 persen , mereka dicerna dengan 0,25 persen trypsin (- EDTA) dan disubkultur dengan rasio 1:2 banding 4. Setelah 2-3 hari pertumbuhan sel, pertumbuhan logaritmik sel fase diambil untuk subkultur atau percobaan selanjutnya

1.2.2 Pengaruh TG terhadap morfologi sel HepG2

Sel HepG2 fase pertumbuhan logaritmik diambil dan diinokulasi dalam pelat sumur 24-dengan konsentrasi sel 5 per sumur × 104 lembar/mL, setelah sel menempel pada dinding, tambahkan TG hingga konsentrasi akhir 0, 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 μ G/mL, 0.5 mL per sumuran, dikultur selama 24 jam, dan diamati morfologi sel masing-masing kelompok di bawah mikroskop cahaya.

1.2.3 Efek TG pada proliferasi sel HepG2

Ambil sel HepG2 pada tahap pertumbuhan logaritmik dan sesuaikan konsentrasi sel menjadi 1 × 104 buah/lubang, diinokulasi dalam 96 lubang lubang, tambahkan 100 buah per lubang μ 50. Inkubasi dalam inkubator sel. Setelah sel menempel pada dinding, mereka diperlakukan dengan obat-obatan sesuai dengan 1.2.2 di atas, dan setiap kelompok memiliki enam reperforasi, dibiakkan selama 24 jam. Tingkat kelangsungan hidup sel diukur menggunakan metode CCK8, dan nilai absorbansi (OD) diukur pada panjang gelombang 450 nm. Tingkat kelangsungan hidup sel dan tingkat penghambatan sel dihitung menggunakan rumus berikut.

Pada formula, kelompok blanko hanya berisi cairan CCK8, sedangkan kelompok kontrol berisi 0 µG/mL kelompok perlakuan, kelompok eksperimen: 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 µG/mL kelompok perlakuan.

1.2.4 Pengaruh TG pada siklus sel HepG2

Ambil sel fase pertumbuhan logaritmik dan tekan 5 × Kepadatan sel 105 sel per sumur diinokulasi ke dalam pelat enam sumur, dan sistem 2 mL per sumur berisi 5 × 105 sel ditempatkan dalam kotak kultur dan dikenai perawatan obat seperti yang dijelaskan pada 1.2.2 di atas. Setelah biakan, operasi selanjutnya dilakukan sesuai dengan instruksi kit.

1.2.5 Pengaruh TG pada Migrasi Sel HepG2:

Pilih sel fase pertumbuhan logaritmik dan letakkan di piring enam sumur. Sistem 2 mL per sumur yang mengandung 6 × 105 sel dihilangkan ketika adhesi sel dan agregasi sel di atas 90 persen . Lakukan perawatan obat sesuai dengan 1.2.2 di atas. Pada 0 jam, pilih secara acak 5 bidang pandang di bawah mikroskop untuk foto, letakkan di inkubator untuk penanaman lebih lanjut selama 24 jam, ambil foto di bawah mikroskop optik, gunakan perangkat lunak Image J untuk menganalisis area goresan sel, dan hitung laju migrasi menurut rumus berikut (2) [18].

1.2.6 Metode pewarnaan ganda Hoechst 33342/PI untuk mendeteksi apoptosis

Pilih sel fase pertumbuhan logaritmik dan letakkan di atas pelat sumur {{0}}, dengan sistem 0,5 mL yang berisi 3 × 104 sel diperlakukan dengan obat sesuai dengan 1.2.2 di atas, dan 1 mL buffer pewarnaan sel ditambahkan, diikuti dengan 5 µL pewarna Hoechst dan 5 µL larutan pewarna LPI untuk pewarnaan. Inkubasi dalam gelap pada suhu 37 derajat selama 7-10menit, keluarkan pelat lubang 24-, basahi dengan PBS, dan ambil foto dengan mikroskop fluoresensi untuk pengamatan.

1.2.7 Deteksi apoptosis sel HepG2 dengan pewarnaan ganda Annexin V-FITC/PI

Pilih sel fase pertumbuhan logaritmik dan letakkan di piring enam sumur, dengan sistem 2 mL per sumur yang berisi 2 × 105 sel diperlakukan dengan obat sesuai dengan 1.2.2 di atas, dan operasi selanjutnya dilakukan sesuai dengan instruksi kit, menambahkan 5 μ L Annexin V-FITC dan 5 μ L larutan pewarnaan PI diinkubasi pada 4 derajat dalam gelap dan kemudian ditempatkan pada flow cytometry untuk deteksi apoptosis.

