idBahasa
Rumah / Pengetahuan / Konten

Pengetahuan

Cistanche Glyside Rg1 Memperbaiki Fibrosis Hati yang Diinduksi Penuaan Dengan Menghambat Peradangan NOX4/NLRP3 pada Tikus SAMP8

May 29, 2023

Abstrak.Penuaansering disertai dengancedera hatiDanfibros, yang pada akhirnya menyebabkan penurunanfungsi hati. Namun, mekanisme darikerusakan hati akibat penuaanDanfibrosmasih belum sepenuhnya dipahami, sejauh pengetahuan kami, dan saat ini tidak ada pilihan pengobatan efektif yang tersedia untuk penuaan hati. Cistanche Glycoside Rg1 (Rg1) telah dilaporkan memberikan efek anti-penuaan yang kuat karena aktivitas antioksidan dan anti-inflamasinya yang kuat. Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki efek perlindungan dan mekanisme aksi yang mendasari Rg1 dikerusakan hati akibat penuaanDanfibrosdi dalampenuaan‑dipercepattikus rawan 8 (SAMP8) dirawat selama 9 minggu.

chinese herbs for liver aging

Klik Disini Untuk Mendapatkan Info Lebih Lanjut Tentang Cistanche Anti-aging treatment for Liver

Hasil histopatologi menunjukkan bahwa susunan hepatosit tidak teratur, degenerasi seperti vakuola terjadi pada sebagian besar sel, dan kolagen IV dan TGF- 1 level ekspresi, yang terdeteksi melalui imunohistokimia, juga diregulasi secara signifikan pada kelompok SAMP8. Perawatan Rg1 meningkat secara nyatakerusakan hati dan fibrosis akibat penuaan, dan secara signifikan menurunkan tingkat ekspresi kolagen IV dan TGF‑ 1. Selain itu, hasil pewarnaan dihydro ethylene dan western blotting menunjukkan bahwa perlakuan Rg1 secara signifikan mengurangi kadar spesies oksigen reaktif (ROS) dan IL-1 , dan menurunkan tingkat ekspresi NADPH oksidase 4 (NOX4), p47phox, p22phox, phosphorylated‑NF‑κB, caspase‑1, protein seperti bintik terkait apoptosis yang mengandung domain rekrutmen C‑terminal caspase dan domain pyrin keluarga NLR yang mengandung 3 (NLRP3) inflammasome, yang secara signifikan diregulasi dalam jaringan hati tikus SAMP8 tua. Sebagai kesimpulan, temuan penelitian ini menunjukkan bahwa Rg1 dapat melemahkerusakan hati dan fibrosis akibat penuaandengan mengurangi stres oksidatif ROS yang dimediasi NOX4 dan menghambat aktivasi peradangan NLRP3.

chinese herbs for liver aging


Perkenalan

The number of individuals >Usia 65 tahun di seluruh dunia diproyeksikan meningkat dari 524 juta pada tahun 2010 menjadi ~1,5 miliar pada tahun 2050 (1). Orang lanjut usia sangat rentan untuk berkembangpenyakit kronis, termasukfibrosis hati(2).

Fibrosis hati adalah proses dinamis yang terkait dengan deposisi dan resorpsi terus menerus dari matriks ekstraseluler, terutama kolagen fibrillar (3), yang seringkali merupakan langkah pertama dalam distorsi arsitektur dan disfungsi yang mencegah fungsi normal hati (4). Jika tidak diobati, fibrosis hati dapat menyebabkan sirosis hati dan hepatoma lanjut (4). Kumpulan bukti menunjukkan bahwa kerentanan terhadap fibrosis hati dan hepatitis meningkat secara signifikan seiring bertambahnya usia (5). Dengan demikian, tetap penting untuk mempelajari penuaan hati dan mekanisme yang mendasari terkait untuk memberikan strategi baru untuk mencegah fibrosis hati terkait penuaan.7


