Komposisi Kimia Cistanche Pengobatan Cina Dan Analisis Komponen Dalam Tubuh Ⅲ

Bab 3 Analisis kuantitatif komponen multi-komponen Cistanche deserticola berdasarkan RPLC-HILIC-MS/MS

Komposisi kimia obat tradisional Tiongkok sangat kompleks dan mengandung berbagai senyawa seperti metabolit primer dan sekunder [55-561. Mencapai analisis yang komprehensif dan andal terhadap komponen kimia pengobatan tradisional Tiongkok (termasuk komponen hidrofilik dan hidrofobik) masih menjadi masalah teknis utama. Selain itu, kandungan setiap komponen dalam pengobatan tradisional Tiongkok sangat bervariasi, dan metode spektrometri massa cair konvensional sulit untuk secara akurat mengukur komponen utama dan komponen jejak pada saat yang bersamaan. 1571 Pemisahan satu kolom secara tradisional tidaklah cukup, dan analisis senyawa jejak dalam pengobatan tradisional Tiongkok akan dibatasi oleh konstanta. Karena interferensi senyawa, fenomena tumpang tindih puncak menjadi serius. Meskipun berbagai teknik kromatografi tingkat lanjut telah digunakan untuk meningkatkan pemisahan matriks kompleks, seperti kolom kromatografi partikel inti-kulit dan submikron, kolom kromatografi interaksi hidrofilik, dll., masih merupakan tantangan untuk mencapai pemisahan komprehensif berbagai senyawa menggunakan a satu kolom [58 -59. Kromatografi multi-kolom yang menggabungkan setidaknya dua mekanisme kromatografi ortogonal, seperti LC dua dimensi, LC peralihan kolom, dan LC dua kolom tandem, telah dianggap sebagai alat yang layak yang dapat memperluas cakupan metabolit secara signifikan. Tidak ada keraguan bahwa LC dua dimensi dan LC pengalih kolom dapat meningkatkan kapasitas puncak secara signifikan (160). Namun, kedua metode ini bergantung pada katup, instrumentasinya rumit, dan memakan waktu, serta tabung penghubung dan regulator mudah dipasang. Residu memang ada, dan kedua metode ini cenderung menimbulkan serangkaian faktor ketidakpastian yang menyebabkan irreprodusibilitas kuantitatif1571. Meskipun kromatografi interaksi hidrofilik fase terbalik-tandem (RPLC-HILIC) tidak dapat meningkatkan kapasitas puncak secara signifikan, namun peralatan instrumennya sederhana, tidak ada residu pada tabung penghubung dan regulator, serta masih dapat mewujudkan perubahan dari hidrofilik menjadi hidrofobik. Retensi komprehensif sejumlah besar senyawa polar luas [61-66. Selain itu, mode pemantauan reaksi ganda (MRM) yang unik pada spektrometer massa triple quadrupole (QgQ) dapat digunakan sebagai dimensi pemisahan lain untuk lebih meningkatkan kemampuan pemisahan RPLC-HILIC. Singkatnya, RPLC-HILIC-MRM mengintegrasikan keunggulan yang melekat pada RPLC, HILIC dan MRM dan diharapkan menjadi metode analisis yang andal.

BERAPA LAMA YANG DIPERLUKAN UNTUK CISTANCHE BEKERJA?

Kandungan masing-masing komponen pengobatan tradisional Tiongkok sangat bervariasi. Dibandingkan dengan komponen utama, masyarakat lebih memperhatikan pengembangan metode yang lebih sensitif untuk menyelesaikan deteksi senyawa jejak atau bahkan senyawa ultra-jejak ini. Mode MRM sering direkomendasikan karena sensitivitasnya yang sangat baik dan rentang dinamis linier yang baik167. Namun, dan karena kejenuhan perkalian elektron terminal pada ruang Q3 spektrometer massa QqQ, rentang linier biasanya menyempit, dan batas atas kuantifikasi (ULOQ) tidak dapat sepenuhnya mencakup kandungan beberapa senyawa utama tanpa pemantauan yang andal. komponen jejak ini. Oleh karena itu, menekan produksi ion produk dapat memperluas ULOO. Menggunakan parameter senyawa yang dilemahkan seperti pasangan ion,depotensial(DP) danenergi tumbukan(CE) dapat mengurangi jumlah ion produk target dan dengan demikian memperluas ULOQ[68-69]