1.2.8 Pengaruh TG pada ekspresi protein dalam sel HepG2

Tekan 2 × 106 sel/sel diperlakukan dengan obat sesuai dengan 1.2.2 di atas, menggunakan 80 μL lisat (RIPA: PMSF=100:1) melisiskan protein, dan kemudian menggunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk memisahkan setiap sampel protein (50 sampel per sumur μ g) Selesaikan transfer protein ke membran PVDF dalam penangas es, gunakan 1 × Bersihkan selotip dengan larutan buffer TBST, tutup perlahan meja pengocok BSA pada suhu kamar selama 1 jam, dan tambahkan antibodi (AFP, GSK3) dalam proporsi- , - Catenin, Dsh), inkubasi pada suhu 4 derajat semalaman, lalu inkubasi membran PVDF dengan antibodi sekunder yang diencerkan pada suhu kamar selama 1-2 jam. GAPDH digunakan sebagai referensi internal. Setelah mengembangkan dan memperbaiki membran PVDF, amati perubahan ekspresi protein target [6].

1.3 Analisis data

Analisis signifikansi faktor tunggal ANONA dilakukan dengan menggunakan SPSS 25.0 perangkat lunak statistik untuk mengekspresikan; Data eksperimen flow cytometry dianalisis menggunakan Flowjo; Gunakan Graphpad Prism 8.0.2 untuk menggambar. P<0.05 indicates a statistically significant difference, while P<0.01 indicates a highly significant difference.

2.Hasil dan Analisis

2.1 Pengaruh TG terhadap morfologi sel HepG2

gambar 1 sel hepg2 diperlakukan dengan konsentrasi tg yang berbeda selama 24 jam (200x)

Selama proses apoptosis, pertama-tama, volumenya secara bertahap akan berkurang dan berubah bentuk, kemudian sel-sel yang melekat secara perlahan akan mengalami proses seperti menyusut, membulat, menumpahkan, dan piknosis kromosom intraseluler. Beberapa inti akan mengalami kerusakan, marginalisasi, dan pembentukan vesikel apoptosis. Seperti yang diamati pada Gambar 1, 3.5, dan 10.5 μ Ketika sel HepG2 diobati dengan TG g/mL, volume sel secara bertahap menurun; Kemudian amati secara visual 21 μ Pada g/mL, inti mulai menyusut dan volumenya menjadi lebih kecil; tiga puluh satu koma lima μ Pada g / mL, sel disertai dengan puing-puing sel yang mengambang dan; empat puluh dua μ Pada g/mL, membran sel benar-benar pecah, sel mengalami lisis, terjadi nekrosis, dan batasnya tidak jelas. Sel-sel berada dalam keadaan kehancuran dan kematian yang akan datang.

2.2 Efek TG pada proliferasi sel HepG2

Gambar 2 Efek TG pada proliferasi sel HepG2

Catatan: * mewakili sama dengan 0 μ Perbedaannya signifikan pada g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Seperti dapat dilihat dari Gambar 2, setelah 24 jam pengobatan dengan konsentrasi TG yang berbeda, proliferasi sel HepG2 dibatasi pada derajat yang bervariasi. Dibandingkan dengan laju kelangsungan hidup sel pada kelompok kontrol, laju kelangsungan hidup sel pada kelompok perlakuan menunjukkan kecenderungan menurun dengan peningkatan konsentrasi, yaitu 96,95 persen, 92,59 persen, 92,78 persen, 77,24 persen, 31,04 persen, dan konsentrasi 3,5, 10,5, dan 21, masing-masing μ Tidak ada perbedaan yang signifikan pada g/mL dan penurunannya kecil, sedangkan 31,5 persen μ G/mL dan 42 μ Pada g/mL, terdapat perbedaan yang signifikan (P<0.01), with an IC50 of 37.77 after TG treatment μ g/mL. CCK8 test results indicate that when TG concentration is 21 μ When the concentration is above g/mL, the inhibitory effect on HepG2 cells is better.

