Ekstrak Cistanche Deserticola Meningkatkan Pembentukan Tulang di Osteoblas
Mar 05, 2022
Kontak: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:{0}}
Te-Mao Lia, Hsin-Chih Huangb, Chen-Ming Suc, Tin-Yun Hoa, Chi-Ming Wua, Wen-Chi Chend, Yi-Chin Fonga,edan Chih-Hsin Tangf,c
Abstrak
Tujuan:Kami menyelidiki efek dariCistanche deserticola Ma. (CD) pada pembentukan tulang oleh osteoblas yang dikultur.MetodeUji pembentukan nodul termineralisasi digunakan untuk memeriksa efek in-vitro CD pada pembentukan tulang. Alkaline phosphatase (ALP), bone morphogenetic protein (BMP)-2, dan ekspresi mRNA osteopontin (OPN) dianalisis dengan reaksi berantai polimerase waktu nyata kuantitatif. Mekanisme kerja ekstrak CD diselidiki menggunakan Western blotting. Efek anti-osteoporosis in-vivo dari ekstrak CD dinilai pada tikus yang diovariektomi.Temuan UtamaEkstrak CD tidak berpengaruh pada proliferasi, migrasi atau penyembuhan luka dari kultur osteoblas, tetapi meningkatkan ALP, BMP-2, dan OPN mRNA dan mineralisasi tulang. Penghambat protein kinase (MAPK) atau faktor nuklir (NF)-kB yang diaktifkan oleh mitogen mengurangi pembentukan tulang yang diinduksi ekstrak CD dan ekspresi ALP, BMP-2, dan OPN. Namun, ekstrak CD tidak mempengaruhi osteoklastogenesis. Selain itu, ekstrak CD mencegah pengeroposan tulang yang disebabkan oleh ovariektomi in vivo.KesimpulanCD mungkin merupakan agen pembentukan tulang baru untuk pengobatan osteoporosis.
pengantar
Tulang adalah jaringan kompleks yang terdiri dari beberapa jenis sel yang mengalami proses pembaruan dan perbaikan terus-menerus yang disebut 'remodeling tulang'. Dua jenis sel utama yang bertanggung jawab untuk remodeling tulang adalah osteoklas, yang menyerap tulang, dan osteoblas, yang membentuk tulang baru. Remodeling tulang diatur oleh beberapa hormon sistemik (misalnya hormon paratiroid, 1, 25-hidroksivitamin D3, hormon seks, dan kalsitonin) dan faktor lokal (misalnya oksida nitrat, prostaglandin, faktor pertumbuhan, dan sitokin).[1]
Osteoporosis terjadi ketika resorpsi dan pembentukan tulang tidak terkoordinasi dan pemecahan tulang yang berlebihan melebihi pembentukan tulang.[2] Perawatan terkini untuk osteoporosis termasuk bifosfonat, kalsitonin, dan estrogen, yang merupakan penghambat resorpsi tulang yang mempertahankan massa tulang dengan menghambat aktivitas osteoklas.[3] Namun, efek obat ini dalam meningkatkan atau memulihkan massa tulang relatif kecil, tentu tidak lebih dari 2 persen per tahun.[3] Oleh karena itu, ada kebutuhan akan bahan pembentuk tulang, seperti teriparatide, yang merangsang pembentukan tulang baru dan mengoreksi perubahan mikroarsitektur trabekular yang merupakan karakteristik dari osteoporosis yang sudah mapan.[4,5] Karena pembentukan tulang baru terutama merupakan fungsi dari tulang. osteoblas, agen-agen yang bekerja dengan meningkatkan proliferasi sel-sel garis keturunan osteoblastik atau menginduksi diferensiasi osteoblas dapat meningkatkan pembentukan tulang.[5,6]
