4.6. Zat Reaktif Asam Tiobarbiturat (TBAR)

Kandungan TBAR digunakan sebagai indeks lipoperoksidasi. Di jaringan otak, 50 mM penyangga fosfat (pH 7,4) ditambahkan ke konsentrasi 25 mg/mL (b/v), dan suspensi dihomogenisasi dengan sonikasi selama 10 detik. Ke 30 µL homogenat, 250 µL asam fosfat 1 persen dan 75 µL asam tiobarbiturat (TBA) 0,6 persen ditambahkan. Campuran reagen diinkubasi pada 100 ◦C dalam penangas air selama 45 menit, setelah itu didinginkan dalam penangas es dan kemudian disentrifugasi pada 3000 × g selama 10 menit pada suhu 4 ◦C. Volume 150 μL supernatan diambil dari masing-masing sampel. Fluoresensi diukur menggunakan pembaca pelat mikro FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Jerman) dengan filter eksitasi diatur pada 485 nm (bandwidth 5 nm) dan filter emisi diatur pada 530 nm (bandwidth 5 nm). Kurva kalibrasi dibuat menggunakan malondialdehid (MDA) sebagai standar. Hasilnya dinyatakan dalam protein pmol MDA/mg.

Glikosida cistanche juga dapat meningkatkan aktivitas SOD di jaringan jantung dan hati, dan secara signifikan mengurangi kandungan lipofuscin dan MDA di setiap jaringan, secara efektif mengais berbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi dari kerusakan DNA yang disebabkan oleh radikal OH. Cistanche phenylethanoid glycosides memiliki kemampuan pemulungan radikal bebas yang kuat, kemampuan reduksi yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktivitas SOD dalam suspensi sperma, mengurangi kandungan MDA, dan memiliki efek perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida Cistanche dapat meningkatkan aktivitas SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan jaringan paru-paru tikus tua yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangi kandungan MDA dan kolagen di paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, memiliki efek pemulungan yang baik pada DPPH, memperpanjang waktu hipoksia pada tikus tua, meningkatkan aktivitas SOD dalam serum, dan menunda degenerasi fisiologis paru-paru pada tikus tua eksperimental Dengan degenerasi morfologi seluler, percobaan telah menunjukkan bahwa Cistanche memiliki kemampuan antioksidan yang baik dan berpotensi menjadi obat untuk mencegah dan mengobati penyakit penuaan kulit. Pada saat yang sama, echinacoside di Cistanche memiliki kemampuan yang signifikan untuk mengais radikal bebas DPPH dan memiliki kemampuan untuk mengais spesies oksigen reaktif dan mencegah degradasi kolagen yang diinduksi radikal bebas, dan juga memiliki efek perbaikan yang baik pada kerusakan anion radikal bebas timin.

Klik Dimana Saya Dapat Membeli Cistanche

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Aktivitas enzimatik Enzim Antioksidan Utama

Untuk penentuan aktivitas enzim di jaringan otak, buffer lisis yang mengandung 50 mM buffer fosfat (pH 7,4) dan antiprotease (1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 g/mL pepstatin, dan 1 g/mL leupeptin) ditambahkan ke konsentrasi 50 mg/mL (b/v). Kemudian, suspensi disonikasi selama 30 detik dalam penangas es, dan homogenat disentrifugasi pada 10,000× g selama 15 menit pada suhu 4 ◦C. Supernatan dikumpulkan untuk penentuan aktivitas enzimatik dari enzim antioksidan.

Aktivitas superoksida dismutase (SOD) diukur dengan mengikuti penghambatan autoksidasi pirogalol pada 420 nm [69]. Satu unit enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim yang dibutuhkan untuk menghambat laju autoksidasi pirogalol sebesar 50 persen. Aktivitas enzimatik SOD dinyatakan sebagai unit internasional (IU)/mg protein. Aktivitas katalase (CAT) diukur dalam supernatan yang diolah Triton-X-100 (1 persen , v/v) dengan mengikuti hilangnya hidrogen peroksida (H2O2) pada 240 nm [70], dan aktivitas enzim dilaporkan sebagai substrat ( µmol H2O2) ditransformasikan/menit · mg protein. Total glutation peroksidase (GPx) ditentukan setelah oksidasi NADPH pada 340 nm dengan adanya kelebihan GR, GSH, dan kumena hidroperoksida [71]. Aktivitas GPx diekspresikan sebagai substrat (nmol NADPH) yang ditransformasikan/min mg protein. Aktivitas glutathione reduktase (GR) dianalisis setelah oksidasi NADPH pada 340 nm dengan adanya GSSG [72] dan dinyatakan sebagai substrat (nmol NADPH) yang ditransformasi/mnt·mg protein. Aktivitas GR dan kedua GPx dikoreksi untuk reaksi spontan tanpa adanya sampel biologis (tanpa adanya enzim).