2.3 Pengaruh TG pada siklus sel HepG2

Gambar 3 Efek konsentrasi TG yang berbeda pada siklus sel sel HepG2

Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3, setelah 24 jam pengobatan dengan konsentrasi TG yang berbeda, ditemukan bahwa dengan meningkatnya konsentrasi, fase G0/G1 secara bertahap menurun, terhitung 59,9 persen , 56,7 persen , 56 persen , 54 persen , 33,4 persen , dan 29,1 persen , dengan penurunan yang signifikan; Proporsi fase S masing-masing adalah 14,3 persen , 15,8 persen , 16,8 persen , 18,7 persen , 25,1 persen , dan 27,6 persen , dengan tingkat peningkatan yang bervariasi; 3.5-21 dibandingkan dengan kelompok kontrol (23,88 persen ) μ Pada g/mL, fase G2/M memiliki sedikit perubahan, masing-masing sebesar 25,85 persen , 24,92 persen , dan 25,33 persen . Ketika TG adalah 31,5 μ G/mL dan 42 μ Pada g/mL, meningkat secara signifikan, masing-masing 37,89 persen dan 39,42 persen. Tes ini menemukan bahwa TG pada konsentrasi rendah (3.5-21 μ G/mL), tidak menghambat pembelahan dan proliferasi sel dengan cara utama yang memengaruhi siklus sel, dan pada konsentrasi tinggi (31,5 μ G/mL dan 42 µG/mL) dapat menginduksi penangkapan sel pada fase S dan fase G2/M, sehingga menghambat proliferasi sel. Pada saat yang sama, ketika TG adalah 31,5 μ G/mL dan 42 μ At g/mL, subG1 juga meningkat, yang konsisten dengan penelitian oleh Sun Qian et al. [19] bahwa turunan artemisinin dapat meningkatkan puncak subG1 sel HepG2 pada konsentrasi tinggi. Dia juga menemukan bahwa dengan peningkatan konsentrasi artemisinin, proporsi sel fase G2/M meningkat. Hasil dari siklus sel menunjukkan bahwa TG dapat mendorong penghambatan perkembangan siklus sel, sehingga menginduksi apoptosis sel.

2.4 Pengaruh TG pada migrasi sel HepG2

Gambar 4 Efek konsentrasi TG yang berbeda pada migrasi sel HepG2

Catatan: * mewakili sama dengan 0 μ Perbedaannya signifikan pada g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Metastasis sel kanker adalah salah satu kunci pengobatan kanker, dan kekambuhan kanker juga terkait erat dengannya. Untuk menyelidiki apakah TG dapat menghambat migrasi sel HepG2, metode awal digunakan untuk mengamati migrasi sel. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4, dengan peningkatan konsentrasi TG, mobilitas 24-jam secara bertahap menurun, dan efek penghambatan yang jelas adalah. Mobilitas 14,82 persen , 13,42 persen , 12,66 persen , 10,11 persen , 8,46 persen , 7,24 persen , 21 μ G/mL menunjukkan perbedaan yang signifikan (P<0.05), 31.5 μ G/mL and 42 μ G/mL showed a significant difference (P<0.01). The results of this experiment indicate that TG can inhibit the migration of liver cancer cells, thereby limiting the metastasis of cancer to other tissues.

2.5 Metode pewarnaan ganda Hoechst 33342/PI untuk mendeteksi apoptosis

Gambar 5 Efek konsentrasi TG yang berbeda pada Hoechst 33342/PI dalam sel HepG2

Pewarnaan nuklir dilakukan dengan Hoechst 33342 untuk mendeteksi kondensasi kromatin [20]. Sel normal menunjukkan biru rendah, sel apoptosis menunjukkan biru tinggi/merah rendah dan sel nekrotik menunjukkan biru rendah/merah tinggi. Seperti dapat dilihat dari Gambar 5, dibandingkan dengan kelompok kontrol, pada kelompok perlakuan TG diamati konsentrasi kromatin dan fragmentasi inti. Pada saat yang sama, ketika TG berada di 3.5-21, diamati bahwa μ Dalam kisaran g/mL, fluoresensi biru secara bertahap meningkat, menunjukkan bahwa TG terutama menghambat proliferasi sel melalui apoptosis pada konsentrasi rendah; Dan di atas 21 μ Pada g/mL, fluoresensi merah meningkat, menunjukkan bahwa TG terutama merusak dan menghancurkan struktur sel untuk membunuh sel pada konsentrasi yang lebih tinggi. Hasil percobaan ini menunjukkan bahwa pengobatan dengan TG dapat menginduksi apoptosis dan nekrosis sel HepG2.

