Pengaruh Runing II Terhadap Pertumbuhan Dan Metastasis Tumor Yang Ditransplantasikan Pada Mencit Yang Menderita Kanker Payudara Dan Mekanismenya
Mar 13, 2023
Objektif:
Untuk mempelajari efek Runing II (sediaan herbal China untuk kanker payudara) pada pertumbuhan dan metastasis tumor transplantasi kanker payudara MA-891-yang mengandung tikus TA2 dan mekanismenya. Metode: Model kanker mammae MA-891 cell strain tumor transplantasi mencit TA2 dengan metastasis paru dikembangkan untuk mengamati pengaruh Runing II terhadap pertumbuhan dan metastasis tumor transplantasi. Metode imunohistokimia dan analisis citra diadopsi untuk mendeteksi kadar faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF), reseptor faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGFR), jumlah pembuluh mikro (MVC), dan area pembuluh mikro (MVA).
Hasil: Pada kelompok Running II, laju penghambatan berat tumor dan laju penghambatan metastasis paru masing-masing adalah 37,3 persen dan 65,4 persen, pertumbuhan tumor dan metastasis paru jelas terhambat; Dan tingkat VEGF dan VEGFR, MVC, dan MVA menurun secara signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol pembawa tumor (P<0.05). Conclusion: The Chinese herbal preparation Running II can inhibit the metastasis of tumors by inhibiting angiogenesis, and the mechanism is possibly related to the down-regulation of VEGF and VEGFR expression.
Selain itu, pada saat penelitian yang sama, kami menemukan bahwa echinacea di Cistanche memiliki efek anti tumor. Untuk penerapan echinacoside dalam obat antitumor, invensi ini pertama-tama menambahkan MTH1, pirofosfatase anorganik, dan dGTP ke dalam larutan reaksi (100mM pH8.0 Tris-acetic acid, 40mM NaCl, 10mM magnesium asetat, 0,005 persen Tween20 dan 1mMDTT) Dalam metode tersebut, enzim dan substrat diinkubasi pada suhu kamar selama 1 jam dan kemudian ditambahkan 25 ul larutan malachite green untuk menghentikan reaksi. Absorbansi terdeteksi pada 630 nm dengan pembaca lempeng mikro BIO‑RAD iMark. Hasil penelitian menunjukkan bahwa echinacoside memiliki efek penghambatan yang signifikan terhadap aktivitas enzim MTH1; Kedua, efek echinacoside pada sel tumor pada tingkat sel terdeteksi oleh uji MTT, dan hasilnya menunjukkan bahwa echinacoside dapat secara signifikan menghambat pertumbuhan sel kanker kolon SW480 dan sel osteosarkoma manusia U2OS, dan penemuan ini menghambat pertumbuhan echinacoside MTH1, enzim spesifik yang mempertahankan kelangsungan hidup dalam sel tumor, mengarah pada penggabungan nukleotida teroksidasi ke dalam DNA, menyebabkan pemutusan rantai ganda DNA yang mematikan dalam sel kanker, sehingga menghasilkan efek anti tumor. Aplikasi medis baru akan meletakkan dasar untuk pengembangan obat antitumor baru di masa depan.
Kata kunci:
tumor payudara; angiogenesis; faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF); Running II (persiapan herbal Cina untuk kanker payudara)
Kanker payudara merupakan tumor ganas yang sangat mengancam kesehatan wanita dan kejadian penyakitnya menempati urutan pertama di antara tumor ganas wanita, dengan kecenderungan meningkat dari tahun ke tahun. Meskipun metode terapeutiknya telah membuat beberapa kemajuan, tingkat kelangsungan hidup jangka panjang untuk pasien kanker payudara belum meningkat karena pertumbuhan invasif dan metastasis tumor. Angiogenesis tumor adalah kondisi dasar untuk pertumbuhan, invasi, dan metastasis tumor.
Oleh karena itu, penghambatan angiogenesis tumor adalah cara yang efektif untuk mencegah produksi dan perkembangan tumor dan memperpanjang hidup pasien.1 Dalam penelitian ini, mekanisme Running II obat China dengan fungsi melengkapi qi dan menutrisi yin, mengatur jalan raya dan pembuluh konsepsi, menyelesaikan massa, dan detoksifikasi dalam menghambat tumor dan anti-metastasis dipelajari dari angiogenesis dan faktor pengaturannya dalam tumor transplantasi kanker mammae MA-891 tikus TA2 dengan metastasis paru.
