Anti-Aging -Klotho Gene-Activated Scaffold Mempromosikan Respons Penyembuhan Luka Peremajaan pada Sel Punca yang Berasal dari Adiposa Manusia

3. Diskusi

Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki dampak fungsional dari anti-penuaan - Perancah yang diaktifkan gen Klotho pada ADSC manusia untuk aplikasi penyembuhan luka yang ditingkatkan. Secara keseluruhan, kami menemukan bahwa perancah yang diaktifkan gen menawarkan aktivasi terkontrol dari kemampuan regeneratif ADSC seperti yang digambarkan pada Gambar5. Secara khusus, perancah yang diaktifkan gen secara sementara meningkatkan kekuatan ADSC melalui aktivasi faktor transkripsi Okt-4. Perancah yang diaktifkan gen juga mendorong aktivasi awal gen anti-fibrotik TGF- 3, faktor penting untuk penyembuhan terkontrol dengan jaringan parut berkurang. Selain itu, ADSC yang teraktivasi mengontrol sementara angiogenesis endotel dan mendukung penyembuhan fibroblas dermal melalui pensinyalan parakrin. Menjelang pematangan, ADSC juga mengontrol aktivasi respon pro-fibrotik pada fibroblas dermal. Sementara itu, ADSC pada scaffold yang diaktifkan gen secara efektif meregenerasi membran basement dermal dengan meningkatkan deposisi laminin dan kolagen IV. Tanggapan ini selanjutnya dikaitkan dengan pengurangan terkait bekas luka Ekspresi protein -SMA dan peningkatan deposisi matriks elastin kualitatif. Studi kami secara kolektif menentukan bahwa -Klotho diaktifkan genCistanchememiliki potensi yang luar biasa untukpenyembuhan lukadan bisaterapi berbasis sel induk canggih untuk aplikasi penyembuhan peremajaan.

Gambar 5. Skema dampak fungsional perancah yang diaktifkan gen B-Klotho pada ADSC manusia untuk aplikasi penyembuhan luka. Temuan utama dari penelitian ini adalah (1) peningkatan sementara pluripotensi sel punca dan respons anti-fibrotik, (2) peningkatan kontrol parakrin terhadap angiogenesis, dan remodeling kolagen pro-fibrotik pada fibroblas dermal dan akhirnya, (3) peningkatan maturasi membran basement dengan kontrol atas ekspresi protein terkait bekas lukaGaris putus-putus untuk matriks elastin menyiratkan peningkatan pengendapan kualitatif.

Klik Disini Untuk Mengetahui Cara CistancheEfek penyembuhan luka

Dalam strategi penyembuhan luka, terapi gen berbasis plasmid diterapkan untuk meningkatkan respon seluler sementara sampai perbaikan luka selesai.37]. Perancah kami yang diaktifkan gen juga menunjukkan bahwa terapeutik Gen -Klotho diatur secara sementara selama 14 hari. Ekspresi (170-fold) yang ditingkatkan secara signifikan dari -Klotho mRNA pada hari ke-3 dapat dikaitkan dengan promotor CMV dini yang dikenal untuk meningkatkan aktivasi transkripsi dari transgen yang disandikan [38]. Namun, pada MSCs, CMV dapat mengalami metilasi DNA atau deasetilasi histone yang dapat mengurangi ekspresi transgen.39]. Selain itu, plasmid umumnya merupakan episom yang tidak bereplikasi, membatasi transfer transgen ke sel-sel yang membelah, dan menyebabkan penurunan ekspresi transgen dari waktu ke waktu.40]. Kehadiran penanda heterokromatik yang berasal dari sekuens bakteri dariplasmid selanjutnya dapat menekan ekspresi transgen [41], secara keseluruhan berkontribusi pada ekspresi gen sementara.

