Vaksin Virus Influenza Hidup Bivalen yang Dilemahkan Melindungi Terhadap Isolat Klinis H1N2 dan H3N2 yang Melayang pada Babi Bagian 2

2.5. Uji Imunosorben Terkait-Enzim (ELISA)

Untuk membuat antigen pelapis, SD435 dan SD467 disebarkan dalam sel MDCK dan dimurnikan menggunakan ultrasentrifugasi gradien sukrosa. Inaktivasi virus terjadi dengan menambahkan 97 persen -propiolakton ke virus pada konsentrasi 1:1000 (v/v) (Thermo Fisher Scientific, AAB2319703). Campuran ini diaduk pada suhu 4 ◦C semalam, diinkubasi pada suhu 37 ◦C selama dua jam untuk memfasilitasi hidrolisis -propiolakton, kemudian disimpan pada suhu -80 ◦C sampai digunakan.

Antigen dan kekebalan tidak dapat dipisahkan. Antigen mengacu pada zat apa pun yang dapat dikenali oleh sistem kekebalan dan menyebabkan respons kekebalan, termasuk bakteri, virus, sel tumor, dll., Sedangkan kekebalan mengacu pada kemampuan tubuh untuk merespons antigen tersebut.

Hubungan antara antigen dan kekebalan dapat diilustrasikan dengan metafora sederhana: Sama seperti berolahraga yang membutuhkan pelatihan yang cukup dan suplemen nutrisi, peningkatan kekebalan juga bergantung pada kontak berulang dengan antigen dan sel kekebalan yang sesuai serta molekul kekebalan. menghasilkan. Ketika sistem kekebalan menghadapi antigen, ia menyerang dengan memproduksi antibodi spesifik, atau sel kekebalan, bersama dengan sel memori untuk melindungi kita dari infeksi ulang.

Sains telah memastikan bahwa mengembangkan kebiasaan hidup dan makan yang baik dapat membantu meningkatkan kekebalan tubuh. Misalnya, menjaga kebersihan, tidak merokok, olahraga ringan, dan kebiasaan tidur dapat membantu mengurangi invasi antigen seperti bakteri dan virus. Pada saat yang sama, mengonsumsi beberapa makanan yang kaya antioksidan, vitamin, dan mineral, seperti sayur dan buah, biji-bijian, dan ikan, juga dapat membantu meningkatkan kekebalan tubuh.

Singkatnya, hubungan antara antigen dan kekebalan sangat erat. Hanya melalui kontak berulang dengan antigen dan kebiasaan hidup yang baik kekebalan dapat terus ditingkatkan, dan berbagai penyakit dapat dicegah dan diobati. Oleh karena itu, kita harus menjaga sikap positif dan mengembangkan kebiasaan hidup yang baik untuk melindungi diri dari penyakit. Dapat dilihat bahwa kita perlu meningkatkan kekebalan kita. Cistanche dapat membantu kita meningkatkan kekebalan tubuh, karena Cistanche kaya akan berbagai zat antioksidan, seperti vitamin C, karotenoid, dll. Bahan-bahan tersebut dapat mengais radikal bebas dan mengurangi stres oksidatif, Meningkatkan daya tahan sistem kekebalan tubuh.

Klik suplemen cistanche deserticola

Untuk mengukur kadar IgG spesifik swIAV yang diinduksi oleh vaksinasi dan tantangan, serum babi diambil setelah vaksinasi pertama (hari ke-20) dan kedua (hari ke-30), dan sebelum nekropsi (hari ke-36).

Virus yang dinonaktifkan -propiolakton yang dimurnikan SD435 (1 µg/mL), dan SD467 (2 µg/mL), diencerkan dalam buffer pelapis karbonat/bikarbonat, (pH 9,6) diaplikasikan pada pelat-2 96-sumur Immulon pada 1{{ 12}}0 µL/well (Thermo Labsystems, Ottawa, ON, Canada, 3655) dan diinkubasi semalaman pada suhu 4 ◦C. Setelah inkubasi semalaman, pelat yang dilapisi dicuci empat kali dengan TBST (0.1 M Tris, 0,17 M NaCl, dan 0,05 persen Tween 20), yang ditambahkan pengenceran serum atau BALF empat kali lipat. piring dalam rangkap dua, diikuti dengan inkubasi dua jam pada suhu kamar. Serum ditambahkan pada pengenceran awal 1:10, dan BALF ditambahkan tanpa diencerkan. Sampel serum kontrol positif yang ditentukan sebelumnya dan kontrol negatif, serum, dan BALF yang sesuai dari babi yang tidak divaksinasi dalam penelitian sebelumnya dijalankan pada setiap cawan [14].

