Inti Talamikus Anterior: Substrat Kritis Untuk Memori Pasangan Berpasangan Non-spasial pada Tikus Bagian 2

2|BAHAN DAN METODE

2.1|Hewan dan kondisi perumahan

Tikus Long-Evans jantan (berusia 12 bulan; rata-rata 630 g) ditempatkan dalam kelompok yang terdiri dari tiga atau empat orang di kandang Makrolon (48 28 22 cm) dengan siklus terang-gelap 12- jam terbalik (lampu menyala pada jam 8 malam ).

Pengujian perilaku dilakukan pada fase gelap siklus terang, lima sesi per minggu; observasi menegaskan bahwa tikus relatif lebih aktif selama fase gelap. Tikus dipelihara pada 85% dari berat badan yang diberi makan gratis dengan air ad libitum; makanan ad libitum sebelum dan sesudah operasi untuk pemulihan pasca operasi.

Pembedahan adalah proses mengobati penyakit dan meningkatkan kesehatan fisik. Proses pemulihan pasca operasi memerlukan perhatian khusus. Selain pemulihan fisik, perasaan baik juga memerlukan fokus pada pemulihan ingatan. Ada hubungan kuat antara pemulihan pasca operasi dan memori.

Selama operasi, faktor-faktor seperti respon tubuh terhadap kesulitan dan efek obat anestesi seringkali mempengaruhi fungsi memori otak. Setelah tubuh pulih, perhatikan menjaga pola makan yang baik, olahraga ringan, dan tidur yang cukup. Selama masa pemulihan di luar rumah sakit, Anda harus tetap menghindari aktivitas berlebihan dan menjaga kenyamanan tubuh.

Selain kebiasaan hidup, penyesuaian psikologis yang wajar juga membantu dalam memulihkan kesehatan dan ingatan. Rilekskan diri Anda, pertahankan pikiran yang tenang, dan bantu diri Anda menyesuaikan diri dengan pemulihan ingatan. Pada saat yang sama, Anda harus berpartisipasi aktif dalam aktivitas rekreasi dan berkomunikasi dengan kerabat dan teman agar otak Anda tetap aktif dan meningkatkan kemampuan kognitif dan memori Anda. Kegiatan ini dapat ditingkatkan secara bertahap dan pada dasarnya dapat dilakukan seminggu sekali.

Singkatnya, proses pemulihan setelah operasi memerlukan perhatian menyeluruh. Mempertahankan kebiasaan hidup yang baik dan penyesuaian psikologis memainkan peran yang sangat penting dalam mendorong pemulihan fisik dan pemulihan ingatan. Mari kita menghadapinya secara positif, dengan penuh keyakinan dan harapan. Kita perlu meningkatkan daya ingat, dan Cistanche deserticola dapat meningkatkan daya ingat secara signifikan, karena Cistanche deserticola juga dapat mengatur keseimbangan neurotransmiter, seperti meningkatkan kadar asetilkolin dan faktor pertumbuhan. Zat-zat ini sangat penting untuk daya ingat dan pembelajaran. Selain itu, Daging juga dapat meningkatkan aliran darah dan meningkatkan pengiriman oksigen, yang dapat memastikan otak menerima nutrisi dan energi yang cukup, sehingga meningkatkan vitalitas dan daya tahan otak.

Klik tahu cara meningkatkan fungsi otak

Semua prosedur mematuhi pedoman yang disetujui dari Komite Etika Hewan Universitas Canterbury. Empat kelompok tikus dibentuk secara acak setelah familiarisasi pra-operasi di labirin lengan radial (RAM) dan landasan pacu. Keempat kelompok tersebut adalah lesi ATN bilateral dengan atau tanpa jejak antara bau dan rangsangan objek ketika dilatih dalam tugas berpasangan dan dua kelompok lesi Sham yang sesuai.

Ukuran sampel akhir adalah (1) Sham-No Trace=7 (yaitu kelompok lesi Sham tanpa interval antara bau dan rangsangan objek yang digunakan dalam tugas berpasangan); (2) Sham-Trace=7 (Kelompok Shamlesi diberi jejak 10-s antara presentasi bau dan objek rangsangan); (3) ATN-Tanpa Jejak=8;dan (4) ATN-Jejak=9. Tikus dengan lesi ATN tambahan dikeluarkan karena tidak memenuhi kriteria lesi (lihat di bawah).