2.6 Pewarnaan ganda Annexin V-FITC/PI untuk mendeteksi efek TG pada apoptosis sel HepG2

Gambar 6 Efek TG pada pewarnaan ganda sel HepG2 AV/PI

Catatan: * mewakili sama dengan 0 μ Perbedaannya signifikan pada g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Untuk menentukan lebih lanjut efek penginduksian apoptosis dari TG pada sel HepG2, kami menggunakan metode pewarnaan ganda Annexin V-FITC / PI untuk menodai sel HepG2. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 6, dengan peningkatan konsentrasi, laju apoptosis menunjukkan tren meningkat, 0, 3,5, 21, 41 μ Laju apoptosis g/mL adalah 5,63 persen , 7,65 persen , 10,93 persen , dan 32,44 persen, masing-masing, dengan cara yang tergantung dosis. Hasil penelitian menunjukkan bahwa TG dapat menginduksi apoptosis dengan menghancurkan integritas membran sel HepG2. Hasil ini konsisten dengan hasil pewarnaan AV/PI sel HepG2 yang didiskusikan oleh Qi Xinxin et al. [6].

2.7 Efek TG pada ekspresi protein dalam sel HepG2

Gambar 7 Ekspresi protein dalam sel HepG2 diobati dengan konsentrasi TG yang berbeda

Catatan: * mewakili sama dengan 0 μ Perbedaannya signifikan pada g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Alpha-fetoprotein (AFP) digunakan sebagai penanda serum untuk diagnosis dan uji efikasi kanker hati primer [21]. Seperti dapat dilihat dari Gambar 7, dibandingkan dengan kelompok kontrol, tingkat ekspresi AFP pada kelompok perlakuan mengalami penurunan, menunjukkan bahwa TG dapat menghambat terjadinya kanker hati sampai batas tertentu, tetapi kemungkinan untuk membalikkan kanker hati sangat kecil. . Selain itu, Dsh - Tingkat Catenin menurun secara linier dengan peningkatan konsentrasi obat; GSK-3 Secara bertahap meningkat, tetapi tidak tergantung dosis. Oleh karena itu, diperkirakan bahwa TG dapat mengatur ekspresi relatif Dsh - Catenin dan GSK-3, melalui jalur pensinyalan klasik Wnt/ - Catenin untuk menginduksi apoptosis pada sel HepG2.

3 .Diskusi dan kesimpulan

Kanker hati adalah salah satu tumor ganas yang paling umum di Cina dan juga termasuk dalam tiga besar penyakit dengan kematian[22]. Metode pengobatan utama untuk kanker hati meliputi reseksi bedah, transplantasi hati, kemoradioterapi, dan imunoterapi [23-25]. Dilaporkan bahwa pada tahun 2016, tingkat kejadian kanker hati di Cina adalah 9,57 persen, dan angka kematian setinggi 13,92 persen [26]. “Karena gejala awal kanker hati yang tidak spesifik, begitu gejala muncul, mereka kebanyakan berada di tahap pertengahan dan akhir. Oleh karena itu, orang lebih aktif menggunakan pengobatan tradisional Tiongkok untuk mengobati kanker hati [27].”Orang-orang percaya bahwa senyawa alami memiliki toksisitas molekuler paling rendah dan telah terbukti bermanfaat untuk pengobatan kanker hati, sehingga mereka secara aktif menyaring senyawa alami baru untuk anti kanker hati.

Total glikosida Cistanche deserticola dapat menghambat sel kanker hati pada stadium awal kanker hati

Dalam beberapa tahun terakhir, berbagai efek dariCistanche deserticolatelah menarik banyak perhatian dan secara bertahap menjadi salah satu hot spot dalam pengembangan penelitian makanan dan obat sehat. Eksperimen morfologi sel dan CCK-8 telah mengonfirmasi bahwa konsentrasi TG tertentu dapat menghancurkan morfologi sel dan menghambat pertumbuhan dan proliferasi sel HepG2, dan konsentrasi tersebut berbanding lurus dengan laju penghambatan sel.