Pelat dicuci empat kali dengan TBST, setelah itu IgG anti-babi kambing (H plus L) berlabel fosfatase memurnikan antibodi afinitas (1:5000) (Sigma Aldrich, SAB3700435) atau IgA anti-babi tikus (Serotec, MCA658) ( 1:300) yang diencerkan dalam TBST ditambahkan dan dibiarkan diinkubasi pada suhu kamar selama satu jam. ELISA IgA dikembangkan dengan penambahan antibodi IgG (H plus L) kambing anti-tikus biotinilasi (CALTAG, Burlingame, CA, USA, M30015) dan larutan streptavidin alkaline phosphatase (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) keduanya selama satu jam pada suhu kamar.

Setelah inkubasi, pelat IgG dan IgA dicuci empat kali dengan TBST, dengan substrat p-nitrofenil fosfat (PNPP) [10 mg/mL p-nitrofenil fosfat di(tris) kristal garam (Sigma-Aldrich) , 1 persen dietanolamina (Sigma-Aldrich), 0,5 mg/mL MgCl2, dan pH 9,8] (1 mg/mL) ditambahkan dan diinkubasi pada suhu kamar selama dua jam.

Reaksi dihentikan melalui penambahan 0.3 M ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), dan pelat dibaca dalam spektrofotometer pada 405 nm dengan acuan 490 nm. Titer sampel didefinisikan sebagai pengenceran tertinggi di mana OD sampel tersebut lebih tinggi dari batas yang ditentukan (OD rata-rata dari sampel negatif yang diketahui ditambah dua kali standar deviasi).

2.6. Uji Netralisasi Virus (VN).

Sel MDCK (3,5 × 104 ) disepuh menjadi 96-pelat sumur. Serum dan BALF diinaktivasi dengan panas pada suhu 56 ◦C selama 30 menit. Pengenceran serum dan BALF dua kali lipat ditambahkan ke piring dalam rangkap empat, dan 60 µL serum encer atau BALF diinkubasi dengan volume yang sama dari SD435 atau SD456 yang mengandung 100 TCID50 pada suhu 37 ◦C selama 1 jam. 100 µL campuran kemudian ditambahkan ke sel MDCK, dan efek sitopatogenik (CPE) didokumentasikan pada 48 jam dan 72 jam pasca infeksi (pi). Titer antibodi netralisasi adalah pengenceran tertinggi dari setiap sampel serum yang benar-benar melindungi sel dari CPE di setidaknya 2 dari 4 sumur.

2.7. Penentuan Viral

Setelah dikumpulkan, sampel paru-paru segera diletakkan di atas es dan dibekukan pada suhu -80 ◦C sampai diproses. Untuk pemrosesan, setiap jaringan paru-paru ditimbang dan konsentrasi MEM 10 persen (b/v) ditambah dengan 1× antibiotik-antimikotik (Thermo Fisher Scientific, 15240-062) ditambahkan. Jaringan paru-paru dihomogenkan dalam TissueLyser II (Qiagen, Hilden, Jerman) pada 30 Hz selama 5 menit, diikuti dengan sentrifugasi pada 5000× g selama 10 menit pada suhu 4 ◦C. Supernatan yang dihomogenkan dikumpulkan dan disimpan pada suhu -80 ◦C sampai analisis lebih lanjut. Penyeka hidung divorteks selama 15 detik dan disentrifugasi pada 1600 × g selama 25 menit pada suhu 4 ◦C. Supernatan dikumpulkan dan disimpan pada suhu −80 ◦C hingga analisis lebih lanjut. Titer virus ditentukan dengan uji TCID50 untuk paru-paru dan RT-PCR kuantitatif untuk apusan hidung.