2.2|Operasi

Tikus dianestesi dengan isofluran (induksi 4%; pemeliharaan 2,5%) dan ditempatkan dalam alat stereotaxic dengan batang telinga atraumatik (Kopf, Tujunga, CA). Batang gigi seri dipasang 7,5 mm di bawah garis interaural untuk meminimalkan kerusakan forniks.

Di setiap belahan bumi, dua infus diarahkan ke nukleus anteroventral (AV; atas dan bawah), dan satu infus diarahkan ke nukleus anteromedial (AM). Setiap operasi menggunakan satu dari lima koordinat anterior-posterior (AP) relatif terhadap jarak Bregma-Lambda tikus (semua nilai dalam mm). Untuk lesi AV, koordinat AP adalah: 2.20 untuk B – L 6.9–7.2; 2.25 untuk B–L 7.3 hingga 7.6; 2.30 untuk B–L Lebih besar dari atau sama dengan 7.7. Infus AV dibuat pada 5,68 dan 5,73 di bawah dura dan 1,52 lateral garis tengah.

Infus AM dibuat {{0}},1 mm lebih anterior dari koordinat AV, pada 5,76 di bawah dura dan 1,16 lateral; lesi AM pertama dibuat setelah menyelesaikan semua infus AV dan dimulai kontralateral dari lokasi lesi AV terakhir. 0.15 M N-metil-d-aspartat (NMDA; Sigma, CastleHill, NSW) dalam 0.1 M buffer fosfat (pH 7,20) dimasukkan ke setiap lokasi dengan kecepatan 0,04 ul per menit melalui a 2.5-alat suntik ulHamilton (Reno, NV, USA) menggunakan pompa infus mikro (Stoelting, Wood Dale, IL).

Belahan situs AV masing-masing menerima {{0}}.12 dan 0.10 ul untuk situs dorsal dan ventral; 0,06 ul digunakan untuk setiap situs AM. Jarum suntik tetap di tempatnya selama 3 menit per sisi, pasca infus.
Pembedahan lesi palsu menggunakan prosedur yang sama, namun jarum diturunkan hingga 1 mm di atas lokasi lesi AV dan AM bagian atas tanpa pemberian infus.

2.3|Tugas perilaku

RAM delapan lengan mengkonfirmasi penurunan memori spasial pada tikus dengan lesi ATN setelah operasi. Peralatan landasan digunakan untuk melatih tikus dalam semua tugas non-spasial, yaitu, penciuman sederhana dan diskriminasi objek sederhana serta tugas berpasangan terkait bau-objek dan bau-jejak-objek.

Sebelum operasi, tikus yang dibatasi makanannya terbiasa dengan RAM delapan lengan, yang dijelaskan di bawah, untuk mengambil 0,1 g potongan coklat (Foodfirst LTD Auckland, NZ) dan beradaptasi dengan membuka dan menutup pintu lengan. Di landasan pacu Perspex merah (Gambar 1), tikus juga dibentuk untuk menyodokkan hidung ke tutup plastik putih melingkar berukuran 2-cm yang berada 10 cm di atas permukaan lantai dan di tengah-tengah spons tipis pada sisipan Perspex bening yang ditempelkan pada dinding ujung.

Mereka juga dibentuk untuk mendorong (menggunakan hidung atau cakar) sebuah benda yang berengsel di bagian belakang alasnya ke atas wadah makanan yang tersembunyi di tengah balok kayu berukuran 5 x 8,5 x 3 cm. Makanan tersebut berisi potongan coklat (dan menyimpan makanan yang tidak dapat diakses di bawah ceruknya). Benda yang digunakan untuk prapelatihan tidak digunakan lagi. Setelah operasi, tikus yang pulih dibiasakan kembali dengan RAM dan landasan pacu.

2.4|Memori kerja spasial dalam RAM

Pasca operasi, memori kerja spasial diuji menggunakan RAM yang terletak di tengah ruangan tanpa jendela (3 3 m). Labirin tersebut memiliki hub tengah kayu bercat abu-abu selebar 35 cm dengan delapan lengan aluminium (panjang 65 cm, lebar 8,6 cm, dengan tinggi tepi 4,5 cm), ditinggikan 67,5 cm di atas lantai ruangan. Dinding Perspex bening (panjang 19 cm dan tinggi 25 cm) memanjang di salah satu sisi setiap lengan dari hub untuk mencegah tikus melompat di antara lengan.