Siklus sel mengacu pada seluruh proses yang dialami sel dari penyelesaian satu mitosis hingga akhir pembelahan berikutnya. Ini dibagi menjadi dua tahap: interfase dan divisi. Flow cytometry menggunakan pewarna fluoresen untuk membedakan fase G0/G1, fase S, dan fase G2/M. Melalui deteksi siklus sel, ditemukan bahwa setelah perawatan dengan konsentrasi TG yang berbeda, ditemukan bahwa pada konsentrasi TG yang tinggi (31,5 μG/mL dan 42 μG/mL) dapat menghalangi sel untuk berada di fase G2/M dan mempengaruhi aktivitas sel HepG2, mengakibatkan sitotoksisitas, sehingga menghambat proliferasi sel. Selama perkembangan kanker, sel kanker dari tumor primer menyerang jaringan normal yang berdekatan, bermetastasis ke tempat yang jauh, dan membentuk koloni baru. Diperkirakan total 90 persen kematian terkait kanker disebabkan oleh metastasis [28]. Jalur pensinyalan Wnt terlibat dalam proses transformasi sel epitel ke mesenkim dan transformasi sel mesenkim ke epitel untuk mempromosikan metastasis kanker. Pada karsinoma hepatoseluler (HCC), kadar -Catenin yang tinggi dikaitkan dengan peningkatan metastasis dan prognosis yang buruk [29]. Dalam penelitian ini, ditemukan bahwa laju migrasi sel HepG2 yang diobati dengan TG selama 24 jam secara bertahap menurun dengan meningkatnya konsentrasi, dengan cara yang bergantung pada konsentrasi.Ini menunjukkan bahwa TG dapat mengontrol migrasi sel kanker dan mencegah penyebaran kanker lebih lanjut, kemungkinan melalui pengurangan jalur pensinyalan Wnt - Expression of Catenin.Secara umum, inti yang terkena terlihat lebih kecil; Beberapa kromatin berkonsentrasi atau berkumpul di pinggiran, sementara yang lain memiliki karakteristik khas seperti fragmentasi kromatin inti dan pembentukan badan apoptosis [30-31]. Hoechst 33342 adalah pewarna fluoresen biru yang dapat menembus membran sel dan memiliki toksisitas rendah terhadap sel. Beberapa penelitian telah menemukan bahwa karakteristik morfologi sel apoptosis, termasuk koagulasi dan fragmentasi nuklir, telah diamati pada sel HepG2 yang diwarnai dengan Hoechst 33342 [32]. Dalam percobaan ini, ditemukan bahwa setelah 24 jam pengobatan TG, proporsi sel dengan koagulasi kromatin dan fragmen nuklir fluoresen meningkat dengan cara yang bergantung pada konsentrasi, yang konsisten dengan hasil penelitian Yang et al. [33] pada apoptosis sel HepG2 yang diinduksi gingerol. Menggunakan metode pewarnaan ganda Annexin V-FITC/PI untuk mendeteksi sel HepG2 yang diobati dengan TG selama 24 jam, ditemukan bahwatingkat apoptosis sel secara bertahap meningkat dengan peningkatan konsentrasi.

Keglikosida tal dari Cistanche deserticol

Dsh, - Catenin dan GSK-3 Adalah tipikal Wnt/ - Disheveled (Dvl/Dsh) adalah pengatur penting dalam jalur pensinyalan Catenin, yang merupakan protein kunci dalam jalur pensinyalan Wnt dan dapat mengirimkan sinyal Wnt ke hilir efektor [34]. Dalam jalur pensinyalan Wnt klasik, Dsh dipanggil ke membran sel oleh reseptor Frizzled, yang bertindak sebagai proto-onkogen dan dikaitkan dengan faktor penghambat sumbu somatik (Axin), gen adenomatous polyposis coli (APC), dan GSK -3 Mengikat untuk membentuk kompleks degradasi yang menghambat GSK-3 ya - Degradasi fosforilasi penyebab Catenin - Catenin memasuki nukleus dan berfungsi [34-36]. - Catenin terutama diekspresikan dalam membran sel sel normal dan terkait dengan adhesi sel. Ini juga berpartisipasi dalam transmisi informasi jalur pensinyalan Wnt, mengatur proliferasi dan diferensiasi sel. Ketika jalur pensinyalan Wnt diaktifkan secara tidak normal, - Redistribusi Catenin mungkin menjadi salah satu alasan terjadinya tumor [37]. Dilaporkan, dapat diamati pada 20 persen - 35 persen kasus HCC [15] - Aktivasi Catenin. Pada saat yang sama, juga dimungkinkan untuk menekan Wnt dengan/ - jalur pensinyalan Catenin mengaktifkan autophagy untuk menghambat proliferasi sel HepG2 [38]. Studi ini menemukan bahwa setelah pengobatan TG, sel HepG2, Dsh - Tingkat Catenin menurun secara linier dengan peningkatan konsentrasi obat; GSK-3 Secara bertahap meningkat, tetapi tidak tergantung dosis. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa TG melewati jalur pensinyalan Wnt/-Catenin untuk menginduksi apoptosis pada sel HepG2.

