Acteoside: Penelitian Tentang Aktivitas Antioksidan Dan Antihipertensi

Kontak:{0}}

Aktivitas Antioksidan Dan Antihipertensi Acteoside Dan Analoginya

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,*, dan Miao-Lin HU1,*

Abstrak. Acteoside (UU), suatu glikosida fenilethanoid, merupakan senyawa aktif dalam beberapa tanaman dan obat-obatan herbal tradisional. Bertindak bersama dengan isomer strukturalnya,isoakteosida(Isoact), dan analog, 6-O-aset-lakteosida (6-O-acetylact), digunakan dalam penelitian untuk menyelidikiantioksidan, enzim pengubah anti-angiotensin (ACE), dan aktivitas penghambatan hemolisisdi vitrodan aktivitas antihipertensi terhadap tikus hipertensi spontan (SHR)di vivo. Kami menunjukkan bahwa Act, Isoact, dan 6-O-acetylact secara efektif menangkap 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl radikal (dengan IC50 pada 11.4, 9.48, dan 9.55 M, masing-masing) dan radikal superoksida (dengan IC50 pada 66.0, 38.5 , dan 39,1 M, masing-masing). Sebagai Isoact dan 6-O-acetylact memiliki aktivitas penangkal radikal yang serupa, hanya Act dan Isoact yang digunakan untuk penelitian berikut. Baik Act dan Isoact menghambat aktivitas xanthine oxidase dengan IC50 masing-masing pada 53,3 dan 62,2 M. Baik Act dan Isoact juga secara signifikan menghambat aktivitas ACE dan hemolisis yang disebabkan oleh 2,2'-azo-bis(2-amidinopropane)dihydrochloride, tetapi efek Act lebih kuat daripada Isoact. Kami kemudian memberikan dosis tunggal Act atau Isoact (10 mg/Kg berat badan) secara oral ke SHR dan mengukur perubahan tekanan darah sistolik (SBP) dan tekanan darah diastolik (DBP) selama 24 jam. Act, tapi tidak Isoact, menunjukkan aktivitas antihipertensi dalam menurunkan SBP dan DBP. Hasil penelitian menunjukkan potensi kegunaan UU sebagai produk pangan kesehatan bagiantioksidanperlindungan dan pengaturan tekanan darah.

Kata kunci: Akteosida; Aktivitas antihipertensi; Enzim pengubah angiotensin (ACE); Antioksidan; hemolisis.

bahan aktif acteoside dalam cistanche

Pengantar

Akteosida(Act), glikosida fenilethanoid yang mengandung asam caffeic, 3',4'-dihydroxy phenylethanol, glukosa, dan rhamnose, pertama kali diisolasi dari bungajarum suntik Vul- garis(Birkofer et al., 1968), dan bersama-sama dengan isomer strukturalisoakteosida(Isoak) dan turunan dari6-O-asetilakteosida(6-O-acetylact), telah ditemukan di banyak tanaman dan obat-obatan herbal, seperti:ligstrum purpurascens(Wong et al., 2001),Kalikarpa dikotomi(Koo et al., 2006; Lee et al., 2006),Benteng deserticoladanBoschniakia rossica(Wu et al., 2006),Scrophularia ningpoenis(Huang et al., 2008),Rehmannia glutinosa(Li et al., 2006). Tindakan tersebut dilaporkan menunjukkan aktivitas antimetastatik pada sel melanoma B16 pada model tikus C57BL/6 (Ohno et al., 2002). Act, Isoact, dan 6-O-acetylact baru-baru ini terbukti menghambat IL-1 -ekspresi CAM interseluler yang diaktifkan-1 dan CAM vaskular-1 dalam sel endotel vena umbilikalis manusia (Chen et al., 2009). Act juga melindungi sel endotel paru sapi dari stres oksidatif yang diinduksi radikal hidroksil (Chiou et al., 2004) dan menghambat produksi oksida nitrat dan TNF melalui pemblokiran aktivasi AP-1 pada makrofag yang distimulasi lipopolisakarida (Rao et al. , 2009). Act dan Isoact menunjukkan aktivitas neuroprotektifdi vitro(Koo et al., 2005). Koo dkk. (2006) melaporkan bahwa Act dan aglikonnya secara efektif mengais 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil (DPPH) dan oksida nitratdi vitro. Namun, beberapa penelitian telah membandingkan secara berdampingandi vitro antioksidanaktivitas Act dan senyawa yang terkait secara struktural seperti Isoact dan 6-O- asetilak.