4.8. Tes Aktivitas BACE1

Protokol uji BACE1 melibatkan penggunaan substrat spesifik-sekretase (peptida) yang dikonjugasikan ke dua molekul pelapor, yaitu EDANS dan DABCYL, yang menghasilkan pelepasan sinyal fluoresen [73,74]. Aktivitas BACE1 diukur baik di lisat korteks dan hippocampus. Reaksi dilakukan pada suhu 37 ◦C selama 1 jam menggunakan substrat 10 µM dalam buffer natrium asetat 50 mM (pH 4,5). Pengukuran intensitas fluoresensi dilakukan menggunakan pembaca pelat mikro FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, BadenWürttemberg, Jerman) dengan filter eksitasi diatur pada 360 nm (bandwidth 5 nm) dan filter emisi diatur pada 530 nm (bandwidth 5 nm). Tingkat aktivitas enzimatik secretase sebanding dengan reaksi fluorometrik, dan data dinyatakan sebagai peningkatan fluoresensi x-kali lipat dibandingkan dengan kontrol latar belakang (reaksi tanpa adanya substrat atau jaringan). Aktivitas BACE1 dinormalisasi dengan konsentrasi protein. Aktivitas BACE1 tikus, yang diobati dengan quercetin atau rutin, dinyatakan sebagai persentase aktivitas tikus kontrol TgAPP.

4.9. Ekspresi Gen RT-PCR dari Enzim Antioksidan Utama, APP, BACE1, ADAM10, Caspase-3 dan Caspase-6 dan Inflflammatory Cytokines

4.9.1. Ekstraksi dan Pemurnian RNA Total

Kami menganalisis berbagai area otak, yaitu korteks, dan hipokampus, yang disimpan pada suhu −80 ◦C. Kepada sejumlah jaringan otak yang diketahui, buffer lisis Triomol® ditambahkan dengan perbandingan 1:10 (b/v). Sampel dihomogenisasi selama 30 detik menggunakan motor Cordless (Alu Pelet, Sigma-Aldrich), dan diinkubasi selama 5 menit pada suhu 25 ◦C untuk memungkinkan disosiasi lengkap kompleks nukleoprotein. Kemudian, 0,2 mL kloroform ditambahkan untuk setiap mL buffer lisis Triomol® yang digunakan. Tabung dikocok dengan kuat selama 15 detik dan diinkubasi pada suhu 25 ◦C selama 3 menit. Kemudian, mereka disentrifugasi pada 11,000× g selama 15 menit pada suhu 4 ◦C. Setelah sentrifugasi, diperoleh tiga fase, dengan RNA di fase atas.

Untuk mengisolasi RNA, fase atas dipindahkan ke tabung lain dan diendapkan dengan menambahkan 0.5 mL isopropanol. Setelah pencampuran menyeluruh antara isopropanol dan larutan berair dengan inversi, campuran diinkubasi pada suhu kamar selama 10 menit untuk mendorong pengendapan, dan disentrifugasi pada 12,000× g selama 10 menit pada suhu 4 ◦C. Supernatan dihilangkan, dan pelet dicuci dengan etanol 75 persen dan disentrifugasi pada 7500 × g selama 5 menit pada suhu 4 ◦C. Pelet dikeringkan pada suhu kamar dan dilarutkan dalam 50 µL air yang diolah dengan DEPC. Untuk menghilangkan jejak DNA, ditambahkan 2,5 µL DNase (RNase-free) dan diinkubasi pada suhu 37 ◦C selama 30 menit. Terakhir, sampel diinkubasi pada suhu 64 ◦C selama 5 menit untuk menonaktifkan DNase.

Selanjutnya, konsentrasi RNA diukur dalam spektrofotometer UV-VIS (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Jerman) pada 260 nm dan kemurnian dinilai dengan mempertimbangkan rasio absorbansi pada 260 dan 280 nm (A260/A280).

Penentuan integritas dan kemurnian RNA dilakukan dengan elektroforesis dalam gel agarosa 1 persen yang diwarnai dengan GelRed dan divisualisasikan di bawah sinar UV, di mana, jika RNA utuh, dua pita atas sesuai dengan RNA ribosom (28S dan 18S) dan dua pita bawah. sesuai dengan transfer RNA (tRNA) dan 5S RNA ribosom harus diamati.

4.9.2. Sintesis DNA Pelengkap (cDNA).

cDNA jauh lebih stabil daripada RNA dan karenanya memungkinkan penanganan sampel yang lebih nyaman dan aman. CDNA disintesis dari mRNA dengan retrotranskripsi menggunakan First Strand cDNA Synthesis Kit untuk RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

Untuk melakukan retrotranskripsi untuk sintesis cDNA menjadi 2 µg RNA, 11 µL air yang diolah DEPC dan 1 µL 10X primer Acak ditambahkan. Kemudian, campuran diinkubasi pada suhu 65 ◦C selama 10 menit untuk mendenaturasi RNA. Setelah itu, tabung segera dibawa ke suhu 4 ◦C selama 5 menit untuk menghindari renaturasi RNA. Campuran reagen untuk sintesis cDNA ditunjukkan pada Tabel S1 (Data tambahan).

Delapan μL campuran reaksi ditambahkan ke setiap sampel. Seluruh volume dibawa ke bagian bawah tabung dan diinkubasi pada suhu 42 ◦C selama 60 menit. Akhirnya, reaksi dihentikan dengan menonaktifkan reverse transcriptase dengan memanaskannya pada suhu 70 ◦C selama 10 menit.

4.9.3. PCR Waktu Nyata

Fitur utama PCR real-time adalah analisis produk berlangsung selama proses amplifikasi dengan menentukan fluoresensi. Dengan cara ini, proses amplifikasi dan deteksi terjadi secara bersamaan dalam tabung atau vial yang sama tanpa perlu tindakan lebih lanjut. Untuk PCR real-time, thermal cycler digunakan, yang dapat memperkuat dan mendeteksi fluoresensi secara bersamaan. Kami menggunakan thermal cycler real-time LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Jerman).

