Ditandai dengan Penurunan Fungsi Fisiologis dalam Sistem Organ Individu

Silakan hubungi oscar.xiao@wecistanche.com untuk informasi lebih lanjut

RINGKASAN

Teh hitam adalah minuman teh yang paling banyak dikonsumsi di dunia dan secara konsisten dilaporkan memiliki manfaat anti-penuaan. Namun, apakah theaflavin, salah satu jenis fitokimia karakteristik dalam ekstrak teh hitam, terlibat dalam mengatur penuaan dan umur pada konsumen sebagian besar masih belum diketahui. Dalam penelitian ini, kami menunjukkan bahwa theaflavin memainkan peran yang bermanfaat dalam mencegah kebocoran usus dan disbiosis akibat penuaan, sehingga menunda penuaan pada Drosophila. Secara mekanis, theaflavin mengatur perakitan kondensat Imd untuk secara negatif mengatur overaktivasi sinyal Imd di usus lalat buah. Selain itu, theaflavin mencegah kolitis yang diinduksi DSS pada tikus, menunjukkan bahwa theaflavin berperan dalam memodulasi integritas usus. Secara keseluruhan, penelitian kami mengungkapkan mekanisme molekuler dimana theaflavin mengatur homeostasis usus kemungkinan melalui pengendalian koalesensi Imd.

Silakan klik di sini untuk tahu lebih banyak

PENGANTAR

Penuaan, ditandai dengan penurunan fungsi fisiologis dalam sistem organ individu dan peningkatan risiko penyakit dan kematian, melibatkan akumulasi kerusakan pada molekul, sel, dan jaringan (Alavez et al., 2011; Bartke et al., 2019; Engeet al., 2017). Identifikasi bahan fungsional atau bahan kimia yang mencegah kerusakan biologis untuk menunda proses penuaan dan memperpanjang umur tidak diragukan lagi sangat penting (Bar-ardo et al., 2017; Kapahi et al., 2017). Penelitian sebelumnya telah melaporkan bahwa teh hitam, teh yang paling banyak dikonsumsi di dunia, memiliki aktivitas signifikan yang menunda penuaan (Cameron et al.,2008; Fei et al.,2017; Kumar dan Rizvi, 2017; Naumovski et al.,2019 ; Peng dkk.,2009; Xiao dkk.,2020). Suplementasi diet dengan ekstrak teh hitam secara efisien memperpanjang umur hewan percobaan seperti cacing (Feet al., 2017), lalat buah (Peng et al., 2009; Site al., 2011), tikus (Site al., 2011 ; Xiao et al., 2020), dan tikus (Kumar dan Rizvi, 2017).

Diketahui bahwa ekstrak teh hitam terutama mengandung dua jenis fitokimia, yaitu katekin dan theaflavin (TFs) (Cameron et al.,2008; Kondo et al.,2019; Li et al.,2013), yang terakhir di antaranya diproduksi dari katekin oleh polifenol oksidase endogen dan peroksidase selama proses oksidasi dalam produksi teh hitam (Li et al., 2013). Serangkaian penelitian telah mengidentifikasi peran antipenuaan katekin melalui peningkatan stres oksidatif dan peradangan terkait usia dan mengurangi kerusakan jaringan (Cameron et al.,2008; Niu et al.,2013; Peng et al.,2009; Si et al. .2011; Waaner dkk., 2015). Namun, studi fungsional tentang kontribusi TF terhadap penuaan sangat tertinggal dibandingkan dengan katekin, karena sulit untuk mengekstraksi TF dalam jumlah yang cukup dari daun teh hitam untuk studi medis (Takemoto dan Takemoto, 2018). Baru-baru ini, beberapa metode biosintetik telah dikembangkan untuk produksi massal TF (Takemoto dan Takemoto, 2018), sehingga memungkinkan untuk mengeksplorasi efek biologis yang tepat dari TF dan mekanisme regulasi yang mendasarinya.

Baru-baru ini, peningkatan set data telah menyoroti peran penting usus dalam penuaan dan modulasi umur (Guo et al.,2014; Jji et al.,2019; Maynard dan Weinkove,2018; Rothenberg dan Zhang, 2019; Salazar et al. ,2018). Epitel usus, yang bertindak sebagai penghalang selektif, memungkinkan penyerapan nutrisi, ion, dan air dan membatasi kontak inang dengan entitas berbahaya, termasuk mikroorganisme, antigen makanan, dan racun lingkungan (Capo et al.,2019; Nicholson et al. , 2012; Ryu et al., 2010). Sebagai jaringan dengan pergantian tinggi pada individu, saluran usus menyediakan lingkungan hidup terbaik untuk mikroorganisme simbiosis, termasuk kondisi anaerobik alami, nutrisi yang melimpah, dan suhu dan pH yang sesuai.

Gambar 1. Theaflavin memperpanjang umur Drosophila dan meningkatkan kemampuan memanjat

(A dan B) Lalat buah betina dikultur dengan makanan standar yang dilengkapi dengan 1 mg/ml atau 2,5 mg/mL theaflavin (TFs) atau tanpa TF sebagai basal. Lalat dipindahkan ke vial segar yang berisi media baru setiap hari, dan lalat mati memiliki skor sepanjang umur dewasa, Kurva kelangsungan hidup (A) dan rata-rata umur panjang (B) lalat betina dianalisis dan ditampilkan.

(Cand D) Betina w18 diberi makan dengan makanan standar Drosophila (disebut Basal) atau dengan makanan yang dilengkapi dengan masing-masing 1mg/ml atau 2.5mg/ETF. Enam kelompok lalat independen pada usia yang ditunjukkan (10 hari, 30 hari, 40 hari, dan 50 hari, masing-masing) menjadi sasaran uji kafe (C) dan pemberian makan Fluorescein (D). nilai, membentuk relung yang ditempati oleh spesies bakteri tertentu dalam tubuh (Bonfini et al.,2016; Buchon et al., 2013; Nicholson et al., 2012). Sementara itu, mikroorganisme simbiosis dan metabolitnya juga secara langsung atau tidak langsung mempengaruhi pengolahan nutrisi; pencernaan dan penyerapan; keseimbangan energi; fungsi kekebalan; perkembangan dan pematangan gastrointestinal; dan banyak aktivitas fisiologis penting lainnya (Bonfini et al., 2016; Broderick, 2016; Maynard dan VVeinkove, 2018; Nicholson et al., 2012). Hubungan yang saling menguntungkan antara kedua simbion tersebut dapat menjaga stabilitas dan keseimbangan dinamis dari mikroekosistem usus (Bonfini et al.,2016; Brodeerick,2016; Broderick et al.,2014; Guo et.,2014; May-nard dan Weinkove,2018; Nicholson et al.,2012).