Meskipun mekanisme osteoporosis masih belum jelas, mereka kemungkinan terkait dengan penurunan ketersediaan atau efek faktor pertumbuhan tulang, seperti protein morfogenetik tulang (BMP).[7] BMP, yang secara struktural terkait dengan superfamili faktor pertumbuhan-b transformasi, awalnya diidentifikasi oleh kapasitasnya untuk menginduksi pembentukan tulang ektopik pada hewan pengerat. BMP memainkan peran penting dalam pembentukan tulang dan diferensiasi sel tulang dengan merangsang aktivitas alkaline phosphatase (ALP) serta sintesis proteoglikan, kolagen, dan osteopontin (OPN).[9] Sebuah studi baru-baru ini menemukan hubungan antara osteoporosis dan polimorfisme spesifik pada gen BMP-2, ALP, dan OPN, menunjukkan bahwa mereka terkait dengan perkembangan osteoporosis.[10]
Cistanche deserticola Ma.(Orobanchaceae; disingkat CD) adalah ramuan asli di Cina dan banyak digunakan dalam pengobatan tradisional sebagai agen terapi karena sifat sedatif, analgesik, dan imunostimulan. Studi farmakologi modern telah menunjukkan bahwa ekstrak CD dapat merangsang kekebalan,[12] mengais radikal bebas[13], dan meningkatkan aktivitas superoksida dismutase.[14] Agen anti-inflamasi dan anti-oksidan memiliki potensi untuk mengobati osteoporosis dengan meningkatkan pembentukan tulang dan/atau menekan resorpsi tulang.[15,16] Namun, efek CD pada fungsi sel tulang belum ditentukan. Di sini, kami melaporkan bahwa ekstrak CD tidak mempengaruhi proliferasi, migrasi, atau aktivitas penyembuhan luka dari osteoblas yang dikultur, tetapi meningkatkan ekspresi ALP, BMP-2, dan OPN serta mineralisasi tulang. Selain itu, kami menunjukkan bahwa jalur pensinyalan protein kinase yang diaktifkan mitogen (MAPK) dan faktor nuklir (NF) -kB mungkin terlibat dalam peningkatan ekspresi gen dan mineralisasi tulang yang dimediasi CD. Sebaliknya, ekstrak CD tidak menekan osteoklastogenesis in vitro. Khususnya, pengobatan tikus dengan ekstrak CD mencegah keropos tulang yang disebabkan oleh ovariektomi in vivo. Oleh karena itu, data kami menunjukkan bahwa CD dapat digunakan untuk merangsang pembentukan tulang untuk pengobatan osteoporosis.
Cistanche deserticola
Bahan dan metode
Ekstrak dan bahan Cistanche deserticola
Ekstrak CD dibeli dari Perusahaan Farmasi Chuang Song-Zong (Kaohsiung, Taiwan). Ekstraksi dan isolasi CD diikuti seperti yang dijelaskan sebelumnya (berdasarkan data spektral mereka telah mengidentifikasi komposisi kimia termasuk beta-sitosterol, daucosterol, asam suksinat, triacontanol, acteoside, betaine, dan polisakarida).[17] Antibodi poliklonal kelinci yang spesifik untuk p-extracellular signal-regulated kinases (ERK), ERK, p-p38, p38, pc-Jun N-terminal kinases (JNK), JNK, p-p65, dan p65 dibeli dari Santa Cruz Biotechnology ( Santa Cruz, AS). Kit ELISA osteocalcin dibeli dari Biosource Technology (Nivelles, Belgia). Telopeptida terminal-C dari kit ELISA kolagen tipe-I diperoleh dari Cross Laps (Herlev, Denmark). Mutan dominan-negatif p38 disediakan oleh Dr. J. Han (South-Western Medical Center, Dallas, USA). Mutan dominan-negatif JNK disediakan oleh Dr. M. Karin (University of California, San Diego, USA). Mutan dominan-negatif ERK2 disediakan oleh Dr. M. Cobb (Pusat Medis Barat Daya). Semua reagen lainnya diperoleh dari Sigma-Aldrich (St Louis, USA).
Budaya sel
Garis sel osteoblas murine MC3T3-E1 dibeli dari American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, USA). Sel dikultur dalam 95 persen udara, 5 persen CO2 dengan a-MEM yang dilengkapi dengan 20 mm HEPES dan 10 persen serum janin anak sapi yang tidak diaktifkan panas, 2 mm-glutamin, penisilin (100 U/ml), dan streptomisin (100 mg /ml).