BAHAN
Enam puluh tikus TA2 betina SPF, dengan berat (20 ± 2) g, berusia 6-8 minggu, dibeli dari Departemen Hewan Laboratorium, Universitas Ilmu Kedokteran Tianjin. Strain sel MA-891 kanker mammae pada tikus disuplai oleh Prof. Luo Liqin, Laboratorium Patologis, Institut Tumor, Akademi Ilmu Kedokteran Tiongkok.
Runing II terdiri dari Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Yi Yi Ren ( Semen Coicis), Yin Yang Huo (Herba Epimedii), Dang Gui (Radix Angelicae Sinensis), dll, dengan rasio dosis 1,67: 1,67: 1,33: 1,33: 1,33: 1,33: 1,33: 1, yang dibuat ramuannya oleh Bagian Farmasi, Rumah Sakit Longhua, menurut teknik tradisional, dan disimpan di 4ć untuk digunakan; Cyclophosphamide (CTX, 200mg/ampul, nomor cabang: 981104) dan tamoxifen (TAM) diproduksi oleh Shanghai Hualian Pharmaceutical Co. Ltd.; Saline normal diproduksi oleh Shanghai Fumin Pharmaceutical Co.
Antibodi poliklonal faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) (pengenceran kerja 1:25–1:50), reseptor faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGFR, pengenceran kerja 1:30–1:50), dan antibodi poliklonal FVIIIAg (pengenceran kerja 1:50 ) dibeli dari Santa Cruz Biotechnology Inc; Antibodi kedua EnVision, antibodi VEGF anti-tikus kelinci, antibodi FVIII Ag anti-kelinci kambing dan antibodi VEGFR anti-kelinci kambing, dan EnVision Kit dibeli dari Dako Co., Denmark; 3,3- Diaminobenzidine (DAB) dibeli dari Shanghai Huamei Bioengineering Factory.
METODE
Pengembangan model hewan
Model hewan dikembangkan dengan inferensi metode Luo dan Gao, et al.2,3. Sel kanker mammae MA-891 tikus yang dikultur secara in vitro pada fase kelangsungan hidup logaritmik dipilih dan konsentrasi sel diatur sebagai 1x107 /ml. Di bawah kondisi aseptik, sel kanker mamalia diinokulasi ke dalam mencit TA2 bagian subkutan ketiak kanan (0,2 ml/mencit, yaitu 2X106 sel/mencit).
Pengelompokan hewan dan cara pemberiannya
Dua hari setelah inokulasi, mencit dibagi secara acak menjadi 4 kelompok, masing-masing kelompok 15 mencit. 1) Kelompok kontrol yang mengandung tumor: 0.4 ml normal saline diberikan secara intragastrik, sekali setiap hari, lima kali setiap minggu. 2) Kelompok Runing II: Runing II diencerkan dengan normal saline dan 0.4 ml pengenceran ini sesuai dengan 48 g·kg{{10}}·d-1 yang dihitung menurut tabel terlampir "Tabel Konversi antara Area Permukaan Tubuh Manusia dan Hewan" dalam "Metodologi Studi farmakologi Obat Cina" 4 diberikan secara intragastrik, sekali sehari, lima kali setiap minggu. 3) Kelompok kontrol CTX: Tentang dosis yang digunakan oleh Jiang Bo,5 CTX diencerkan dengan salin normal, dan 0.4 ml sesuai dengan 50 mg·kg-1·d-1 adalah diberikan secara intragastrik, sekali setiap hari, tiga kali setiap minggu. 4) Kelompok kontrol TAM: TAM diencerkan dengan salin normal dan 0,4 ml sesuai dengan 2,7 mg·kg-1·d-1 diberikan secara intragastrik, sekali sehari, lima kali setiap minggu. Obat diberikan selama 3 minggu pada keempat kelompok.
Contoh
Pada hari ke-22 setelah pemberian, mencit dikorbankan dengan cara dislokasi tulang leher dan ditimbang. Kemudian massa tumor dan paru-paru diambil dan ditimbang masing-masing. Berat badan sebenarnya dari tikus=berat badan tertimbang – berat tumor. Node abu-abu pada permukaan paru-paru, yaitu fokus metastasis, dihitung dengan mata telanjang. Massa tumor ditempatkan ke dalam larutan formaldehida netral 10 persen untuk fiksasi, diikuti dengan penyematan parafin, pemotongan ultrathin, pemeriksaan dua langkah immunohistochemical Envision, dan penentuan VEGF, VEGFR, microvessel count (MVC), dan microvessel area (MVA).