Beberapa kelas agen farmakologis telah digunakan dalam pengobatan hipertensi (Mark dan Davis, 2000). Satu kelas obat antihipertensi, yang dikenal sebagai inhibitor enzim pengubah angiotensin I (ACE inhibitor) (yaitu inhibitor peptidase), memiliki insiden efek samping yang rendah dan merupakan kelas antihipertensi yang lebih disukai.

agen ketika merawat pasien dengan penyakit sekunder bersamaan (Fotherby dan Panayiotou, 1999). ACE (peptidyl-dipeptide hydrolase EC 3.4.15.1) adalah eksopeptidase yang mengandung Zn yang membebaskan dipeptida, yang menghilangkan dipeptida dari C-terminus angiotensin I untuk membentuk angiotensin II, senyawa yang sangat hipertensi. Beberapaantioksidanpeptida (glutathione tereduksi dan peptida terkait carnosine) menunjukkan aktivitas penghambatan ACE (Hou et al., 2003). Yang pertama tersedia secara klinis, ACE inhibitor yang aktif secara oral, kaptopril, dikembangkan untuk pengobatan hipertensi (Ondetti et al., 1977; Borer, 2007). Tindakan tersebut telah dilaporkan memberikan efek relaksasi yang diperantarai nitrit oksida pada cincin aorta utuh endotelium tikus SD (Wong et al., 2001). Ahmad dkk. (1995) telah melaporkan bahwa Act menginduksi penurunan tergantung dosis pada tekanan darah sistolik (SBP) dan tekanan darah diastolik (DBP) setelah injeksi intravena ke tikus Wistar yang dibius normotensif. Namun, tidak jelas apakah Act yang diberikan secara oral dan/atau isomer terkaitnya adalah antihipertensidi vivo. Dalam penelitian ini, kami menyelidikidi vitro antioksidankapasitas dan aktivitas penghambatan ACE sertadi vivoaktivitas antihipertensi Act, Isoact, dan/atau 6-O-acetylact menggunakan tikus hipertensi spontan (SHRs). Kajian-kajian tersebut diharapkan dapat memberikan data yang bermanfaat bagi pengembangan Act sebagai produk pangan kesehatan.

Bahan dan metode

Bahan:

2,2'-azo-bis(2-amidinopropane)dihydrochloride (AAPH), ACE (satuan I, paru-paru kelinci), butylated hydroxytoluene (BHT), DPPH, N-(3-[{{7 }}furyl]acryloyl)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, phenazine methosulfate (PMS), xanthine, dan xanthine oxidase dibeli dari Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Captopril dibeli dari Calbiochem Co. (CA, USA). Act, Isoact, dan 6-O-acetylact (Gambar 1) dibeli dari Equal Corp. (kemurnian > 98 persen, Shanghai, Cina). Bahan kimia dan reagen lainnya berasal dari Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA).

Memulung aktivitas dari Bertindak, isoak, dan 6-O- asetilak melawan dPPH radikal oleh spektrofotometri

Volume (0.3 mL) dariAct, Isoact, dan 6-O-asetilak (konsentrasi akhir adalah 1,56 hingga 50 M), BHT dan asam askorbat (konsentrasi akhir adalah 2,4 hingga 60 M) ditambahkan ke 0,1 mL buffer Tris-HCl 1 M (pH 7,9 ) dan kemudian dicampur dengan 0,6 mL 100 M DPPH dalam metanol hingga konsentrasi akhir 60 M selama 20 menit di bawah perlindungan cahaya pada suhu kamar (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Penurunan absorbansi pada 517 nm diukur dan dinyatakan sebagai A517 nm. Air deionisasi digunakan sebagai percobaan kosong. Aktivitas scavenging radikal DPPH ( persen ) dihitung dengan persamaan: (ΔA517blank A517sample) A517blank × 100. IC50 adalah singkatan dari konsentrasi setengah penghambatan.

penghambatan aktivitas dari Bertindak dan isoact melawan xantin oksidase

Aktivitas xantin oksidase diukur dengan menentukan pembentukan asam urat pada 295 nm menggunakan xantin sebagai substrat (Kalckar, 1947). Jumlah Act dan Isoact yang berbeda (konsentrasi akhir adalah 25, 50, dan 75 M) telah dicampur sebelumnya dengan 50 L 1 mU/mL xanthine oxidase pada 4 derajat selama 1 jam, dan kemudian 300 L 1 mM xanthine ditambahkan. Perubahan absorbansi pada 295 nm dicatat selama 2 menit dan dinyatakan sebagai A295 nm/menit. Aktivitas penghambatan xantin oksidase ( persen) dihitung sebagai berikut: (ΔA295 nm/min hitam A295 nm/min sampel) A295 nm/min hitam × 100. Air deionisasi digunakan sebagai pengganti larutan sampel sebagai percobaan kosong. IC50 adalah singkatan dari konsentrasi setengah penghambatan.