cistanche dapat anti-penuaan

Serangkaian penelitian telah menunjukkan bahwa respon imun bawaan sangat penting untuk menjaga homeostasis mikrobiota usus dan dilestarikan dari invertebrata ke vertebrata (Guillouet al.,2016; Guo et al.,2014; Ryu et al., 2006, 2010; Vijay- Kumar dkk., 2010). Di Drosophila, dua jalur pensinyalan utama, yaitu jalur Toll dan defisiensi imun (Imd), terlibat dalam respons imun bawaan (Lu et al., 2020; Myllymakiet al.,2014; Valanne et al.,2011). Khususnya, jalur Toll Drosophila memiliki kesamaan dengan reseptor interleukin-1 mamalia (IL-1R) dan jalur MyD88-dependent Toll-like receptor (TLR), sedangkan jalur Imd serupa ke jalur reseptor faktor nekrosis tumor (TNFR) dan jalur TLR yang bergantung pada TRIF pada mamalia (Imler, 2014; Myllymaki et al., 2014; Valanne et al., 2011). Kedua jalur ini mengontrol ekspresi peptida antimikroba (AMP) melalui aktivasi faktor transkripsi NF-KB (Imler, 2014; Myllymaki et al., 2014; Valanne et al., 2011).bioflavonoidJalur pensinyalan Imd biasanya diaktifkan oleh infeksi bakteri Gram-negatif dan menghasilkan ekspresi set AMP lain, seperti Attacin, Cecropin, dan Diptericin (Kleino dan Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014). Ekspresi AMP ini membutuhkan reseptor protein pengenalan peptidoglikan (PGRP) -LC di jalur Imd dan pembelahan yang bergantung pada sinyal dan translokasi nuklir Relish, faktor transkripsi keluarga NF-kB (Kleino dan Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014). Sebuah studi baru-baru ini menunjukkan bahwa pembentukan amiloid diperlukan untuk aktivasi jalur Drosophila Imd setelah mengenali peptidoglikan bakteri (Kleino et al., 2017). Namun, apakah kondensat Imd ini terlibat dalam proses biologis lainnya, seperti pemeliharaan homeostasis usus dan regulasi penuaan, sebagian besar masih belum diketahui.

Dalam penelitian ini, kami menggunakan lalat buah dan tikus sebagai model hewan untuk menyelidiki peran TF dalam mengendalikan integritas dan penuaan usus. Kami menunjukkan bahwa TF menunda proliferasi berlebihan sel punca usus, melindungi terhadap disbiosis mikrobioma usus, dan mencegah aktivasi jalur pensinyalan Imd, sehingga memperpanjang umur di Drosophila. Studi mekanistik lebih lanjut menunjukkan bahwa TF berkontribusi negatif pada pensinyalan Imd mungkin melalui pemblokiran kondensasi Imd daripada di mana-mana. Selain itu, kami menemukan bahwa TF sangat efektif dalam mencegah kolitis yang diinduksi DSS pada tikus. Secara keseluruhan, temuan kami mengungkapkan peran potensial TF dalam memodulasi perilaku Imd, yang dapat menjadi faktor kunci dalam kontribusi positif mereka terhadap homeostasis usus dan perpanjangan umur.

HASIL

Suplemen makanan theaflavin memperpanjang umur Drosophila

Untuk memeriksa apakah theaflavin (TF) mempengaruhi penuaan dan umur di Drosophila, kami memelihara lalat betina w'118 dengan makanan pemeliharaan standar yang dilengkapi dengan 1mg/mL atau 2,5mg/ml TF dan melakukan uji rentang hidup seperti yang dijelaskan sebelumnya (Ji et al .,2019). Lalat yang diberi pakan yang dilengkapi dengan pelarut TF (H2O) dengan volume yang sama dianggap sebagai kontrol. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1A, penambahan makanan dengan konsentrasi TF yang relatif rendah (1 mg/mL) sedikit memperpanjang umur lalat buah, dan konsentrasi TF yang tinggi (2,5 mg/mL) memiliki efek positif yang signifikan pada perpanjangan umur. Khususnya, penyerapan TF konsentrasi tinggi dalam jangka panjang (2,5 mg/mL) menghasilkan peningkatan sekitar 8 hari dalam rentang hidup rata-rata lalat betina (Gambar 1B), menunjukkan peran TFsin yang bermanfaat dalam mengatur umur panjang di Drosophila. Hasil serupa diperoleh ketika kami menguji efek potensial dari TF tambahan pada umur lalat jantan w'*''8 (Gambar S1A dan S1B).

Gambar 2. Theaflavin mencegah disfungsi usus akibat penuaan dan disbiosis mikrobiota di Drosophila

(A dan B)Kehilangan integritas usus diuji dengan Smurftest pada usia 10 hari, 30 hari, 40 hari, dan 50 hari wanita dewasa w18. Contoh non-Smurf dan Smurf ditunjukkan pada (A). Persentase Smurf dalam kelompok yang ditunjukkan berbeda dianalisis dan ditunjukkan pada (B).

( C ) Kelimpahan bakteri yang disimpan oleh qPCR dari gen 16S rRNA dalam file w18 betina dari kelompok yang ditunjukkan berbeda dianalisis dan ditampilkan.

(DF) Sekuensing gen 16S rRNA bakteri komensal dilakukan. Proporsi taksa bakteri (D), peta panas taksa mikroba utama (F), dan kelimpahan relatif Gammaproteobacteria (F) dianalisis dan disajikan.

Gambar 2. Lanjutan

(G dan H) Usus dibedah dari lalat betina yang diberi makan dengan TF 2,5 mg/ml atau tanpa TF sebagai kontrol pada umur 10 hari dan 40 hari. Gambar slide midgut ditangkap oleh mikroskop fluoresensi untuk sinyal GFP (G). Analisis statistik yang menunjukkan persentase sel GFP-positif ditunjukkan pada (H).