Tingkat penghambatan berat tumor
Tingkat penghambatan tumor=(rata-rata berat tumor dari kelompok kontrol setelah pengobatan – rata-rata berat tumor dari kelompok obat setelah pengobatan)/rata-rata berat tumor dari kelompok kontrol setelah pengobatan × 100 persen .
Tingkat penghambatan metastasis paru-paru
Laju penghambatan metastasis paru=(rata-rata jumlah simpul metastasis paru dari kelompok kontrol – rata-rata jumlah simpul metastasis paru dari kelompok pengobatan)/rata-rata jumlah simpul metastasis paru dari kelompok kontrol x 100 persen .
Immunohistochemical Bayangkan pewarnaan dua langkah
Bagian parafin 4 μm diambil, diikuti deparafin rutin dengan xylene, dehidrasi gradien, dan pencucian dengan PBS, 5 menit x 3 kali; bagian direndam dalam 0.01 mol/L, buffer sitrat pH6.0, dimasukkan ke dalam oven microwave 98C selama 10 menit untuk perbaikan antigenik dan didinginkan secara alami pada suhu kamar setelah diambil dari oven gelombang mikro; meneteskan antibodi pertama (masing-masing antibodi yang disebutkan di atas dan pengenceran antibodi yang sesuai), 37ć, 90 menit, cuci dengan PBS, 5 menit x 3 kali; menetes Envasion antibodi kedua, pada suhu kamar selama 60 menit, cuci dengan PBS, 5 menit x 3 kali; meneteskan larutan pengembang warna DAB yang baru disiapkan, mengendalikan warna yang berkembang selama 3-10 menit di bawah mikroskop, pewarnaan ulang selama 45 detik dengan campeachy, membilas dengan air ledeng, mengeringkan dengan blower, memasang dengan permen karet netral. Sel dengan sitoplasma butiran coklat-kuning atau hitam-coklat dianggap positif. Bagian positif yang diketahui dari kanker payudara digunakan sebagai kontrol positif, dan buffer PBS yang menggantikan antibodi pertama digunakan sebagai kontrol negatif.
Analisis gambar
Kamera video ACE (resolving power 930 lines) dan penganalisa gambar LEICAQ500W dan sistem analisis gambar full-otomatis LEICA digunakan. Di bawah mikroskop x 200, 2 bidang penglihatan di setiap bagian dipilih secara acak untuk penentuan VEGF atau 3 bidang penglihatan untuk penentuan VEGFR dan MVA, dan persentase area positif terhadap seluruh area bidang penglihatan dihitung di semua kelompok. . Untuk penentuan MVC, 5 daerah dengan pembuluh darah terkaya dipilih di setiap bagian di bawah mikroskop x 100, dan kemudian di bawah x 400 pembuluh mikro di setiap bidang penglihatan dari 5 daerah yang tidak tumpang tindih dihitung, dan rata-rata digunakan sebagai penghitung pembuluh mikro rata-rata (MVC) dari tumor.
Metode statistik
Perangkat lunak SPSS8.0 digunakan dan uji chi-square digunakan untuk perbandingan antara tarif, dan uji-t atau ANOVA satu arah digunakan untuk perbandingan rata-rata.
HASIL
Efek penghambat tumor dan anti-metastasis dari Running II pada tumor transplantasi kanker mammae MA-891-yang mengandung tikus TA2 dengan metastasis paru
It was shown in Table 1 that the tumor weight inhibition rate was 37.3% in the Runing II group and 86.2% in the CTX control group, both tumor inhibition rates being >30 persen, dengan perbedaan yang signifikan (keduanya P<0.05) as compared with both tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor-inhibiting effect. And there was a significant difference (P<0.05) between the Runing II group and the CTX control group in the tumor inhibition rate, indicating that the tumor-inhibiting effect of Runing II was lower than that of CTX. The lung metastasis inhibition rate was 65.4% in the Runing II group and 43.9% in the CTX control group, with significant difference (both P<0.05) as compared with a tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor metastasis-inhibiting action. And there was a significant difference between the Runing II group and the CTX control group (P<0.05) in the lung metastasis inhibition rate, suggesting that the anti-metastasis action of Runing II is superior to that of CTX.
