Pengaruh Echinacoside Pada Iskemia Otak Tikus

Abstrak: Tujuan Untuk mempelajari pengaruhEchinosida(ECH) pada neurotransmitter monoamine dalam cairan ekstraseluler striatum pada tikus dengan iskemia serebral fokal, dan untuk mengeksplorasi kemungkinan mekanisme efek neuroprotektif ECH pada otak. Metode Tikus SD secara acak dibagi menjadi kelompok kontrol, kelompok model, kelompok ECH dosis tinggi dan rendah, dan kelompok ligustrazine (CXQ). Tikus pada masing-masing kelompok diberi obat atau garam fisiologis yang sesuai secara intraperitoneal sekali sehari selama 7 hari. Pada hari ketiga pemberian, selongsong probe ditancapkan pada striatum otak. Satu jam setelah pemberian terakhir, model tikus iskemia serebral fokal (MCAO) dibuat. Setelah model dibuat, segera dilakukan mikrodialisis. Dialisat disuntikkan ke dalam detektor elektrokimia-kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC-ECD) untuk menentukan kandungan norepinefrin (NE), dopamin (DA), 5-hydroxytryptamine (5-HT), 3 ,4-asam dihidroksifenilasetat (DOPAC), asam homovanillic (HVA), 5-asam hidroksi indol asetat (HIAA) dalam cairan ekstraseluler striatum masing-masing kelompok. Hasil Dibandingkan dengan kelompok kontrol, kadar NE, DA, dan 5-HT pada kelompok model meningkat, dan metabolit asam DOPAC, HVA, dan HIAA juga meningkat. Dibandingkan dengan kelompok model, kandungan enam zat pada kelompok ECH dosis tinggi dan rendah (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) dan kelompok CXQ mengalami penurunan. Kesimpulan Efek neuroprotektif ECH mungkin berhubungan dengan peningkatan neurotransmitter monoamine setelah iskemia serebral.

Bubuk Cistanche

Kata-kata kunci: Echinosida; iskemia otak; striatum; HPLC-ECD; Neurotransmiter dan metabolit monoamine

Echinaceoside(ECH) adalah komponen efektif glikosida feniletanoid yang diisolasi dan dimurnikanCistanche desertikola, pabrik khusus di Xinjiang. Penelitian telah menunjukkan bahwa ECH memiliki efek neuroprotektif seperti antioksidan [1-2], perlindungan saraf [3-4], anti penuaan [5], dan peningkatan pembelajaran dan memori [6-8]. Hasil Chen Hong dkk. mengkonfirmasi bahwa ECH memiliki efek perlindungan pada neuron DA pada penyakit Parkinson [9]. Neurotransmiter monoamine adalah sejenis zat penting yang mengatur aktivitas fisiologis tubuh.Kandungan dalam jaringan dapat mencerminkan proses biosintesis, pelepasan, serapan, dan inaktivasi neurotransmitter [10-11]. Saat ini, belum ada laporan relevan tentang pengaruh ECH pada pemancar monoamina di otak tikus dengan iskemia serebral. Dalam penelitian ini, pengaruh ECH terhadap kandungan neurotransmiter monoamina dalam cairan ekstraseluler striatum tikus dengan iskemia serebral diselidiki dengan menggunakan teknologi mikrodialisis otak, dan kemungkinan mekanisme ECH pada perlindungan saraf otak telah dieksplorasi terlebih dahulu.

Bubuk ekstrak cistanche tubulosa

1.Bahan

1.1 Hewan percobaan

Tikus SD, ♂, Massa tubuh 250~300g (dibeli dari Pusat Hewan Eksperimental Xinjiang, nomor lisensi: 2009-0053).