Salah satu jalan yang ditempuh dalam pengobatan luka yang sulit sembuh adalah penerapan perancah bioaktif yang diunggulkan sel. Salah satu alasannya adalah kemampuannya untuk mempercepat perbaikan luka. Sel-sel yang aktif secara metabolik dalam cangkok mengeluarkan faktor parakrin dan menjalani diferensiasi, mengatur peristiwa pensinyalan kompleks di lingkungan luka [42]. Sel induk, khususnya, memiliki kemampuan unik untuk merasakan rangsangan eksternal dan memodulasi responsnya untuk memulihkan homeostasis.43]. Namun, sel punca kehilangan batangnya saat diperluas secara in vitro untuk menghasilkan jumlah sel yang besar untuk cangkokan. Studi kami menunjukkan bahwa batang dapat ditingkatkan secara sementara menggunakan scaffold yang diaktifkan gen yang membawa gen anti-penuaan -Kloto. Secara khusus, kami mencatat bahwa perancah yang diaktifkan gen anti-penuaan meningkatkan ekspresi gen batang Okt-4 di ADSC. Okt-4 adalah salah satu faktor transkripsi kunci dalam sel punca embrionik dan sangat penting untuk perkembangan embrionik yang terkontrol [44]. Dalam ADSC, aktivasi gen Oct-4 dapat meningkatkan potensi proliferasi dan diferensiasinya [45]. Dengan demikian, peningkatan ekspresi Oct-4 dapat memfasilitasi diferensiasi cepat ADSC pada scaffold yang diaktifkan gen ke dalam sel inang dan membantu proses penyembuhan.

Setelah mengamati aktivasi gen Oct-4 di ADSC, kami kemudian menilai potensi angiogenik ADSC. Angiogenesis sangat penting untuk integrasi cangkok yang efisien dengan jaringan inang.46]. Sel-sel dalam cangkok memicu angiogenesis melalui sekresi faktor parakrin. Angiogenesis juga merupakan peristiwa penting untuk perkembangan jaringan granulasi dan aktivitasnya berkurang saat jaringan granulasi matang.47]. Pembatasan terprogram dari aktivitas angiogenik pada tahap akhir penyembuhan ini sangat penting untuk mengendalikan jaringan parut dan granulasi hiper yang dapat menghambat re-epitelisasi.48]. Temuan kami juga menunjukkan bahwa ADSC pada perancah yang diaktifkan gen dapat meningkatkan pertumbuhan endotel dan mengontrol pertumbuhannya melalui pensinyalan parakrin. Selain itu, peningkatan yang signifikan dalam aktivitas metabolisme sel endotel dan pertumbuhan sebagai respons terhadap hari ke 3 CM menunjukkan potensi perancah yang diaktifkan oleh gen yang sarat ADSC untuk berintegrasi dengan jaringan inang dengan cepat. Selain itu, penggunaan sel punca CM adalah pendekatan bebas sel yang diadopsi secara umum untuk meningkatkan kualitas penyembuhan luka [49]. Sebagai batasan, kami mengakui bahwa sel endotel dermal dewasa akan menjadi model sel yang lebih baik untuk mempelajari angiogenesis; namun, untuk mempertahankan konsistensi dengan penelitian kami sebelumnya dan HUVEC diterima secara luas sebagai kandidat sel "standar emas" [50], kami mengadopsi uji angiogenesis HUVECs.

Peningkatan aktivitas remodeling fibroblas adalah gambaran umum pematangan jaringan granulasi.51]. Selama tahap ini, matriks kolagen III secara bertahap digantikan oleh serat kolagen I yang lebih kuat.51]. Serat kolagen kemudian meningkatkan kontraksi luka [52], dan kontraksi luka sangat diperlukan untuk penutupan luka secara sempurna [53]. Namun, peningkatan berkelanjutan yang agresif dalam deposisi kolagen I dapat meningkatkan pembentukan bekas luka.54]. Mengontrol jaringan parut sangat penting karena dapat menghambat perkembangan pelengkap kulit lainnya seperti folikel rambut, kelenjar sebaceous, dan kelenjar keringat, misalnya pada luka bakar.54]. Temuan kami menunjukkan bahwa CM berusia (hari ke-14) dari kelompok perancah yang diaktifkan gen dapat mengontrol ekspresi kolagen pro-fibrotik I pada fibroblas dermal dewasa. Efek terkontrol pada fibroblas ini terjadi tanpa pengaruh lebih lanjut pada migrasi fibroblas atau ekspresi kolagen III anti-fibrotiknya relatif terhadap kelompok perancah bebas gen. Oleh karena itu, kami menyarankan bahwa perancah yang diaktifkan oleh gen yang sarat ADSC dapat menawarkan kontrol yang lebih baik dalam membatasi jaringan parut in vivo melalui ekspresi kolagen I yang terkontrol. Li et al., juga telah menunjukkan bahwa CM ADSCs dapat secara signifikan mengurangi ekspresi kolagen I pada fibroblas yang berasal dari bekas luka hipertrofik [55]. Studi lain oleh Wang et al., menunjukkan penurunan serupa dalam ekspresi kolagen I pada fibroblas turunan keloid [56], secara kolektif menunjukkan potensi anti-fibrotik CM ADSC.