Tabel S2 (Data tambahan) mencantumkan reagen yang diperlukan untuk PCR waktu nyata, menggunakan primer spesifik urutan dan pewarna pengikat DNA (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Rotkreuz, Swiss) sebagai sistem deteksi.

Untuk desain primer untuk penanda terukur yang berbeda, program bioinformatika Primer3Plus digunakan, di mana kami mengambil sekuens cDNA dari gen yang diminati dari database akses terbuka Medline. Primer dipasok oleh Merck (Sigma-Aldrich). Suhu hibridisasi dan urutan berbagai primer yang digunakan ditunjukkan pada Tabel S3 (Data tambahan).

Kondisi reaksi untuk amplifikasi gen yang diinginkan ditunjukkan pada Tabel S4 (Data tambahan).

Akhirnya, sampel menjadi sasaran program peleburan: 95 ◦C selama 15 detik, 65 ◦C selama 30 detik, dan hingga 98 ◦C dengan kecepatan 0,1 ◦C/s dengan perekaman fluoresensi terus menerus.

Untuk kuantifikasi level cDNA, metode perbandingan ambang siklus (Ct) [75] digunakan, menggunakan GADPH sebagai pembantu rumah tangga. Amplifikasi pengurus rumah tangga dilakukan secara paralel dengan gen yang dianalisis. Nilai Ct dihitung menggunakan perangkat lunak 4.0 yang disediakan oleh LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Jerman). Perangkat lunak ini memungkinkan membedakan antara fluoresensi karena amplifikasi sampel dan latar belakang. Kurva leleh juga dicatat. Penentuan suhu leleh dari fragmen yang diamplifikasi memungkinkan untuk karakterisasi produk yang diamplifikasi. Ukuran pita diperiksa pada gel agarosa 1,5 persen.

Variasi ekspresi gen yang diteliti dengan pengobatan quercetin atau rutin diekspresikan sebagai fungsi kontrol TgAPP (tikus tanpa pengobatan) dan menormalkan ekspresi ini dengan kadar GADPH. Lipatan Perubahan (2−∆∆Ct) mewakili berapa kali gen yang diinginkan dimodifikasi di bawah perlakuan khusus mengenai tikus kontrol.

4.10. Analisis Statistik

Semua tes dilakukan setidaknya dalam rangkap dua dan dalam tiga percobaan berbeda. Hasil yang diperoleh dinyatakan sebagai rata-rata ± kesalahan standar. Analisis varians satu arah (ANOVA) dilakukan setelah data diuji dan menunjukkan bahwa itu sesuai dengan distribusi normal. Tes post-hoc perbandingan berganda Newman–Keuls dijalankan, memeriksa perbedaan rata-rata antar kelompok. Nilai p < 0.05 dianggap signifikan. Perangkat lunak SigmaPlot 11.0 digunakan untuk analisis statistik.

5. Kesimpulan

Kebiasaan diet dan suplemen dapat mempengaruhi status redoks seluler. Atas dasar ini, kami bertujuan untuk memperbaiki homeostasis redoks seluler dalam model tikus AD dengan diet flavonoid yang mengandung quercetin atau rutin untuk meringankan patologi amiloid, mengingat interaksi antara status redoks seluler dan fitur amiloid yang bergantung pada proteasome pada AD asimtomatik. Kumpulan data kami relevan karena efek flavonoid yang ditampilkan dalam model tikus TgAPP konsisten dengan yang dilaporkan sebelumnya dalam model in vitro dan ex vivo kami.

Sebagai kesimpulan, temuan kami menunjukkan bahwa memulai pengobatan diet pada tahap asimtomatik atau timbulnya gejala mirip AD dapat mengembalikan status redoks seluler dan pemrosesan fisiologis APP melalui regularisasi bersamaan ekspresi APP dan aktivitas BACE1.

Meskipun sulit untuk mengekstrapolasi temuan kami ke kondisi manusia, mereka mungkin memiliki implikasi luas terhadap respons manusia terhadap terapi di masa depan. Dari dua flavonoid, rutin, dengan efek in vivo secara keseluruhan lebih menonjol, tampaknya paling cocok untuk dimasukkan dalam makanan sehari-hari sebagai terapi tambahan pada AD, berdasarkan augmentasi homeostasis redoks intraseluler otak.

Bahan Pelengkap:Informasi pendukung berikut dapat diunduh di situs web. Referensi [76] dikutip dalam bahan tambahan.

Kontribusi Penulis:PB-B. dan SM-A. menyusun ide dan desain eksperimen, membantu dalam eksperimen, menafsirkan hasil yang diperoleh, dan menulis naskah. KLJ-A. melakukan percobaan, melakukan analisis data, dan menginterpretasikan hasil yang diperoleh. JB membantu analisis data dan revisi naskah. Semua data dibuat sendiri, dan tidak ada pabrik kertas yang digunakan. Semua penulis setuju untuk bertanggung jawab atas semua aspek pekerjaan yang memastikan integritas dan akurasi. Semua penulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan:Penelitian ini didanai oleh Medical Research Foundation «Mutua Madrileña» (Edisi keempat Hibah untuk Proyek Penelitian Medis), Kementerian Pendidikan dan Ilmu Pengetahuan Spanyol (Ref. AGL2008-04892-C03-02), dan Kementerian Sains dan Inovasi Spanyol (Ref. CTQ2010-16170).