Patogenesis penuaan sangat kompleks. Selama sekitar 40 tahun terakhir, stres oksidatif semakin diakui sebagai faktor penyebab penyakit terkait penuaan (6-8). Stres oksidatif disebabkan oleh ketidakseimbangan antara produksi spesies oksigen reaktif (ROS) dan kapasitas pemulungan sistem antioksidan (9,10). Telah dilaporkan bahwa produksi ROS yang berlebihan dapat menyebabkan kerusakan pada protein, lipid dan DNA, mengakibatkan berbagai jenis penyakit, seperti penyakit Alzheimer, diabetes, gagal jantung, sindrom kelelahan kronis, dan kanker (11). NADPH oksidase (NOX) adalah salah satu sumber utama ROS, dan keluarga protein NOX terdiri dari subunit membran (NOX1‑5), p22phox dan subunit sitoplasma p67phox, p47phox dan
Rac1 (12,13). Perlu dicatat bahwa NOX4 adalah enzim yang aktif secara konstitutif dan telah ditemukan diekspresikan secara luas di hati, terutama di dalam hepatosit, sel stellate hati, dan fibroblas (14). Semakin banyak bukti yang menunjukkan bahwa stres oksidatif yang disebabkan oleh ROS turunan NOX4 dapat memainkan peran kunci dalam fibrosis hati (15).


Peradangan kronis adalah proses penting lainnya yang terjadi selama penuaan sebagai akibat dari peningkatan tingkat rendah dari mediator peradangan yang bersirkulasi (16). Peradangan adalah gambaran umum dari beberapa patologi terkait usia, seperti kelemahan dan penyakit kardiovaskular (17), yang berkontribusi pada perkembangan disfungsi jaringan (18). Telah dilaporkan bahwa peradangan juga berperan penting dalam cedera hati terkait usia (19). Inflammasom, yang merupakan kompleks multiprotein sitoplasma besar, terdiri dari keluarga domain pirin NLR yang mengandung (NLRP), sebuah pola sitoplasma

reseptor pengakuan caspase-1 dan protein seperti bintik terkait apoptosis yang mengandung C-terminal caspase recruitment domain (ASC). Menurut temuan penelitian sebelumnya, inflamasiom NLRP3, sejenis inflamasiom yang diekspresikan di mana-mana di banyak jaringan, termasuk hati, ditemukan terlibat dalam evolusi fibrosis hati dan perkembangan cedera hati dan penyakit hati terkait usia ( 20-22). Ketika diaktifkan oleh beragam iritan, seperti ATP dan kristal kolesterol, serta patogen bakteri, virus, dan jamur (23,24), peradangan NLRP3 merespons peradangan dengan mendorong pematangan serangkaian sitokin proinflamasi, seperti IL-1 dan IL-18 (25). Selain itu, telah dilaporkan bahwa akumulasi ROS yang berlebihan mengaktifkan inflamasiom NLRP3 di hati selama proses penuaan, yang pada akhirnya menyebabkan penyakit hati terkait penuaan (26).