Memulung aktivitas dari Bertindak, isoak, dan 6-O- asetilak melawan superoksida radikal oleh spektrofotometri

Radikal superoksida dihasilkan oleh sistem PMS-NA-DH (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Semua sampel 0,2 mL, mengandung jumlah Act, Isoact, dan 6- yang berbedaO-asetilat (konsentrasi akhir adalah 15,6, 31,3, 62,5, 125, dan 250 µM), ditambahkan secara berurutan ke 0.2 mL dari 630 M nitroblue tetrazolium, 0,2 ml 33 M PMS, dan 0,2 ml 156 M NADH dalam 100 mM buffer fosfat (pH 7,4). Air deionisasi digunakan sebagai pengganti larutan sampel sebagai percobaan kosong. Asam askorbat (konsentrasi akhir adalah 6, 9, 12, dan 24 M) digunakan sebagai kontrol positif. Perubahan absorbansi pada 560 nm dicatat selama 2 menit dan dinyatakan sebagai A560 nm/menit. Aktivitas pembilasan radikal superoksida ( persen) dihitung sebagai berikut: (ΔA560 nm/min hitam sampel A560 nm/min) ΔA560 nm/min hitam × 100. IC50 singkatan konsentrasi setengah-penghambatan.

penentuan dari Kartu as penghambatan aktivitas dari Bertindak dan isoact oleh HPLC

Masing-masing 50 L Act (0.2, 0.4, 0.5, dan 2.0 mol) dan Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0, dan 2.0 mol) dipremix dengan 15 L 1U/mL ACE selama 5 menit, dan kemudian 200 L 0,5 mM FAPGG ditambahkan dan direaksikan pada suhu kamar selama 10 menit (Anzenbacherova et al., 2001). 800 L metanol ditambahkan untuk menghentikan reaksi. Eksperimen kosong hanya FAPGG. Dalam eksperimen kontrol, ACE bereaksi dengan FAPGG dalam kondisi yang sama. Pemisahan kromatografi FAPGG dan FAP dilakukan pada sistem kromatografi Hitachi (Jepang) dengan loop 10 L. Analisis HPLC dilakukan pada kolom Biosil Aqua-ODS-W 5 (Biotic Chemical Co., Ltd., Taiwan, 250 × 4,6 mm id), ukuran partikel 5 m. Campuran yang direaksikan dipisahkan secara isokratik dengan fase gerak yang terdiri dari 0,02 M nonilamin (disesuaikan dengan pH 2,4 dengan asam fosfat) dan asetonitril dengan perbandingan 67,5:32,5 (V/V) (Anzenbacherova et al., 2001). Laju aliran adalah 1 mL/menit; volume injeksi adalah 10 L; detektor diatur pada 345 nm. Penghambatan ACE ( persen ) dari Act dan Isoact dihitung sebagai berikut: [(Luas FAPGGblank Luas Kontrol FAPGG) (Luas FAPGGblank Luas Sampel FAPGG) (Luas FAPGGblank Luas Kontrol FAPGG) × 100.

penghambatan aktivitas dari Bertindak dan isoact melawan dimediasi AAPH hemolisis

Oksidasi rantai radikal bebas sel darah merah tikus (RBC) melalui hemolisis yang dimediasi AAPH (Miki et al., 1987). Darah tikus ditempatkan ke dalam tabung heparin dan disentrifugasi pada 1000 ×gselama 10 menit. Setelah dicuci dengan 0,15 M NaCl tiga kali, RBC yang dikemas diperoleh dengan sentrifugasi pada 1000 ×gselama 10 menit. Jumlah Act dan Isoact yang berbeda (konsentrasi akhir adalah 2, 5, dan 10 M) dicampurkan 25 L suspensi RBC 20 persen (V/V, dalam 10 mM PBS) dan 25 L larutan AAPH 500 mM pada 37 derajat untuk 0 , 1, 1,5, 2, 2,5, 3, dan 3,5 jam dengan pengocokan lembut. Setiap campuran disentrifugasi pada 1000 ×gselama 10 menit, dan supernatan diukur pada 536 nm. Air deionisasi digunakan sebagai pengganti larutan AAPH atau larutan sampel, masing-masing, sebagai kelompok kosong atau sebagai kelompok kontrol. Penghambatan hemolisis ( persen ) dari Act dan Isoact pada 3 jam atau pada 3,5 jam dihitung sebagai berikut: (ΔA536 nmkontrol A536 nmsampel) A536 nmkontrol × 100.