Biomarker yang paling banyak digunakan untuk kanker hati primer di seluruh dunia adalah - Alpha-fetoprotein (AFP) [39]. AFP memainkan peran penting dalam pemantauan dini, klasifikasi patologis, pemilihan pengobatan, dan prognosis pasien dengan kanker hati 9 primer. Terlepas dari metode pengobatannya, ketika kadar AFP lebih tinggi dari 400 ng/mL, akan menyebabkan kelangsungan hidup yang buruk [40]. Dengan mendeteksi tingkat ekspresi protein AFP dalam sel yang diobati dengan TG,ditemukan bahwa TG dapat secara efektif mengurangi ekspresi AFP, menunjukkan bahwa TG dapat berperan dalam menghambat sel kanker hati pada stadium awal kanker hati.

Teh cistanche

Kesimpulan,glikosida total Cistanche deserticola menghambat proliferasi dan pertumbuhan sel HepG2 dengan mempengaruhi perkembangan siklus sel, menghancurkan struktur sel, mempromosikan apoptosis, dan membatasi migrasi sel.Mekanisme kerjanya mungkin melalui jalur sinyal Wnt/ - Catenin, mengaktifkan Degradasi GSK-3 - Catenin dapat menghambat kanker hati, tetapi diperlukan penelitian lebih lanjut. Di masa depan, para ahli dan cendekiawan dapat secara mendalam mengeksplorasi penerapan Cistanche deserticola di Wnt/ - Molekul protein hulu dan hilir dari jalur pensinyalan Catenin digunakan untuk memverifikasi gen target dan mengeksplorasi lebih lanjut mekanisme aksi total glikosida dari Cistanche deserticola terhadap sel HepG2. Selain itu, sebagai zat homolog obat dan makanan, cistanche deserticola dapat dikonsumsi dalam makanan sehari-hari untuk memberikan pencegahan dan pengobatan, dan juga memberikan dasar teori tertentu untuk mempraktikkan Pandangan Makanan Hebat, mempromosikan pembangunan "China Sehat", dan meningkatkan derajat kesehatan masyarakat.

[1] FENG D, HE Y, JIANG YJ, dkk. Kemajuan penelitian tentang fungsi anti-penuaan Cistanches[J]. Jurnal Keamanan & Kualitas Pangan, 2021, 12(11): 4429-4437.

[2] Ma G, Chen J, Wei T, dkk. Menghambat peran FOXA2 dalam migrasi dan invasi sel kanker hati dengan menekan secara transkripsi microRNA103a-3p dan mengaktifkan sumbu GREM2/LATS2/YAP[J]. Sitoteknologi. 2021, 73:523-537.

[3] LI MQ, WANG K, ZHOU X. Penghambatan Peptida Kacang Hijau pada Proliferasi dalam Sel HepG2[J]. Jurnal Institut Ilmu dan Teknologi Pangan Tiongkok, 2018, 18(10): 52-57.

[4] HU Y, WANG S, WU X, dkk. Senyawa turunan jamu Cina untuk terapi kanker: fokus pada karsinoma hepatoseluler[J]. J Etnofarmakol. 2013, 149(3):601-612. doi:10.1016/j.jep.2013.07.030.

[5] YE Y, SONG Y, ZHUANG J, dkk. Efek antikanker echinacoside pada model tikus karsinoma hepatoseluler dan sel HepG2 [J]. Fisiol Sel J. 2019, 234(2): 1880-1888. doi:10.1002/jcp.27063

[6] QI XX, YOU SP, HE ZX, dkk. Pengaruh Cistanche deserticola phenylethanol glycoside pada proliferasi dan apoptosis sel HepG2 in vitro[J]. Jurnal Universitas Kedokteran Xinjiang, 2021, 44(09): 1041-1047.

[7] XIE YT. Efek Echniacoside pada 786-Apoptosis Sel O dan Mekanisme Induktif in Vitro[D]. Universitas Guru Baotou, 2020.