Sebuah wadah makanan kayu hitam (5 8,5 3 cm), dengan makanan yang tidak dapat diakses di bawahnya, ditempatkan di ujung setiap lengan. Selama pengujian, 2 0,1 g keping coklat terdapat di setiap wadah makanan di awal setiap wadah makanan. uji coba. Pintu Clear Perspexguillotine, yang dapat diangkat dari bawah hub dengan sistem katrol, mengontrol akses ke hub dan lengan.

Pelatihan formal sepuluh hari berturut-turut dalam RAM digunakan untuk menguji memori kerja spasial. Tikus ditempatkan di hub tengah, dan 10 detik kemudian, kedelapan lengan dibuka, dan tikus diizinkan membuat pilihan yang ditentukan dengan kedua kaki belakang melewati ambang lengan. Setelah tikus memasuki suatu lengan, semua pintu ditutup, dan tikus dikurung di lengan tersebut selama 15 detik terlepas dari apakah pilihannya benar.

Tikus itu kemudian diizinkan kembali ke hub pusat dan ditahan di sana selama 10 detik sebelum semua pintu dibuka kembali untuk memungkinkan pilihan lengan lainnya. Percobaan menyimpulkan ketika tikus telah mengunjungi kedelapan kelompok, 20 pilihan kelompok telah dibuat atau 10 menit telah berlalu.

2.5|Tugas non-spasial: Diskriminasi sederhana dan pembelajaran berpasangan

Baik tugas diskriminasi sederhana maupun tugas berpasangan menggunakan landasan pacu Perspex merah yang sama (93 26 26 cm) yang ditempatkan pada meja setinggi 75-cm (Gambar 1). Landasan pacu dapat dibagi dengan tiga pintu yang dapat dilepas secara vertikal (Perspex merah, 26 26 cm) yang dipilih berdasarkan tugas perilaku tertentu. Sebagai pengenalan, spons tipis berukuran 6,5 x 8 mm dengan tutup di bagian tengahnya berisi hadiah makanan coklat (Gambar 1).

Spons ditempelkan pada pintu yang dapat dilepas di runway (untuk tugas berpasangan) atau di dinding ujung runway (untuk tugas diskriminasi sederhana). Spons doorplus yang berbeda digunakan untuk setiap bau, yang dimasukkan ke dalam wadah dengan 5 ml minyak bunga matahari yang dicampur dengan 20 ul bahan Minyak Atsiri Selandia Baru.

Baunya adalah lemon dan cengkeh untuk tugas berpasangan, dan kayu manis dan jeruk nipis untuk tugas diskriminasi sederhana, atau sebaliknya dalam kelompok penyeimbang. Benda-benda ringan dan berbeda secara visual (Gambar 1) dipasang dengan engsel di bagian belakang alasnya ke bagian atas wadah makanan sehingga tikus dapat dengan mudah mendorong benda tersebut ke belakang (baik hidung atau cakarnya) untuk mencari hadiah makanan di dalam sumur.

Sebuah bingkai kayu (tinggi 1,8 m dari lantai dan lebar 1,3 m), dibungkus dengan tirai hitam, menutupi semua sisi area pengujian untuk mengurangi isyarat spasial selama pengujian.

Diskriminasi sederhana (hanya bau; hanya objek) dan tugas berpasangan menggunakan prosedur 'go/no-go'.

Percobaan pertama untuk setiap sesi dimulai dengan menahan tikus di area awal selama 120 detik untuk menyesuaikan diri kembali dengan labirin; uji coba selanjutnya menggunakan 20 detik di area awal ini. Allrats menerima 12 uji coba massal per sesi harian, dengan enam uji coba go (berhadiah) dan enam uji coba no-gos (tidak dihargai) dalam urutan acak semu. Tidak lebih dari tiga uji coba go atau tiga no-go dijalankan secara berurutan dalam satu sesi.