Antihipertensi efek dari Bertindak dan isoact pada SHr

Efek dari Act, Isoact, dan kaptopril yang diberikan secara oral dengan selang makanan (2.0 × 80 mm) pada penurunan SBP dan penurunan DBP ditentukan menurut metode laporan sebelumnya (Lin dkk., 2006; Lin dkk., 2008; Han dkk., 2011). Semua prosedur percobaan hewan mengikuti pedoman yang diterbitkan (National Science Council, 1994). SHR jantan (usia 8 minggu, Pusat Hewan Laboratorium Nasional, Taipei) ditempatkan secara individual di kandang baja yang disimpan pada suhu 24 derajat dengan siklus terang-gelap 12-h dan memiliki akses gratis ke makanan tikus/tikus standar ( Prolab RMH2500, Diet 5P14, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) dan air. SHR secara acak dibagi menjadi kontrol dan perlakuan sampel untuk penentuan SBP dan DBP (enam tikus per kelompok). Untuk percobaan antihipertensi jangka pendek, 0,5 mL 10 mg Act atau Iso-act/Kg SHR atau 5 mg kaptopril/Kg SHR diberikan secara oral satu kali, dan tekanan darah ekor diukur pada 2, 4, 6, dan 24 h setelah pemberian oral tunggal. 0,5 mL air suling digunakan untuk percobaan kosong. Pengukur tekanan darah tidak langsung (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokyo, Jepang) digunakan untuk mengukur SBP dan DBP empat kali pada setiap penentuan untuk setiap perlakuan.

data analisis

Nilai disajikan sebagai mean ± SD dan dianalisis menggunakan ANOVA satu arah, diikuti dengan uji post hoc Tukey untuk perbandingan mean ganda. Murid-muridt-test dilakukan, ketika hanya dua kelompok data yang dibandingkan (seperti antara Act dan Isoact pada konsentrasi yang sama). Nilai p < 0.05="" dianggap="" signifikan="" secara="" statistik.="" analisis="" statistik="" dilakukan="" dengan="" menggunakan="" spss="" for="" windows,="" versi="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

akteosidadi cistanche untuk meningkatkan memori

Hasil

Memulung aktivitas dari PPH dan superoksida radikal

Act, Isoact, dan 6-O-acetylact menunjukkan aktivitas pemulungan DPPH yang bergantung pada dosis pada pH 7,9 (Gambar 2). Nilai IC50 masing-masing adalah 11,4, 9,48, dan 9,55 M untuk Act, Isoact, dan 6-O-asetilak. Nilai IC50 dari kontrol positif asam askorbat dan BHT masing-masing adalah 13,1 dan 18,5 M.

Inhibisi dari xantin oksidase aktivitas

Act dan Isoact ditunjukkan untuk menunjukkan penghambatan xanthine oksidase yang bergantung pada dosis (Gambar 3). IC50 dihitung menjadi 53,3 dan 62,2 M, masing-masing, untuk Act dan Isoact.

Inhibisi dari superoksida dismutase aktivitas

Karena Act dan Isoact menghambat aktivitas xanthine oxidase, kami menggunakan sistem PMS-NADH untuk menghasilkan radikal superoksida (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Bertindak,

Isoak, dan 6-O-acetylact menunjukkan aktivitas pembilasan radikal superoksida yang bergantung pada dosis (Gambar 4). Nilai IC50 masing-masing adalah 66,0, 38,5, dan 39,1 M, untuk Act, Isoact, dan 6-O-asetilak. Nilai IC50 dari kontrol positif asam askorbat adalah 9,0 M. Dari hasil Gambar 2 dan 4 terlihat jelas bahwa Isoact dan 6-O-asetilat memiliki aktivitas penangkal radikal yang serupa terhadap DPPH dan radikal superoksida, dan dengan demikian hanya Act dan Isoact yang dipilih untuk penyaringan aktivitas biologis lebih lanjut.

