CaWRKY30 Secara Positif Mengatur Kekebalan Lada Dengan Menargetkan CaWRKY40 Terhadap Inokulasi Ralstonia Solanacearum Melalui Modulasi Gen Terkait Pertahanan Bagian 1

Abstrak:

Jaringan faktor transkripsi (TF) WRKY terdiri dari subset TF WRKY, yang melakukan peran penting dalam pengaturan kekebalan tanaman. Namun, fungsi jaringan TF WRKY masih belum jelas, terutama pada tanaman non-model seperti lada (Capsicum annum L.). Studi ini secara fungsional mengkarakterisasi CaWRKY30 — anggota protein WRKY Lada kelompok III — untuk kekebalan lada terhadap infeksi Ralstonia solanacearum. CaWRKY30 terdeteksi dalam nukleus, dan tingkat ekspresi transkripsinya diregulasi secara signifikan oleh inokulasi R. solanacearum (RSI), etilen aplikasi daun (ET), asam absisat (ABA), dan asam salisilat (SA). Pembungkaman gen yang diinduksi virus (VIGS) dari CaWRKY30 memperkuat kerentanan lada terhadap RSI.

Selain itu, pembungkaman CaWRKY30 oleh VIGS membahayakan kematian sel seperti SDM yang dipicu oleh RSI dan gen penanda terkait pertahanan yang diturunkan regulasi, seperti CaPR1, CaNPR1, CaDEF1, CaABR1, CaHIR1, dan CaWRKY40. Sebaliknya, ekspresi berlebihan sementara dari CaWRKY30 pada daun lada memicu kematian sel seperti HR dan meningkatkan regulasi gen penanda terkait pertahanan. Selain itu, ekspresi berlebih sementara dari CaWRKY30 meningkatkan level transkripsi CaWRKY6, CaWRKY22, CaWRKY27, dan CaWRKY40.

Di sisi lain, over-ekspresi sementara dari CaWRKY6, CaWRKY22, CaWRKY27, dan CaWRKY40 meningkatkan level ekspresi transkripsi CaWRKY30. Hasilnya merekomendasikan bahwa CaWRKY30 yang baru dikarakterisasi secara positif mengatur kekebalan lada terhadap serangan Ralstonia, yang diatur oleh pensinyalan yang dimediasi secara sinergis oleh fitohormon seperti ET, ABA, dan SA, dan berasimilasi secara transkripsi ke dalam jaringan TF WRKY, yang terdiri dari CaWRKY6, CaWRKY22, CaWRKY27, dan CaWRKY40 . Secara kolektif, data kami akan memfasilitasi untuk menjelaskan mekanisme yang mendasari crosstalk antara kekebalan lada dan respons terhadap RSI.

Faktor transkripsi memainkan peran kunci dalam sistem kekebalan tubuh, mengendalikan regulasi ekspresi gen dan pembentukan tipe sel tertentu. Berikut ini adalah hubungan antara faktor transkripsi dan imunitas:

1. Faktor transkripsi - NF-κB: NF-κB adalah faktor transkripsi kunci yang terlibat dalam regulasi respon imun adaptif sel T dan sel B. Aktivasi NF-κB dapat meningkatkan respon inflamasi, respon imun, dan apoptosis sel.

2. Faktor transkripsi—STAT: STAT adalah faktor transkripsi yang memediasi pensinyalan pembawa dan respons seluler. STAT dapat diaktifkan, memainkan peran kunci dalam mengaktifkan sel T dan sel B, dan berpartisipasi dalam proses seperti proliferasi, diferensiasi, dan aktivasi sel imun.

3. Faktor transkripsi - AP-1: AP-1 adalah keluarga faktor transkripsi yang terlibat dalam pengaturan berbagai fungsi seluler dan respons imun. Aktivasi AP-1 dapat meningkatkan proses seperti proliferasi, diferensiasi, dan transformasi sel, serta mempertahankan respons antivirus dan kekebalan.