Pernyataan Dewan Peninjau Kelembagaan:Protokol hewan telah disetujui oleh Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) di Complutense University of Madrid dan sepenuhnya sesuai dengan European Directive 2010/63/tentang perlindungan hewan yang digunakan untuk tujuan ilmiah dan undang-undang Spanyol tentang Kesejahteraan Hewan ( Keputusan Kerajaan 53/2013, 1 Februari 2013).

Pernyataan Persetujuan yang Diinformasikan:Tak dapat diterapkan.

Pernyataan Ketersediaan Data:Data yang mendukung temuan penelitian ini tersedia dari penulis terkait atas permintaan yang masuk akal.

Ucapan terima kasih:Kami berterima kasih kepada Foundation Folch atas hibah pra-doktoral untuk KLJA.

Konflik kepentingan:Para penulis menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan.

Singkatan

AD, penyakit Alzheimer; ADAM-10, A Disintegrin dan protein yang mengandung domain metalloproteinase 10; APP, protein prekursor amiloid; APPswe, mutasi Swedia dari protein prekursor amiloid; A , amiloid- ; BACE1, -site enzim pemecah APP 1; KUCING, Katalase; GPx, Glutathione peroksidase; GR, Glutathione reduktase; GSH, Mengurangi glutathione; GSSG, glutathione teroksidasi; SOD, Superoksida dismutase.

Referensi

1. Ebenau, JL; Pelkmans, W.; Verberk, IMW; Verfaillie, SCJ; van den Bosch, KA; van Leeuwenstijn, M.; Collij, LE; Scheltens, P.; Prins, ND; Barkhof, F.; et al. Asosiasi CSF, Plasma, dan Penanda Pencitraan Neurodegenerasi dengan Perkembangan Klinis pada Orang dengan Penurunan Kognitif Subjektif. Neurologi 2022, 98, e1315–e1326. [Referensi Silang] [PubMed]

2.Dominguez, LJ; Veronese, N.; Vernuccio, L.; Catanese, G.; Inzerillo, F.; Salemi, G.; Barbagallo, M. Nutrisi, Aktivitas Fisik, dan Faktor Gaya Hidup Lainnya dalam Pencegahan Penurunan Kognitif dan Demensia. Nutrisi 2021, 13, 4080. [Ref Silang]

3. Tsarbopoulos, A. penyakit Alzheimer: Menjelajahi 'peti obat' alam untuk agen terapeutik baru. Biomol. Konsep 2020, 11, 201–208. [Referensi Silang] [PubMed]

4. Ashe, KH; Zahs, KR Menyelidiki biologi penyakit Alzheimer pada tikus. Neuron 2010, 66, 631–645. [Referensi Silang] [PubMed]

5.Zahs, KR; Ashe, KH 'Terlalu banyak kabar baik'—Apakah model tikus Alzheimer mencoba memberi tahu kita cara mencegah, bukan menyembuhkan, penyakit Alzheimer? Tren Neurosci. 2010, 33, 381–389. [Referensi Silang]

6. Foley, AM; Ammar, ZM; Lee, RH; Mitchell, CS Tinjauan sistematis tentang hubungan antara kadar amiloid dan ukuran defisit kognitif tikus transgenik pada penyakit Alzheimer. J. Dis Alzheimer. 2015, 44, 787–795. [Referensi Silang]

7. Anand David, A.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Tinjauan tentang pentingnya quercetin secara biologis: Flavonoid bioaktif. Farmasi. Wahyu 2016, 10, 84–89.

8. Habtemariam, S. Rutin sebagai Terapi Alami untuk Penyakit Alzheimer: Wawasan tentang Mekanisme Tindakannya. Kur. Kedokteran kimia 2016, 23, 860–873. [Referensi Silang]

9. Martín-Aragón, S.; Jiménez-Aliaga, K.; Benedi, J.; Bermejo-Bescós, P. Tanggapan neurohormetik dari quercetin dan rutin dalam garis sel yang mengekspresikan protein prekursor amiloid secara berlebihan (sel APPswe). Phytomedicine 2016, 23, 1285–1294. [Referensi Silang]

10. Zhou, W.; Qing, H.; Tong, Y.; Song, ekspresi gen W. BACE1 dan degradasi protein. Ann. NY Acad. Sains. 2004, 1035, 49–67. [Referensi Silang]

11. Gutbier, S.; Musim Semi, SEBAGAI; Delp, J.; Schildknecht, S.; Karreman, C.; Suciu, I.; Brunner, T.; Groettrup, M.; Leist, M. Pencegahan apoptosis neuron oleh astrosit melalui modulasi respons stres yang dimediasi tiol dan percepatan pemulihan dari stres proteotoksik. Kematian Sel Berbeda. 2018, 25, 101–117. [Referensi Silang] [PubMed]

12. Aoyama, K. Glutathione di Otak. Int. J.Mol. Sains. 2021, 22, 5010. [Referensi Silang] [PubMed]

13. Scholey, A. Nutrisi untuk neurokognisi dalam kesehatan dan penyakit: Tindakan, metodologi, dan mekanisme. Proses Nutr. Soc. 2018, 77, 73–83. [Referensi Silang] [PubMed]