(I) Usus dari lalat betina yang ditunjukkan dikumpulkan dan menjadi sasaran uji imunostaining menggunakan antibodi terhadap Histone 3(pH3) terfosforilasi Hasil statistik yang mengukur pH3-sel positif per usus dianalisis dan ditampilkan. Pada data B, C, H, dan, dianalisis dengan uji Student dua sisi dan ditunjukkan sebagai mean ± SEM.NS, tidak signifikan,*p<><0.001. see="" also="" figure="">

ETF telah dikenal memiliki rasa pahit, dan makanan pahit biasanya dihindari oleh konsumen termasuk lalat buah dan mamalia (Yamazaki et al., 2014; Yang et al., 2018). Kami kemudian berusaha untuk menjelaskan apakah TF dapat memengaruhi asupan makanan Drosophila, karena penelitian sebelumnya telah membuktikan bahwa pembatasan diet menyebabkan umur yang lebih panjang baik pada vertebrata maupun invertebrata (Hudry et al.,2019; Kapahi et al.,2017; Moger-Reischer et al. ., 2020). Untuk melakukan ini, pertama-tama kami melakukan uji kafe, pendekatan yang banyak digunakan untuk mengukur laju pengumpanan secara langsung dan akurat dengan memanfaatkan pengumpan kapiler yang berisi media cair, seperti yang dijelaskan sebelumnya (Ja et al., 2007). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1C dan S1C, suplementasi makanan TF (masing-masing 1 mg/mL dan 2,5 mg/mL) hampir tidak mengubah konsumsi makanan lalat yang diuji. Untuk mengkonfirmasi hal ini lebih lanjut, kami kemudian menggunakan Fluorescein sebagai pelacak makanan (Rera et al.,2012; Wang et al.,2005) dan melakukan uji pemberian makan alami (Danilov et al.,2015). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1D dan S1D, kami gagal mengamati korelasi antara suplementasi TF dan tingkat asupan makanan. Secara keseluruhan, hasil kami menunjukkan bahwa peran menguntungkan TF dalam memperpanjang umur mungkin bukan karena pembatasan diet di Drosophila.

TF tambahan dapat dibuang untuk memengaruhi homeostasis energi Drosophila

Telah dikemukakan bahwa polifenol teh hitam memberikan efek positif dalam mencegah obesitas dengan menghambat pencernaan, penyerapan, dan asupan lipid dan sakarida, sehingga mengurangi asupan kalori (Cameron et al., 2008). Kami kemudian berusaha untuk menjelaskan apakah perpanjangan umur LDrosophila yang diatur oleh TF disebabkan oleh perubahan dalam penyerapan nutrisi dan penyimpanan energi. Untuk melakukan ini, pertama-tama kami memeriksa kadar triasilgliserida (TAG), salah satu metabolit lipid yang paling umum terdeteksi (Tennessen et al., 2014), pada lalat betina sepanjang hidup mereka seperti yang dijelaskan sebelumnya (Fan et al., 2017).beli cistancheSeperti yang ditunjukkan pada Gambar 1E, pengobatan TF hampir tidak memengaruhi kelimpahan TAG keseluruhan pada titik usia yang berbeda. Ketika kami lebih lanjut mendeteksi kandungan glikogen dan karbohidrat sirkulasi yang diukur (glukosa dan trehalosa) oleh kit Hexokinase (Li et al.,2018; Ten-nessen et al., 2014), hasilnya menunjukkan bahwa tidak ada perubahan yang jelas antara sampel dengan atau tanpa perlakuan TF (Gambar 1F-1H). Sebagai catatan, hasil yang konsisten diperoleh ketika kami memeriksa fenotipe metabolik yang menggunakan w118 jantan sebagai model hewan (Gambar S1E-S1H). Secara kolektif, data ini menunjukkan bahwa suplementasi makanan TF dapat diabaikan untuk regulasi homeostasis karbohidrat dan energi sepanjang umur Drosophila.

Kami lebih lanjut menyelidiki kinetika penuaan alami Drosophila di bawah intervensi diet TF dengan melakukan tes geotaksis negatif (RING) berulang cepat seperti yang dijelaskan sebelumnya (Dilliane et al., 2017; Staats et al.,2018). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1l,1J, S1l, dan S1J, indeks pendakian usia (40 hari) w1118 (baik wanita dan pria) dalam kelompok suplementasi TF meningkat secara nyata (meningkat hampir 12 persen pada wanita dan hampir 18 persen peningkatan pada pria ) dibandingkan dengan kelompok kontrol, menunjukkan bahwa TF berpotensi meningkatkan aktivitas pendakian dan lokomotor Drosophila.

Theaflavin mencegah kebocoran usus akibat penuaan dan disbiosis mikrobiota

Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa aktivitas lokomotor lalat buah dan umur sangat berhubungan dengan kondisi kesehatan inang, seperti jenis kelamin, pola makan, umur, dan genotipe (Caruso et al.,2013; Heintz dan Mair,2014). Baru-baru ini, beberapa bukti telah membuktikan bahwa mempertahankan homeostasis pensinyalan IMD usus memperbaiki integritas usus dengan mencegah proliferasi berlebihan dari ISC dan sel-sel prekursor dan dengan menunda disfungsi epitel usus yang dimulai dengan usia, yang pada gilirannya berkontribusi positif terhadap kesehatan organisme (Clark et al. , 2015; Guo et al., 2014). Di Drosophila, masa hidup yang lebih pendek terkait erat dengan disfungsi penghalang epitel usus, dan pengembangan integritas penghalang ini selama penuaan menghasilkan perpanjangan umur (Clark et al.,2015; Guoet al.,2014; Jet al., 2019). Dengan demikian, kami berusaha untuk menentukan apakah TF mengubah integritas usus dengan melakukan uji Smurf, metode yang telah dijelaskan sebelumnya (Clark et al.,2015; Rera et al.,2011). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2A, lalat buah yang diuji di mana pewarna biru terbatas pada saluran pencernaan disebut sebagai non-Smurf (panel kiri pada Gambar 2A). Jika pewarna biru diamati

Gambar 3. Lanjutan

(EG) Nyali diisolasi dari file w1118 betina yang diberi makan dengan TF 2,5 mg / ml atau tanpa TF sebagai basal pada usia 10 hari, 30 hari, 40 hari, dan 50 hari, masing-masing. Total RNA diekstraksi dan menjadi sasaran analisis ART-PCR. Tingkat ekspresi mRNA diptericin (F), attacin (F).dan cecropin A1(G) dianalisis dan ditampilkan. Pada EG, data dianalisis dengan uji-t Student dua sisi dan ditunjukkan sebagai mean ± SEM.NS, tidak signifikan, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