4. Faktor transkripsi—CEBP: CEBP adalah keluarga besar faktor transkripsi, termasuk CEBP , , , dll. di berbagai sel jaringan. Dalam sistem kekebalan, CEBP terlibat dalam aktivasi makrofag dan pelepasan sitokin, serta diferensiasi dan aktivasi sel B dan sel T.

Secara bersama-sama, faktor transkripsi memainkan peran penting dalam kekebalan, berpartisipasi dalam pengaturan dan pemeliharaan aktivitas sistem kekebalan dalam berbagai jenis dan fungsi sel. Oleh karena itu, kita juga perlu memperhatikan peningkatan imunitas dalam kehidupan kita sehari-hari. Cistanche dapat meningkatkan kekebalan, dan polisakarida dalam daging dapat mengatur respon kekebalan dari sistem kekebalan tubuh manusia, meningkatkan kemampuan stres sel kekebalan, dan meningkatkan efek sterilisasi sel kekebalan.

Klik manfaat kesehatan dari cistanche

Kata kunci:

cabai (Capsicum annuum); Ralstonia solanacearum; CaWRKY30; TF WRKY.

1. Perkenalan

Tumbuhan sering terpapar berbagai cekaman biotik dan abiotik selama masa hidupnya karena sifatnya yang tidak bergerak [1,2]. Tumbuhan telah mengembangkan beberapa mekanisme pertahanan sebagai respons terhadap tekanan seleksi berulang dari kendala ekologi dan lingkungan utama. Faktor transkripsi yang berbeda (TF) saling berhubungan untuk mengembangkan jaringan transkripsi yang canggih untuk mengatur mekanisme pertahanan klasik ini pada tingkat transkripsi [3,4]. Reaksi pertahanan terhadap berbagai tekanan disinkronkan dan dikendalikan dengan baik karena sangat penting bagi tanaman dalam bentuk pengeluaran dan pengembangan energi [5]. Mekanisme pertahanan mungkin berbeda pada spesies tumbuhan yang berbeda karena keadaan lingkungan yang bervariasi mempengaruhi aklimatisasi mereka [6-8].

Oleh karena itu, sistem pertahanan yang digunakan oleh tanaman model tidak dapat sepenuhnya diterapkan pada tanaman non-model. Oleh karena itu, sistem pertahanan tumbuhan telah menjadi fokus utama selama beberapa dekade terakhir; akan tetapi, penelitian ini lebih banyak difokuskan pada tanaman model, yaitu Arabidopsis thaliana dan padi (Oryza sativa L.). Namun demikian, sinkronisasi fungsional dari kompleks transkripsi ini untuk mengatur respons tanaman terhadap berbagai tekanan telah diselidiki dengan buruk, terutama pada tanaman non-model.

Protein WRKY terdiri dari keluarga TF terbesar pada tanaman. TF WRKY berisi satu atau dua domain WRKY dan biasanya urutan WRKYGQK pada N-terminus diikuti oleh motif jari seng C2HC atau C2H2 [4,9,10]. Protein WRKY secara filogenetik dibagi menjadi tiga kelompok utama (yaitu, kelompok I–III) berdasarkan beberapa domain WRKY dan struktur motif seng-jari.

Kelompok II TF WRKY sekali lagi dibagi menjadi lima sub-kelompok (IIa, IIb, IIc, IId, dan IIe) [11-13]. Anggota WRKY terutama berikatan dengan kotak-W [TTGAC(C/T)] yang ditemukan di daerah promotor dari berbagai gen target dengan memasukkan baji eksklusif secara vertikal ke dalam alur utama DNA [14] dengan motif WRKY GQK pada untai b kedua, yang menstimulasi modulasi transkripsi dari ekspresi gen target [14-16]. WRKY telah terlibat dalam beberapa sistem biologis pada tanaman, termasuk dormansi benih, perkecambahan benih, penuaan, dan perkembangan benih. Demikian pula, ini juga terlibat dalam respon terhadap tekanan biotik dan abiotik dan transkripsi transkripsi gen target mereka [17-20].