Salah satu temuan signifikan yang kami catat dengan penerapan -Perancah yang diaktifkan gen Klotho adalah peningkatan regenerasi membran basement di ADSC. Regenerasi membran dasar sangat penting untuk pematangan pembuluh darah dan re-epitelisasi lengkap.57,58]. Yang penting, tren di mana protein laminin(2.1-fold) dan kolagen IV (8.8-fold) diregulasi lebih lanjut menunjukkan peningkatan pematangan membran basement pada kelompok scaffold yang diaktifkan gen [59]. Selain bertindak sebagai faktor anti-penuaan [60], beta klotho berfungsi untuk meningkatkan sensitivitas terhadap fibroblast growth factor (FGF) oleh reseptor FGF [61]. Selain itu, peningkatan pensinyalan FGF telah ditemukan untuk mempromosikan pematangan membran dasar melalui pengendapan laminin dan kolagen IV.62]. Oleh karena itu, dengan mempertimbangkan peran beta klotho sebagai ko-reseptor FGF, peningkatan pematangan basement pada kelompok scaffold yang diaktifkan gen berpotensi dimediasi oleh peningkatan pensinyalan FGF ADSC.

Komponen membran basement yang sangat diregulasi dalam kelompok scaffold yang diaktifkan gen adalah protein kolagen IV. Protein kolagen IV mewakili 50 persen dari semua membran dasar [63] dan memberikan stabilitas struktural pada membran basement [59]. Namun, penuaan secara signifikan mengurangi ekspresi kolagen IV di persimpangan dermal-epidermal [58,64] dan kurangnya kolagen IV dapat meningkatkan patogenesis bekas luka [65]. Dengan demikian, hasil kami menunjukkan bahwa peningkatan potensi regeneratif membran basement dari scaffold yang diaktifkan gen yang sarat dengan ADSC dapat secara signifikan membantu dalam peningkatan penyembuhan pada pasien lanjut usia. Studi lain juga menunjukkan bahwa ECM yang berasal dari jaringan adiposa memiliki potensi terapeutik yang luar biasa untuk perbaikan kulit [66]. Selain itu, cangkok yang direkayasa jaringan yang kaya akan laminin dan kolagen IV juga menarik untuk perbaikan epitel pernapasan [67]. 

Selain kontrol pro-fibrotik terhadap fibroblas, penelitian kami lebih lanjut menunjukkan bahwa ADSC dalam perancah yang diaktifkan gen juga mengekspresikan 2-ekspresi protein terkait bekas luka yang lebih rendah -SMA % 5b68]. Meskipun kami tidak mengevaluasi dampaknya secara in vivo, pengurangan secara lokal Ekspresi -SMA sangat penting untuk penyembuhan kualitatif yang lebih baik [69]. Menggunakan agen fibrotik seperti bleomycin [70] bisa menjadi salah satu cara untuk mengevaluasi lebih baik sifat anti-fibrotik dari konstruk ADSCs / scaffold yang diaktifkan gen secara in vitro; namun, fokus kami adalah untuk menetapkan potensi terapeutik sementara dari konstruk tersebut.