Senescence‑accelerated mouse is prone 8 (SAMP8) adalah model percepatan penuaan yang semata-mata berasal dari genetik, yang belum mengalami manipulasi eksperimental apa pun(27). Studi sebelumnya telah melaporkan bahwa tikus SAMP8 menunjukkan degenerasi hati yang luas, termasuk steatosis hati, penggelembungan hepatosit yang ditandai dengan sel bengkak, nekrosis fokal dan pembengkakan, dan fibrosis (28,29). Di antara pengamatan ini, fibrosis hati adalah perubahan patologis yang paling umum dan signifikan (5). Selain itu, tikus SAMP8 juga memiliki hasil tes fungsi hati yang abnormal, seperti peningkatan yang signifikan pada level alanine aminotransferase (ALT) dan aspartate aminotransferase (AST) (30). Namun, masih belum ada metode dan obat yang efektif untuk menunda penuaan hati dan kerusakan hati terkait penuaan serta fibrosis.
Ginseng has been used for >2,000 tahun dan menunjukkan beberapa efek menguntungkan, seperti meningkatkan kesehatan hati dan menunda penuaan (31). Cistanche Glycoside Rg1 (Rg1) adalah salah satu bahan aktif dalam ginseng (32). Telah dilaporkan bahwa Rg1 memberikan efek perlindungan pada kerusakan saraf melalui penghambatan apoptosis neuron yang diinduksi stres oksidatif (33). Selain itu, Rg1 ditemukan untuk memperbaiki
kardiomiopati diabetik dengan menghambat apoptosis yang diinduksi stres retikulum endoplasma (ER) pada tikus diabetes (34). Studi kami sebelumnya menemukan bahwa Rg1 dapat melindungi terhadap cedera ginjal terkait penuaan dan penuaan neuron dengan menghambat NOX4/2 (35,36). Namun, sejauh pengetahuan kami, masih belum diketahui apakah Rg1 melindungi terhadap cedera hati dan fibrosis terkait penuaan. Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki apakah pengobatan Rg1 memperbaiki kerusakan hati dan fibrosis terkait penuaan dengan menghambat pensinyalan NOX4/NLRP3 untuk mengurangi stres oksidatif dan pembengkakan di hati selama penuaan.



Bahan dan metode

Animals and treatment. In total, 9 male senescence‑accelerated resistant mouse 1 (SAMR1) and 45 male SAMP8 mice (both age, 6 months; weight, 30‑40 g) were purchased from the Department of Experimental Animal Science, Peking University Medical Science Center (Beijing, China). The mice were maintained in an environmentally controlled room (temperature, 22‑25˚C; relative humidity, 50‑70%) under a 12‑h light/dark cycle with unlimited access to food and water. The SAMP8 mice were randomly divided into five groups (n=9 in each group): i) SAMP8 model group; ii) SAMP8 + apocynin (50 mg/kg) group; iii) SAMP8 + tempol (50 mg/kg) group; iv) SAMP8 + Rg1 (5 mg/kg) group; v) SAMP8 + Rg1 (10mg/kg) group; and vi) SAMR1 mice group, which were used as the control group. The treatments were administered intragastrically (0.1 ml/10 g body weight), and the mice treated with either apocynin (MilliporeSigma), tempol (MilliporeSigma) or Rg1 (content >98 persen ; Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.) sekali sehari selama 9 minggu. Kelompok SAMP8 dan SAMR1 diperlakukan dengan air suling selama 9 minggu. Setelah 9 minggu pengobatan, enam tikus di setiap kelompok dikorbankan melalui dislokasi serviks. Hati dipanen dan disimpan pada suhu -80˚C untuk penggunaan selanjutnya dalam percobaan western blotting, atau ditempatkan di

dalam paraformaldehyde 4 persen selama 24-48 jam pada suhu kamar untuk pemeriksaan histologis. Prosedur eksperimental disetujui oleh Komite Etika Hewan Universitas Kedokteran Anhui (persetujuan no. LLSC20160183; Hefei, China) dan dilakukan sesuai dengan Pedoman Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium (37).

chinese herbs for liver aging

Deteksi ROS. Tingkat produksi ROS di hati tiga tikus yang tersisa pada kelompok tikus yang berbeda dideteksi menggunakan pewarnaan dihydro ethylene (DHE). Secara singkat, 100 µM DHE (0,1 ml/10 g; Beyotime Institute of Biotechnology) disuntikkan melalui vena ekor pada setiap kelompok tikus (n=3). Setelah 30 menit, hewan dikorbankan dengan dislokasi serviks dan hati dikeluarkan dan disematkan dalam senyawa suhu pemotongan optik (Sakura Finetek USA, Inc.) pada suhu -20˚C selama 2 jam. Jaringan hati kemudian dipotong menjadi 10‑µm bagian menggunakan micro‑ beku

tome (Leica CM3050; Leica Microsystems GmbH) pada suhu ‑20˚C. Bagian dicuci dengan PBS dan diinkubasi dengan larutan Hoechst 33258 5 mg/l (Sigma‑Aldrich; Merck KGaA) pada suhu kamar selama 5 menit. Kemudian, bagian disegel dengan zat pendingin anti-fluoresensi (Beyotime Institute of Biotechnology) dan divisualisasikan menggunakan mikroskop fluoresensi (Olympus IX72; Olympus Corporation; perbesaran, x400). Perangkat lunak Image Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc.) digunakan untuk mendeteksi kepadatan rata-rata fluoresensi merah dari tiga bidang pandang yang dipilih secara acak di setiap bagian untuk menunjukkan produksi ROS.