2.8. Ekstraksi RNA dan RT-PCR Kuantitatif (qRT-PCR)

Untuk menentukan tingkat RNA virus SD467 dan SD435 pada penyeka hidung pasca-tantangan, qRT-PCR dilakukan. Kurva standar dibuat menggunakan RNA yang diekstraksi dari SD435 dan SD467 dari titer yang diketahui. Secara singkat, RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Toronto, ON, Canada, 74136) digunakan untuk mengekstraksi vRNA dari 200 µL pencuci hidung. RNA diubah menjadi cDNA menggunakan universal influenza primer Uni12 dan SuperScript III Transcriptase (Invitrogen, Burlington, ON, Canada) [19]. qPCR dilakukan dalam rangkap tiga pada sistem PCR Real-Time StepOnePlusTM (Applied Biosystems, CA, USA) dengan Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), 5 µL cDNA, dan 1 µL primer maju dan mundur 10µM. Reaksi PCR dijalankan pada suhu annealing 58 ◦C selama 40 siklus. Semua urutan primer qPCR tersedia berdasarkan permintaan.

2.9. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak GraphPad Prism 8. Uji nonparametrik Mann-Whitney dan Kruskal-Wallis digunakan. Perbedaan yang signifikan dilambangkan dengan * (p < 0.05), ** (p < 0.01), *** (p < 0,001) , atau **** (p <0,0001). ns=tidak signifikan.

3. Hasil

3.1. Vaksinasi dengan Vaksin Bivalen Memberikan Perlindungan terhadap Isolat Klinis Baru

Kami mengukur respons fisik untuk menantang virus serta replikasi virus di saluran pernapasan untuk menilai perlindungan yang diberikan oleh vaksin bivalen terhadap isolat klinis baru ini. Suhu dicatat setiap hari selama lima hari pasca-tantangan virus di semua kelompok. Babi yang divaksinasi tiruan dan ditantang dengan SD435 (H3N2) (MEM/SD435) atau SD467 (H1N2) (MEM/SD467) menunjukkan lonjakan suhu yang khas pada hari ke-1 pasca-tantangan virus, dengan suhu rata-rata 40,6 ◦C dan 41,1 ◦ C, masing-masing. Lonjakan ini tidak terlihat pada kelompok yang divaksinasi yang ditantang dengan SD435 (Bivalen/SD435) atau SD467 (Bivalen/SD467), yang masing-masing memiliki suhu rata-rata 39,4 ◦C dan 39,6 ◦C. Pada hari ke 2–5 pasca-tantangan, kelompok yang divaksinasi dan tidak divaksinasi memiliki suhu sekitar 39 ◦C (Gambar 2A).

Lima hari pasca-tantangan semua babi dinekropsi, dengan paru-paru diangkat seluruhnya dan dianalisis untuk menghitung jumlah lesi yang ada. Kelompok Bivalen/SD435 menunjukkan lesi minimal atau tanpa lesi, dengan median 0.65 persen total lesi paru. Kelompok MEM/SD435 memiliki lesi yang jauh lebih tinggi daripada kelompok yang divaksinasi, dengan median 5,1 persen (p=0.0025) (Gambar 2B). Pada kelompok Bivalent/SD467, lima dari tujuh babi memiliki jumlah lesi yang rendah (<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

Di paru-paru, kelompok Bivalen/SD435 dan Bivalen/SD467 sama-sama memiliki titer virus yang rendah, dengan rata-rata 8,6 PFU/mL/gr dan 3.0 PFU/mL/gr, masing-masing. Sebaliknya, kelompok MEM/SD435 dan MEM/SD467 memiliki jumlah virus yang lebih tinggi, dengan rata-rata masing-masing 656,1 dan 9118,2 PFU/mL/gr (p=0.0025 untuk keduanya) (Gambar 3A, B). Kecenderungan serupa terlihat pada penyeka hidung. Pada kelompok Bivalen/SD435, titer hidung rendah pada hari 1, 3, dan 5 pasca-tantangan (dpc), sedangkan pada kelompok MEM/SD435 titer sedikit meningkat dan meningkat seiring berjalannya hari (ns) (Gambar 3C). Pada kelompok Bivalen/SD467, titer hidung juga rendah, rata-rata di bawah 5 PFU/mL pada hari ke-1 dan ke-5, dan 10,0 PFU/mL pada hari ke-3 pascatantangan. Titer lebih tinggi pada kelompok MEM/SD467 setiap hari, rata-rata 4123,6 PFU/mL/gr pada 1dpc (p=0.0278), 77233,1 PFU/mL/gr (p=0.0009) pada 3dpc, dan 65,2 PFU/mL/gr pada 5dpc (ns) (Gambar 3D).

Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa vaksin bivalen menawarkan tingkat perlindungan yang signifikan terhadap strain tantangan, mengurangi lesi paru-paru dan replikasi virus yang terkait dengan infeksi dengan dua isolat swIAV ini di paru-paru dan saluran hidung.

3.2. Vaksin Bivalen Menginduksi Respons Kekebalan terhadap Strain Tantangan

Kami mengukur respons antibodi dalam serum dan spesifik paru-paru untuk kedua strain tantangan setelah vaksinasi prime-boost dengan vaksin bivalen. Serum dikumpulkan dari babi setelah vaksin pertama (hari ke-20) dan setelah vaksin kedua (hari ke-30). Virus tantangan SD435 (H3N2) dan SD467 (H1N2) digunakan sebagai antigen penangkap untuk mengukur respons antibodi IgG spesifik virus dalam serum. Dengan SD435, tidak ada perbedaan yang signifikan antara titer antibodi pada MEM dan kelompok yang divaksinasi bivalen setelah vaksinasi pertama (hari ke-20). Namun, titer antibodi terhadap SD467 secara signifikan lebih tinggi pada kelompok yang divaksinasi pada hari ke-20 (p=0.0321). Setelah vaksin kedua (hari ke-31), titer antibodi secara signifikan lebih tinggi pada kelompok yang divaksinasi SD435 dan SD467 dibandingkan pada kelompok vaksin tiruan MEM (p <0,0001) (Gambar 4A, B). Secara khusus, terhadap penangkapan antigen SD435, titer serum IgG pada kelompok yang divaksinasi MEM tiruan rata-rata 52 pada hari ke 20 dan 30, sedangkan titer IgG serum pada kelompok yang divaksinasi MEM mock rata-rata 52 pada hari ke 20 dan 30, sedangkan mereka adalah 311 (hari ke 20) dan 4852 (hari ke 30) pada kelompok vaksin bivalen (Gambar 3A). Terhadap SD467, titer IgG serum pada kelompok MEM yang divaksinasi tiruan adalah 39 (hari ke-20) dan 38 (hari ke-30), sedangkan pada kelompok vaksin bivalen, adalah 219 (hari ke-20) dan 3509 (hari ke-30) (Gambar 3B).

Kecenderungan serupa terlihat ketika titer antibodi penawar diukur dalam serum terhadap dua strain tantangan. Sekali lagi, tidak ada perbedaan yang signifikan antara titer antibodi penawar dalam MEM dan kelompok yang divaksinasi bivalen terhadap SD435 setelah satu dosis vaksin (hari ke-20) ​​(Gambar 5A, B). Terhadap SD467, tingkat antibodi secara signifikan lebih tinggi pada hari ke-20, setelah satu vaksin (p=0.0069). Terhadap kedua virus tersebut, terjadi peningkatan titer antibodi pada kelompok vaksin bivalen setelah pemberian dosis kedua hari ke-30) (p < 0,0001). Titer pada kelompok yang divaksinasi MEM mock ditantang dengan SD435rata-rata 1 (hari 20) dan 3 (hari 30), sedangkan titer pada kelompok bivalen rata-rata 10 (da20) dan 77 (hari 30) (Gambar 5A). Titer pada kelompok yang divaksinasi tiruan MEM ditantang dengan SD467 rata-rata 0 (hari 20) dan 2 (hari 30), sedangkan titer pada kelompok vaksin bivalen rata-rata 10 (hari 20) dan 54 (hari 30) (Gambar 5B).