Pengukuran pembentukan nodul termineralisasi
Pembentukan nodul termineralisasi dievaluasi seperti yang dijelaskan. Singkatnya, osteoblas dikultur dalam media yang mengandung vitamin C (50 mg/ml) dan b-gliserofosfat (10 mm) selama dua minggu, dan media diganti setiap tiga hari. Setelah diinkubasi dengan ekstrak CD selama 12 hari, sel dicuci dua kali dengan larutan garam tris-buffered 20 mm yang mengandung
0.15 m NaCl (pH 7,4), difiksasi dalam etanol 75 persen (v/v) dingin selama 30 menit, dan dikeringkan di udara. Deposisi kalsium ditentukan dengan pewarnaan alizarin red-S. Secara singkat, sel dan matriks yang difiksasi etanol diwarnai selama 1 jam dengan alizarin red-S 40 mm (pH 4.2) dan dibilas secara ekstensif dengan air. Noda terikat dielusi dengan 10 persen (b/v) setilpiridinium klorida, dan alizarin red-S dalam sampel diukur dengan mengukur absorbansi pada 550 nm dan dibandingkan dengan kurva standar. Satu mol alizarin red-S secara selektif mengikat sekitar dua mol kalsium.
Reaksi berantai polimerase real-time kuantitatif
Total RNA diekstraksi dari osteoblas menggunakan kit TRIzol (MDBio Inc., Taipei, Taiwan). Transkripsi terbalik dilakukan menggunakan 2 mg total RNA dan primer oligo(dT). [19,20] Reaksi rantai polimerase waktu nyata kuantitatif (qPCR) dilakukan menggunakan TaqMan® satu langkah PCR Master Mix (Applied Biosystems, Carlsbad, AMERIKA SERIKAT). Total cDNA ditambahkan (100 ng per 25-ml reaksi) dengan primer urutan-spesifik dan probe Taqman®. Semua primer dan probe gen target dibeli secara komersial, termasuk b-aktin sebagai kontrol internal (Biosistem Terapan). uji qPCR dilakukan dalam rangkap tiga pada sistem deteksi urutan StepOnePlus (Biosistem Terapan). Kondisi bersepeda adalah 10-min aktivasi polimerase pada 95 derajat diikuti oleh 40 siklus 95 derajat selama 15 detik dan 60 derajat selama 60 detik. Ambang ditetapkan di atas latar belakang kontrol non-templat dan dalam fase linier amplifikasi gen target untuk menghitung nomor siklus di mana transkrip terdeteksi (dilambangkan CT).
Analisis Western blot
Lysates sel disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya. [21,22] Protein diselesaikan dengan SDS-PAGE dan dipindahkan ke membran Immobilon polivinil difluorida (Millipore, Billerica, USA). Bercak diblokir dengan 4 persen albumin serum sapi selama 1 jam pada suhu kamar dan kemudian diperiksa dengan antibodi anti-manusia kelinci terhadap p-65, atau p-p65 (1: 1000) selama 1 jam pada suhu kamar. Setelah tiga kali pencucian, noda diinkubasi dengan antibodi sekunder anti-kelinci keledai terkonjugasi peroksidase (1: 1000) selama 1 jam pada suhu kamar. Bercak divisualisasikan dengan peningkatan chemiluminescence menggunakan film X-OMAT LS (Eastman Kodak, Rochester, USA).
Ovariektomi yang diinduksi osteoporosis
Tikus ICR betina, berumur empat minggu, 22~28 g, digunakan untuk penelitian ini. Tikus diovariektomi secara bilateral di bawah anestesi trikloroasetaldehid (100 mg/kg) dan tikus kontrol dioperasi palsu (Sham) untuk perbandingan. Kepadatan mineral tulang dan kandungan mineral tulang diukur setelah pemberian oral berbagai konsentrasi ekstrak CD setiap dua hari selama empat minggu. Kepadatan mineral tulang tubuh total dan kandungan mineral tulang ditentukan oleh absorptiometer sinar-X energi ganda (DEXA; XR-26; Norland, Fort Atkinson, USA) menggunakan mode untuk subjek kecil seperti yang dijelaskan sebelumnya.[18, 23] Semua protokol mematuhi pedoman kelembagaan dan disetujui oleh Komite Perawatan Hewan Universitas Kedokteran China.
Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak Prism 4.01. (GraphPad Software Inc., San Diego, AS). Nilai yang diberikan adalah mean ± SEM. Analisis statistik antara dua sampel dilakukan dengan menggunakan uji-t Student. Perbandingan statistik lebih dari dua kelompok dilakukan dengan menggunakan analisis varians satu arah dengan uji posthoc Bonfer- Roni. Dalam semua kasus, P <0,05 dianggap="">
Ekstrak Cistanche deserticola
Hasil
Ekstrak Cistanche deserticola meningkatkan mineralisasi tulang oleh osteoblas
Penambahan ekstrak CD selama 24 atau 48 jam tidak mempengaruhi proliferasi sel osteoblas tikus MC3T3-E1 dalam uji MTT (data tidak ditampilkan). Karena diferensiasi osteoblas adalah proses kompleks yang melibatkan proliferasi dan migrasi sel, kami juga menguji kemampuan migrasi sel MC3T3-E1 setelah pengobatan dengan ekstrak CD. Menggunakan uji transwell dan penyembuhan luka, kami menemukan bahwa ekstrak CD tidak mempengaruhi migrasi osteoblas (data tidak ditampilkan). Pembentukan nodul termineralisasi adalah salah satu penanda pematangan osteoblas. Pewarnaan alizarin red S menunjukkan bahwa nodul termineralisasi terbentuk ketika osteoblas dikultur selama dua minggu dalam media yang mengandung vitamin C (50 mg/ml) dan b-gliserofosfat (10 mm), dan ini meningkat dengan cara yang bergantung pada konsentrasi dengan penambahan CD (Gambar 1a). Oleh karena itu, ekstrak CD menginduksi pembentukan nodul tulang oleh osteoblas yang dikultur, tetapi bukan proliferasi atau migrasinya. Kami juga memeriksa peran ekstrak CD dalam osteoklastogenesis yang diinduksi RANKL tetapi tidak menemukan efek (data tidak ditampilkan).
Ekstrak Cistanche deserticola meningkatkan alkaline phosphatase, protein morfogenetik tulang-2, dan ekspresi osteopontin dalam osteoblas yang dikultur
Osteoblas yang berdiferensiasi menunjukkan aktivitas ALP yang meningkat, yang berkorelasi dengan tingkat ekspresi enzim yang tinggi.[18] Kami menemukan bahwa pengobatan dengan ekstrak CD selama 72 jam secara signifikan meningkatkan aktivitas ALP osteoblas (Gambar 1b). Mengingat peran penting BMP-2, ALP, dan OPN dalam diferensiasi osteoblas, kami menguji apakah ekstrak CD memberikan efeknya pada diferensiasi osteoblas dengan mengatur ekspresi BMP-2, ALP, dan OPN. Pengobatan sel dengan ekstrak CD meningkatkan ekspresi mRNA dari ALP, BMP-2, dan OPN dengan cara yang bergantung pada konsentrasi (Gambar 1c), menunjukkan bahwa ekstrak CD menginduksi diferensiasi osteoblas dengan meningkatkan regulasi ALP, BMP-2 , dan ekspresi OPN.
Ekstrak Cistanche deserticola meningkatkan pembentukan nodul tulang melalui jalur protein kinase yang diaktifkan mitogen
Telah dilaporkan bahwa MAPK memainkan peran penting dalam pembentukan tulang [24,25] jadi kami selanjutnya memeriksa apakah jalur pensinyalan ini terlibat dalam mineralisasi tulang yang diinduksi ekstrak CD. Pretreatment sel dengan ERK inhibitor U0126, p38 inhibitor SB203580, atau JNK inhibitor SP600125 mengurangi mineralisasi tulang yang meningkatkan ekstrak CD (Gambar 2a, 3a, dan 4a). Selanjutnya, inhibitor juga memblokir ekspresi ALP, BMP{12}} yang diinduksi ekstrak CD, dan OPN (Gambar 2b–4c). Transfeksi sel dengan mutan ERK2, p38, atau JNK mengurangi peningkatan ekstrak CD dalam ekspresi ALP, BMP-2, dan OPN mRNA (Gambar 2c, 3c, dan 4c). Selanjutnya, kami langsung memeriksa aktivasi ERK, p38, dan JNK setelah perawatan ekstrak CD. Inkubasi sel dengan ekstrak CD menginduksi fosforilasi ERK, p38, dan JNK (Gambar 2d, 3d, dan 4d). Oleh karena itu, ERK, p38, dan JNK memediasi peningkatan pembentukan tulang yang diinduksi oleh pengobatan CD osteoblas.