Pemeriksaan patologis jaringan hati.

Perubahan morfologi hati diperiksa menggunakan H&E, periodik acid-Schiff (PAS), dan teknik pewarnaan trichrome Masson. Pewarnaan H&E adalah metode yang paling umum untuk mengamati perubahan patologis pada jaringan (38). Secara singkat, spesimen hati difiksasi dalam paraformaldehyde 4 persen selama 24‑48 jam, didehidrasi dan ditempelkan parafin, kemudian dipotong menjadi bagian setebal 5µm. Bagian hati (n=4) dideparafinisasi dalam xilena dan direhidrasi dalam seri alkohol bertingkat (etanol anhidrat, etanol 85 persen, etanol 75 persen), kemudian diwarnai dengan hematoxylin selama 3 menit dan eosin selama 30 detik. Semua langkah ini dilakukan pada suhu kamar. Bagian disegel dengan resin netral dan diamati menggunakan mikroskop cahaya (Olympus IX72; Olympus Corporation; perbesaran, x200).


Pewarnaan PAS sering digunakan untuk mendeteksi akumulasi glikoprotein asam untuk mengevaluasi cedera hati (39). Untuk pewarnaan PAS, bagian jaringan (n=4) dideparafinisasi dan direhidrasi, menurut metode yang dijelaskan untuk pewarnaan H&E. Kemudian, bagian diwarnai dengan larutan Schiff selama 10 menit (Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.), diikuti dengan hematoxylin selama 3 menit. Semua langkah ini dilakukan pada suhu kamar.



Pewarnaan trichrome Masson adalah metode penting untuk menilai deposisi kolagen dalam jaringan hati (40). Untuk pewarnaan trichrome Masson, bagian (n=4) dideparafinisasi dan direhidrasi, sesuai dengan metode yang dijelaskan untuk pewarnaan H&E. Kemudian, bagian tersebut diwarnai dengan hematoksilin, dibedakan dengan etanol asam, dan diwarnai dengan larutan biru Masson (Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), diikuti dengan pewarnaan dengan Fuchsin selama 8 menit. Sel-sel kemudian dicuci dengan asam fosfomolibdat selama 2 menit dan diwarnai dengan anilin biru selama 5 menit. Semua langkah ini dilakukan pada suhu kamar. Sel-sel bernoda PAS‑ dan Masson divisualisasikan menggunakan mikroskop cahaya (Olympus IX71; perbesaran, x400). Daerah positif pewarnaan PAS tampak ungu dan kolagen berwarna biru. Hasil PAS dan pewarnaan trichrome Masson di hati dianalisis dalam tiga bidang yang dipilih secara acak
lihat di setiap bagian menggunakan perangkat lunak Image‑Pro Plus (Media Cybernetics, Inc.). Kepadatan rata-rata PAS dan area positif Masson dihitung untuk menilai derajat fibrosis hati.



Pewarnaan imunohistokimia.