Kartu as penghambatan kegiatan dari Bertindak dan isoact

Dalam uji pendahuluan, kami menemukan bahwa Act dan Isoact mengganggu absorbansi substrat ACE FAPGG dan produk terhidrolisis FAP pada 345 nm seperti yang digunakan untuk pengujian spektrofotometri kontinu (Holmquist et al., 1979). Oleh karena itu, pemisahan yang digabungkan dengan deteksi Act atau Isoact dan FAPGG oleh HPLC digunakan untuk memantau aktivitas penghambatan ACE. Gambar 5A hingga Gambar 5D adalah kromatogram HPLC tipikal dari campuran reaksi 10 l dari uji blanko (hanya FAPGG, Gambar 5A); uji kontrol (ACE direaksikan kembali dengan FAPGG untuk menghasilkan FAP, Gambar 5B); 0.5 mol ofAct (312,5 g), ACE dan FAPGG (Gambar 5C); dan 0,5 mol Isoact (312,5 g), ACE dan FAPGG (Gambar 5D). Area FAPGG pada Gambar 5B adalah yang terendah dan pada Gambar 5A adalah yang tertinggi dari empat kromatogram HPLC tipikal. Area FAPGG pada Gambar 5C dan 5D bergantung pada aktivitas penghambatan ACE dari konsentrasi Act dan Isoact yang berbeda. Penghambatan ACE yang dihitung dari Act dan Isoact ditunjukkan pada Gambar 5E. Tindakan tersebut menunjukkan aktivitas penghambatan ACE yang lebih tinggi daripada Isoact, dan IC50 dari yang pertama dihitung menjadi 472 M berdasarkan area dalam kromatogram HPLC.

penghambatan aktivitas dari Bertindak dan isoact melawan dimediasi AAPH hemolisis

Aktivitas penghambatan Act dan Isoact terhadap hemolisis yang dimediasi AAPH pada konsentrasi 2, 5, dan 10 M dievaluasi selama 3,5 jam (Miki et al., 1987). Hasil Gambar 6A menunjukkan bahwa hemolisis pada sel darah merah tikus meningkat secara dramatis (dinyatakan sebagai A536 nm) setelah reaksi 3-jam atau 3.5-h dengan adanya radikal AAPH (sebagai kelompok kontrol, simbol siklus putih ). Sedikit atau tidak ada hemolisis yang diamati tanpa adanya radikal AAPH selama reaksi 3.5-h (sebagai kelompok kosong, simbol siklus hitam). Oleh karena itu, penghambatan hemolisis Act dan Isoact pada 3 jam atau pada 3,5 jam dihitung sebagai berikut: (ΔA536 nmcontrol A536 nmsample) A536 nmcontrol × 100. Gambar 6B

menunjukkan bahwa Act dan Isoact pada 2, 5 dan 10 M menunjukkan penghambatan yang bergantung pada konsentrasi pada hemolisis yang diinduksi AAPH, dengan efek penghambatan Act secara signifikan lebih kuat daripada Isoact pada setiap konsentrasi yang digunakan.

Antihipertensi efek dari Bertindak dan isoact pada SHr

SHR menerima pemberian oral tunggal Act dan Isoact (10 mg/Kg SHR), dan perubahan SBP dan DBP dicatat selama 24 jam. Kami sebelumnya melaporkan bahwa tekanan darah (SBP dan DBP) SHR berubah selama 24- jam (Lin et al., 2006; Han et al., 2011). Oleh karena itu, perbandingan pada waktu yang tetap (seperti 2, 4, 6, 8, dan 24 jam) antara blanko dan sampel digunakan sebelum dan sesudah pemberian oral. Ditemukan bahwa Act, tetapi bukan Isoact, efektif mengurangi SBP dan DBP SHR dibandingkan dengan kelompok blanko (air suling). SBP berkurang secara signifikan pada kelompok Act pada 2, 4, dan 6 jam masing-masing sebesar 18,8, 16,5, dan 14,9 mmHg, tetapi pengurangan SBP (3,3 mmHg) pada 24 jam setelah pengobatan Act tidak stabil.

signifikan secara artistik (Gambar 7A). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 7B, DBP menurun pada kelompok Act pada 2, 4 dan 6 jam (masing-masing sebesar 8,5, 7,6, dan 12.0 mmHg), meskipun hanya hasil yang diperoleh pada 6 jam yang signifikan secara statistik. (P< {}.05).="" tercatat="" bahwa="" act="" dan="" captopril="" (sebagai="" kontrol="" positif)="" memiliki="" efek="" yang="" sama="" pada="" sbp="" pada="" tahap="" awal="" (2,="" 4,="" dan="" 6="" jam)="" setelah="" pemberian="">