14. Apelt, J.; Bigl, M.; Wunderlich, P.; Schliebsm, R. Peningkatan stres oksidatif terkait penuaan berkorelasi dengan pola perkembangan aktivitas beta-sekretase dan pembentukan plak beta-amiloid pada tikus Tg2576 transgenik dengan patologi mirip Alzheimer. Int. J.Dev. Ilmu saraf. 2004, 22, 475–484. [Referensi Silang] [PubMed]

15. Howlett, DR; Richardson, JC Patologi tikus transgenik APP: Sebuah model penyakit Alzheimer atau hanya overekspresi APP? Histol. Histopatol. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Cencioni, C.; Spalotta, F.; Martelli, F.; Valente, S.; Mai, A.; Zeiher, AM; Gaetano, C. Stres oksidatif dan regulasi epigenetik pada penuaan dan penyakit terkait usia. Int. J.Mol. Sains. 2013, 14, 17643–17663. [Referensi Silang]

17. Tsang, AH; Chung, KK Stres oksidatif dan nitrosatif pada penyakit Parkinson. Biochim. Biofisika. Acta 2009, 1792, 643–650. [Referensi Silang]

18. Mandal, PK; Sahara, S.; Tripathi, M.; Murari, G. Tingkat glutathione otak—Sebuah biomarker baru untuk gangguan kognitif ringan dan penyakit Alzheimer. Biol. Psikiatri 2015, 78, 702–710. [Referensi Silang]

19. Chen, JJ; Thiyagarajah, M.; Lagu, J.; Chen, C.; Herrmann, N.; Gallagher, D.; Rapoport, MJ; Hitam, SE; Ramirez, J.; Andreazza, AC; et al. Mengubah glutathione sentral dan darah pada penyakit Alzheimer dan gangguan kognitif ringan: Sebuah meta-analisis. Res Alzheimer. Ada. 2022, 14, 23. [Ref Silang]

20.Pocernich, CB; Butterfield, DA Ketinggian glutathione sebagai strategi terapi pada penyakit Alzheimer. Biochim. Biofisika. Akta (BBA)-Mol. Dasar Dis. 2012, 1822, 625–630. [Referensi Silang]

21. Raza, A.; Xie, W.; Kim, KH; Dronamraju, VR; Williams, J.; Vince, R.; Lebih lanjut, SS Dipeptide dari ψ-GSH Menghambat Stres Oksidatif dan Peradangan Neuro pada Model Tikus Penyakit Alzheimer. Antioksidan 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Yang, H.; Xie, Z.; Wei, L.; Ding, M.; Wang, P.; Bi, J. Glutathione-mimetic D609 meredakan defisit memori dan mengurangi deposisi amiloid dalam model tikus transgenik A PP/PS1. Laporan saraf 2018, 29, 833–838. [Referensi Silang] [PubMed]

23. Guerrero-Gómez, D.; Mora-Lorca, JA; Sáenz-Narciso, B.; Naranjo-Galindo, FJ; Muñoz-Lobato, F.; Parrado-Fernández, C.; Goikolea, J.; Cedazo-Minguez, Á.; Tautan, CD; Neri, C.; et al. Hilangnya homeostasis redoks glutathione merusak proteostasis dengan menghambat degradasi protein yang bergantung pada autophagy. Kematian Sel Berbeda. 2019, 26, 1545–1565. [Referensi Silang] [PubMed]

24. Lefaki, M.; Papaevgeniou, N.; Chondrogianni, N. Redoks regulasi fungsi proteasome. Redoks Biol. 2017, 13, 452–458. [Referensi Silang] [PubMed]

25. Bonet-Costa, V.; Pomatto, LC; Davies, KJ Stres proteasome dan oksidatif pada penyakit Alzheimer. Antioksidan. Sinyal Redoks. 2016, 25, 886–901. [Referensi Silang]

26. Belkacemi, A.; Ramassamy, C. Urutan waktu stres oksidatif di otak dari model tikus transgenik penyakit Alzheimer terkait dengan kaskade amiloid. Radikal Bebas. Biol. Kedokteran 2012, 52, 593–600. [Referensi Silang]

27. Tanigawa, S.; Fujii, M.; Hou, Aksi DX Nrf2 dan Keap1 dalam ekspresi NQO1 yang dimediasi oleh ARE oleh quercetin. Radikal Bebas. Biol. Kedokteran 2007, 42, 1690–1703. [Referensi Silang]

28. Chondrogianni, N.; Kapeta, S.; Chinou, aku.; Vassilatou, K.; Papassideri, I.; Gonos, ES Efek anti-penuaan dan peremajaan dari quercetin. Exp. Gerontol. 2010, 45, 763–771. [Referensi Silang]

29. Bodendorf, AS; Danner, S.; Fischer, F.; Stefani, M.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Staufenbiel, M.; Paganetti, P. Ekspresi sekretase beta manusia di otak tikus meningkatkan tingkat beta-amyloid yang stabil. J. Neurochem. 2002, 80, 799–806. [Referensi Silang]

30. Yamakawa, H.; Yagishita, S.; Futai, E.; Potensi inhibitor Ishiura, S. beta-Secretase diturunkan oleh lokasi pembelahan beta yang menyimpang dari protein prekursor amiloid "mutan Swedia". J.Biol. kimia 2010, 285, 1634–1642. [Referensi Silang]