1.2 Obat dan reagen

ECH disumbangkan oleh Profesor Tu Pengfei, Sekolah Farmasi, Universitas Peking (kemurnian di atas 95%); Norepinefrin (NE), dopamin (DA), 5-hidroksitriptamin (5-HT), 3,4-asam dihidroksifenilasetat (DOPAC), asam homovanilat (HVA)

5-asam hidroksi indol asetat (HIAA) adalah Sigma; Tetramethylpyrazine hidroklorida untuk injeksi (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Semen seng fosfat (produk Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., terdiri dari cairan dan bubuk, bercampur seiring waktu); Natrium 1-alkil sulfat (DIKMA); Hidrat asam sitrat (Institut Penelitian Kimia Halus Tianjin Jinke); Trisodium sitrat (Acros); Asam dinatrium etilendiamin tetraasetat (JTTakerChemicalco); Metanol (DIKMA); Asetonitril (DIKMA); Cairan perfusi mikrodialisis otak adalah injeksi senyawa natrium klorida (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Semua air yang digunakan adalah air yang dikukus ulang.

1.3 Instrumen

Peralatan stereotaktik otak tikus BAS4100 Amerika; Probe CMA/12 dan selongsong probe; Perangkat hewan sadar CMA/120; Pompa mikro CMA/402; Kolektor otomatis sampel suhu rendah CMA/150. Pompa infus Esa 5600A; Pompa infus Esa 5600A; Perangkat injeksi sampel otomatis Esa 542; Detektor elektrokimia CoulArray Esa; Elektroda kerja karbon kaca dan elektroda referensi Ag/AgCl; Kolom C18 (DIKMA, ODS5 μm,150mm × 4,6mm); Stasiun kerja kromatografi CoulArraywin (perusahaan Esa); Mixer pusaran (tipe QL-861); Penguji keasaman desktop (HANNA-211); Centrifuge kecepatan tinggi desktop (tipe XYJ-2).

2.metode

Intisuplemen lain di dekat saya—Imbuktikan ingatan

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Meningkatkan Memori

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 Pengelompokan dan administrasi hewan

Tiga puluh tikus secara acak dibagi menjadi lima kelompok: ① Kelompok kontrol: 1ml · kg-1 · d-1 saline normal; ② Kelompok model: larutan garam normal 1ml · kg-1 · d-1; ③ Model+ligustrazine (CXQ) 30mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Model+ECH kelompok dosis tinggi dan rendah (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; Semua hewan di setiap kelompok disuntik secara intraperitoneal selama 7 hari.

2.2 Metode pemodelan dan mikrodialisis

Setiap tikus dikuburkan dengan kanula pada hari ketiga pemberian: tikus dibius dengan 10% kloral hidrat (3,5ml · kg-1), dipasang pada peralatan stereotaktik otak BAS4100, dan kateter probe ditanamkan ke striatum kiri (koordinat AP:+0.2mm; ML: - 3.0mm; DV: - 3.5mm) mengenai "Peta Stereotaktik Otak Tikus" GeorgePaxinos. Setelah pemberian terakhir, tikus dibius 1 jam kemudian, dan tikus dibuat model iskemia serebral fokal (model MCAO) menggunakan metode jahitan Longa yang ditingkatkan Yang Zanzhang [12]. Tali pancing pada kelompok kontrol hanya dimasukkan 10 mm, dan langkah lainnya sama dengan pada kelompok operasi. Setelah pemodelan, masukkan probe mikrodialisis dalam keadaan sadar dan bergerak bebas, dan gunakan larutan Ringer untuk μ Mikrodialisat otak dikumpulkan pada suhu 4 derajat dan tabung dialisat dikumpulkan pada 20 menit. Setelah setiap tabung dialisat dikumpulkan, tabung tersebut harus segera disimpan dalam lemari es dengan suhu - 20 derajat, dan dipindahkan ke lemari es dengan suhu - 70 derajat setelah dialisis. Tingkat pemulihan probe diukur sebelum digunakan, yang digunakan untuk mengubah konsentrasi neurotransmiter monoamine dalam dialisat.

apa yang dilakukan cistanche tubulosa—Meningkatkan daya ingat

2.3 Analisis HPLC-ECD

Konfigurasi fase gerak: fase gerak mengandung 829ml 0.15mol · L-1 buffer asam sitrat-natrium sitrat per liter; 0.1mol · L-1 dinatrium EDTA 1ml; Metanol 150ml; Natrium {{10}}alkil sulfat 0.283g. Tetapkan laju aliran fase gerak sebagai 0.7ml · min-1, dan suhu oven kolom sebagai 28 derajat. Tegangan kerja detektor elektrokimia adalah 200mV, 400mV, dan 600mV, dengan masing-masing 2, 3, dan 4 saluran; Keuntungannya adalah 2nA. Volume injeksi adalah 25 μl. Kurva standar digambar dengan larutan standar campuran gradien 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5mg · L-1.