akteosidadi cistanche memiliki efek yang baik pada antioksidan

DISKUSI

Spesies oksigen aktif dan reaksi yang dimediasi radikal bebas terlibat dalam proses degeneratif atau patologis seperti penuaan, kanker, penyakit jantung koroner, dan penyakit Alzheimer (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith et al., 1996). Beberapa laporan telah berfokus pada penyaringanantioksidankegiatan dari sumber daya alam. Dalam penelitian ini, pertama-tama kami membandingkanantioksidanaktivitas Act, Isoact, dan 6-O-asetilat. Act dan Isoact adalah isomer struktural di mana konstituen bagian asam caffeic terikat pada gugus hidroksil C-4 glukosa pada gugus pertama dan pada gugus hidroksil C-6 glukosa pada gugus hidroksil C-6. Sementara konstituen rhamnose dan 3',4'- dihidroksi fenil etanol, masing-masing, terikat pada gugus hidroksil C-3 dan C-1 dari bagian glukosa dalam molekul Act dan Isoact yang sama, { {8}}O-acetylact adalah turunan Act di mana asam asetat terikat pada gugus hidroksil C-6 pada bagian glukosa (Gambar 1). Koo dkk. (2006) melaporkan bahwa Act dan aglikonnya menunjukkan aktivitas DPPH-scavenging, dan urutan aktivitas ini (dinyatakan sebagai IC50) adalah Act (1,28 M) > asam caffeic (2,22 M) > 3',4'-dihydroxy phenyl ethanol ( 7,72 M) > -tokoferol (15,1 M). Dalam laporan ini (Gambar 2), urutan kegiatan pemulungan DPPH (dinyatakan sebagai IC50) adalah 6-O-asetilat (9,55 M) Isoak (9,48 M) > Aksi (11,4 M). Nilai-nilai ini sebanding dengan atau lebih baik daripada asam askorbat (IC50 dari 13,1 M) dan BHT (IC50 dari 18,5 M) untuk mengais radikal DPPH. IC50 yang lebih tinggi dari Act dalam laporan ini mungkin berasal dari konsentrasi akhir 60 M DPPH daripada 30 M yang digunakan Koo et al. dilaporkan (2006). Karena uji radikal DPPH termasuk dalam reaksi transfer elektron (Huang et al., 2005), diperkirakan bahwa turunan dalam gugus hidroksil C-6 dari gugus glukosa, seperti gugus asetil pada {{21 }}O- gugus asetil dan asam caffeic di Isoact, mungkin lebih mudah memberikan reaksi transfer elektron dibandingkan gugus hidroksil bebas C-6 dalam gugus glukosa Act untuk uji scavenging DPPH.

UU, 6-O-acetylate dan Isoact telah dilaporkan memiliki aktivitas superoksida-scavenging in vitro menggunakan sistem xanthine/xanthine oxidase untuk menghasilkan radikal superoksida (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999). Namun, penelitian kami saat ini menunjukkan bahwa Act menunjukkan aktivitas penghambatan xantin oksidase (Gambar 3). Oleh karena itu, radikal superoksida dihasilkan dengan menggunakan sistem PMS-NADH dalam laporan ini (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008) sebagai ganti sistem xanthine/xanthine oxidase. Memang, menggunakan sistem xanthine/xanthine oxidase untuk menghasilkan radikal superoksida, Wang et al. (1996) memperoleh IC50 dari 63 M Act melawan radikal superoksida, dan nilai ini dekat dengan penghambatan aktivitas xanthine oxidase oleh Act, seperti yang dilaporkan dalam penelitian ini (53,3 M). Dilaporkan bahwa asam caffeic menunjukkan aktivitas penghambatan xantin oksidase (Chiang et al., 1994). Mungkin berspekulasi bahwa aktivitas pemulungan superoksida menggunakan sistem penghasil xanthine/xanthine oxidase dari beberapa fitokimia dengan struktur yang terkait dengan asam caffeic, seperti Act atau Isoact (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999), mungkin memiliki telah berkontribusi, setidaknya sebagian, pada penghambatan xantin oksidase. Menariknya, Wang et al. (1996) menemukan bahwa Act (0,5 dan 2,5 mM) tidak menghambat aktivitas xantin oksidase yang ditentukan oleh elektroda oksigen untuk konsumsi oksigen selama oksidasi xantin. Dengan demikian, penting untuk diingat bahwa metode yang berbeda untuk menguji aktivitas superoksida dapat menghasilkan data yang kontradiktif.

Li dkk. (1993) telah melaporkan tingkat penghambatan Act dan Isoact yang serupa terhadap hemolisis yang dimediasi AAPH dalam sel darah merah tikus. Namun, kami menunjukkan di sini bahwa Act menunjukkan aktivitas penghambatan yang jauh lebih tinggi terhadap hemolisis yang diinduksi AAPH pada RBC tikus daripada Isoact (Gambar 6). Tidak jelas apakah inkonsistensi tersebut mungkin disebabkan oleh perbedaan spesies hewan pengerat.