Ekstrak Cistanche deserticola meningkatkan pembentukan nodul tulang melalui jalur faktor-kB nuklir
Seperti disebutkan sebelumnya, aktivasi NF-kB diperlukan untuk pembentukan tulang. [26,27] Kami selanjutnya merawat osteoblas dengan inhibitor NF-kB pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) dan N-tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) dibeli dari Calbiochem (Darmstadt, Jerman) untuk menentukan apakah aktivasi NF-kB terlibat dalam mineralisasi tulang yang diinduksi ekstrak CD. Gambar 5a menunjukkan bahwa perlakuan awal osteoblas dengan PDTC atau TPCK menghambat pembentukan nodul tulang yang diinduksi ekstrak CD dan juga mengurangi peningkatan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN (Gambar 5b dan 5c). Fosforilasi subunit NF-kB p65 merupakan indikator aktivasi NF-kB;[28] konsisten dengan ini, kami menemukan bahwa ekstrak CD meningkatkan fosforilasi p65 dalam osteoblas (Gambar 5d). Hasil ini menunjukkan bahwa aktivasi NF-kB penting untuk ekspresi CD yang diinduksi ekstrak CD, BMP-2, dan OPN serta pembentukan nodul tulang.
Penghambatan pengeroposan tulang oleh ekstrak Cistanche deserticola pada tikus yang diovariektomi
Untuk menguji pengaruh ekstrak CD pada pengeroposan tulang, osteoporosis diinduksi pada tikus betina dengan ovariektomi. Seperti yang diharapkan, tikus yang diovariektomi menunjukkan penurunan kepadatan mineral tulang tubuh total dan kandungan mineral tulang (Gambar 6a dan 6b). Pengobatan dengan ekstrak CD selama empat minggu menghambat hilangnya kepadatan mineral tulang dan kandungan mineral tulang dengan cara yang bergantung pada dosis (Gambar 6a dan 6b). Konsentrasi darah ALP dapat mencerminkan aktivitas osteoblastik. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 6c, ekstrak CD menghambat penurunan aktivitas ALP serum yang disebabkan oleh ovariektomi. Selain itu, ekstrak CD juga meningkatkan kadar osteokalsin, penanda pembentukan tulang, dan menurunkan kadar telopeptida terminal-C dari kolagen tipe-I, penanda resorpsi tulang (Gambar 6d dan 6e). Temuan ini dengan demikian mendukung potensi dan kemanjuran ekstrak CD dalam mencegah keropos tulang in vivo.
Diskusi
Cistanche deserticolaMa, ramuan asli di Cina, banyak digunakan dalam pengobatan tradisional untuk berbagai perawatan terapeutik karena aktivitas penenang, analgesik, dan imunostimulasinya. tidak mempengaruhi migrasi atau proliferasi sel mereka. Selain itu, kami menemukan bahwa ALP, BMP-2, dan OPN adalah protein target dari pensinyalan yang diinduksi ekstrak CD, yang memerlukan aktivasi ERK, p38, JNK, dan NF-kB.
Tulang adalah jaringan kompleks yang terdiri dari beberapa jenis sel yang terus menerus mengalami proses pembaruan dan perbaikan.[30] Ketika resorpsi dan pembentukan tulang tidak seimbang, kerusakan tulang menimpa pembentukan tulang dan mengakibatkan osteoporosis.[30] Kami menggunakan tikus ovariektomi untuk menguji efek anti-osteoporosis dari ekstrak CD. Tikus ovariektomi telah mengurangi kepadatan mineral tulang tubuh total dan kandungan mineral tulang, yang dikurangi dengan pengobatan dengan ekstrak CD. Ekstrak CD juga meningkatkan kadar serum penanda osteogenik ALP dan osteocalcin. Oleh karena itu, CD adalah agen pembentukan tulang yang mencegah pengeroposan tulang yang disebabkan oleh ovariektomi in vivo.