Dilaporkan bahwa sekelompok TF WRKY atau satu TF WRKY yang diinduksi secara transkripsi hanya oleh satu tekanan memodulasi beberapa tekanan. Kotak-W diperkaya di dalam wilayah promotor [21–24]. Studi-studi ini menggambarkan keberadaan jaringan WRKY yang terlibat dalam respons terhadap tekanan tertentu, atau kombinasi dari dua atau lebih. Peran protein WRKY dan mekanisme yang mendasarinya dalam menanggapi tekanan biotik dan abiotik telah sering diselidiki dalam dekade terakhir; namun, penekanan studi ini terutama pada satu gen sebagai respons terhadap satu tekanan pada tanaman model, misalnya A. thaliana dan O. sativa. Baru-baru ini, varian fungsional yang penting di antara homolog dekat TF WRKY dari berbagai spesies tanaman telah disarankan [24,25]. Fungsi WRKY dan web WRKY di pabrik non-model seperti Capsicum annuum L., sebagai respons terhadap tekanan tunggal atau gabungan, telah diselidiki dengan buruk sampai sekarang.

Lada dikenal secara global karena kepentingan ekonominya. Ditaburkan di dataran tinggi selama musim sedang [26,27]. Lada terkena berbagai penyakit tular tanah seperti hawar lada dan layu bakteri yang disebabkan oleh bakteri patogen, masing-masing Phytophthora capsicum dan Ralstonia solanacearum [28,29]. Kebetulan patogen ini memberikan dampak yang menghancurkan pada produksi lada di bawah suhu tinggi dan kelembaban tinggi (HTHH). HTHH merusak kekebalan lada yang dimediasi oleh protein R dan mempercepat pertumbuhan dan perkembangan patogen. Selain itu, serangan patogen dan HTHH secara bersamaan memberikan tekanan seleksi alam pada lada, yang telah mempengaruhi evolusi lada di masa lalu [30-32]. Sebaliknya, terjadinya infeksi patogen dan HTHH secara bersamaan mungkin tidak mempengaruhi evolusi tanaman model, seperti A. thaliana dan O. sativa. Oleh karena itu, lada tampaknya lebih cocok untuk penelitian tentang kekebalan terhadap cekaman biotik atau abiotik, yaitu RSI atau HTHH.

Ralstonia solanacearum menyebabkan layu bakteri pada banyak tanaman, yaitu lada, tomat, kentang, dll. Ini adalah proteobacterium gram negatif yang ditularkan melalui tanah [33]. Ini membentuk koloni cepat di jaringan xilem, yang menyebabkan penyakit layu bakteri pada tanaman yang terinfestasi [34].

Respon spesies tumbuhan terhadap cekaman biotik dan abiotik diketahui diatur oleh fitohormon [35]. Fitohormon adalah molekul kecil yang terlibat dalam pengaturan pertumbuhan tanaman, reproduksi tanaman, dan kelangsungan hidup. Asam salisilat (SA) dan asam jasmonat (JA) sangat penting untuk respon imun spesies tanaman. Keduanya dianggap sebagai fondasi penting dari respon imun tanaman terhadap patogen. Biosintesis dan pensinyalan SA sangat penting untuk pertahanan melawan patogen biotrofik, sedangkan JA memberikan pertahanan terhadap patogen nekrotrofik [36,37]. Ethylene (ET) membantu respon pertahanan terhadap beberapa interaksi tanaman-patogen [37].