[8] HAN YM, JIN WM, ZENG H, et al, Effects of Echniacoside on Proliferation, Invasion and Metastasis of Colon Cancer SW480 Cells in Vitro and in Vivo[J]. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, 2020,37(08):1542-1549.

[9] HU Q, ANDA SP, LIU T, dkk. Investigasi tentang efek anti-kanker hati cistanche[J]. Karsinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis, 2018,30(03):194-199.

[10] XU Q, QIN W, WU FZ, dkk. Efek rebusan Roucongrong(Herba Cistanches Deserticolae) pada substansia nigra melalui jalur pensinyalan Wnt/ -catenin pada tikus dengan penyakit Parkinson yang diinduksi oleh 6-hidroksidopamin hidroklorida[ J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2021,41(05):762-770.

[11] YIN SL, WANG HB, YANG S. Neuroprotektif Efek Polisakarida Cistanche Deserticola pada Tikus Parkinson yang Diinduksi oleh 6-HODA yang Disebabkan dengan Mengaktifkan Jalur Pensinyalan Wntt/ -catenin[J]. 10 Jurnal Pengobatan Integratif China tentang Penyakit Kardio-Serebrovaskular, 2020,18(08):1227-1230.

[12] TANG C H. Echinacoside menghambat sel kanker payudara dengan menekan jalur pensinyalan Wnt/-catenin[D]. Universitas Kedokteran Chongqing, 2020.

[13] FENG L, MA QL, SHI L, dkk. Echinacein menghambat proliferasi sel leukemia myeloid akut dengan menekan sinyal SOX4/Wnt/beta-Catenin[J]. Jurnal Imunologi, 2020,36(02):138-142.

[14] Pandai H, dkk. Pensinyalan Wnt/ -catenin dan penyakit[J]. Sel. 2012, 149(6):1192-205.

[15] Russel JO, Monga SP. Pensinyalan Wnt/ -Catenin dalam Perkembangan Hati, Homeostasis, dan Patobiologi[J]. Annu Rev Pathol. 2018, 13: 351-378. doi:10.1146/annurev-pathol-020117-044010

[16] LIU CY, CHEN KF, CHEN PJ. Pengobatan Kanker Hati[J]. Cold Spring Harb Perspektif Med. 2015, 5(9):a021535.

[17] WANG F, LI R, TU P, dkk. Glikosida Total Cistanche deserticola Mempromosikan Pemulihan Fungsi Neurologis dengan Menginduksi Regenerasi Neurovaskular melalui Jalur Nrf-2/Keap-1 pada Tikus MCAO/R. Perbatasan dalam farmakologi 2020, 11, 236.

[18] LAGU QJ. Efek penghambatan ekstrak Buah Akebia pada Adhesi, Migrasi dan Invasi Sel HepG2 Hepatoma Manusia dan Mekanisme Terkait[D]. Universitas Pengobatan Tradisional Cina Shanghai, 2019.

[19] SUN Q, WANG J, LI Y, dkk. Sintesis dan evaluasi aktivitas sitotoksik turunan artemisinin[J]. Obat Kimia Biol Des. 2017, 90(5): 1019-1028.

[20] ZHAO YM, SUN LN, ZHOU HY, dkk. Saluran kalium yang bergantung pada tegangan terlibat dalam apoptosis yang diinduksi glutamat dari neuron hippocampal tikus [J]. Neurosci Lett. 2006, 398(1-2):22-27.

[21] GALLE PR, FOERSTER F, KUDO M, dkk. Biologi dan signifikansi alfa-fetoprotein pada karsinoma hepatoselular [J]. Hati Int, 2019, 39(12): 2214-2229.

[22] MA G, CHEN J, WEI T, dkk. Menghambat peran FOXA2 dalam migrasi dan invasi sel kanker hati dengan menekan microRNA-103a-3p secara transkripsi dan mengaktifkan sumbu GREM2/LATS2/YAP[J]. Sitoteknologi. 2021, 73(4): 523-537.

[23] KAMARAJAH SK, FRANKEL TL, SONNENDDAY C, dkk. Evaluasi kritis terhadap sistem stadium edisi ke-8 American Joint Commission on Cancer (AJCC) untuk pasien dengan Hepatocellular Carcinoma (HCC): A Surveillance, Epidemiology, End Results (SEER) analysis[J]. J Surg Oncol. 2018, 117(4):644-650.