Indikator lain bahwa perancah yang diaktifkan gen yang sarat ADSC dapat meningkatkan penyembuhan kualitatif adalah pengendapan matriks elastin berserat alih-alih sekresi ekstraseluler yang tidak merata pada kelompok perancah bebas gen. Deposisi elastin adalah salah satu aktivitas utama yang mendorong penyembuhan luka tanpa bekas luka pada janin [71]. Namun, kulit orang dewasa kekurangan pengendapan elastin [71]. Dengan demikian, tropoelastin, prekursor elastin, sering dimasukkan ke dalam perancah biomaterial untuk mengontrol jaringan parut pada penyembuhan luka.72]. Secara bersama-sama, fifindings kami menyiratkan bahwa ADSCs / Konstruksi scaffold yang diaktifkan oleh gen Klotho dapat memberikan respons anti-fibrotik yang kuat secara in vivo.

4. Bahan dan Metode

4.1. Persiapan Perancah yang Diaktifkan Gen

Perancah yang diaktifkan gen dikembangkan menggunakan 2-proses langkah. Pertama, perancah kolagen-kondroitin sulfat berpori padat dibuat dengan bubur pengeringan beku dari kolagen tipe 1 tendon sapi dan kondroitin-6-sulfat yang berasal dari tulang rawan hiu (Sigma, UK). Proses pengeringan beku yang dioptimalkan yang dirancang untuk menciptakan pori-pori yang seragam digunakan untuk menghasilkan perancah [73]. Berdasarkan protokol yang kami terbitkan [74], perancah beku-kering kemudian diperlakukan secara dehidrotermal (DHT) pada 105◦C di bawah vakum untuk sterilisasi dan perbaikan mekanis. Perancah yang disterilkan kemudian dihubungkan secara kimiawi dengan larutan 14 mM N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride dan 5,5 mM N-Hydroxysuccinimide (2,5 molar EDC/NHS) (Sigma, UK) untuk lebih meningkatkan stabilitas mekanik [75]. Perancah yang terhubung silang kemudian dicuci dengan PBS (Gibco, Paisley, UK) untuk menghilangkan sisa bahan kimia. Setelah perancah siap, polipleks pada rasio N/P10 (rasio nitrogen terhadap fosfat) disiapkan dengan mencampur volume larutan polyethyleneimine (PEI) bercabang yang telah ditentukan sebelumnya dengan pengkodean DNA plasmid (pDNA) untuk gen beta-Klotho manusia ( -Klotho), diperoleh dari SinoBiological, Beijing, China. Rasio N/P10 dipilih berdasarkan penelitian kami sebelumnya yang menemukan bahwa polipleks yang diformulasikan pada rasio N/P 10 dapat secara efektif membentuk nanopartikel kationik kecil yang stabil dengan plasmid sebesar GLuc (5,76 kb) [21,23]. Sebelum digunakan, plasmid diencerkan dalam air bebas endotoksin untuk mendapatkan konsentrasi kerjadari 0.5µg/µL. Plasmid mengandung sitomegalovirus segera-awal yang ditingkatkan oleh manusia(CMV3) promotor untuk mempromosikan ekspresi stabil dan transien tingkat tinggi dari yang disandikangen dalam sel mamalia.

Campuran plasmid / PEI dibiarkan mengendap selama 30 menit untuk merakit sendiri menjadi polipleksnanopartikel. Partikel nano kemudian direndam ke perancah dengan pemipetanvolume yang sama dari larutan polipleks per sisi perancah. Sebanyak 2µg pDNAdigunakan per perancah untuk mengembangkan perancah yang diaktifkan gen.