Berbagai kultivar lada asli daerah subtropis menunjukkan ketahanan penyakit yang dipercepat, bahkan di bawah HTHH [38]. Unsur cis yang berhubungan dengan panas HSE umumnya hidup berdampingan dengan fitohormon, termasuk SA, JA, ET, ABA, atau unsur cis yang berhubungan dengan patogen di daerah promotor dari sebagian besar MAPK dan CDPK yang terlibat dalam kekebalan tanaman [39-41]. Ini merekomendasikan adanya crosstalk antara imunitas dan HTHH. Genom lada masing-masing 27 dan 7,5 kali lebih besar dibandingkan dengan A. thaliana dan O. sativa. Namun, ia hanya memiliki 73 gen WRKY, sedangkan genom yang lebih kecil dari A. thaliana dan O. sativa masing-masing memiliki 72 dan 122 gen WRKY [9,42,43]. Kami sebelumnya mendeteksi bahwa CaWRKY6 [44], CaWRKY22 [9], CaWRKY40 [45], dan CaWRKY58 [46] telah terlibat dalam respon lada terhadap RSI.

Di antaranya, CaWRKY6, -22, -27, dan -40 bertindak sebagai pengatur positif kekebalan tanaman, sedangkan CaWRKY58 adalah pengatur negatif. Gen-gen ini memiliki subset elemen HSE dan kotak-W di wilayah promotornya dan promotor TF WRKY lainnya, menyimpulkan peran jaringan WRKY dalam regulasi respons lada terhadap RSI. Selain itu, CaWRKY40 secara langsung diatur oleh CaWRKY6 [44] dan CabZIP63 [16], sedangkan CaWRKY40 diatur secara tidak langsung oleh CaCDPK15 [47]. Sebaliknya, sebagian besar TF WRKY lada belum dikarakterisasi untuk responsnya terhadap serangan patogen.

Dalam studi saat ini, cDNA lengkap untuk keluarga lada WRKY TF diisolasi dan diberi nama CaWRKY30. Kami mencirikannya secara ekspresif dan fungsional dan menemukan bahwa CaWRKY30 diinduksi oleh RSI dan aplikasi daun SA, JA, ET, dan ABA. Ekspresi CaWRKY30 yang berlebihan dalam daun lada memicu kematian sel seperti HR dan produksi H2O2. Membungkam CaWRKY30 dalam lada membahayakan kekebalan lada terhadap RSI. Hasil ini menunjukkan bahwa CaWRKY30 secara positif mengatur kekebalan lada terhadap RSI.

2. Hasil

2.1. Analisis Kloning dan Urutan CaWRKY30

Gen WRKY baru CaWRKY30 (CA01g34480) diidentifikasi dengan analisis seluruh genom. Gen CaWRKY30 dipilih untuk karakterisasi fungsional karena keberadaan elemen cis terkait imunitas seperti TGA (faktor pengikat motif TGACG), motif TGACG, kotak TATC, TATAbox, dan kotak W di wilayah promotor menunjukkan kemungkinannya. peran dalam kekebalan lada (Gambar S1). Fragmen cDNA dari CaWRKY30 (CA01g34480) dari 924 bp open-reading-frame (ORF) diklon dengan menggunakan primer spesifik gen (Tabel S1). Panjang urutan asam amino CaWRKY30 yang disimpulkan adalah 307 residu asam amino, yang memiliki domain WRKY yang dilestarikan, dan dikategorikan ke dalam kelompok III (Gambar 1). Protein yang diprediksi memiliki ukuran dan pI teoritis masing-masing 34,55 kDa dan 7,32. CaWRKY30 berbagi identitas asam amino 88, 60, 68, dan 57 persen dengan NsWRKY53, CcWRKY53, NaWRKY53, dan StWRKY53, masing-masing (Gambar S2).