31. Keller, D.; Erö, C.; Markram, Kepadatan Sel H. di Otak Tikus: Tinjauan Sistematis. Depan. Neuroanat. 2018, 12, 83. [Referensi Silang] [PubMed]

32. Mladenovic Djordjevic, AN; Kapetanou, M.; Loncarevic-Vasiljkovic, N.; Todorovic, S.; Athanasopoulou, S.; Jovic, M.; Prvulovic, M.; Taofik, E.; Matsas, R.; Kanazir, S.; et al. Intervensi farmakologis dalam model tikus transgenik meningkatkan fenotipe patologis terkait Alzheimer: Keterlibatan aktivasi proteasome. Radikal Bebas. Biol. Kedokteran 2021, 162, 88–103. [Referensi Silang] [PubMed]

33. Tamagno, E.; Bardini, P.; Guglielmotto, M.; Danni, O.; Tabaton, M. Berbagai keadaan agregasi beta-amiloid 1-42 memediasi efek yang berbeda pada stres oksidatif, degenerasi saraf, dan ekspresi BACE-1. Radikal Bebas. Biol. Kedokteran 2006, 41, 202–212. [Referensi Silang] [PubMed]

34. Jorissen, E.; Prox, J.; Bernreuther, C.; Weber, S.; Schwanbeck, R.; Serneels, L.; Snellinx, A.; Craessaerts, K.; Thatiah, A.; Tesseur, I.; et al. Disintegrin/metalloproteinase ADAM10 sangat penting untuk pembentukan korteks otak. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [Referensi Silang]

35. Kuhn, PH; Wang, H.; Dislich, B.; Kolombo, A.; Zeitschel, AS; Elwart, JW; Kremmer, E.; Rosner, S.; Lichtenthaler, SF ADAM10 adalah sekretase konstitutif fisiologis yang relevan dari protein prekursor amiloid di neuron primer. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [Referensi Silang]

36. Postina, R.; Schroeder, A.; Dewachter, I.; Bohl, J.; Schmitt, AS; Kojro, E.; Prinzen, C.; Endres, K.; Hiemke, C.; Berkah, M.; et al. Sebuah disintegrin-metalloproteinase mencegah pembentukan plak amiloid dan cacat hippocampal pada model tikus penyakit Alzheimer. J.Clin. Selidiki. 2004, 113, 1456–1464. [Referensi Silang]

37. Elfiky, AM; Mahmud, AA; Elreedy, HA; Ibrahim, KS; Ghazy, MA Quercetin merangsang jalur non-amiloidogenik melalui aktivasi ekspresi gen ADAM10 dan ADAM17 dalam model tikus penyakit Alzheimer yang diinduksi aluminium klorida. Sains Kehidupan. 2021, 285, 119964. [Ref Silang]

38. Copanaki, E.; Chang, S.; Vlachos, A.; Tschäpe, JA; Müller, UC; Kögel, D.; Deller, T. sAPPalpha memusuhi degenerasi dendritik dan kematian neuron yang dipicu oleh stres proteasomal. Mol. Neurosi sel. 2010, 44, 386–393. [Referensi Silang]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Nagel, H.; Kundu, A.; Kins, S.; Kogel, D.; Behl, C.; Hajieva, P. Produk pembelahan prekursor protein amiloid-beta sAbetaPPalpha memodulasi BAG3-pembentukan agresom yang bergantung dan meningkatkan aktivitas proteasomal seluler. J. Dis Alzheimer. 2015, 44, 879–896. [Referensi Silang]

40. Livingstone, RW; Penatua, MK; Singh, A.; Westlake, CM; Tate, WP; Ibrahim, WC; Williams, JM Mensekresi Protein Prekursor Amiloid-Alpha Meningkatkan LTP Melalui Sintesis dan Perdagangan Ca2 plus -Reseptor AMPA Permeabel. Depan. Mol. Ilmu saraf. 2021, 14, 660208. [Ref Silang]

41. Crawford, HC; Dempsey, PJ; Coklat, G.; Adam, L.; Moss, ML ADAM10 sebagai target terapi untuk kanker dan peradangan. Kur. Farmasi. Des. 2009, 15, 2288–2299. [Referensi Silang] [PubMed]

42. Saftig, P.; Lichtenthaler, SF Alpha secretase ADAM10: Metaloprotease dengan banyak fungsi di otak. Prog. Neurobiol. 2015, 135, 1–20. [Referensi Silang] [PubMed]

43. Borreca, A.; Gironi, K.; Amadoro, G.; Ammassari-Teule, M. Disregulasi Kebalikan dari Protein Retardasi Mental Fragile-X dan Protein Heteronuclear Ribonucleoprotein C Berasosiasi dengan Terjemahan APP yang Disempurnakan pada Penyakit Alzheimer. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 3227–3234. [Referensi Silang] [PubMed]

44. Agustinus, S.; Rimbach, G.; Augustin, K.; Schliebs, R.; Wolffram, S.; Cermak, R. Pengaruh pengobatan jangka pendek dan jangka panjang dengan ekstrak Ginkgo biloba pada kadar protein prekursor amiloid dalam model tikus transgenik yang relevan dengan penyakit Alzheimer. Lengkungan. Biokimia. Biofisika. 2009, 481, 177–182. [Referensi Silang] [PubMed]