Setelah nekropsi (hari ke 36), BALF dikumpulkan dari masing-masing babi sehingga kadar antibodi dapat diukur di paru-paru. Virus tantangan SD435 dan SD467 digunakan sebagai antigen penangkap untuk mengukur respons IgA dan IgG spesifik virus. Terhadap SD435, kadar IgA pada kelompok vaksin tiruan MEM rata-rata 17, sedangkan titer pada kelompok vaksin bivalen secara signifikan lebih tinggi, rata-rata 95 (p=0.0014) (Gambar 6A). Untuk SD467, kadar IgA rata-rata 18 pada kelompok vaksin tiruan dan secara signifikan lebih tinggi pada 158 pada kelompok vaksin bivalen (p=0.0185) (Gambar 6B). Dalam hal IgG, titer terhadap SD435 pada kelompok vaksin tiruan MEM rata-rata 3, sedangkan pada kelompok bivalen, titer terhadap SD435 secara signifikan lebih tinggi pada rata-rata 138 (p <0,0001) (Gambar 6C). Antibodi IgG terhadap SD467 rata-rata 16 pada kelompok vaksin tiruan MEM, sedangkan pada kelompok vaksin bivalen, mereka secara signifikan lebih tinggi, rata-rata 259 (p <0,0001) (Gambar 6D).

Mengenai antibodi penawar dalam BALF, trennya serupa dengan yang terlihat pada ELISA IgA dan IgG. Terhadap SD435, titer antibodi penawar tidak terdeteksi pada kelompok vaksin tiruan MEM, dan mereka rata-rata lebih tinggi secara signifikan pada 13,2 pada kelompok vaksin bivalen (p < 0.0001) (Gambar 7A). Demikian pula, titer antibodi spesifik untuk SD467 rata-rata 0,7 pada kelompok vaksin tiruan MEM dan secara signifikan lebih tinggi pada kelompok vaksin bivalen dengan titer rata-rata 10,9 (p=0.0002) (Gambar 7B). Secara keseluruhan, data ini menunjukkan bahwa dua dosis vaksin bivalen menginduksi respons humoral sistemik yang kuat, serta respons imun lokal di paru-paru terhadap dua isolat klinis non-homolog ini.

4. Diskusi

Kami sebelumnya menunjukkan bahwa virus yang bergantung pada elastase SD191-R342V dan SD69.K345V benar-benar dilemahkan dan tidak virulen pada babi dan bahwa dua vaksinasi dengan LAlV bivalen ini menimbulkan respons kekebalan yang kuat dan memberikan perlindungan terhadap infeksi dengan SD191 homolog ( H1N2) dan strain SD69 (H3N2) [14]. Dalam studi saat ini, kami ingin menguji apakah vaksin bivalen akan bertahan in vivo terhadap isolat klinis yang lebih baru yang telah mengalami antigenic drift. SD467, seperti SD191, adalah anggota kelompok antigenik Ho-3 yang muncul di Kanada, tetapi telah memperoleh banyak mutasi di situs antigenik utama (12,15). Demikian juga, SD435 mewakili kluster H3N2 IV-E yang hadir di Kanada barat dan memiliki banyak substitusi asam amino di situs antigenik H3 utama dari yang ada di SD69 (17).

LAlV bivalen secara signifikan mengurangi lesi pada babi yang divaksinasi ketika ditantang dengan SD435 (H3N2) atau SD467 (H1N2) dan mencegah lonjakan suhu yang terlihat pada kelompok yang divaksinasi MEM (mock) satu hari pasca-tantangan. Hal ini juga menyebabkan penurunan replikasi virus dari kedua galur di paru-paru dan penurunan SD467 (H1N2) di apusan hidung. Menariknya, titer hidung SD435 (H3N2) rendah pada kelompok yang divaksinasi dan tidak divaksinasi, meskipun metode pengambilan sampel identik, menunjukkan bahwa jenis ini mungkin tidak memiliki banyak tropisme untuk saluran hidung. Sehubungan dengan babi outlier di Grup yang memiliki skor lesi paru-paru tinggi 31, pengukuran suhu tidak menunjukkan lonjakan pada tantangan, dan titer virus di paru-paru di bawah 10 PFU/g/mL. Tingkat antibodi dalam serum dan respons paru lokal juga sama dengan semua babi yang divaksinasi. Hal ini membuat kami berspekulasi bahwa lesi tersebut tidak terkait dengan influenza. Analisis sero mengungkapkan bahwa respons imun yang kuat dipasang terhadap kedua strain setelah dua dosis vaksin dan hal yang sama terbukti benar sehubungan dengan analisis lokal di paru-paru. Glikoprotein permukaan yang diarahkan oleh antibodi sangat penting dalam melindungi terhadap infeksi IAV, sehingga tingkat tinggi antibodi penawar serta lgG dan lgA yang ditemukan pada babi yang divaksinasi mendukung perlindungan yang terlihat secara in vivo [20].