2.2. Ekspresi Transkripsi CaWRKY30 di bawah RSI dan Perawatan dengan Berbagai Fitohormon

Kehadiran elemen cis terkait kekebalan di wilayah promotor CaWRKY30 menunjukkan peran potensialnya dalam RSI kekebalan lada. Untuk memeriksa gagasan tersebut, analisis qRT-PCR dilakukan untuk menilai tingkat transkripsi CaWRY30 pada RSI. Tingkat transkripsi CaWRKY30 meningkat pada daun yang diberi perlakuan Ralstonia dibandingkan dengan daun yang diberi perlakuan tiruan (Gambar 2A). Level ekspresi transkripsional CaWRKY30 yang ditingkatkan konsisten antara 0 jam hingga 48 jam pasca perawatan (HPT). Level ekspresi transkripsional tertinggi tercatat pada 48 hpt (Gambar 2A).

Fitohormon, termasuk jalur pensinyalan yang dimediasi ET, ABA, SA, dan JA, adalah pengatur utama reaksi tanaman terhadap cekaman biotik dan abiotik. Regulasi CaWRKY30 oleh jalur pensinyalan yang dimediasi fitohormon dipelajari oleh aplikasi daun ET, ABA, SA, dan JA menggunakan analisis qRT-PCR. Hasilnya menunjukkan bahwa tingkat ekspresi transkripsi relatif CaWRKY30 ditingkatkan dari 0 jam menjadi 48 hpt dengan 100 µM ET dibandingkan dengan mock. Level transkripsi ini tertinggi pada 48 hpt dengan ET (Gambar 2B). Aplikasi daun 100 µM ABA secara signifikan meningkatkan level transkripsi CaWRKY30 dibandingkan dengan mock. Level transkripsi mencapai level tertinggi pada 12 hpt dengan ABA (Gambar 2C). Hasil menunjukkan bahwa akumulasi transkripsi CaWRKY30 meningkat secara signifikan setelah penerapan 1 mM SA, dibandingkan dengan mock. Tingkat ekspresi transkripsi yang ditingkatkan ini tertinggi pada 24 hpt (Gambar 2D).

Gambar 2. Uji qRT-PCR dari tingkat ekspresi transkripsi relatif CaWRKY30 dalam daun lada yang mengalami inokulasi Ralstonia solanacearum (RSI), dan aplikasi daun dari berbagai fitohormon. Analisis qRT-PCR digunakan untuk memeriksa tingkat transkripsi CaWRKY30 dalam daun lada yang mengalami berbagai perlakuan termasuk RSI (A), aplikasi 100 µm ET (B), aplikasi 100 µm ABA (C), dan aplikasi 1 mM. SA (D) pada interval waktu yang berbeda. Kelimpahan transkripsi pada daun yang diberi perlakuan RSI dibandingkan dengan daun kontrol yang diberi perlakuan MgCl2 -(tiruan), yang tingkat ekspresi relatifnya disetel ke "1". (B – D) Tingkat ekspresi transkripsi pada daun yang diberi perlakuan fitohormon dibandingkan dengan daun yang diberi perlakuan ddH2O (tiruan), yang tingkat ekspresinya disetel ke "1". Ketinggian bilah menunjukkan rata-rata dan bilah kesalahan menunjukkan kesalahan standar rata-rata. Huruf yang berbeda di atas batang menunjukkan perbedaan yang signifikan antara rata-rata berdasarkan uji LSD yang dilindungi Fisher.

2.3. CaWRKY30 Ditemukan Terlokalisasi di Nukleus

Analisis urutan dengan menggunakan WoLFPSORT menggambarkan bahwa urutan protein CaWRKY30 yang diprediksi memiliki sinyal lokalisasi nuklir diduga (Gambar 1), menunjukkan potensi penargetan dalam nukleus. Untuk memvalidasi persepsi ini, konstruksi fusi GFP aCaWRKY30 dihasilkan yang digerakkan oleh promotor konstitutif CaMV35S. Vektor yang terbentuk kemudian dipindahkan ke Agrobacterium strainGV3101. Kami secara sementara mengekspresikan konstruk CaWRKY30 GFP pada daun Nicofiamabenthamiana dengan injeksi A. tumefacient, dan sinyal GFP diperiksa dengan mikroskop confocal fluores.science. Hasil menunjukkan bahwa sinyal GFP dari CaWRKY30-GFP terdapat di nukleus, sedangkan GFP kontrol terdeteksi di berbagai bagian subselular, seperti sitoplasma dan nukleus (Gambar 3).