4.2. Penyemaian Sel aktif -Klotho Gene-Activated Scaffold

Human ADSC (iXCells Biotechnologies, San Diego, CA, USA) diperluas ke bagian 4 dalam media pertumbuhan ADSC (Cat no. MD0003) yang disediakan oleh perusahaan. Sebanyak 5× 105 ADSC (2.5× 105 per sisi) kemudian diunggulkan per perancah bebas gen (kontrol,n = 3) atau perancah yang diaktifkan gen (tes,n = 3). Setelah membiarkan sel mengendap sekitar 20 menit, 2 mL media transfeksi OptiMEM (Gibco, UK) ditambahkan, dan scaffold seluler diinkubasi pada suhu 37◦C selama 24 jam. Setelah inkubasi 24 jam, scaffold yang bebas-gen atau teraktivasi-gen dipindahkan ke pelat 12-sumur baru, dan diberi makan dengan 2 mL media pertumbuhan ADSC. Pergantian media kemudian dilakukan setiap 3-4 hari hingga hari ke-14 dengan mengumpulkan 1 mL media terkondisi (CM) dan menggantinya dengan media baru dengan volume yang sama. Semua CM disimpan di−80 ◦C sampai analisis.

4.3. qRT-PCR Analisis untuk Menentukan -Klotho Gene Overexpression dan Aktivasi Gen Fungsional

Untuk menentukan regulasi transien dari gen target, sel dipanen pada hari ke 3 (awal) dan 14 (akhir) pasca-pembibitan pada perancah yang bebas gen atau yang diaktifkan gen. Sel-sel pertama kali dilisiskan menggunakan reagen lisis Qiazol (Qiagen, Germantown, MD, USA). Kloroform kemudian ditambahkan untuk memisahkan lisat sel menjadi fase protein, DNA, dan RNA. Menggunakan RNeasy Kit (Qiagen, Manchester, UK), RNA diekstraksi, dan kualitas serta kuantitasnya ditentukan menggunakan pembaca plat Multiskan Go (Thermo Scientific, UK) dengan absorbansi yang ditetapkan pada 260 nm. DNA genom kemudian dihilangkan dengan mencampurkan RNA dengan buffer wipeout DNA genomik (Qiagen, Manchester, UK) dan dipanaskan hingga 42◦C selama 2 menit. Selanjutnya, transkripsi balik dilakukan untuk menyiapkan cDNA. Duplikat cDNA per ulangan (n = 3) dimuat ke pelat qRT-PCR dan kemudian pengujian dijalankan menggunakan primer yang tercantum dalam Tabel1. Perubahan lipat dalam ekspresi mRNA relatif terhadap sel pada perancah bebas gen dihitung menggunakan 2−∆∆CTmetode dari rata-rata tiga ulangan per kelompok. GAPDH manusia (Hs_GAPDH_1_SG, Cat. No. QT00079247) digunakan sebagai gen housekeeping.

4.4. Analisis Bioaktivitas Faktor Tersekresi dari ADSCs pada -Klotho Gen-Diaktifkan Perancah

4.4.1. Analisis Bioaktivitas Pro-Angiogenik

4.4.2. Dermal Fibroblast Penyembuhan dan Analisis Pematangan

Setelah uji angiogenesis, kami menyelidiki potensi CM untuk penyembuhan dermal dengan menggunakan uji awal fibroblas dermal manusia dewasa (iXcells, Cat no. 10 HU-014). Untuk penelitian ini, kami secara khusus memilih CM berusia dari hari ke 14 untuk mempelajari pengaruhnya terhadap penutupan luka fibroblas selama maturasi. Sebanyak 1× 104 sel/sumur dalam pelat 96-sumur diunggulkan dan diinkubasi semalaman dalam media pertumbuhan fibroblas. Keesokan harinya, luka dibuat pada monolayer dengan menggores ujung pipet 200 uL secara horizontal melintasi sumur. Monolayer kemudian dibilas dengan PBS untuk menghilangkan kotoran dan diberi makan dengan CM. Penutupan luka dicatat antara 12-16 jam setelah goresan. Imunostaining digunakan untuk mempelajari ekspresi kolagen pro-fibrotik I (1:100, Novusbio, UK) dan kolagen anti-fibrotik III (1:100, Novusbio, UK) pada fibroblas. Fibroblas diimbangi dengan rhodamine (1:800, Abcam, UK) untuk pencitraan F-aktin. Imunostaining dilakukan seperti yang dijelaskan dalam Bagian4.5, dengan pengecualian pemrosesan jaringan dan deparafinisasi. Baik HUVEC dan fibroblas digunakan pada bagian 4.