bocor keluar dari usus ke perut, tuan rumah dihitung sebagai Smurf (panel kanan pada Gambar 2A). Konsisten dengan temuan sebelumnya (Clark et al.,2015), proporsi Smurf secara bertahap meningkat selama penuaan (Gambar 2B). Menariknya, proporsi orang dewasa Smurf sangat menurun pada kelompok yang diberi makan TF dibandingkan dengan kontrol dengan usia yang sama pada kedua wanita (dari 8,2 persen menjadi 3,7 persen, dari 19,4 persen menjadi 15,6 persen, dan dari 35,4 persen menjadi 27,1 persen untuk kelompok). pada usia 30 hari, 40 hari, dan 50 hari, masing-masing, Gambar2B) dan pria dewasa (dari 2,7 persen menjadi 0,9 persen, dari 6,9 persen menjadi 0,9 persen, dan dari 8,3 persen menjadi 2,7 persen pada usia 30 tahun). hari, 40 hari, dan 50 hari, masing-masing, Gambar S2A), menunjukkan bahwa TF dapat mencegah disfungsi penghalang usus pada lalat buah tua. Sebagai catatan, kami mengamati penurunan persentase Smurf yang lebih besar pada laki-laki (berkurang hampir 65,8 persen , 86,9 persen , dan 67,4 persen pada usia 30 hari, 40 hari, dan 50 hari, masing-masing) daripada mereka yang berusia betina yang cocok (berkurang hampir 54,1 persen, 19,5 persen, dan 23,3 persen pada usia 30 hari, 40 hari, dan 50 hari, masing-masing), menyiratkan bahwa TF mungkin memainkan peran yang lebih baik dalam menurunkan kebocoran usus pada lalat jantan.

Studi sebelumnya telah menyarankan bahwa disfungsi penghalang usus onset usia sering berkorelasi dengan dysbiosis mikrobiota usus (Clark et al., 2015; Guo et al., 2014). Dengan demikian, kami memeriksa komposisi bakteri komensal usus setelah suplementasi TF. Kami pertama kali menggunakan primer universal dan melakukan eksperimen PCR kuantitatif untuk mengukur tingkat gen 16S rRNA bakteri. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2C, pada pemotongan umur, total populasi bakteri dari kelompok intervensi TF menunjukkan penurunan yang mencolok (hampir 45 persen -55 persen ) dibandingkan dengan kontrol, menunjukkan bahwa suplementasi TF mungkin mencegah ekspansi mikrobiota selama penuaan . Kemudian, kami melakukan metagenomik untuk memeriksa secara rinci perubahan dalam komunitas mikroba usus yang disebabkan oleh suplementasi makanan dengan TF. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2D-2F, proporsi Gammaproteobacteria, ekspansi yang ditemukan terkait erat dengan kegagalan penghalang usus (Clark et al., 2015), jelas menurun dengan suplementasi TF di usus tua ( pengurangan hampir 7 persen), menyiratkan bahwa TF berkontribusi positif pada homeostasis mikrobiota usus selama penuaan di Drosophila.

Theaflavin meningkatkan homeostasis proliferatif usus di Drosophila

We further examined the intestinal integrity of flies that were treated with or without TFs. First, we employed the widely-used P{Esg-Gal4}/P{Uasp-GFP};{Tub-Gal80*s}strain(referred to as esgts>GFP), di mana sel induk usus (ISC) dan sel progenitor diberi label dengan GFP. Seperti yang ditunjukkan pada Figures2G dan 2H, jumlah sel GFP-positif dalam kelompok intervensi TF pada usia 40 hari (20 nyali dihitung) jauh lebih sedikit (hampir 29,7 persen) dibandingkan dengan kontrol yang sesuai usia (hampir 47,6 persen dan 2H). 19 nyali dihitung), menunjukkan bahwa TF mungkin menghambat proliferasi berlebihan usia-onset dari ISC. Selanjutnya, kami melakukan percobaan imunostaining menggunakan antibodi terhadap Phospho-Histone 3 (pH3), penanda khusus untuk sel mitosis dalam jaringan usus. Kami mengamati lebih sedikit pH3-sel positif dalam usus dari orang dewasa yang diberi suplemen TF (jumlah rata-rata adalah 20,6) dibandingkan dengan mereka yang berasal dari kontrol (jumlah rata-rata adalah 39,5, Gambar 2). Secara keseluruhan, hasil kami menunjukkan bahwa suplementasi makanan dengan TF memperbaiki homeostasis proliferatif usus dan mencegah displasia mikrobiota onset usia, sehingga menunda penuaan di Drosophila.

Theaflavin secara negatif memodulasi sinyal IMD usus

Untuk mengeksplorasi mekanisme molekuler yang mendasari di mana TF berkontribusi positif pada homeostasis usus Drosophila, kami melakukan analisis RNA-seq menggunakan sampel usus yang sesuai dengan usia dari wanita dewasa w1118 yang diobati dengan atau tanpa TF. Analisis fragmen per kilobase per juta (FPKM) menunjukkan bahwa keseluruhan pola ekspresi gen serupa antara dua kelompok eksperimen (Gambar 3A). Analisis ekspresi diferensial lebih lanjut, bagaimanapun, mengidentifikasi total 229 gen yang diekspresikan secara berbeda, 99 di antaranya diregulasi ke atas dan 126 diregulasi ke bawah (Gambar 3B). Menariknya, analisis ontologi gen dari gen-gen ini mengungkapkan bahwa jalur respons imun sangat diubah oleh suplementasi makanan dengan TF (Gambar 3C).

Di Drosophila, jalur pensinyalan imun bawaan telah terbukti memainkan peran dominan dalam mengatur homeostasis usus dan umur panjang (Clark et al, 2015; Guo et al, 2014). Kami kemudian fokus pada pemeriksaan pola ekspresi peptida antimikroba (AMP) di hilir sinyal imun bawaan. Seperti yang ditunjukkan

Gambar 4. Lanjutan

( D ) Protein Imd yang dimurnikan diinkubasi dengan berbagai konsentrasi TF (masing-masing 50 uM, 100 uM, dan 200 uM) pada suhu kamar selama 5 menit. Sampel kemudian dikenai analisis spektrum emisi fluoresensi menggunakan panjang gelombang yang ditunjukkan (eksitasi pada 430 nm, emisi dari 450 nm hingga 550 nm dengan lebar celah 5 nm). Sampel tanpa TF digunakan sebagai kontrol dasar.

（E and F）Lysates of guts from NP11>Lalat Myc-Imd disiapkan dan diinkubasi dengan TFs（100μM） pada suhu kamar selama 30 menit. Uji SDD-AGE panel atas di E) dan SDS-PAGE (panel bawah di E) dilakukan untuk menganalisis agregat protein Imd. Tubulin digunakan sebagai kontrol pemuatan.tangkiAnalisis densitometri dilakukan untuk mengukur kondensat Imd dalam sampel yang berbeda, dan hasilnya ditunjukkan pada (F). (G) Sebuah kromatogram perwakilan sampel TF.