[24] EDGE SB, COMPTON CC. Komite Gabungan Amerika untuk Kanker: manual stadium kanker AJCC edisi ke-7 dan masa depan TNM[J]. Ann Surg Oncol. 2010, 17(6):1471-1474.

[25] VAUTHEY JN, LAUWERS GY, ESNAOLA NF, dkk. Pementasan yang disederhanakan untuk karsinoma hepatoseluler [J]. Jurnal onkologi klinis : jurnal resmi American Society of Clinical Oncology. 2002, 20(6): 1527-36.

[26] ZHENG R, ZHANG S, ZENG H, dkk. Insiden dan kematian akibat kanker di Tiongkok, 2016. Jurnal Pusat Kanker Nasional, 2022, 2(1), 1–9.

[27] ANWANWAN D, SINGH SK, SINGH S, dkk. Tantangan pada kanker hati dan kemungkinan pendekatan pengobatan[J]. Biochim Biophys Acta Rev Kanker. 2020, 1873(1): 188314.

[28] CHAFFER CL, WEINBERG RA. Perspektif tentang metastasis sel kanker[J]. Sains, 2011, 331(6024): 1559-1564.

[29] ZHONG Z, YU J, VIRSHUP DM, dkk. Wnts dan ciri-ciri kanker[J]. Cancer Metastasis Rev 2020, 39: 625–645.

[30] SYAM S, ABDUL AB, SUKARI MA, dkk. Efek penekanan pertumbuhan girinimbine pada HepG2 melibatkan induksi apoptosis dan penghentian siklus sel[J]. Molekul. 2011, 16(8):7155-7170.

[31] ZHANG X, LUO W, ZHAO W, dkk. Isocryptotanshinone Induced Apoptosis dan Activated MAPK Signalling pada Sel MCF-7 Kanker Payudara Manusia[J]. J Kanker Payudara. 2015, 18(2):112-118.

[32] Ponselvi Induja M, Ezhilarasan D, Ekstrak metanol Ashok Vardhan N. Evolvulus alsinoides memicu apoptosis pada sel HepG2[J]. Avicenna J Phytomed. 2018, 8(6): 504-512.11

[33] YANG G, WANG SP, ZHONG LF, dkk. 6-Gingerol menginduksi apoptosis melalui aksis lisosomal-mitokondria pada sel hepatoma G2 manusia[J]. Phytother Res. 2012, 26(11):1667-1673. doi:10.1002/ptr.4632

[34]  LI J, GUO G, FAN YM, dkk. Acak mempromosikan proliferasi glioma: Sebuah studi eksperimental [J]. Pengobatan & Klinik China, 2021, 21(18): 3077-3080.

[35] Fiedler M, Mendoza-Topaz C, Rutherford TJ, Mieszczanek J, Bienz M. Disheveled berinteraksi dengan antarmuka polimerisasi domain DIX dari Axin untuk mengganggu fungsinya dalam mengatur turun -catenin[J]. Proc Natl Acad Sci US A. 2011;108(5):1937-1942. doi:10.1073/pnas.1017063108.

[36]  SHI QQ, ZUO GW, FENG ZQ, dkk. Kajian efek antihepatoma ginsenoside Rh2 dan mekanisme degradasi -catenin melalui aktivasi GSK-3 [J]. Obat Tradisional dan Herbal Tiongkok, 2016,47(18):3231-3238.

[37] Pensinyalan HE S, TANG S. WNT/ -catenin dalam perkembangan kanker hati[J]. Apoteker Biomed. 2020, 132: 110851.

[38] HU P, CHENG B, HE Y, dkk. Autophagy menekan proliferasi sel HepG2 melalui penghambatan glipican-3/wnt/ -catenin signaling[J]. Onco Menargetkan Ada. 2018;11:193-200.

[39] GAO YX, YANG TW, YIN JM, dkk. Kemajuan dan prospek biomarker pada kanker hati primer (Ulasan)[J]. Int J Oncol. 2020, 57(1): 54-66.

[40] Tangkijvanich P, Anukulkarnkusol N, Suwangool P, dkk. Karakteristik klinis dan prognosis karsinoma hepatoseluler: analisis berdasarkan kadar alfa-fetoprotein serum[J]. J Clinic Gastroenterol. 2000, 31(4):302-308.

[41] FENG D, DUAN H, LYU YN, dkk. Penerapan Cistanche Deserticola Ma dalam Pangan Fungsional di China[J]. Ilmu dan Teknologi Pangan, 2021,46(12):76-81.