4.5. Pencitraan imunoffluoresensi dari Protein Matriks Ekstraseluler

Setelah 14 hari kultur, scaffold yang bebas gen atau teraktivasi gen dipanen untuk mendeteksi deposisi matriks menggunakan imunofluoresensi. Pemrosesan sampel dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya. Secara singkat, perancah pertama kali dicuci dengan PBS dan difiksasi dalam formalin buffer netral 10 persen selama 20 menit. Sampel tetap kemudian diproses menggunakan protokol standar untuk deparafinisasi. Blok kemudian dipotong menjadi 7-µm irisan tebal dan dikumpulkan pada slide yang diisi. Bagian kemudian dideparafinisasi menggunakan xylene diikuti dengan rehidrasi bagian dengan penurunan gradien etanol. Selanjutnya, sel-sel itu permeabilisasi dengan 0.2 persen Tween®20 (Sigma-Aldrich, Prancis) dalam PBS selama 30 menit (10 menit cuci× 3) dan diblokir menggunakan 10 persen NGS (Normal Goat Serum, Invitrogen, Rockford, IL, USA)/5 persen BSA/0,3 M Glycine (disiapkan dalam larutan permeabilisasi) selama 1 jam. Setelah pemblokiran, slide dibilas dalam PBS dan kemudian diinkubasi pada 4◦C semalam dengan antibodi untuk menargetkan protein matriks yang tercantum dalam Tabel2. Keesokan harinya, slide dibilas dalam PBS tiga kali masing-masing selama 2-3 menit untuk menghilangkan antibodi primer yang tidak terikat. Selanjutnya, slide diinkubasi di Alexa 488-IgG anti-tikus kambing terkonjugasi (A32723, Invitrogen, UK) atau Alexa 594-IgG anti-kelinci kambing terkonjugasi (A11012, Invitrogen, UK) pada 1: pengenceran 800 pada suhu kamar selama 1 jam dalam gelap. Langkah pembilasan dilakukan seperti sebelumnya dan pewarnaan ulang untuk inti menggunakan media pemasangan dengan DAPI (ab104139, Abcam, UK). Slide kemudian dicitrakan menggunakan mikroskop fluoresensi (Olympus BX43, Jepang) pada 20× objektif. Sampel yang diinkubasi dengan hanya antibodi sekunder digunakan sebagai kontrol.

Kuantifikasi Gambar

Perangkat lunak Image] (Image, NIH, MD, USA) digunakan untuk menentukan secara semi-kuantitatif jumlah protein yang diekspresikan. Untuk setiap penanda, nilai ambang konstan pertama kali ditentukan melalui pencitraan awal dari berbagai bagian. Menggunakan kepadatan nilai ambang batas yang ditetapkan (area bernoda x nilai abu-abu rata-rata) dari gambar ditentukan dan kemudian dinormalisasi ke jumlah sel (penghitungan DAPI) untuk memberikan kerapatan fluoresensi rata-rata akhir per sel. Rata-rata dihitung dari 8-10 gambar acak per ulangan dengan minimal tiga ulangan per grup. Rata-rata yang diperoleh dari tiga ulangan/kelompok kemudian digunakan untuk mengukur ekspresi relatif antar kelompok.

4.6. Analisis statistik

Semua hasil dinyatakan sebagai rata-rata ditambah standar deviasi. Unpaired, two-tailed t-test umumnya digunakan untuk menghitung signifikansi statistik antar kelompok, di mana p < 0.05 dianggap signifikan

Studi ini menunjukkan bahwaanti penuaan -Klotho cistanche yang diaktifkan genpenawaran dikendalikan aktivasi kapasitas regeneratif ADSC. Temuan utama dari penelitian ini adalah (1)peningkatan sementara pluripotensi sel induk dan respon anti-fibrotik, (2)meningkatkan kontrol parakrin menuju angiogenesis, dan remodeling kolagen pro-fibrotikdalam fibroblast dermal, dan akhirnya, (3)peningkatan pematangan membran basaldengan kontrol atas ekspresi protein terkait bekas luka. Secara meyakinkan, hasil ini menyarankanbahwa ADSC-sarat Perancah yang diaktifkan gen -Klotho mungkin memiliki potensi besar amengobati berbagai macam luka kulit.