Tak satu pun dari empat pasangan rangsangan bau-objek yang berbeda diulangi pada percobaan berturut-turut. Item yang benar dalam tugas diskriminasi sederhana dan pasangan stimulus yang benar dalam tugas berpasangan-asosiasi diimbangi pada seluruh tikus.

Untuk membedakan bau secara sederhana, responsnya didefinisikan sebagai hidung yang dimasukkan ke dalam tutup di tengah spons yang diberi bau; mengendus spons saja dianggap sebagai respons yang tidak boleh dilakukan. Makanan selalu ada dalam tutup di tengah spons untuk tugas-tugas yang berhubungan dengan bau-objek; aspek go/no-go di sini mengacu pada apakah objek didorong untuk menunjukkan apakah ada hadiah makanan di bawahnya, di ujung landasan.

Untuk benda, respons didefinisikan sebagai dorongan apa pun dengan hidung atau cakar yang membuat benda tersebut miring ke belakang. Latensi sejak pintu terakhir dibuka dan saat tikus berinteraksi dengan bau (hidung menyodok tutup; untuk diskriminasi bau sederhana) atau dengan objek (didorong kembali pada engsel, untuk diskriminasi objek sederhana dan tugas berpasangan) adalah diukur menggunakan stopwatch yang tenang (Dick Smith, Selandia Baru).

Pengamat duduk di dalam tirai dan berdekatan dengan landasan pacu untuk mengoperasikan pintu dan mencatat perilaku. Suatu percobaan dianggap 'benar' jika tikus merespons dalam waktu kurang dari 8 detik pada uji coba berjalan atau tidak merespons sebelum 8 detik pada uji coba tanpa jalan.

2.6|Diskriminasi sederhana

Separuh dari tikus menerima pelatihan dalam tugas diskriminasi bau sederhana diikuti dengan diskriminasi objek sederhana dan sebaliknya untuk separuh lainnya. Latensi antara Pintu X (Gambar 1a) dan interaksi dengan bau atau benda di ujung landasan dicatat. Tikus dilatih tentang tugas membedakan bau sederhana dan objek sederhana hingga mereka mencapai kriteria (80% benar selama 2 hari berturut-turut).

Untuk tugas diskriminasi bau yang sederhana, satu bau disajikan pada setiap percobaan. Tikus harus membedakan mana dari dua bau yang dipadukan dengan hadiah makanan yang disajikan dalam spons di ujung Kompartemen B (Gambar 1a).

Dalam tugas diskriminasi objek sederhana, satu objek disajikan pada setiap percobaan di akhir Kompartemen B (tidak ditunjukkan pada Gambar 1). Therat harus mempelajari yang mana dari dua benda yang dipasangkan dengan hadiah makanan yang disajikan di bawah benda tersebut.

2.7|Tugas berpasangan berpasangan (jejak dan tanpa jejak) Tugas ini menggunakan tata letak baru pintu yang dapat dilepas secara vertikal (Gambar 1). Tikus mengetahui mana dari dua pasangan bau-objek yang akan diberi imbalan (misalnya Bau 1 + ObjekA dan Bau 2 + Objek B) dan pasangan mana yang tidak diberi imbalan (yaitu Bau 1 + Objek B dan Bau 2 + Objek A).

Terlepas dari pasangannya, tikus selalu menerima hadiah atas presentasi bau ketika diizinkan masuk ke kompartemen kedua landasan pacu. Ini adalah kompartemen C untuk kondisi 'tanpa jejak' di mana Kompartemen A tidak digunakan dan Kompartemen B adalah kompartemen awal. Baunya ada di ujung Kompartemen B untuk kondisi 'jejak', dimana Kompartemen A digunakan sebagai kotak start.

Tikus dalam kondisi jejak dikenakan penundaan 10-s antara presentasi bau dan rangsangan objek, dengan ditahan di Kompartemen C, sedangkan tikus dalam kondisi tanpa jejak dipaparkan ke objek segera setelah interaksinya dengan bau (setelah memakan hadiahnya). Baik dalam kondisi jejak maupun tanpa jejak, kami mencatat latensi untuk melintasi Kompartemen D, sejak DoorZ diangkat hingga tikus berinteraksi dengan objek atau menahan diri untuk berinteraksi dengannya selama 8 detik.