Bagian yang tertanam parafin (n=4) dideparafinisasi dan direhidrasi, sesuai dengan metode yang dijelaskan untuk pewarnaan H&E. Kemudian, bagian diinkubasi dengan 3 persen H2O2 selama 10 menit pada suhu 37˚C untuk memblokir aktivitas peroksidase endogen sebelum direndam dalam buffer natrium sitrat mendidih selama 7 menit dalam oven microwave untuk pengambilan antigen. Bagian-bagian tersebut kemudian diinkubasi dengan serum kambing 10 persen (kucing no. C0265; Institut Bioteknologi Beyotime) pada suhu 37˚C selama 30 menit untuk memblokir pengikatan non-spesifik. Bagian-bagian tersebut kemudian diinkubasi dengan antibodi primer berikut pada suhu 4˚C semalam: Kelinci poliklonal anti‑kolagen IV (1:100; Bioworld Biotechnology, Inc.; kucing. no. BS1072), kelinci poliklonal anti‑NLRP3 (1:100; Bioworld Biotechnology, Inc.; cat.no. BS90949) dan kelinci poliklonal anti‑TGF‑ 1 (1:100; Abcam; cat.no.ab92486).

Setelah inkubasi antibodi primer, bagian dipanaskan kembali hingga 37˚C selama 30 menit dan dicuci tiga kali dengan PBS. Kemudian, bagian-bagian tersebut diinkubasi dengan antibodi sekunder terkonjugasi IgG peroksidase-terkonjugasi domba anti-kelinci polimer (1:500; Affinity Biosciences; cat.no. S0001) pada suhu 37˚C selama 1 jam, kemudian dicuci tiga kali dengan PBS. Sel kemudian diinkubasi dengan DAB untuk menghasilkan pewarnaan coklat selama 30 detik, kemudian diwarnai dengan hematoxylin selama 3 menit baik pada suhu kamar dan ditutup dengan resin netral. Sel bernoda divisualisasikan di bawah mikroskop (Olympus IX71; perbesaran, x400).
Perangkat lunak Image‑Pro Plus digunakan untuk menganalisis tingkat ekspresi kolagen IV, TGF‑1 dan NLRP3 dalam tiga bidang pandang acak dari setiap bagian jaringan hati.


blotting Barat.

Total protein diekstraksi dari jaringan hati (n{{0}}) menggunakan buffer lisis RIPA (kucing no. P0013B; Beyotime Institute of Biotechnology) dan mesin penggiling cepat sampel otomatis (Jinxing Industrial Development Co.,Ltd .) pada 65 Hz selama 60 detik pada 4˚C. Total protein dihitung menggunakan alat uji protein BCA dan protein (20 µg) dipisahkan melalui 8-15 persen SDS/PAGE. Protein yang dipisahkan kemudian dipindahkan ke membran PVDF (MilliporeSigma) dan diblokir dengan 5 persen susu skim dalam buffer TBS‑0,05 persen Tween‑20 (TBST) selama 1 jam pada suhu kamar. Membran kemudian diinkubasi dengan antibodi primer berikut semalaman pada suhu 4˚C: Anti‑NLRP3 (1:1,000; Bioworld Biotechnology, Inc.; kucing. no. BS90949), anti‑ASC (1:1 ,000; BIOSS; cat.no.bs‑67412‑R), anti‑caspase‑1(1:1,000; Abcam; cat.no.ab1872), anti‑IL‑1 (1:500; Abcam;kucing.no.ab9722), anti‑NOX4 (1:1,000; Bioworld Biotechnology,Inc.; kucing.no.BS60435), anti‑p47phox (1:1,{ {40}}; Bioworld Biotechnology, Inc.; cat.no. BS4852), anti‑p22phox (1:1,000;Bioworld Biotechnology, Inc.; cat.no.BS60290), anti‑NF‑κB p65 (1:1,000; Wuhan Service Technology Co., Ltd.;

kucing. TIDAK. GB11142), anti‑fosforilasi (p)‑NF‑κB p65 (1:1,000; Wuhan Service Technology Co., Ltd.; cat.no.GB11142‑1) dan anti‑GAPDH (1:5 ,000; Biosains Afinitas; cat.no.AF7021).