sumber daya, SEMUA, FJO dan MBK; kurasi data, ALL dan MBK; tulisan—persiapan draf aslition, SEMUA; menulis—review dan editing, ALL, FJO dan MBK; visualisasi, SEMUA; pengawasan,FJO dan MBK; administrasi proyek, MBK; akuisisi pendanaan, FJO dan MBK Semua penulistelah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Konflik kepentingan:Para penulis menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan.

Referensi

1.Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB Inovasi dalam sistem pengiriman gen dan faktor pertumbuhan untuk penyembuhan luka diabetes.J. Jaringan Eng. Regen. Kedokteran2018, 12, e296–e312. [CrossRef] [PubMed] 

2. Makrantonaki, E.; Wlaschek, M.; Scharffetter-Kochanek, K. Patogenesis gangguan penyembuhan luka pada lansia.JDDG J.Dtsch. Dermatol. Ges.2017, 15, 255–275. [CrossRef] [PubMed]

3. Ganguly, P.; El-Jawhari, JJ; Burska, AN; Ponchel, F.; Giannoudis, PV; Jones, EA Analisis penuaan in vivo pada sel stroma mesenchymal sumsum tulang manusia menggunakan uji unit-fibroblast pembentuk koloni dan fenotipe CD45lowCD271 plus.Sel Punca Int.2019, 2019, 5197983. [CrossRef] 

4. Westerweel, PE; Teraa, M.; Rafifii, S.; Jaspers, JE; Putih, IA; Hooper, AT; Verhaar, MC Gangguan mobilisasi sel progenitor endotel dan stroma sumsum tulang disfungsional pada diabetes mellitus.PLo SATU2013, 8, e60357. [CrossRef] 

5. Murray, RZ; Barat, ZE; Cowin, AJ; Farrugia, BL Pengembangan dan penggunaan biomaterial sebagai terapi penyembuhan luka.Membakar. Trauma2019, 

6. [CrossRef] [PubMed] 6. Ibrahimian, TG; Pouzoulet, F.; Squiban, C.; Buard, V.; André, M.; Sepupu, B.; Tamarat, R. Terapi sel berdasarkan sel stroma yang berasal dari jaringan adiposa mendorong penyembuhan luka fisiologis dan patologis.Arterioscler. Denyut. Vasc. Biol.2009, 29, 503–510. [CrossRef] 

7. Wu, Y.; Chen, L.; Scott, PG; Tredget, EE Mesenchymal stem cells meningkatkan penyembuhan luka melalui diferensiasi dan angiogenesis.Sel Punca2007, 25, 2648–2659. [CrossRef] [PubMed] 

8. Foubert, P.; Gonzales, AD; Teodosescu, S.; Berard, F.; Doyle-Eisele, M.; Yekkala, K.; Fraser, JK Terapi Sel Regeneratif Turunan Adiposa untuk Penyembuhan Luka Bakar: Perbandingan Dua Metode Pengiriman.Lanjut Perawatan Luka2016, 5, 288–298. [CrossRef] [PubMed]

9. Assi, R.; Foster, TR; Dia, H.; Stamati, K.; Bai, H.; Huang, Y.; Dardik, A. Penghantaran sel punca mesenkimal dalam scaffold rekayasa biomimetik mendorong penyembuhan ulkus diabetik.Regen. Kedokteran2016, 11, 245–260. [CrossRef] [PubMed] 

10. Jiang, Y.; Chen, B.; Liu, Y.; Zhufu, Z.; Yan, X.; Hou, X.; Tan, Q. Pengaruh perancah kolagen dengan sel fraksi vaskular stroma yang diturunkan adiposa pada penyembuhan luka diabetes: Sebuah studi dalam model babi diabetes.Jaringan Eng. Regen. Kedokteran2013, 10, 192–199. [CrossRef] 