Protein Flag-Imd yang Dimurnikan H dan I） diinkubasi dengan TFs, TF1, TF2a, TF2b, atau TF3（100 M untuk setiap sampel）atau dengan volume buffer kontrol） yang sama pada suhu kamar selama 30 menit seperti yang ditunjukkan. Sampel kemudian menjadi sasaran tes SDD-AGE (panel atas di H) dan SDS-PAGE (panel bawah di H) untuk menentukan pola agregasi Imd. Analisis densitometri untuk mengukur kondensat Imd dalam sampel yang berbeda dilakukan dan ditunjukkan pada (). Dalam C, F, dan I, data dianalisis dengan uji Student dua sisi dan ditunjukkan sebagai mean ± SEM.***p< 0.001.="" see="" also="" figure="">

pada Gambar 3D, gen AMP diatur oleh jalur defisiensi imun (Imd), termasuk dipterisin A (DptA), dip-terisin B(DptB), attacin A(AttA), cecropin A1 (CecA1), cecropin A2(CecA2), dan cecropin C (Cece), secara signifikan menurun (masing-masing sebesar 39,4 persen ,72,3 persen ,10,5 persen ,86.5 persen ,99,8 persen , dan 36,1 persen ) pada kelompok yang diobati dengan TF dibandingkan dengan kelompok kontrol. Untuk mengkonfirmasi lebih lanjut hasil yang diperoleh dari analisis RNA-seq, kami melakukan reaksi rantai transkripsi-polimerase terbalik kuantitatif (gRT-PCR) untuk mengukur tingkat ekspresi relatif gen AMP terkait Imd dalam sampel usus Drosophila yang diperoleh pada empat titik usia yang berbeda termasuk 10 hari, 30 hari, 40 hari, dan 50 hari. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3E-3G, tingkat ekspresi mRNA dari gen tertentu, termasuk dipterisin, attacin, dan cecropin A1, secara signifikan menurun (hampir 35,9 persen -66,6 persen) pada TF yang diobati nyali tua. Secara kolektif, data kami mengungkapkan bahwa TF berpotensi memusuhi aktivasi jalur pensinyalan Imd dalam sel usus Drosophila selama penuaan.

Theaflavin dapat dibuang untuk regulasi transkripsi jalur Imd atau ubiquitinasi Imd

Kami berusaha untuk memeriksa hubungan antara TF dan Imd dan melakukan uji resonansi plasmon permukaan (SPR) seperti yang dijelaskan sebelumnya (Lan et al., 2020). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4A. TF menunjukkan afinitas pengikatan sedang dengan protein Imd murni pada perkiraan konstanta Kp 8,078 uM. Kemudian kita cenderung menentukan bagaimana TF mengontrol jalur pensinyalan IMD usus. Berdasarkan hasil analisis transkriptom dari data RNA-seq, kami menemukan bahwa tingkat ekspresi faktor pengatur utama dalam jalur pensinyalan Imd, seperti PGRP-LC, Imd, dan Relish, hampir tidak diubah oleh pengobatan TF (Gambar S3A ). Kami selanjutnya mengumpulkan sampel usus dari lalat yang menjadi sasaran suplementasi makanan dengan atau tanpa TF pada berbagai usia dan melakukan eksperimen qRT-PCR untuk secara khusus mendeteksi pola ekspresi gen ini. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar S3B, tingkat mRNA gen tertentu, termasuk effete, faded, tak1, pgrp-Ica, uev1a, bendless, relish, imd, pgrp-sc2, tab2, ird5 Kenny, dan diap2, serupa antara kelompok kontrol dan kelompok intervensi TF, menunjukkan bahwa TF tidak terlibat dalam mengatur sinyal IMD pada tingkat transkripsi.

Selanjutnya, kami memeriksa profil ubiquitinasi Imd karena penelitian sebelumnya telah menyarankan bahwa ubiguitinasi Imd sangat penting untuk transduksi sinyal hilir di jalur Imd (Myllymaki et al., 2014; Zhou et al., 2005). Kami pertama kali melakukan uji pergeseran E1 in vitro dan menemukan bahwa pengobatan dengan TF tidak memiliki pengaruh nyata pada reaksi enzimatik E1 dan ubiquitin untuk membentuk E1/Ub terkonjugasi (Gambar S4A). Selain itu, kami mentransfeksi sel Drosophila S2 dengan plasmid yang mengekspresikan Flag-tagged Imd bersama dengan HA-tag Ub dan kemudian merawat sel dengan atau tanpa TF. Tes ubiquitinasi lebih lanjut menunjukkan bahwa suplementasi TF hampir tidak mempengaruhi tingkat Imd di mana-mana dalam sel yang dikultur (Gambar S4B dan S4C). Untuk menentukan hubungan antara TF dan ubiquitinasi Imd in vivo, kami menggunakan lalat transgenik P {NP1-Gal4}/P{Uasp-Myc-Imd};P{Tub-Gal80*} (disebut sebagai NP1* s > Myc-Imd), di mana protein Imd yang ditandai dengan Myc sangat diekspresikan dalam sel usus (Gambar S4D). Eksperimen ubiquitinasi kami menunjukkan bahwa suplementasi makanan dengan TF dapat dibuang untuk memodulasi ubiquitinasi Imd dalam jaringan usus (Gambar S4D dan S4E). Secara keseluruhan, hasil kami menunjukkan bahwa TF secara negatif mengatur sinyal Drosophila Imd dengan tidak memengaruhi pola ubiquitinasi Imd.

Theaflavin mencegah perakitan kondensat Imd

Sebuah studi baru-baru ini menyarankan bahwa agregasi Imd sangat penting untuk aktivasi gen hilir di jalur Imd (Kleino et al., 2017). Kami kemudian berusaha untuk memeriksa apakah TF mengatur proses

Gambar 5. Lanjutan

(F dan G)Wanita w18 (disebut sebagai imd plus / plus ), mutan imd' heterozigot dan homozigot (masing-masing disebut sebagai imd plus /- dan imd-/-) dipelihara dengan pakan standar Drosophila (disebut sebagai Basal) atau suplementasi makanan dengan 2,5 mg/mL (disebut sebagai TF) dan kemudian menjadi sasaran uji umur kurva Kelangsungan hidup (F) dan umur panjang rata-rata (G) dianalisis dan ditampilkan.