Setelah inkubasi antibodi primer, membran dicuci dengan TBST tiga kali (10 menit setiap kali) dan diinkubasi dengan HRP‑conjugated goat anti‑rabbit IgG (1:10,000; Affinity Biosciences; cat.no. S 0001) dan goat anti‑mouse IgG (1:10.000 Affinity Biosciences; cat.no. S0002) antibodi sekunder selama 1 jam pada suhu kamar. Pita protein divisualisasikan menggunakan kit ECL (Bio‑Rad Laboratories, Inc.) dan Bioshine Chemi Imaging System (Q4600 Mini; Shanghai Bioshine Technology). Kepadatan optik masing-masing pita semi-kuantifikasi menggunakan perangkat lunak ImageJ 1.53a (National Institutes of Health) dan dinormalisasi menjadi ekspresi GAPDH.


Analisis statistik.

Semua data disajikan sebagai rata-rata ± SD dari Lebih dari atau sama dengan 3 percobaan independen. Perangkat lunak GraphPad Prism 8.0 (GraphPad Software, Inc.) digunakan untuk melakukan analisis statistik. ANOVA satu arah diikuti oleh uji post hoc Tukey dilakukan untuk membandingkan perbedaan antar kelompok. P< 0.05 was considered to indicate a statistically significant difference.


chinese herbs for liver aging

Hasil

Pengobatan Rg1 memperbaiki perubahan histopatologis hati pada hati tikus SAMP8. Hasil pewarnaan H&E mengungkapkan bahwa pada kelompok kontrol SAMR1, batas-batassitoplasma dan inti hepatosit jelas. Ituhepatosit disusun dalam tali dari vena sentral kedaerah sekitarnya, dan vakuola tetesan lemak adalah kesempatansekutu diamati. Dibandingkan dengan kelompok SAMR1, seldari kelompok SAMP8 tidak jelas, intitidak ada atau sangat ternoda dan terjepit ke satu sisi(panah hitam). Susunan hepatosit tidak normaldan tidak teratur dan sebagian besar sel menunjukkan seperti vakuola

chinese herbs for liver aging

chinese herbs for liver aging

image


Gambar 1. Efek pengobatan Rg1 terhadap perubahan histopatologi hati pada mencit SAMP8. (A) Pewarnaan hati H&E (Bilah skala, 100µm; Pembesaran, x200). Panah hitam menunjukkan bahwa sel-sel kelompok SAMP8 tidak terdefinisi dengan jelas, nuklei tidak ada atau ternoda dalam dan terjepit ke satu sisi. (B) Pewarnaan PAS pada hati (Scale bar, 50 µm; Pembesaran, x400). (C) Area pewarnaan PAS positif (dinormalisasi ke grup SAMR1). Data disajikan sebagai rata-rata ± SD; n=4. **P<0.01 vs. SAMR1; ##P<0.01 vs. SAMP8. SAMP8, senescence‑accelerated mouse prone 8; SAMR1, senescence‑accelerated resistant mouse 1; PAS, periodic acid‑Schiff; Rg1, Cistanche Glycoside Rg1. 


degenerasi pada kelompok SAMP8. Namun, kelompok perlakuan tempol (50 mg/kg), apocynin (50 mg/kg) dan Rg1 (5 dan 10 mg/kg) menunjukkan peningkatan yang nyata pada histopatologi hati dibandingkan dengan kelompok SAMP8 (Gbr. 1A). Hasil pewarnaan PAS juga menunjukkan bahwa hepatosit bernoda ringan, dengan distribusi area positif yang seragam di dalam sel pada kelompok SAMR1. Dibandingkan dengan kelompok SAMR1, akumulasi pewarnaan ungu positif pada hepatosit meningkat secara signifikan pada kelompok SAMP8, menunjukkan adanya cedera hepatosit yang signifikan pada tikus tua (Gbr. 1B dan C). Dibandingkan dengan kelompok SAMP8, akumulasi pewarnaan positif berkurang secara signifikan pada kelompok perlakuan tempol, apocynin dan Rg1 (5 dan 10 mg / kg) (Gbr. 1B dan C). Hasil ini menunjukkan bahwa Rg1 dapat secara signifikan memperbaiki kerusakan hati akibat penuaan pada tikus. Pengobatan Rg1 meredakan fibrosis hati pada tikus SAMP8. Ke