Gambar 3. Lokalisasi subseluler dari CaWRKY30. CaWRKY30 telah sepenuhnya terletak di inti daun nicotiana benthaminna. Warna hijau menunjukkan GFP Warna biru menunjukkan pewarnaan inti DAPI. Warna cyan menunjukkan perpaduan CFP hijau dan inti bernoda DAPI biru. CPP signaGreen) untuk kontrol, daun N. benthamiana terdeteksi di seluruh sel. gambar ditangkap dengan mikroskop confocal pada 48 jam pasca inokulasi. Bilah=25 um.

2.4. Pembungkaman CaWRKY30 oleh VIGS Membatasi Imunitas Pepper terhadap RSI dan Menurunkan Imunitas Terkait Marker Genes.

CaWRKY30 dibungkam oleh pembungkaman gen yang diinduksi virus (VIGS) untuk mempelajari perannya dalam kekebalan lada. Sebanyak 50 tanaman CaWRKY30-tidak dibungkam (TRV:00) dan 50 tanaman CaWRKY30- dibungkam (TRV: CaWRKY30) diperoleh. Enam tanaman yang didiamkan CaWRKY30 dipilih secara acak untuk memeriksa efisiensi pembungkaman gen dengan inokulasi akar dengan sel strain R. solanacearum virulen yang kompatibel. Temuan kami menunjukkan bahwa tingkat transkripsi CaWRKY30 menurun ~ 30 persen pada tanaman yang dibungkam CaWRKY30 yang diperlakukan dengan Ralstonia dibandingkan dengan tanaman yang tidak dibungkam, memvalidasi pembungkaman CaWRKY30 (Gambar 4A).

Tanaman yang dibungkam CaWRKY30 menunjukkan kerentanan yang jauh lebih tinggi terhadap RSI dibandingkan dengan tanaman yang tidak dibungkam. Kerentanan lada terhadap patogen meningkat dengan menunjukkan peningkatan pertumbuhan populasi Ralstonia, ditandai dengan nilai cfu yang lebih tinggi pada tanaman cabai CaWRKY30 yang didiamkan dibandingkan dengan tanaman yang tidak didiamkan pada 3 hari dan 5 hari pasca inokulasi (dpi) (Gambar 4B). Uji pewarnaan histokimia dilakukan untuk mendeteksi produksi H2O2 dan nekrosis sel pada daun cabai Ralstonia inokulasi CaWRKY30 silence (TRV: CaWRKY30), dan unsilenced (TRV:00). Pewarnaan DAB gelap (tanda produksi H2O2) dan kematian sel seperti HR yang ditunjukkan dengan pewarnaan biru tripan gelap terlihat pada daun lada yang tidak didiamkan pada 48 hpi (jam setelah inokulasi). Sebaliknya, konsentrasi trypan blue dan pewarnaan DAB menurun secara signifikan pada daun lada CaWRKY30 yang dibungkam (Gambar 4C). Konduktivitas listrik — indikator kebocoran ion — dihitung untuk mempelajari kerusakan membran plasma dan kematian sel setelah RSI.