Vaksin Whole Inactivated Virus (WIV) adalah yang paling umum tersedia untuk babi yang secara tradisional diformulasikan dengan adjuvant, dianggap sebagai pendekatan yang aman karena tidak ada risiko reassortment dengan strain yang bersirkulasi. Namun, mereka memberikan kemanjuran terbatas terhadap galur yang tidak cocok dan telah terbukti menyebabkan gangguan pernapasan yang ditingkatkan terkait vaksin (VAERD) bila digunakan untuk melawan galur yang tidak cocok. Kemanjurannya juga berkurang dengan adanya antibodi yang berasal dari ibu (MDA) [4]. Yang tersedia secara komersial di Amerika Utara termasuk FluSure XP®, yang tersedia sebagai formulasi tetravalen di AS dengan kluster H1N1, H1N2, dan H3N2 IV-A dan IV-B [21]. Formulasi Flusure XP® yang lebih lama tersedia di Kanada dengan dua galur H1N1 dan satu galur H1N2, diisolasi antara tahun 2000 dan 2005 [22]. Di kedua negara Amerika Utara, FluSure® Pandemic tersedia, vaksin monovalen yang terdiri dari strain H1N1pdm09, serta Pneumostar SIV Complete (Elanco, Greensboro, North Carolina, US Inc.), yang mengandung H1N1, H1N2, dan H3N2, dan Pneumostar SIV, dengan strain subtipe H1N1 dan H3N2 (GOC, USDA) [23,24]. Vaksin yang tersedia secara komersial ini mencakup sekitar 50 persen vaksin flu babi di Amerika Utara, dan 50 persen vaksinasi lainnya adalah vaksin autogenous [4].

Dalam hal platform vaksin alternatif, vaksin partikel replika turunan alphavirus rekombinan dilisensikan di AS [4]. Platform vaksin ini menggunakan alphavirus dengan genom yang diubah, di mana gen struktural virus digantikan oleh gen pilihan, membuat replikasi alphavirus rusak. RNA ini mereplikasi diri, sehingga platform vaksin mengarah pada ekspresi gen yang diinginkan yang tinggi, dan untuk influenza, HA dan nukleoprotein (NP) telah diuji sebagai antigen [25]. Penelitian telah menunjukkan bahwa penggunaan platform ini melindungi terhadap tantangan yang cocok dan tidak cocok secara antigen HA, serta strain yang tidak cocok dengan NP, meskipun platform tersebut tidak dapat melindungi dari keberadaan MDA.

LAIV pertama untuk flu babi disetujui oleh Departemen Pertanian AS (USDA) pada tahun 2017. Ingelvac Provenza™ adalah vaksin bivalen H3N2 dan H1N1, dengan HA dan NA dari dua galur yang diisolasi di AS, diekspresikan pada tulang punggung TX98, dilemahkan melalui pemotongan protein nonstruktural (NS1) [14,26]. LAIV meniru infeksi alami dan menyebabkan peningkatan kekebalan mukosa di saluran udara bagian atas saat diberikan secara intranasal. Jika vaksin yang tidak aktif terutama mengarah pada produksi antibodi IgG sistemik, vaksin hidup yang dilemahkan dapat menginduksi IgA mukosa di saluran pernapasan, serta meningkatkan respons yang dimediasi sel karena pemaparan sistem kekebalan terhadap protein influenza internal, yang mengandung lebih banyak T. epitop sel [27]. Ini mengarah pada perlindungan yang lebih baik terhadap strain yang tidak cocok.