Kang dkk. (2003) melaporkan bahwa Act menunjukkan aktivitas penghambatan ACE, dan IC50 adalah 373,3 g/mL yang dihitung menjadi 598 M menggunakan Hip-His-Leu sebagai substrat. Dalam laporan ini, Undang-undang menunjukkan aktivitas penghambatan ACE yang lebih tinggi daripada Isoact, dan IC50 dari yang pertama dihitung menjadi 472 M berdasarkan area dalam kromatogram HPLC (Gambar 5). Tindakan tersebut telah dilaporkan memberikan efek relaksasi yang diperantarai oksida nitrat pada cincin aorta utuh endotelium tikus SD (Wong et al., 2001). Meskipun Act telah terbukti antihipertensi pada tikus Wistar,

penelitian ini menggunakan injeksi intravena Act ke tikus yang dibius untuk menyingkirkan faktor adsorpsi (Ahmad et al., 1995). Di sini, kami mengadministrasikan Act secara lisan ke SHRs dan menentukan perubahan tekanan darah. Kami menemukan bahwa fakta pemberian oral, tetapi bukan dari Isoact, menunjukkan efek antihipertensi dengan menurunkan SBP dan DBP lebih dari 24 jam setelah pemberian tunggal (Gambar 7). Bertindak pada dosis 10 mg/kg berat badan memiliki efek yang hampir sama dengan kaptopril pada dosis 5 mg/kg SHR dalam menurunkan SBP dan lebih baik daripada kaptopril dalam menurunkan DBP.

Kesimpulannya, UU dipamerkanantioksidanaktivitas, aktivitas penghambatan ACE, dan efek antihipertensi pada SHR. Hasil yang disajikan di sini akan bermanfaat bagi upaya untuk mengembangkan obat-obatan herbal atau produk terkait dengan menggunakan Undang-Undang, yang telah ditemukan di banyak tanaman dan obat-obatan herbal, untuk perlindungan anti-oksidan dan efek terapeutik di masa depan.

Bentengakteosidauntuk antioksidan dan anti-penuaan

1Departemen Ilmu Pangan dan Bioteknologi, Universitas Nasional Chung Hsing, Taichung, Taiwan

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Taiwan

3School of Pharmacy, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

4Lulusan Institut Bahan dan Teknik Biomedis, Universitas Kedokteran Taipei, Taipei, Taiwan

5Pusat Penelitian Obat Herbal Tradisional, Rumah Sakit Universitas Kedokteran Taipei, Taipei, Taiwan

6Lulusan Institut Farmakognosi, Universitas Kedokteran Taipei, Taipei, Taiwan

(Diterima 12 Maret 2012; Diterima 20 April 2012)

DAFTAR PUSTAKA

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani, dan SP Ahmad. 1995.Akteosida: obat antihipertensi baru. fitoterapi. Res. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Diet karsinogen dan antikarsinogen: radikal oksigen dan penyakit degeneratif. Sains 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacher, K. Macek, dan J. Kvetina. 2001. Penentuan inhibitor enzim (angiotensin convertase) berdasarkan reaksi enzimatik dilanjutkan dengan HPLC.J. Farmasi. Bioma. dubur. 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser, dan U. Thomas. 1968.Akteosidadan neoacteoside: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc- hung 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Penghambatan enzim pengubah angiotensin: kemajuan penting dalam pengobatan penyakit kardiovaskular. Eur. Jantung J. Suppl. 9(Suppl. E): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang, dan ML Hu. 2009.Akteosidadan 6-O-acetylacteoside menurunkan regulasi molekul adhesi sel yang diinduksi oleh IL-1 melalui penghambatan ERK dan JNK dalam sel endotel vaskular manusia. J. Pertanian. Makanan

Kimia 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo, dan FJ Lu. 1994. Inhibitor xanthine oksidase dari daun Alsophila spinulosa (Hook) Tryon. J. Enzim Menghambat. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin, dan CF Chen. 2004.Akteosidamelindungi sel endotel terhadap stres oksidatif yang diinduksi radikal bebas. J. Farmasi. farmasi. 56: 743-748.

Fotherby, MD dan B. Panayiotou. 1999. Terapi antihipertensi dalam pencegahan stroke: apa, kapan, dan untuk siapa? Narkoba 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi, dan M. Nukina. 1999. Aktivitas radikal scavenging glikosida fenilpropanoid di Caryopteris incana. Biosci. Bioteknologi. Biokimia. 63: 983-988.

Gey, KF 1990. Theantioksidanhipotesis penyakit kardiovaskular: epidemiologi dan mekanisme. Biokimia. Soc. Trans. 18: 1041-1045.428 Studi Botani, Vol. 53, 2012

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu, dan WC Hou. 2011. Aktivitas antihipertensi olahan bawang putih pada tikus hipertensi spontan dan manusia hipertensi. Bot. pejantan 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning, dan JF Riordan. 1979. Uji spektrofotometri kontinu untuk enzim pengubah angiotensin. dubur. Biokimia. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen, dan YH Lin. 2003. Peptida antioksidan dengan aktivitas penghambatan enzim pengubah angiotensin dan aplikasi untuk pemurnian enzim pengubah angiotensin. J. Pertanian. Kimia Makanan. 51: 1706-1709.