Dua kelompok tikus (lesi palsu dan lesi ATN) dilatih pada tugas asosiasi berpasangan bau-objek (kelompok Tanpa Jejak), dan dua kelompok terkait dilatih pada tugas asosiasi berpasangan bau-jejak-objek (grup Jejak) sampai mereka mencapai kriteria (80% uji coba benar dalam 3 hari) atau maksimal 50 hari.

2.8|Tes retensi pasca akuisisi

Retensi tugas berpasangan untuk setiap tikus dilakukan 5 hari setelah mencapai kriteria atau setelah 50 hari pelatihan. Sesi ini menggunakan 12 uji coba massal yang diberi imbalan/tidak diberi imbalan pada satu hari dengan cara yang sama seperti yang digunakan sebelumnya pada tikus tersebut.

2.9|Histologi

2.9.1|Perfusi dan pengumpulan jaringan

Pada 3 hari sebelum uji retensi, tikus tunggal dibiasakan dengan kandang kosong yang bersih selama 90 menit di ruangan gelap dan tenang. Segera setelah percobaan terakhir dalam uji retensi, tikus ditempatkan di kandangnya di ruangan gelap dan tenang 90 menit sebelum dilakukan perfusi.

Tikus dibius secara mendalam dengan natrium pentobarbital (125 mg/kg) dan diperfusi secara transkardial dengan garam diikuti oleh paraformaldehida [4% PFA dalam 0.1 M buffer fosfat(PB)] untuk memperbaiki otak. Otak difiksasi dalam PFA 4% diikuti dengan minimal 48 jam dalam larutan jangka panjang (20% gliserol dalam 0.1 M PB). Bagian koronal berukuran 40-μm dikumpulkan menggunakan mikrotom pembekuan (Thermo Fisher, UK) dan disimpan dalam larutan krioprotektan (30% gliserol, 30% etilen glikol dalam 0,1 M PB) pada suhu 20 C hingga diproses untuk imunohistokimia.

Bagian koronal dikumpulkan dalam dua seri terpisah. Seri pertama menangkap bagian berturut-turut dalam lima cryovial untuk imunohistokimia (yaitu satu dari lima). Rangkaian ini mencakup bagian blok anterior dari korteks prefrontal ke area septum (kira-kira {{0}},7 hingga 0,6 mm dari Bregma) dan blok posterior dari talamus mediodorsal (kira-kira 3,5 mm dari Bregma) ke bagian ekor. korteks retrosplenial.

Seri kedua menangkap bagian yang berurutan untuk verifikasi lesi. Bagian ini dikumpulkan dalam empat cryovial mulai dari anterior ATN hingga thalamus mediodorsal posterior (kira-kira 0,6 hingga 3,5 mm dari Bregma).

2.9.2|Pewarnaan Neu-N dan verifikasi lesi ATN

Bagian yang mengambang bebas di seluruh wilayah ATN dicuci (3 10 mnt) dalam 0.1 M larutan salin yang mengandung fosfat dengan Triton-X (0,2%; PBSTx) sebelum diinkubasi dalam buffer penghambat peroksidase endogen selama 30 min [1% hidrogen peroksida (H2O2), 50% metanol (CH3OH) dalam 2%PBSTx].

Bagian diinkubasi semalaman pada antibodi primer inanti-NeuN 4 C (1:5000; monoclonal-MouseCat# MAB377; Millipore, California USA) dalam PBSTx dengan 1% serum kambing normal (NGS; Life Technologies, NZ).

Buffer antibodi berlebih dihilangkan dengan PBSTx dan diikuti dengan inkubasi dalam antibodi sekunder anti-tikus kambing yang terbiotinilasi (1:1000 Cat# BP-9200-50: VectorLaboratories, California USA) semalaman pada suhu 4 C di PBSTx dan 1% NGS. Bagian ditempatkan dalam ExtrAvidin (konjugasi peroksidase; 1:1000; Sigma, NSW Australia), PBSTx dan 1% NGS selama 2 jam pada suhu kamar.

Untuk menghilangkan kelebihan ExtrAvidin dan Triton X{{0}}, bagian tersebut dicuci dalam PBS, PB, dan kemudian buffer Tris (pH 7,4 dalam H2 sulingan0) untuk menyiapkan bagian tersebut untuk visualisasi dengan diaminobenzidine yang baru disiapkan ( DAB 0,05%; Sigma, dalam 0,01% H2O2 dalam buffer Tris).