Mereka telah menunjukkan perlindungan parsial di hadapan MDA. Seluruh antibodi IgG lebih lazim di saluran pernapasan bagian bawah, dan antibodi IgA polimerik dominan di saluran pernapasan bagian atas babi, paling sering sebagai dimer [28]. Antibodi ini diproduksi secara lokal dan diangkut melintasi lapisan sel epitel di mana mereka tetap berada di mukosa, dibantu oleh komponen sekretori yang menolak degradasi oleh protease [28,29]. Antibodi IgA adalah garis pertahanan pertama sistem kekebalan adaptif melawan patogen yang masuk, bekerja untuk memblokir perlekatan virus ke reseptor asam sialat [30]. Antibodi IgA polimer lebih reaktif silang daripada antibodi IgG monomer, berpotensi karena pengikatan multivalen [31]. Studi juga menunjukkan bahwa antibodi ini dapat mencegah pelepasan IAV yang baru terbentuk dari sel yang terinfeksi jauh lebih efisien daripada IgG atau IgA monomer, yang dapat ditemukan dalam serum babi, menunjukkan struktur polimer IgA menguntungkan untuk menghubungkan silang keturunan virus. untuk HA diekspresikan pada permukaan sel yang terinfeksi [31-33]. Oleh karena itu, respon antibodi IgA lokal merupakan bagian integral dalam perlindungan terhadap infeksi IAV dan telah disarankan berkorelasi dengan perlindungan pada manusia [34].

Namun, risiko dengan LAIV adalah potensi reassortment dengan strain yang bersirkulasi. Sebuah studi filogenetik di AS menemukan strain baru dalam sirkulasi yang telah disortir kembali dengan strain vaksin yang termasuk dalam Ingelvac Provenza™ [26]. Platform LAIV yang bergantung pada elastase mengurangi risiko ini, karena protein elastase sangat langka di saluran pernapasan babi, sehingga replikasi virus vaksin sangat terbatas, demikian pula kerangka waktu untuk terjadinya reassortment. Studi selanjutnya akan mencakup evaluasi risiko reassortment vaksin bivalen ini, serta bagaimana vaksin ini bertahan di hadapan MDA. Menarik juga untuk menguji tanggapan yang dimediasi sel dari vaksin ini, karena ini adalah salah satu manfaat utama LAIV. Sebagai kesimpulan, LAIV yang bergantung pada elastase bivalen memperluas perlindungan ke isolat klinis baru yang ditemukan di Kanada bagian barat, dan akan mengisi beberapa celah di pasar vaksin flu babi.

Kontribusi Penulis:

Konseptualisasi, YZ; metodologi, YZ, dan LA; analisis formal, LA; investigasi, LA dan UB-C.; sumber daya, SD; menulis—persiapan draf asli, LA; menulis— review dan editing, YZ, UB-C., dan SD; pengawasan, YZ; akuisisi pendanaan, YZ Semua penulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan:

Penelitian ini didanai oleh Dana Pengembangan Pertanian (ADF), Kementerian Pertanian Saskatchewan. LA didukung sebagian oleh Beasiswa Vaccinology and Immunotherapeutics (V&I) dari School of Public Health, University of Saskatchewan. VIDO menerima dana operasional dari Pemerintah Saskatchewan melalui Innovation Saskatchewan dan Kementerian Pertanian dan dari Canada Foundation for Innovation melalui Major Science Initiatives untuk fasilitas CL3 (InterVac).

Pernyataan Dewan Peninjau Kelembagaan:

Tak dapat diterapkan.

Pernyataan Ketersediaan Data:

Data dan analisis penelitian ini semuanya dilaporkan dalam artikel ini.

Ucapan terima kasih:

Kami ingin berterima kasih kepada dokter hewan dan teknisi hewan VIDO yang telah melakukan semua pekerjaan hewan untuk uji coba hewan kami. Karya ini diterbitkan dengan izin dari direktur VIDO sebagai manuskrip seri #1005.