Efek Running II pada ekspresi VEGF dan VEGFR pada tumor yang ditransplantasikan pada tikus TA2 yang mengandung MA-891-
Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2, ekspresi VEGF dan VEGFR pada kelompok Running II dan kelompok kontrol CTX secara signifikan lebih rendah dibandingkan pada kelompok kontrol pembawa tumor (P<0.05), with a significant difference between the two. In the Running II group, the VEGF and VEGFR expressions were not significantly different from those in the CTX control group (P>0.05), ekspresi VEGF secara signifikan lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol TAM (P<0.05), and the VEGFR expression was similar to that in the TAM control group (P>0.05). In the CTX control group, the VEGF and VEGFR expression was lower than those in the TAM control group. In the TAM control group, the VEGF expressions were similar to that in the tumor-bearing control group (P>0.05), dan ekspresi VEGFR lebih rendah dari pada kelompok kontrol pembawa tumor (P<0.05).
Pengaruh Running II pada MVA dan MVC dari tumor yang ditransplantasikan pada tikus MA-891-yang mengandung TA2
Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3, tingkat MVA dan MVC pada kanker yang ditransplantasikan pada kelompok obat secara signifikan lebih rendah dibandingkan pada kelompok kontrol yang mengandung tumor (P<0.05); in the Running II group, the levels of MVA and MVC were significantly higher than those in the CTX control group (P<0.05), the level of MVC was lower than that in the TAM control group (P<0.05), and the MVA level was similar to that in the TAM control group (P>0.05).
DISKUSI
Pengobatan tradisional Tiongkok berpendapat bahwa asal-usul dan perkembangan tumor dihasilkan dari efek menyeluruh dari faktor idiopatik dan empati tetapi dengan tekanan pada faktor sebelumnya. Dalam studi klinis sebelumnya, Prof. Lu dan Tang berpendapat bahwa defisiensi vital-qi di bagian dalam dan ketidakharmonisan jalan raya dan pembuluh konsepsi adalah penyebab utama asal mula tumor, dan invasi internal, pergerakan dan penyebaran patogen kanker adalah kondisi utama dari penyakit kanker. pertumbuhan dan metastasis kanker mammae.6 Oleh karena itu, dalam pengobatan, mereka menganjurkan nutrisi vital qi dan menghilangkan massa. Running II adalah ramuan herbal Cina yang diringkas melalui praktik klinis selama bertahun-tahun sesuai dengan prinsip pengobatan memperkuat daya tahan tubuh terlebih dahulu dan menghilangkan faktor patogen kedua. Dalam formulanya, Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), Yin Yang Huo (Herba Epimedii) adalah bahan-bahan yang berdaulat, dengan efek melengkapi qi dan yin bergizi, mengatur jalan raya dan pembuluh konsepsi, yang sesuai dengan karakteristik kanker payudara yang umum terlihat seperti defisiensi qi dan yin dan ketidakharmonisan jalan raya dan pembuluh konsepsi. Secara klinis, formula ini mencapai efek nyata memperpanjang waktu bertahan hidup, meningkatkan kualitas hidup, menstabilkan fokus tumor, dan mencegah metastasis kanker.
Penelitian ini menetapkan model kanker mammae MA-891 sel tumor yang ditransplantasikan dari tikus TA2 dengan metastasis paru dan mengamati efek Running II pada pertumbuhan tumor padat dan metastasis paru, dan menemukan bahwa ada perbedaan yang signifikan pada tumor tingkat penghambatan dan tingkat penghambatan metastasis paru-paru antara kelompok Running II dan kelompok pembawa tumor, dan antara kelompok Running II dan kelompok kontrol CTX, menunjukkan bahwa Running II memiliki fungsi yang jelas dalam menghambat pertumbuhan tumor dan anti-metastasis. Selain itu, tamoxifen (TAM) tidak memiliki fungsi yang jelas untuk menghambat pertumbuhan tumor dan anti-metastasis pada tikus model, mirip dengan hasil bahwa kanker mammae MA-891 adalah strain sel ER dan laporan tentang tindakan langsung rendahnya konsentrasi TAM di luar negeri.7
Tumor adalah penyakit yang bergantung pada pembuluh darah, dan pertumbuhan, infiltrasi, dan metastasisnya bergantung pada angiogenesis. Pada saat yang sama, neovaskularisasi kembali memasok saluran metastasis untuk sel tumor, menciptakan kondisi yang menguntungkan untuk pertumbuhan, metastasis, dan difusi tumor. 8, 9 VEGF adalah faktor pro-angiogenik dengan aksi terkuat, unik, dan spesifik pada sel endotel vaskular, dan banyak sel tumor dapat mengeluarkan VEGF, yang meningkatkan permeabilitas vaskular dan secara langsung bekerja pada sel endotel vaskular melalui pengikatan ke reseptor VEGF, merangsang pembelahan dan proliferasinya, menginduksi angiogenesis tumor dan memengaruhi jumlah pembuluh mikro, untuk mendorong pertumbuhan dan metastasis tumor.10,11 Sebagian besar sel tumor memiliki ekspresi VEGF yang tinggi, sedangkan pada jaringan normal, hanya sejumlah kecil organ seperti ginjal, ovarium, dll., memiliki ekspresi VEGF yang lebih tinggi. Oleh karena itu, beberapa sarjana berpendapat bahwa VEGF dapat digunakan sebagai penanda metabolisme tumor dan metastasis12 dan bagian target yang lebih ideal untuk memblokir neoangiogenesis pada tumor,13 dan mengganggu faktor pengatur pembuluh darah tumor dan penghubung kerjanya, mengatur ekspresi faktor angiogenesis, dan menghambat angiogenesis mungkin mengontrol pertumbuhan dan metastasis tumor.