Huang, D., B.Ou, dan RL Sebelumnya. 2005. Kimia di baliknyaantioksidantes kapasitas. J. Pertanian. Kimia Makanan. 53: 1841-1856.

Huang, CG, YJ Shang, J.Zhang, JR Zhang, WJ Li, dan BH Jiao. 2008. Efek hipourisemia dari glikosida fenilpropanoidakteosidadari Scrophularia ningpoenis pada kadar asam urat serum pada tikus yang diberi kalium oksonat. Amer. J.

Dagu. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee, dan YC Kim. 2006.Akteosidadari Callicarpa dichotoma melemahkan gangguan memori yang diinduksi skopolamin. Biol. Farmasi. Banteng. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu, dan Z. Jia. 1993. Perlindungan glikosida fenilpropanoid dari Pedicularis terhadap hemolisis oksidatif in vitro. Planta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang, dan ZB Hu. 2006. Penetapan HPLCakteosidadalam Radix Rehmanniae. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu, dan WC Hou. 2008.Antioksidan, anti-semicarbazide-sensitif amina oksidase, dan aktivitas anti-hipertensi geraniin diisolasi dari Phyllanthus urinaria. Kimia Makanan. racun. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin, dan WC Hou. 2004. Pameran monohidroksamat asam aspartat dan asam glutamatantioksidandan aktivitas penghambatan enzim pengubah angiotensin. J. Pertanian. Kimia Makanan. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Spektrofotometri diferensial senyawa purin melalui enzim tertentu. J.Biol. Kimia.167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee, dan HS Lee. 2003. Angiotensin-converting enzyme penghambat glikosida fenilpropanoid dari Clerodenron trichotomum. J. Etnofarmaka. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee, dan YC Kim. 2005. Aktivitas neuroprotektif in vitro dari glikosida fenilethanoid dari Callicarpa dichotoma. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh, dan YC Kim. 2006.Akteosidadan aglikonnya melindungi kultur primer sel kortikal tikus dari eksitotoksisitas yang diinduksi glutamat. Ilmu Kehidupan. 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin, dan WC Hou. 2006. Pengaruh protein penyimpanan umbi bengkuang (Dioscorea alata cv. Tainong No.1) dan hidrolisat peptiknya pada tikus hipertensi spontan. J.Sci. pertanian pangan. 86: 1489-1494.

Mark, KS dan TP Davis. 2000. Stroke: pengembangan, pencegahan, dan pengobatan dengan inhibitor peptidase. Peptida 21:1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto, dan E. Niki. 1987. Oksidasi rantai radikal bebas sel darah merah tikus oleh molekul oksigen dan penghambatannya oleh -tokoferol. Biokimia Lengkung. Biofis. 258: 373-380.

Dewan Sains Nasional. 1994. Panduan untuk perawatan dan penggunaan hewan laboratorium. Dewan Sains Nasional, Taiwan.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara, dan I. Saracoglu. 2002. Aktivitas anti-metastasis dariakteosida, suatu glikosida fenilethanoid.Biol. Farmasi. Banteng. 25: 666-668.

Vendetti, MA, B. Rubin, DW Cushman. 1977. Desain inhibitor spesifik enzim pengubah angiotensin: kelas baru agen antihipertensi oral aktif. Sains 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh, dan YM Tzeng. 2009. Konstituen Anisomeles India dan aktivitas anti-inflamasinya. J. Etnofarmaka. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal, dan N. Kowal 1996. Kerusakan oksidatif pada Alzheimer. Sifat 382: 120-121.Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao, dan Z. Jia.

1996. Efek scavenging glikosida fenilpropanoid dari Pedicularis pada anion superoksida dan radikal hidroksil dengan metode spin trapping. Biokimia. farmasi. 51: 687- 691.

Wong, IYF, Y. Huang, ZD He, CW Lau, dan ZY Chen. 2001. Efek relaksasi dari ekstrak dan pemurnian Ligstrum purpurascensakteosidapada cincin aorta tikus. Planta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung, dan TH Tsai. 2006. Penetapanakteosidadi Cistanche deserticola dan Boschniakia rossica dan farmakokinetiknya pada tikus yang bergerak bebas menggunakan LC-MS/MS. J. Kromatografi. B 844: 89-95.