mengeksplorasi apakah Rg1 mengurangi fibrosis hati terkait penuaan, deposisi kolagen diukur dalam jaringan hati dengan menggunakan pewarnaan Masson. Hasilnya menunjukkan bahwa area biru positif meningkat secara signifikan pada jaringan hati kelompok SAMP8 dibandingkan dengan kelompok SAMR1 (Gambar 2A dan B). Namun, dibandingkan dengan kelompok model SAMP8, tingkat deposisi kolagen berkurang secara signifikan pada kelompok perlakuan tempol, apocynin dan Rg1 (5 dan 10 mg/kg) (Gbr. 2A dan B). Selain itu, tingkat ekspresi kolagen IV dan TGF‑1 diukur pada jaringan hati dengan menggunakan pewarnaan imunohistokimia.

Hasil pewarnaan kolagen IV mengungkapkan bahwa kolagen IV diekspresikan pada tingkat rendah di jaringan hati pada kelompok SAMR1 (Gbr. 3A dan C). Namun, dibandingkan dengan kelompok SAMR1,

tingkat ekspresi kolagen IV diregulasi secara signifikan pada kelompok SAMP8 (Gbr. 3A dan C). Sebaliknya, dibandingkan dengan kelompok SAMP8, pengobatan dengan tempol, apocynin, dan Rg1 (5 dan 10 mg/kg) secara signifikan menurunkan deposisi kolagen IV, terutama pada kelompok Rg1 (10 mg/kg) (Gambar 3A dan C). Selanjutnya, mirip dengan kolagen IV, ekspresi TGF-1 juga meningkat secara signifikan pada kelompok SAMP8 dibandingkan dengan kelompok SAMR1, dan menurun secara signifikan setelah pengobatan dengan tempol, apocynin dan Rg1 (5 dan 10 mg/kg), terutama pada Kelompok Rg1 (10 mg/kg) (Gbr. 3B dan D). Hasil ini menunjukkan bahwa penuaan dapat menyebabkan fibrosis jaringan hati, dan pengobatan tempol, apocynin, dan Rg1 dapat secara signifikan meningkatkan fibrosis jaringan hati selama penuaan.


Perawatan Rg1 mengurangi produksi ROS dan ekspresi NOX4 di hati tikus SAMP8. ROS merupakan faktor penting dalam perkembangan fifibrosis hati (41). Dalam penelitian ini, probe ROS, DHE, digunakan untuk mendeteksi tingkat produksi ROS di jaringan hati. Hasil penelitian menunjukkan adanya produksi ROS yang rendah pada jaringan hati kelompok SAMR1. Namun, dibandingkan dengan kelompok SAMR1, tingkat produksi ROS meningkat secara signifikan pada kelompok SAMP8 (Gambar 4A dan B), sedangkan dibandingkan dengan kelompok SAMP8, pengobatan tempol, apocynin dan Rg1 (5 dan 10 mg / kg) secara signifikan mengurangi tingkat produksi ROS di jaringan hati (Gbr. 4A dan B). Untuk mengkonfirmasi efek NOX4 pada akumulasi ROS selama penuaan, tingkat ekspresi protein terkait NOX4 dianalisis. Hasilnya menunjukkan bahwa, dibandingkan dengan kelompok SAMR1, tingkat ekspresi NOX4, p22phox dan p47phox dalam jaringan hati diregulasi secara signifikan pada kelompok SAMP8 (Gbr. 5A-D).

Namun, dibandingkan dengan kelompok SAMP8, pengobatan tempol, apocynin, dan Rg1 (5 dan 10 mg/kg), secara signifikan menurunkan regulasi tingkat ekspresi NOX4, p22phox, dan p47phox dalam jaringan hati selama penuaan (Gbr. 5A‑D). Data ini menunjukkan bahwa pengobatan Rg1 dapat memperbaiki cedera stres oksidatif yang diinduksi ROS pada jaringan hati dengan menghambat NOX4 selama penuaan pada tikus.



Anda Mungkin Juga Menyukai