2.4 Pemrosesan statistik

Data eksperimen dinyatakan dalam x bidang ± s, dan data pengukuran berulang dianalisis dengan menggunakan perangkat lunak statistik SPSS13.0.

Gambar 1-6 menggambarkan perubahan kadar NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA, dan 5-HT dalam cairan ekstraseluler striatum tikus. Terlihat dari gambar bahwa setelah iskemia serebral, neurotransmiter monoamine pada cairan ekstraseluler striatum mengalami gangguan metabolisme, dan kandungan masing-masing neurotransmitter mengalami peningkatan. Dalam rentang tertentu, peningkatannya semakin nyata seiring dengan pemanjangan waktu iskemia. Pada iskemia 90 menit, konsentrasi DA dan NE dalam cairan ekstraseluler striatum lebih dari tiga kali lipat tingkat kelompok kontrol. Kadar NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA, dan 5-HT pada kelompok kontrol menurun dari tinggi ke rendah, yang mungkin berhubungan dengan iskemia sementara pada otak kiri setelah ligasi arteri karotis komunis kiri dan kerusakan yang disebabkan oleh memasukkan probe. Dari kurva perubahan, ECH dan CXQ dapat mengurangi konsentrasi puncak DA, DOPAC, HIAA, HVA, dan 5-HT setelah iskemia serebral, dan CXQ serta ECH dosis tinggi lebih terlihat jelas. Pergeseran ke bawah kurva perjalanan waktu masing-masing neurotransmitter menunjukkan bahwa ECH dapat menghambat peningkatan neurotransmiter dan metabolitnya di otak tikus dengan iskemia serebral.

                                                                           Gambar 2 Pengaruh Echinoside pada tingkat ekstraseluler DA pada striatum tikus

Gambar 3 Pengaruh Echinoside pada tingkat DOPAC ekstraseluler pada striatum tikus. Gambar 4 Pengaruh Echinoside pada tingkat HIVV ekstraseluler pada striatum tikus

Gambar 5 Pengaruh Echinoside pada tingkat HVA ekstraseluler pada striatum tikus Gambar 6 Pengaruh Echinoside pada tingkat ekstraseluler 5- HT instriatum tikus

4.Diskusi

cistanche supermanherba—Peningkatanaku punya ingatan

【Minta lebih lanjut】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikasi WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Mekanisme cedera otak akibat iskemia serebral sangatlah kompleks. Dalam kasus iskemia serebral, neurotransmiter monoamina di otak mengalami gangguan, dan kandungan NE, DA, dan 5-HT berkurang secara signifikan. Semakin parah iskemia serebral, semakin rendah kandungan NE, DA, dan 5-HT pada jaringan otak [13]. Metode mikrodialisis intraserebral membuktikan bahwa kandungan neurotransmiter monoamine meningkat dalam cairan ekstraseluler selama iskemia serebral, berlangsung selama seluruh periode iskemik, dan selanjutnya meningkat seiring dengan pemanjangan waktu iskemik. Hasil eksperimen konsisten dengan laporan [14].Echinosidaadalah komponen efektif glikosida feniletanoid yang diisolasi dan dimurnikan dari Cistanche deserticola, tanaman khusus di Xinjiang. Ini memiliki banyak efek neuroprotektif seperti anti-penuaan, meningkatkan pembelajaran dan memori, dan apoptosis anti-neuronal. Dalam penelitian ini, mikrodialisis otak tingkat lanjut dalam negeri yang dikombinasikan dengan teknologi deteksi HPLC-ECD digunakan untuk mengeksplorasi efek awalEchinosidapada neurotransmiter monoamine dan metabolitnya dalam cairan ekstraseluler striatum tikus percobaan dengan iskemia serebral. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ECH dapat mengurangi peningkatan neurotransmiter monoamine pada cairan ekstraseluler striatum akibat iskemia serebral, dan memiliki efek yang lebih baik dalam memperbaiki kerusakan jaringan iskemik serebral.