Dalam dan F, uji Log Rank digunakan untuk analisis statistik. Dalam BE, dan, uji-t Student dua sisi digunakan untuk analisis statistik, dan data adalah sh sebagai rata-rata ± SEM. NS, tidak signifikan, *p<0.05, **p="" <="" 0.01,=""><0.001. see="" also="" figure="">

Pembentukan agregat imd. Pertama, kami memurnikan protein Imd yang ditandai dengan Myc dari sel S2 yang dikultur dan menginkubasi protein dengan konsentrasi TF yang berbeda (Gambar 4B). Menariknya, kami menemukan bahwa TF secara nyata mencegah agregasi Imd (dikurangi 81,7 persen -89,7 persen, Gambar 4B dan 4C), seperti yang disarankan oleh uji elektroforesis gel agarose deterjen semidenaturasi (SDD-AGE) kami. Untuk mengkonfirmasi temuan ini, kami selanjutnya melakukan uji pengikatan thioflavin-T dan memperoleh hasil yang konsisten (Gambar 4D). Terakhir, kami memelihara lalat transgenik NP1ts > Myc-Imd yang diberi suplementasi makanan dengan atau tanpa TF dan mengumpulkan sampel usus dari orang dewasa lanjut usia. Eksperimen SDD-AGE menunjukkan bahwa agregasi Imd sangat diturunkan regulasinya oleh TF dalam sel usus (berkurang 16,7 persen -22 persen , Gambar 4E, dan 4F).

Untuk menentukan bagaimana TF berkontribusi untuk mengendalikan perakitan kondensat Imd, kami melakukan TF ke HPLCanal-ysis dan menemukan bahwa mereka terutama mengandung empat jenis monomer (Gambar 4G), yaitu, theaflavin (TF1), theaflavin 3-O-gallate ( TF2a), theaflavin 3'-O-gallate (TF2b), dan theaflavin 3,3'-di-O-gallate (TF3), yang konsisten dengan laporan sebelumnya (Li et al.,2013; Takemoto dan Takemoto,2018) . Kemudian, kami menginkubasi masing-masing bahan kimia ini dengan Imdprotein murni dan melakukan eksperimen SDD-AGE. Seperti ditunjukkan pada Gambar 4H dan 4l, perlakuan semua monomer TF ini menghasilkan pengurangan yang nyata (masing-masing sebesar 59,5 persen ,60,9 persen ,58,4 persen ,58,2 persen . dan 55,8 persen untuk TF, TF1, TF2a, TF2b, dan TF3) di tingkat agregat IMD. Secara kolektif, hasil kami menunjukkan bahwa TF secara negatif mengatur jalur pensinyalan Drosophila Imd mungkin dengan mengendalikan perilaku kondensat Imd.

Theaflavin memperpanjang umur Drosophila dengan cara yang bergantung pada Imd

To examine whether TFs prolong Drosophila lifespan depending on their regulatory role in Imd, we specifically knocked down Imd in gut tissues using the transgenic flies P{NP1-gal4)PITub-gal80*}/P{Uasp-imd-IR(KK)} (referred to as Imd RNAi). As shown in Figures 5A and 5B, dietary supplementation of TFs extended the lifespan of controls (elevation of nearly 7.2 days in the mean lifespan), whereas prevention of Imd expression in guts apparently reversed the lifespan extension caused by TFs. Consistent results were obtained when we utilized male Imd RNAi and control flies to perform lifespan assays (Figures S5A and S5B). Further qRT-PCR assays showed that the mRNA expression levels of AMP genes at ages of 10 days, 30 days, 40 days, and 50 days, including diptericin, attacin, and cecropin A1.hardly changed in the gut tissues of Imd RNAi flies(Figures 5C-5E), whereas additional TFs caused reductions of 31%-72.3% in mRNA abundances of these genes in samples from control groups. To confirm these results from Imd RNAi flies, we first performed lifespan assays using w18(control, referred to as imd+/+), imd' heterozygous (referred to as imd+/-), and homozygous(referred as imd-/-)mutant flies. We found that TFs addition extended lifespan and increased mean life longevity of imd+/-flies (elevation of nearly 6.2 days, Figures 5F and 5G). However, this lifespan extension effect by TFs was almost abolished in imd-/-flies (Figures 5F and 5G). Next, we performed lifespan assays utilizing Relish RNAi(NP1's>Relish RNAi and control(NP1ts>ditambah) lalat. karena Relish adalah faktor transkripsi kunci yang bertanggung jawab atas ekspresi gen AMP hilir Imd (Myllymaki et al., 2014). Seperti yang ditunjukkan dalam Fiqures S5C dan S5D. penambahan diet TF secara nyata memperpanjang umur panjang lalat kontrol, dan perpanjangan umur ini secara signifikan dicegah pada lalat Relish RNAi. Secara kolektif, data kami menunjukkan bahwa suplementasi makanan TF berkontribusi positif terhadap umur Drosophila yang kemungkinan tergantung pada sinyal IMD usus.

Untuk melihat apakah perpanjangan umur oleh TF masih terjadi di latar belakang axenic, kami melakukan uji umur menggunakan w1118 betina dalam kondisi axenic. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar S5E dan S5F, penambahan konsentrasi TF yang berbeda (1 mg/mL dan 2,5 mg/mL) hampir tidak mempengaruhi rasio kematian dan umur panjang rata-rata pada orang dewasa w18. Karena kondisi pemeliharaan axenic sebagian besar dapat mencegah mikrobiota yang melimpah, sehingga membatasi sinyal Imd dalam pemotongan (Clarke al., 2015), data kami menyarankan TF memperpanjang umur Drosophila mungkin melalui modulasi sinyal imun bawaan yang diatur mikrobiota usus.

Gambar 6. Theaflavin meringankan kolitis yang diinduksi DSS pada tikus CD-1

(A) Perlakuan TF tidak mempengaruhi konsumsi air pada berbagai kelompok tikus CD-1.

(BD) Pemberian gavage dari berbagai konsentrasi TF (1 mg/mL, 2,5 mg/mL, dan 5mg/mL, masing-masing) memperbaiki pemendekan usus besar dan pembesaran limpa yang disebabkan oleh DSS pada tikus CD-1. Gambar representatif (B) dan analisis statistik dari usus besar (C) dan limpa (D) ditampilkan. (E) Pemberian berbagai konsentrasi TF (masing-masing 1 mg/mL, 2,5 mg/ml, dan 5mg/mL) mencegah kebocoran usus yang disebabkan oleh DSS pada tikus CD-1. (F dan G) Kolon dikumpulkan dari kelompok tikus yang ditunjukkan. RNA total diekstraksi dan dilakukan uji qRT-PCR untuk mendeteksi tingkat ekspresi mRNA dari TNFa(F) dan IL-6 (G).