45. Borreca, A.; Valeri, F.; De Luca, M.; Ernst, L.; Russo, A.; Nobili, A.; Cordella, A.; Corsetti, V.; Amadoro, G.; Mercuri, NB; et al. Peningkatan sementara efisiensi translasi pada tikus Tg2576 prodromal dan gejala awal berkontribusi pada patologi A. Neurobiol. Dis. 2020, 139, 104787. [Referensi Silang] [PubMed]

46. ​​D'Amelio, M.; Sheng, M.; Cecconi, F. Caspase-3 dalam sistem saraf pusat: Melampaui apoptosis. Tren Neurosci. 2012, 35, 700–709. [Referensi Silang]

47. Ertürk, A.; Wang, Y.; Sheng, M. Pemangkasan lokal dendrit dan duri oleh caspase-3-mekanisme yang bergantung pada proteasome dan terbatas. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [Referensi Silang]

48. D'Amelio, M.; Cavallucci, V.; Middei, S.; Marchetti, C.; Pacioni, S.; Feri, A.; Diamantini, A.; De Zio, D.; Carrara, P.; Battistini, L.; et al. Caspase-3 memicu disfungsi sinaptik awal pada model tikus penyakit Alzheimer. Nat. Ilmu saraf. 2011, 14, 69–76. [Referensi Silang]

49.Gervais, FG; Xu, D.; Robertson, GS; Vaillancourt, JP; Zhu, Y.; Huang, J.; LeBlanc, A.; Smith, D.; Rigby, M.; Shearman, MS; et al. Keterlibatan caspases dalam pembelahan proteolitik protein prekursor amiloid-beta Alzheimer dan pembentukan peptida beta amiloidogenik. Sel 1999, 97, 395–406. [Referensi Silang]

50. Taman, G.; Nhan, HS; Tyan, SH; Kawakatsu, Y.; Zhang, C.; Navarro, M.; Koo, Aktivasi Caspase EH dan Pembelahan APP yang Dimediasi Caspase Berhubungan dengan Kehilangan Sinaps yang Diinduksi Amyloid -Protein pada Penyakit Alzheimer. Rep. Sel 2020, 31, 107839. [Ref Silang]

51. Lu, DC; Rabizadeh, S.; Chandra, S.; Shayya, RF; Ellerby, LM; Kamu, X.; Salvesen, GS; Koo, EH; Bredesen, DE Peptida proteolitik sitotoksik kedua yang berasal dari prekursor beta-protein amiloid. Nat. Kedokteran 2000, 6, 397–404. [Referensi Silang] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Caspase-6 sebagai target awal baru dalam pengobatan penyakit Alzheimer. eur. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [Referensi Silang]

53. Albrecht, S.; Bogdanovic, N.; Ghetti, B.; Winblad, B.; Aktivasi LeBlanc, AC Caspase-6 pada otak penyakit Alzheimer familial yang membawa protein prekursor amiloid atau mutasi presenilin I atau presenilin II. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2009, 68, 1282–1293. [Referensi Silang] [PubMed]

54. Morihara, T.; Teter, B.; Yang, F.; Lim, GP; Boudinot, S.; Boudinot, FD; Frautschy, SA; Cole, GM Ibuprofen menekan interleukin-1induksi beta alfa pro-amiloidogenik1-antichymotrypsin untuk memperbaiki patologi beta-amyloid (Abeta) pada model Alzheimer. Neuropsikofarmakologi 2005, 30, 1111–1120. [Referensi Silang] [PubMed]

55. Niu, YL; Zhang, WJ; Wu, P.; Liu, B.; Matahari, GT; Yu, DM; Deng, JB Ekspresi protein terkait apoptosis caspase-3 dan NF-kappaB di hippocampus tikus Tg2576. Ilmu saraf. Banteng. 2010, 26, 37–46. [Referensi Silang]

56. Fuller, S.; Steele, M.; Munch, G. Mengaktifkan astroglia selama peradangan kronis pada penyakit Alzheimer – apakah mereka mengabaikan peran pendukung saraf mereka? Mutat. Res. 2010, 690, 40–49. [Referensi Silang]

57. Lee, M.; Cho, T.; Jantaratnotai, N.; Wang, YT; McGeer, E.; McGeer, PL Penipisan GSH dalam sel glial menginduksi neurotoksisitas: Relevansi dengan penuaan dan penyakit neurologis degeneratif. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [Referensi Silang]

58. Hensley, K. Peradangan saraf pada penyakit Alzheimer: Mekanisme, konsekuensi patologis, dan potensi manipulasi terapeutik. J. Dis Alzheimer. 2010, 21, 1–14. [Referensi Silang]

59. Lu, J.; Wu, DM; Zheng, YL; Hu, B.; Zhang, ZF; Shan, Q.; Zheng, ZH; Liu, CM; Wang, YJ Quercetin mengaktifkan protein kinase yang diaktifkan AMP dengan mengurangi ekspresi PP2C yang melindungi otak tikus tua dari neurotoksisitas akibat kolesterol tinggi. J. Pathol. 2010, 222, 199–212. [Referensi Silang]

60. Chen, JC; Ho, FM; Chao, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Hsu, HB; Lee, ST; Wen Tung, W.; Lin, WW Penghambatan ekspresi gen iNOS oleh quercetin dimediasi oleh penghambatan IkappaB kinase, faktor nuklir-kappa B dan STAT1, dan bergantung pada induksi heme oxygenase-1 pada mikroglia tikus BV-2. eur. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [Referensi Silang]