Hasil dalam penelitian ini menunjukkan bahwa Runing II dapat menurunkan regulasi ekspresi VEGF dan VEGFR untuk kemungkinan memblokir konduksi sinyal migrasi yang diinduksi VEGF dan proliferasi sel endotel, dan selanjutnya menghambat angiogenesis pada tumor, sehingga memberikan efek antineoplastik dan anti-metastasis. .
Studi sebelumnya menunjukkan bahwa dalam perjalanan pertumbuhan tumor ganas, pertumbuhan jaringan yang terlalu cepat pasti menyebabkan anoksia serius pada jaringan lokal, dan anoksia dapat merangsang sintesis mRNA VEGF dan memperlambat degradasi mRNA VEGF untuk menginduksi asal-usul a sejumlah besar pembuluh kapiler lokal baru. 14,15 Dalam pengamatan sel pewarnaan positif imunohistokimia, penulis menemukan ekspresi VEGF yang jelas dalam sitoplasma sel tumor nekrotik yang sekarat, sebaliknya, kurang atau tidak ada ekspresi VEGF dalam sel tumor dengan proliferasi aktif , yang mungkin terkait dengan faktor pemicu anoksia tingkat tinggi dalam sel tumor, sesuai dengan laporan Talks KL, et al.16 Running II mengandung Dang Gui (ᔧᔦ Radix Angelicae Sinensis), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Sheng Yi Yi Ren (Semen Coicis), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), dll, yang berfungsi melancarkan peredaran darah, mengatasi dahak dan mengeluarkan keruh. Mereka menghambat sintesis dan sekresi VEGF mungkin melalui peningkatan mikrosirkulasi lokal tumor, meningkatkan suplai oksigen ke sel tumor, sehingga menghambat pertumbuhan tumor untuk melakukan anti-metastasis.
REFERENSI
1.Folkman J. Angiogenesis dan kanker payudara. J Clinic Oncol 1994; 12: 441-443.
2. Penelitian Folkman J. Angiogenesis: dari laboratorium ke klinik. Forum (Genova) 1999; 9: 59-62.
3.Potgen AJ. Ekspresi faktor permeabilitas vaskular memengaruhi angiogenesis tumor pada garis melanoma manusia yang di-xenograft ke tikus telanjang. Am J Pathol 1995; 5: 775-782.
4.Sauter ER, Nesbit M, Watson JC, dkk. Faktor pertumbuhan endotel vaskular adalah pasar invasi tumor dan metastasis pada karsinoma sel skuamosa kepala dan leher. Klinik Kanker Res 1999; 5: 775-782.
5.Warren RS, Yuan H, Matli MR, dkk. Regulasi oleh faktor pertumbuhan endotel vaskular oleh hipoksia. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.
6. Retribusi AP, Retribusi NS, Goldberg MA. Regulasi pasca-transkripsi faktor pertumbuhan endotel vaskular oleh hipoksia. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.
7.Talks KL, Turley H, Gatter KC, dkk. Ekspresi dan distribusi faktor yang diinduksi hipoksia HIF-1 alfa dan HIF-2 alfa dalam jaringan manusia normal, kanker, dan makrofag terkait tumor. Am J Pathol 2000; 157: 411-421.
For more information:1950477648nn@gmail.com