Reaksi DAB (kira-kira 5 menit) dihentikan menggunakan buffer Tris (pencucian 1-10 menit), dan potongan ditempatkan dalam PB pada suhu 4 C semalaman sebelum dipasang pada slide agar-agar dan dibiarkan kering. Slide didehidrasi melalui alkohol bertingkat (70% –100%) sebelum dibersihkan dalam xylene dan dipasang dengan DPX (06522; Sigma-Aldrich) dan kaca penutup.

Jumlah sel Neu-N-positif di ATN digunakan untuk menentukan luas lesi. Ini menggunakan bagian dari belahan kiri dan kanan untuk setiap bagian dalam empat40-μm di seluruh ATN dan area tersebut diukur menggunakan ImageJ (NIH, USA). Pewarnaan sel NeuN-positif difoto pada 5 tujuan pada mikroskop tegak LeicaDM6 B dan kamera DFC7000T (Leica Microsystems, Jerman).

Penghitungan sel secara otomatis diperoleh melalui ImageJ (perangkat lunak analisis gambar, National Institute of Health, NIH, USA). Area di sekitar neuron di wilayah ATN dipilih secara manual dan gambar diubah menjadi skala abu-abu {{0}}, latar belakang dikurangi (bergulir=40), diubah menjadi topeng dan fungsi daerah aliran sungai diterapkan, dan semua sel saraf di atas ambang batas (ambang batas 'MaxEntropy', sirkularitas 0.5–1.0) dihitung.

Ambang deteksi adalah sama untuk semua bagian. Inti sel yang diwarnai NeuN otomatis dihitung pada sembilan tikus palsu (lima pada kelompok Sham-Trace dan empat pada kelompok Sham-No Trace) untuk menyatakan jumlah sel dalam ATN.

Jumlah otomatis inti sel yang ternoda NeuN pada semua tikus yang terkena ATN dibandingkan dengan jumlah rata-rata sel NeuN yang diamati pada tikus palsu. Lesi yang dapat diterima didefinisikan ketika mencapai kriteria hilangnya sel sebesar 50% pada ATN, dengan minimal 25% per belahan. Hal ini konsisten dengan kriteria lesi ATN pada penelitian sebelumnya (Mitchell & Dalrymple-Alford, 2005, 2006; Perry et al., 2018).

2.9.3|imunohistokimia Zif268

Bagian yang mengambang bebas diproses dengan cara yang mirip dengan NeuN, tetapi diinkubasi dalam antibodi primer poliklonal Zif268 kelinci (Egr-1; 1:1000 Cat# sc-110; Santa CruzBiotechnology, USA) selama 72 jam di 4 C dalam PBSTx dengan 1%NGS, diikuti dengan inkubasi dalam antibodi sekunder antirabbit kambing yang terbiotinilasi (1:1000: Vector LaboratoriesBA-1000) semalaman dalam PBSTx dan 1% NGS.

Setelah visualisasi DAB (18 menit), pewarnaan sel Zif268-positif di setiap wilayah yang diinginkan difoto dengan objektif 10 dengan mikroskop cahaya (Leica, Jerman). Penghitungan sel secara otomatis diperoleh melaluiImageJ ( NIH, USA) dengan cara yang sama seperti sel NeuNpositif, kecuali sirkularitas ditetapkan pada 0.65–1.0.

Jumlah sel Zif268-positif untuk semua wilayah menggunakan algoritme ambang batas yang sama, dengan antara dua dan enam bagian per wilayah yang diminati pada setiap tikus dihitung. Rata-rata jumlah sel Zif268-positif per mm2 di seluruh bagian (dari kedua belahan bumi) dalam wilayah yang diinginkan digunakan.

2.10|Analisis data

ANOVA menggunakan Statistica (v13; Dell Inc.) dilakukan untuk menguji perbedaan rata-rata pada empat kelompok tikus (Sham-No Trace, Sham-Trace, ATN-No Trace dan ATNTrace). Faktor pengukuran berulang ditambahkan selama berhari-hari (RAM dan diskriminasi sederhana), blok uji coba (tugas berpasangan), dan penghitungan Zif268 di seluruh wilayah atau subwilayah yang diminati.