(HL) Kolon dari berbagai kelompok tikus dikumpulkan secara longitudinal dan dilakukan uji pewarnaan HE. Sampel diperiksa dengan mikroskop, dan gambar representatif dari sampel yang ditunjukkan HL） diperoleh dan ditampilkan. Batang timbangan, 40 m. (M-Q') Gambar SEM menunjukkan mikrotrikoma titik dua dari sampel yang ditunjukkan berbeda. Bilah skala, 50 um (MQ) dan 4 um (M'-Q').

Pada CG, data dianalisis dengan uji Student dua sisi dan ditunjukkan sebagai mean ± SEM.NS, tidak signifikan, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

Theaflavin meringankan kolitis yang diinduksi DSS pada tikus CD-1

Untuk menyelidiki lebih lanjut peran potensial TF dalam mempertahankan homeostasis usus pada mamalia, tikus CD-1 digunakan untuk menginduksi kolitis dengan dekstran sulfat natrium (DSS). Tikus diberi konsentrasi TF yang berbeda secara intragastrik (1 g/L, 2,5 g/L, atau 5 a/L) atau air sebagai kontrol selama empat minggu, diikuti dengan pengobatan dengan 2 persen DSS dalam air minum selama 7 hari. Untuk melihat apakah TF mempengaruhi jumlah minum DSS pada kelompok tikus yang berbeda, kami memantau minum tikus setiap hari. Seperti yang ditunjukkan dalam Fiqre6A, pengobatan TF dapat diabaikan untuk memengaruhi konsumsi minuman pada tikus kolitis yang diinduksi DSS, tikus yang diobati dengan DSS menunjukkan sindrom kolitis dengan diare dan/atau hematochezia, yang dicegah dengan pengobatan TF yang bergantung pada dosis (Gambar S6A-S6E).cistanche AustraliaSelain itu, intervensi dengan TF menyelamatkan pengurangan panjang usus besar yang disebabkan oleh DSS dan memperbaiki pembesaran limpa (Gambar 6B-6D).

Kami kemudian menggunakan dekstran-4000-FITC (FITC-DX) untuk memeriksa fungsi penghalang usus tikus ini. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 6E, tikus dari kelompok yang diobati dengan DSS menunjukkan konsentrasi FITC-DX yang tinggi dalam sampel darah, menunjukkan kebocoran usus pada hewan ini, Namun, intervensi dengan TF secara signifikan mencegah pengangkutan FITC-DX dari organ pencernaan ke dalam sistem peredaran darah (berkurang 56,1 persen -77,5 persen , Gambar 6E). Khususnya, pemberian TF tidak mengubah permeabilitas usus tikus dalam kondisi normal (Gambar S6F). Karena peradangan memainkan peran penting dalam pengembangan kolitis model tikus, kami selanjutnya melakukan percobaan qRT-PCR, menunjukkan bahwa pengobatan TF secara signifikan menurunkan regulasi IL -6 dan ekspresi TNF dalam usus tikus yang diobati dengan DSS (Gambar 6F dan 6G).

Untuk menganalisis lebih lanjut perubahan patologis di usus besar, kami melakukan uji pewarnaan hematoxylin-eosin (HE). Seperti yang ditunjukkan pada Figures6H-6L dan S6G-S6J, kerusakan epitel parah yang diinduksi DSS secara nyata diperbaiki dengan pengobatan TF dengan cara yang bergantung pada dosis. Pemindaian pencitraan mikroskop elektron dari sampel usus ini selanjutnya memberikan hasil yang konsisten (Gambar 6M-6Q' dan S6K-S6N'). Secara keseluruhan, temuan kami menunjukkan bahwa TF memainkan peran yang bermanfaat dalam melindungi fungsi penghalang usus pada serangga dan mamalia.

DISKUSI

Dalam penelitian ini, kami menyelidiki fungsi fisiologis TF dalam memodulasi homeostasis dan umur panjang usus dan mekanisme molekuler yang mendasarinya. Kami menunjukkan bahwa suplementasi makanan dengan TF secara positif berkontribusi pada pencegahan disbiosis onset usia mikrobiota usus dan penundaan disfungsi epitel usus, sehingga memperpanjang umur Drosophila. Studi mekanistik in vitro dan in vivo kami mengungkapkan bahwa TF kemungkinan memainkan peran negatif dalam mengendalikan jalur pensinyalan Imd dengan menghalangi penggabungan Imd. Selain itu, kami menemukan bahwa kolitis yang diinduksi DSS dapat dikurangi secara efisien dengan suplementasi TF pada tikus CD-1. Hasil kami mendukung gagasan bahwa TF secara menguntungkan berkontribusi pada homeostasis usus pada invertebrata dan vertebrata.

Suplemen makanan dengan theaflavin memperpanjang umur Drosophila

Konsumsi teh populer di seluruh dunia dan menempati urutan kedua setelah konsumsi air (Rothenberg dan Zhang, 2019). Sejumlah penelitian telah berfokus pada fungsi fisiologis sering melalui pendekatan eksperimental dan klinis (Cameron et al.,2008; Niu et al.,2013; Peng et al.,2009; Rothenberg dan Zhang.2019; Spindleret al.,2013; Takemoto and Takemoto,2018; Unno et al.,2020;Zhou et al.,2020. Telah terbukti secara luas bahwa teh bermanfaat bagi kesehatan dengan menurunkan kadar lipid dan melalui efek anti-obesitas, dan senyawa fungsional utama dalam teh adalah katekin, terutama epigallocatechin gallate (EGCG)(Abbas and Wink,2009; Modernelli et al.,2015; Niu et al.,2013; Wagner et al.,2015; Xiong et al.,2018).Penelitian sebelumnya juga menunjukkan bahwa teh hijau dan teh hitam dapat meningkatkan rentang kesehatan dan umur lalat buah (Situs al., 2011; Wagner et al., 2015), cacing (Fei et al., 2017; Xiong et al., 2018), dan tikus (Imran et al. .,2018; Niu et al.2013) dan mekanisme pengaturan utama adalah pencegahan stres oksidatif yang efektif oleh EGCG melalui modulasi sinyal ROS.manfaat cistanche,Namun, apakah TF, sebagai senyawa "emas" yang khas dalam teh hitam, berperan dalam mengatur penuaan dan umur sebagian besar masih belum diketahui. Studi ini memberikan bukti kuat yang menunjukkan bahwa intervensi TF dapat diabaikan untuk memengaruhi asupan makanan, dan penyerapan TF jangka panjang melalui makanan secara signifikan memperpanjang umur lalat buah jantan dan betina. Temuan ini memberikan pedoman untuk studi lebih lanjut tentang fungsi TF dalam umur panjang mamalia.