Hasilnya menunjukkan bahwa tanaman yang tidak dibungkam yang dirawat dengan RSI menunjukkan kebocoran ion yang lebih tinggi daripada tanaman yang dibungkam CaWRKY30 yang dirawat dengan Ralstonia pada 24 dan 48 dpi (Gambar 4D). Indeks penyakit relatif diperkirakan hingga 10 dpi untuk menyimpulkan tingkat penyakit pada tanaman CaWRKY30-yang dibungkam dan tidak dibungkam setelah RSI (Tabel Tambahan S2). Gejala penyakit yang menonjol terlihat pada tanaman yang dibungkam CaWRKY30 pada 10 dpi, sementara tanaman yang tidak didiamkan menunjukkan sedikit gejala penyakit (Gambar 4E). Enam CaWRKY30-tanaman yang didiamkan dan tidak didiamkan dipilih secara acak dan diinfiltrasi dengan R. solanacearum di akar untuk uji fenotipe. Gejala penyakit layu yang jelas terlihat pada cabai CaWRKY30 yang didiamkan pada 10 dpi, sementara tanaman yang tidak didiamkan menunjukkan gejala layu yang sangat lemah (Gambar 4F). Analisis qRT-PCR dilakukan untuk mempelajari akumulasi transkripsi gen penanda terkait kekebalan dan hasilnya menyatakan bahwa tingkat ekspresi transkripsi gen penanda terkait kekebalan seperti CaPR1, CaNPR1, CaDEF1, CaABR1, dan CaHIR1 berkurang di CaWRKY{{ 25}}tanaman yang dibungkam dibandingkan dengan tanaman yang tidak dibungkam pada 48 dpi (Gambar 4G).

Gambar 4. Pembungkaman CaWRKY30 oleh VIGS membatasi resistensi lada terhadap RSI dan meningkatkan regulasi gen penanda terkait imunitas. Uji qRT-PCR dari level ekspresi CaWRKY30 pada R. solanacearum yang diinokulasi, tiruan (diinokulasi dengan larutan MgCl2) CaWRKY30-tanaman lada yang dibungkam (TRV: CaWRKY30), dan tanaman kontrol (TRV:00) (A). Perbedaan pertumbuhan R. solanacearum antara tanaman cabai CaWRKY30-diam dan tidak (kontrol) yang diinokulasi dengan R. solanacearum pada 3 dan 5 dpi (B). Pewarnaan histokimia (pewarnaan DAB dan trypan blue) pada CaWRKY yang diinokulasi R. solanacearum30-diam (TRV: CaWRKY30) dan daun lada tidak didiamkan (TRV:00) pada 48 dpi. Bilah skala=50 µm (C). Pengukuran kebocoran elektrolit sebagai konduktivitas ion untuk mengevaluasi respons kematian sel pada cakram daun tanaman cabai CaWRKY30-diam (TRV: CaWRKY22) dan tidak didiamkan (TRV:00) pada 24 dan 48 hpi dengan dan tanpa R. solanacearum (D). Pembungkaman CaWRKY30-dengan VIGS meningkatkan kerentanan tanaman lada terhadap infeksi R. solanacearum.

Indeks penyakit secara signifikan meningkat seiring berjalannya waktu. CaWRKY30-tanaman yang didiamkan (TRV: CaWRKY30) menunjukkan kerentanan yang tinggi terhadap infeksi R. solanacearum dibandingkan dengan tanaman yang tidak didiamkan (TRV:00) seiring waktu. Rata-rata didasarkan pada empat ulangan biologis dengan lima tanaman per ulangan (E). Efek fenotipik pengobatan R. solanacearum pada tanaman cabai CaWRKY30-diam (TRV: CaWRKY30) dan tidak didiamkan (TRV:00) pada 10 dpi (F). uji qRT-PCR tingkat transkripsi gen penanda terkait pertahanan di CaWRKY30-tanaman lada yang dibungkam (TRV: CaWRKY30) dan tidak dibungkam (TRV:00) pada 48 jam pasca inokulasi dengan R. solanacearum (G). Tingkat ekspresi transkripsi relatif dari tanaman tanpa perlakuan tiruan diatur ke "1". Ketinggian bilah menunjukkan rata-rata dan bilah kesalahan menunjukkan kesalahan standar rata-rata. Data mewakili rata-rata ± SE dari empat ulangan biologis. Huruf yang berbeda di atas batang menunjukkan perbedaan yang signifikan di antara rata-rata.

For more information:1950477648nn@gmail.com