61. Dwivedi, D.; Mega, K.; Mishra, R.; Mandal, PK Glutathione di Otak: Tinjauan Konformasi, Fungsi, Karakteristik Biokimia, Kuantisasi, dan Peran Terapi Potensial dalam Gangguan Otak. Neurokimia. Res. 2020, 45, 1461–1480. [Referensi Silang] [PubMed]

62. Rossner, S.; Sastre, M.; Bourne, K.; Lichtenthaler, SF Regulasi transkripsi dan translasi ekspresi BACE1– implikasi untuk penyakit Alzheimer. Prog. Neurobiol. 2006, 79, 95–111. [Referensi Silang] [PubMed]

63. Westerman, MA; Cooper-Blacketer, D.; Mariash, A.; Kotilinek, L.; Kawarabayashi, T.; Younkin, LH; Carlson, GA; Younkin, SG; Ashe, KH Hubungan antara Abeta dan memori pada model tikus Tg2576 penyakit Alzheimer. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [Referensi Silang] [PubMed]

64. Irizarry, MC; Locascio, JJ; Hyman, BT Beta-site APP membelah ekspresi mRNA enzim pada tikus transgenik APP: Tumpang tindih anatomi dengan ekspresi transgen dan tingkat statis dengan penuaan. Saya. J. Pathol. 2001, 158, 173–177. [Referensi Silang] [PubMed]

65. Hsiao, K.; Chapman, P.; Nilsen, S.; Eckman, C.; Harigaya, Y.; Younkin, S.; Yang, F.; Cole, G. Defisit memori korelatif, peningkatan Abeta, dan plak amiloid pada tikus transgenik. Sains 1996, 274, 99–102. [Referensi Silang] [PubMed]

66. Hsiao, K. Tikus transgenik yang mengekspresikan protein prekursor amiloid Alzheimer. Exp. Gerontol. 1998, 33, 883–889. [Referensi Silang]

67. Simon, AM; Schiaparelli, L.; Salazar-Colocho, P.; Cuadrado-Tejedor, M.; Escribano, L.; López de Maturana, R.; Del Río, J.; Pérez-Mediavilla, A.; Frechilla, D. Ekspresi berlebih dari APP manusia tipe liar pada tikus menyebabkan defisit kognitif dan fitur patologis yang tidak terkait dengan level Abeta. Neurobiol. Dis. 2009, 33, 369–378. [Referensi Silang]

68. Senft, AP; Dalton, TP; Shertzer, HG Menentukan glutathione dan glutathione disulfide menggunakan probe fluoresensi oftalaldehida. Anal. Biokimia. 2000, 280, 80–86. [Referensi Silang]

69. Marklund, S.; Marklund, G. Keterlibatan radikal anion superoksida dalam autoksidasi pirogalol dan uji nyaman untuk dismutase superoksida. eur. J. Biochem. 1974, 47, 469–474. [Referensi Silang]

70. Aebi, H. Catalase in vitro. Metode Enzimol. 1984, 105, 121–126.

71. Barja de Quiroga, G.; Perez-Campo, R.; Lopez Torres, M. Pertahanan anti-oksidan dan peroksidasi di hati dan otak tikus tua. Biokimia. J. 1990, 272, 247–250. [Referensi Silang] [PubMed]

72. Massey, V.; Williams, CH, Jr. Tentang mekanisme reaksi ragi glutathione reduktase. J.Biol. kimia 1965, 240, 4470–4480. [Referensi Silang]

73. Jash, K.; Gondaliya, P.; Sunkaria, A.; Kalia, K. MicroRNA-29b Memodulasi Aktivitas -Secretase di SH-SY5Y Cell Line dan Otak Tikus Diabetes. Sel Mol. Neurobiol. 2020, 40, 1367–1381. [Referensi Silang] [PubMed]

74. Jimenez-Aliaga, K.; Bermejo-Bescos, P.; Benedi, J.; Martin-Aragon, S. Quercetin dan rutin menunjukkan efek anti-amiloidogenik dan pemilahan fibril in vitro dan aktivitas antioksidan kuat dalam sel APPswe. Sains Kehidupan. 2011, 89, 939–945. [Referensi Silang] [PubMed]

75. Ramos, CA; Bowman, TA; Bola, NC; Pedagang, AA; Zheng, Y.; Parra, saya.; Fuqua, SA; Shaw, CA; Goodell, MA Bukti keragaman dalam profil transkripsi sel punca hematopoietik tunggal. PLoS Genet. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Stower, CC; Scallet, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C menghasilkan resolusi sangat tinggi dan pelabelan kontras dari neuron yang mengalami degenerasi. Otak Res. 2005, 1035, 24–31. [Referensi Silang] [PubMed]

Penafian/Catatan Penerbit:Pernyataan, pendapat, dan data yang terkandung dalam semua publikasi adalah milik masing-masing penulis dan kontributor dan bukan dari MDPI dan/atau editor. MDPI dan/atau editor tidak bertanggung jawab atas cedera apa pun pada orang atau properti yang diakibatkan oleh ide, metode, instruksi, atau produk apa pun yang disebutkan dalam konten.

【Untuk info lebih lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】