Theaflavin meningkatkan disbiosis mikrobiota onset usia dan mempromosikan homeostasis usus Ketidakseimbangan progresif homeostasis proliferatif dan kapasitas regeneratif adalah ciri khas penyakit penuaan dan onset usia (Clark et al., 2015; Heintz dan Mair, 2014; Maynard dan Weinkove, 2018; Rera dkk.2012). Peradangan kronis dikaitkan dengan hilangnya homeostasis dan peningkatan insiden kanker pada organisme yang menua (Bartke et al., 2019; Kapahi et al., 2017; Xiao et al., 2020). Ini sangat signifikan pada epitel penghalang seperti epitel usus (Guo et al., 2014; Maynard dan Weinkove, 2018). Dengan model untuk pengembangan displasia terkait usia di usus yang menua, kami menunjukkan bahwa meningkatkan interaksi host-commensal dalam epitel penghalang penuaan dapat meningkatkan kesehatan dan umur. Kami menggunakan sejumlah pendekatan noninvasif untuk menguji fungsi usus dan dinamika mikrobiota selama penuaan. Pertama, uji Smurf menunjukkan peran positif TF dalam mengatur disfungsi penghalang epitel selama penuaan. Kemudian, uji imunostaining menggunakan beberapa lalat transgenik mengungkapkan bahwa TF menunda proliferasi berlebihan ISC dan pergantian sel yang berdiferensiasi. Akhirnya, sekuensing mikrobioma menyarankan bahwa TF menurunkan regulasi ekspansi usia mikroflora komensal usus. Hasil ini sangat menunjukkan bahwa TF memainkan peran kunci dalam menunda proses penuaan inang dengan mempertahankan homeostasis usus.

Theaflavin mengurangi respons imun yang berlebihan di usus dengan mengatur pensinyalan Imd secara negatif

Telah disarankan bahwa keseimbangan antara fungsi kekebalan usus dan mikrobiota harus dipertahankan untuk memastikan homeostasis jangka panjang dari epitel penghalang (Guo et al., 2014; Maynard dan Weinkove, 2018). Penelitian sebelumnya juga menunjukkan bahwa peradangan kronis yang berlebihan di usus dikaitkan dengan disfungsi terkait usia di epitel penghalang dan merupakan ciri penuaan (Clark et al., 2015; Guo et al., 2014; Ji et al., 2019) . Dengan demikian, mempertahankan populasi komensal yang sehat dengan mempertahankan homeostasis imun bawaan di epitel tersebut adalah pendekatan yang menjanjikan untuk meningkatkan kesehatan dan umur panjang (Bonfini et al.,2016; Broderick,2016; Clark et al.,2015). Untuk mengeksplorasi mekanisme molekuler dengan TF mana yang menunda penuaan, kami melakukan analisis RNA-seq menggunakan usus yang dibedah dengan atau tanpa perawatan TF. Data kami menunjukkan bahwa kelompok gen yang sangat diekspresikan dalam usus lalat buah kontrol dibandingkan dengan hewan yang diobati dengan TF diperkaya dengan gen yang diklasifikasikan sebagai gen "respon imun". Analisis bioinformatika lebih lanjut dan uji get-PCR mengungkapkan bahwa ekspresi gen AMP terkait Imd secara dramatis dihambat oleh penambahan makanan TF. Hasil dari percobaan tikus CD-1 yang menggunakan DSS untuk menginduksi respon imun abnormal di usus lebih lanjut menegaskan gagasan bahwa TF berfungsi sebagai pelindung terhadap peradangan usus.

Theaflavin menekan sinyal dengan menentukan perakitan amiloid dari Imd

Bagaimana TF secara negatif mengatur jalur pensinyalan IMD? Berdasarkan hasil analisis transkriptom, kami menemukan bahwa TF dapat diabaikan untuk regulasi transkripsi faktor kunci dalam jalur pensinyalan Imd. Yang menarik, kami mengamati afinitas pengikatan TF yang jelas dengan protein Imd yang dimurnikan dengan uji SPR, yang menyarankan kemungkinan bahwa TF mungkin berperan dalam mengendalikan perilaku protein Imd atau proses modifikasi pasca-translasinya. Studi sebelumnya telah menyoroti peran penting ubiquitinasi dalam transduksi sinyal Imd (Kleino dan Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014), dan pencegahan ubiquitinasi Imd menghasilkan penghentian pensinyalan Imd secara mendalam (Myllymaki et al., 2014; Thevenon; dkk., 2009). Namun, uji in vitro dan in vivoubiquitination kami menunjukkan bahwa TF hampir tidak mempengaruhi pola ubiquitinasi Imd. Sebuah studi baru-baru ini menunjukkan bahwa pembentukan amiloid diperlukan untuk aktivasi jalur Drosophila Imd setelah mengenali peptidoglikan bakteri (Kleino et al., 2017). Menariknya, uji SDD-AGE dan ThTbinding kami menyarankan bahwa penggabungan Imd dicegah oleh TF. Pencegahan agregasi Imd dengan merobohkan atau mutasi Imd dalam sel usus tampaknya membalikkan efek menguntungkan dari TF pada perpanjangan umur. Untuk mengkonfirmasi lebih lanjut temuan kami, akan menarik untuk memeriksa apakah TF tidak lagi berfungsi untuk memperpanjang umur dalam selebaran buah ketika motif RHIM (cRHIM, asam amino dari 118 hingga 121 jam) samar yang dilestarikan dari motif Imd secara khusus dihancurkan, berdasarkan temuan bahwa kejahatan di IMD sangat penting untuk agregasi dan pembentukan amiloidnya (Kleino et al., 2017). Namun demikian, penelitian kami menyoroti peran penting TF dalam mengendalikan homeostasis usus dan proses penuaan, mungkin melalui modulasi koalesensi Imd. Studi masa depan harus fokus pada eksplorasi residu atau wilayah mana dari Imd yang terikat oleh TF dan bagaimana ikatan ini menghasilkan pencegahan kondensasi Imd. Selain itu, temuan kami dalam sistem mamalia menunjukkan bahwa TF dapat secara efektif melindungi usus besar terhadap peradangan yang disebabkan oleh DSS kimia beracun eksogen, menunjukkan peran pengaturan TF yang dilestarikan dalam mempertahankan homeostasis usus. Penting untuk menyelidiki apakah TF berperan dalam mengatur perakitan protein dalam jaringan mamalia.

Artikel ini diambil dari zhongwenxie@ahau.edu.cn