ANOVA untuk tugas diskriminasi RAM dan sederhana membandingkan empat kelompok untuk memastikan bahwa dua kelompok lesi Sham dan dua kelompok lesi ATN konsisten satu sama lain, namun perhatikan bahwa tidak ada komponen jejak dalam tugas diskriminasi RAM atau sederhana. Untuk diskriminasi sederhana dan tugas berpasangan di runway, transformasi data latensi timbal balik dalam uji coba individual digunakan untuk memastikan homogenitas varians.

Pada hari pengujian tertentu, latensi yang ditransformasikan menghasilkan latensi rata-rata untuk masing-masing dari enam uji coba yang tidak diberi imbalan dan enam uji coba yang diberi imbalan. Untuk tugas diskriminasi sederhana, kami menganalisis skor perbedaan latensi rata-rata (rata-rata uji coba yang diberi imbalan dikurangi rata-rata uji coba yang tidak diberi imbalan) namun bukan uji coba yang diberi imbalan dan tidak diberi imbalan secara terpisah karena kegagalan penyimpanan data.

Ketiga ukuran latensi tersedia untuk tugas memori berpasangan (uji coba yang tidak diberi imbalan, uji coba yang diberi imbalan, dan perbedaan latensi). Untuk memperhitungkan beberapa perbandingan dan untuk menyeimbangkan kesalahan Tipe I dan Tipe II, kami menggunakan tingkat signifikansi p < 0.02 untuk analisis perilaku karena ada tiga ukuran terkait dalam tugas berpasangan (uji coba yang tidak diberi imbalan, uji coba yang diberi imbalan dan perbedaan latensi rata-rata).

Ada enam analisis utama untuk wilayah yang menjadi perhatian ekspresi Zif268, sehingga signifikansi dalam analisis ini ditetapkan pada p < 0.01. Tes Posthoc Newman – Keuls (NK) menilai perbedaan kelompok berpasangan. Analisis efek utama sederhana digunakan ketika terdapat interaksi signifikan yang melibatkan faktor pengukuran berulang.

3|HASIL

3.1|Verifikasi lesi

Semua kecuali satu dari 18 tikus dengan lesi ATN memenuhi kriteria apriori yaitu 50% kerusakan ATN bilateral dan minimal 25% per belahan bumi. Median kerusakan bilateral adalah 76% pada kedua kelompok lesi ATN (kisaran: ATN-No Trace, 61% –93%; ATN-Trace, 63% –93%; Gambar 2). Tikus yang dikecualikan hanya mempunyai lesi yang memuaskan di satu belahan otak saja (total 48%, kiri 75%, dan kanan 20%).

Gambar 2d menunjukkan bahwa jumlah NeuN untuk neuron ATN pada tikus dengan lesi ATN (M=3388, SD=2024) semuanya jauh di bawah nilai yang ditemukan pada tikus dengan lesi palsu (M=15, 339, SD=1065; jumlah ini serupa dengan yang dilaporkan oleh Frost et al., 2020). Delapan dari 17 tikus yang terkena lesi (empat pada kelompok Trace dan empat pada kelompok No-Trace) tidak mengalami kerusakan pada inti mediodorsal thalamus (MD) atau reunion/rhomboid (Re/Rh), dan hanya terdapat sedikit kerusakan pada struktur ini pada sembilan tikus yang mengalami lesi.

Kerusakan MD terjadi pada bagian anterior yang berdekatan dengan ATN. Jadi, kerusakan MD dinilai dari sekitar {{0}},72 hingga +2,10 mm dari Bregma, yang berkisar antara 0% hingga 41% hilangnya sel di seluruh kelompok (median=21%). Ketika kerusakan Re/Rh terjadi, kerusakan tersebut juga berdekatan dengan wilayah ATN, sehingga dinilai sekitar 1,08 hingga 2,04 mm dari Bregma, yang berkisar antara 0% hingga 33% (median=6%). Perhatikan bahwa nilai persen cedera ini tidak mewakili keseluruhan daerah MD dan Re/Rh, karena daerah posterior kedua inti masih utuh pada semua tikus yang mengalami lesi ATN.

For more information:1950477648nn@gmail.com