Meskipun mekanisme osteoporosis tidak sepenuhnya jelas, kemungkinan besar terkait dengan penurunan ketersediaan, atau penurunan efek, faktor pertumbuhan tulang, seperti ALP, BMP-2 dan OPN. Ketiga faktor ini memainkan peran penting dalam proses pembentukan dan remodeling tulang,[31] dan telah didokumentasikan dengan baik bahwa stimulasi diferensiasi sel osteoblas ditandai terutama oleh peningkatan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN.[32 ] Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa ekstrak CD meningkatkan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN dan meningkatkan mineralisasi tulang. Oleh karena itu, ekstrak CD memediasi pembentukan tulang sebagian dengan mengatur ekspresi ALP, BMP-2, dan OPN.
Telah dilaporkan bahwa p38 terlibat dalam regulasi ekspresi ALP selama diferensiasi sel-sel osteoblastik;[33] sama halnya, ERK1/2 penting untuk proliferasi dan diferensiasi osteoblas.[34,35] JNK terlibat dalam pembentukan osteoklas. .[36] Kami menunjukkan di sini bahwa ekstrak CD menginduksi fosforilasi ERK, p38 dan JNK, dan penghambat enzim-enzim ini menentang potensiasi mineralisasi tulang yang dimediasi ekstrak CD, menunjukkan bahwa aktivasi ERK, p38 dan JNK memainkan peran wajib dalam pembentukan tulang yang diinduksi ekstrak CD oleh osteoblas. Selain itu, penghambat enzim dan mutan dominan-negatif ERK, p38 dan JNK mengurangi ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN yang ditingkatkan ekstrak CD. Data ini menunjukkan bahwa aktivasi jalur ERK, p38 dan JNK diperlukan untuk peningkatan ekspresi dan pematangan ALP, BMP-2 dan OPN yang disebabkan oleh ekstrak CD dalam osteoblas. ERK telah dilaporkan meningkatkan proliferasi dan diferensiasi osteoblas.[34,35] Namun, kami tidak mendeteksi efek ekstrak CD pada proliferasi osteoblas. Oleh karena itu, jalur lain mungkin menetralkan efek ERK setelah stimulasi ekstrak CD, atau diperlukan untuk proliferasi. Dalam hal ini, kami telah menemukan bahwa PI3K dan Akt inhibitor juga mengurangi mineralisasi tulang yang diinduksi ekstrak CD dan ekspresi mRNA ALP, BMP-2 atau OPN (data tidak ditampilkan). Oleh karena itu, jalur ini mungkin diperlukan untuk pembentukan tulang yang diinduksi ekstrak CD.
NF-kB telah terbukti mengontrol fungsi osteoblas dalam tulang.[37] Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivasi NF-kB berkontribusi pada mineralisasi tulang yang diinduksi ekstrak CD dan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN dalam osteoblas yang dikultur dan bahwa penghambat jalur pensinyalan yang bergantung pada NF-kB (PDTC dan TPCK ) menghambat mineralisasi tulang yang diinduksi ekstrak CD dan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN. p65 terfosforilasi pada Ser536 oleh berbagai kinase di beberapa jalur pensinyalan, yang meningkatkan potensi transaktivasi p65.[38] Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak CD meningkatkan fosforilasi p65. Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa aktivasi NF-kB diperlukan untuk pembentukan tulang yang diinduksi ekstrak CD dalam osteoblas yang dikultur. Kami juga menemukan bahwa ERK, p38 dan JNK inhibitor membalikkan aktivitas NF-kB luciferase yang diinduksi ekstrak CD (data tidak ditampilkan), konsisten dengan enzim ini menjadi mediator hulu dari aktivasi NF-kB yang diinduksi ekstrak CD. Oleh karena itu, ekstrak CD menginduksi pembentukan tulang melalui jalur ERK/p38/JNK/ dan NF-kB.
Kesimpulan
Studi ini menunjukkan bahwa ekstrak CD menginduksi diferensiasi dan pematangan osteoblas tetapi tidak proliferasi atau migrasi. Ekstrak CD juga meningkatkan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN serta mineralisasi tulang. Kami menunjukkan bahwa jalur ERK, p38, JNK dan NF-kB terlibat dalam pembentukan tulang yang dimediasi ekstrak CD dan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN. Lebih lanjut, ekstrak CD mencegah keropos tulang in-vivo yang disebabkan oleh ovariektomi. Oleh karena itu, CD mungkin bermanfaat dalam merangsang pembentukan tulang dalam pengobatan penyakit osteoporosis.