11. Falanga, V.; Sabolinski, M. Konstruksi kulit hidup berlapis ganda (APLIGRAF®) mempercepat penutupan total ulkus vena yang sulit sembuh.Regen Perbaikan Luka.1999, 7, 201–207. [CrossRef] 12. Hart, CE; Loewen-Rodriguez, A.; Lessem, J. Dermagraft: Gunakan dalam pengobatan luka kronis.Lanjut Perawatan Luka.2012, 1, 138–141. [CrossRef] [PubMed] 13. Dinh, TL; Veves, A. Khasiat Apligraf dalam pengobatan ulkus kaki diabetik.Plas. Rekonstruksi Surg.2006, 117, 152S–157S. [CrossRef] [PubMed]

14. Eaglstein, WH; Falanga, V. Rekayasa jaringan dan pengembangan Apligraf®, setara dengan kulit manusia.Klinik. Ada.1997, 19, 894–905. [CrossRef] 

15. Jiang, T.; Xu, G.; Wang, Q.; Yang, L.; Zheng, L.; Zhao, J.; Zhang, X. In vitro, ekspansi merusak stemness sel punca mesenchymal bagian awal untuk pengobatan cacat tulang rawan.Kematian Sel Dis2017, 8, e2851. [CrossRef] [PubMed]

16. Liu, J.; Ding, Y.; Liu, Z.; Liang, X. Senescence di Mesenchymal Stem Cells: Perubahan Fungsional, Mekanisme Molekuler, dan Strategi Peremajaan.Depan. Pengembang Sel. Biol.2020, 8, 258. [CrossRef] [PubMed] 

17. Wang, W.; Xu, X.; Li, Z.; Lendlein, A.; Ma, N. Rekayasa genetika sel punca mesenchymal dengan pengiriman gen non-virus.Klinik. hemoheol. Lingkaran mikro.2014, 58, 19–48. [CrossRef] 

18. Deveza, L.; Choi, J.; Lee, J.; Huang, N.; Cooke, J.; Yang, F. Ekspresi Berlebih CXCR4 yang Diinduksi Polimer-DNA Nanopartikel Meningkatkan Pengerjaan Sel Punca dan Regenerasi Jaringan dalam Model Iskemia Hindlimb Tikus.Theranostika2016, 6, 1176–1189. [CrossRef] [PubMed] 

19. O'Brien, FJ Biomaterial & perancah untuk rekayasa jaringan.Mater. Hari ini2011, 14, 88–95. 20. Yannas, I.; Tzeranis, D.; Harley, B.; Jadi, P. perancah berbasis kolagen yang aktif secara biologis: Kemajuan dalam pemrosesan dan karakterisasi.Filos. Trans. R. Soc. Matematika. Fisika. Eng. Sains.2010, 368, 2123–2139. [CrossRef] 

21. Laiva, AL; Kasau, RM; Keogh, MB; O'Brien, FJ Dampak pro-angiogenik dari SDF-1 perancah berbasis kolagen yang diaktifkan gen dalam angiogenesis yang digerakkan oleh sel punca.Int. J. Farmasi.2018, 544, 372–379. [CrossRef] [PubMed] 

22. Lackington, WA; Kasau, RM; O'Brien, FJ Kemanjuran in vitro dari saluran panduan saraf yang diaktifkan gen yang menggabungkan nanopartikel PEI-pDNA non-viral yang membawa gen yang mengkode untuk NGF, GDNF dan c-Jun.Biomater Akta.2018, 75, 115–128. [CrossRef] 

23. Tierney, EG; Duffy, GP; Hibbitts, AJ; Cryan, SA; O'Brien, FJ Pengembangan matriks teraktivasi gen non-viral untuk regenerasi tulang menggunakan polyethyleneimine (PEI) dan perancah berbasis kolagen.J.Kontrol. Melepaskan2012, 158, 304–311. [CrossRef] [PubMed] 24. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB SDF-1 perancah kolagen yang diaktifkan gen mendorong diferensiasi fungsional sel Schwann manusia untuk aplikasi penyembuhan lukaBioteknologi. Bioeng.2021, 118, 725–736. [CrossRef] [PubMed]