Konflik kepentingan:

Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi

Webster, virus Influenza RG: Penularan antar spesies dan relevansinya dengan munculnya pandemi manusia berikutnya. Lengkungan. Virol. Supl. 1997, 13, 105–113. [PubMed]

2. Li, Y.; Robertson, I. Epidemiologi flu babi. Animasi. Dis. 2021, 1, 21. [Referensi Silang] [PubMed]

3. Donovan, T. Peran Influenza terhadap Performa Babi Tumbuh; Universitas Minnesota: Minneapolis, MN, AS, 2005.

4. Gracia, JCM; Pearce, DS; Masik, A.; Balasch, M. Influenza A Virus in Swine: Epidemiologi, Tantangan dan Strategi Vaksinasi. Depan. Vet.-Sci. 2020, 7, 647. [Referensi Silang] [PubMed]

5. Ma, W. Virus flu babi: Status dan tantangan saat ini. Res Virus. 2020, 288, 198118. [Referensi Silang]

6. Suzuki, Y.; Ito, T.; Suzuki, T.; Belanda, RE; Kamar, TM; Kiso, M.; Ishida, H.; Kawaoka, Y. Spesies Asam Sialat sebagai Penentu Rentang Inang Virus Influenza A. J.Virol. 2000, 74, 11825–11831. [Referensi Silang]

7. Matahari, H.; Xiao, Y.; Liu, J.; Wang, D.; Li, F.; Wang, C.; Li, C.; Zhu, J.; Lagu, J.; Matahari, H.; et al. Virus flu babi H1N1 mirip unggas Eurasia dengan gen virus pandemi 2009 memfasilitasi infeksi manusia. Proses Natl. Acad. Sains. AS 2020, 117, 17204–17210. [Referensi Silang]

8. Henritzi, D.; Petrik, PP; Lewis, NS; Graaf, A.; Pesia, A.; Starick, E.; Breithaupt, A.; Strebelow, G.; Luttermann, C.; Parker, LMK; et al. Pengawasan Populasi Babi Domestik Eropa Mengidentifikasi Waduk yang Muncul dari Virus Influenza A Babi yang Berpotensi Zoonotik. Mikroba Inang Sel 2020, 28, 614–627.e6. [Referensi Silang]

9. Vincent, AL; Ibu, W.; Lager, KM; Janke, BH; Richt, JA Virus flu babi: Sebuah perspektif Amerika Utara. Lanjut Res Virus. 2008, 72, 127–154.

10. Rajao, DS; Anderson, TK; Kitikoon, P.; Stratton, J.; Lewis, NS; Vincent, AL Evolusi antigenik dan genetik dari virus flu babi H1 kontemporer di Amerika Serikat. Virologi 2018, 518, 45–54. [Referensi Silang]

11. Mena, I.; Saya Nelson, M.; Quezada-Monroy, F.; Dutta, J.; Cortes-Fernández, R.; Lara-Puente, JH; Castro-Peralta, F.; Cunha, LF; Trovao, NS; Lozano-Dubernard, B.; et al. Asal usul pandemi influenza H1N1 2009 pada babi di Meksiko. Elife 2016, 5, e16777. [Referensi Silang]

12.Nelson, MI; Culhane, MR; Trovao, NS; Patnayak, DP; Halpin, RA; Lin, X.; Sial, MH; Das, SR; Detmer, SE Kemunculan dan evolusi virus influenza A (H1 ) pada babi di Kanada dan Amerika Serikat. J.Gen. Virol. 2017, 98, 2663–2675. [Referensi Silang] [PubMed]

13. Chauhan, RP; Gordon, ML Tinjauan Sistematis Menganalisis Prevalensi dan Peredaran Virus Influenza pada Populasi Babi di Seluruh Dunia. Patogen 2020, 9, 355. [Ref Silang]

14. Landreth, S.; Detmer, S.; Gerdts, V.; Zhou, Y. Vaksin virus influenza hidup bivalen yang dilemahkan melindungi dari infeksi virus H1N2 dan H3N2 pada babi. Dokter hewan. Mikrobiol. 2020, 253, 108968. [Referensi Silang] [PubMed]

15. McCormick, K.; Jiang, Z.; Zhu, L.; Lawson, SR; Langenhorst, R.; Ransburgh, R.; Brunick, C.; Tracy, MC; Hurtig, SDM; Mabee, LM; et al. Evaluasi Konstruksi dan Imunogenisitas Virus Influenza A Rekombinan yang Mengandung Gen Chimeric Hemagglutinin Berasal dari Virus Subtipe Influenza A H1N1 Divergen Secara Genetik. PLoS ONE 2015, 10, e0127649. [Referensi Silang] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com