Pengobatan tradisional TiongkokCistanches Herbaadalah batang berdaging kering dengan daun bersisikTanaman Cistanches. Ini adalah salah satu obat tradisional Tiongkok yang umum digunakan dan dikenal sebagai "ginseng gurun". Glikosida feniletanoid selalu menjadi topik penelitian hangat di Cistanche deserticola, namun dalam beberapa tahun terakhir, efek farmakologis dari komponen hidrofilik lainnya seperti manitol juga telah diketahui dengan baik! 70-721. Namun, dalam analisis kuantitatif CH rutin kami, kandungan komponen utama sepertiechinaceaside,verbascoside, dan manitol terkadang terlalu tinggi untuk melebihi rentang pengukuran detektor UV atau detektor hamburan cahaya evaporatif (ELSD). Oleh karena itu, dari perspektif evaluasi kualitas secara keseluruhan, penting untuk menetapkan metode analisis yang dapat memantau komponen hidrofilik dan hidrofobik secara bersamaan dan secara akurat mengukur komponen utama dan komponen jejak.

Eksperimen dalam bab ini menetapkan metode andal yang cocok untuk menganalisis matriks kompleks - spektrometri massa cair RPLC-HILIC-MS/MS (kromatografi interaksi fase-hidrofilik berpasangan terbalik-spektrometri massa tandem), yang mencapai deteksi 23 polaritas di Cistanche deserticola . Pemisahan, analisis, dan penentuan kandungan berbagai macam senyawa secara bersamaan (mencakup komponen hidrofilik dan hidrofobik); saat menggunakan mode SMRM untuk memastikan reproduktifitas metode ini, menggunakan nilai CE yang sesuai dan pasangan ion yang berbeda untuk memperluas kerucut pinus. ULOQ komponen utama seperti inulin dan verbascoside memungkinkan kuantifikasi simultan komponen utama dan komponen jejak di Cistanche deserticola, memberikan a alat yang layak untuk meningkatkan kendali kualitas Cistanche deserticola dan membantu mencapai metabolisme tanaman yang ditargetkan secara luas. Genomik.

Bagian 1 Bahan Percobaan

1. Instrumen

Spektrometer massa cair HPLC-Qtap-MS dilengkapi dengan Shimadzu HPLC (dilengkapi dengan 2 pompa LC-20ADxR, sampler otomatis SIL-20ACxR, detektor UV SPD-M20A, CTO-20AC termostat, DGU-20degassing online A3R Terdiri dari mesin, pengontrol CBM-20A, Shimadzu Corporation, Jepang) dan spektrometer massa SCIEX5500 Qtrap (sumber ion ESI, SCIEX, Foster City, CA, AS) . Akuisisi dan perhitungan data diselesaikan oleh perangkat lunak Analyst Software1.6.2. Sistem pemurnian air ultra murni Mili-Q (Milipore Company, AS), timbangan analitik elektronik Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Swiss), ekstraktor ultrasonik (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, AS).

2. Bahan dan reagen

Kolom Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm), kolom Waters XBridge Amide (4,6mmx150mm, 3,5 μm).Polietereterketon(PEEK) pipa (Agilent Company, USA). Metanol tingkat kromatografi dan tingkat spektrometri massa, asetonitril, dan asam format tingkat spektrometri massa dibeli dari ThermoFisher (Pittsburgh, PA, USA), dan airnya adalah air ultra murni Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA) yang dibuat di laboratorium . Niacin (asam nikotinat, cLogP, 0.799), asam suksinat (cLogP, -0.526) dibeli dari Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, USA): uridine (cLogP, -2.219), adenoid Adenosin (cLogP, -2.158), inosin (cLogP, {{10}}.106) dan guanosin (cLogP , -3.326) dibeli dari Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidroside (cLogP -0.296), 6-deoxycatalpol (cLogP, -3.071), fenilalanin (cLogP, -1.556), 8-asam epi-loganat (cLogP , -2.366), manitol (cLogP, -2.046), sukrosa (cLogP , -3.087), gluroside (cLogP, -1.757), alaschanioside A (alaschanioside A, cLogP -0.971 ), echinacoside (echinacoside, cLogP, -1 .811), asam ferulic (cLogP, 1.421), acteoside (cLogP, -0.890), isoacteoside (cLogP, -0.057) dan Pinoresinol- -D-glucopyranoside (cLogP, -0.384) disediakan oleh Laboratorium Kunci Obat Alami dan Biomimetik Universitas Peking, cistanoside F (cistanoside F, cLogP, -2.211) Dibeli dari Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanoside A (cistanoside A, cLogP, -1.365), 2'-acetylacteoside (cLogP, -0.040) dan liquiritin apioside (cLogP , -0.267) dibeli dari Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., dan tubuloside A (tubulosideA, cLogP, 0,287) dibeli dari Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. Kemurnian semua zat referensi diuji oleh HPLC-DAD-IT-TOF-MS, dan kemurniannya lebih besar dari 98%. Semua nilai cLogP zat kontrol dihitung dengan perangkat lunak ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, MA, USA).